耐热芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶的中试发酵工艺

对耐热芽孢杆菌(Thermophilicbacillus)XJT9503保藏、菌种活化、种子培养基和发酵培养基及7,25,250,3000L发酵罐的中试发酵工艺参数进行了研究,确定了耐热芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶的中试发酵工艺.在3000L发酵罐上控制罐温为46℃、转速180r/min、通气量4L/(L·min),培养18h后发酵酶活最高达13240U/mL.     

嗜热芽孢杆菌2004产β-甘露聚糖酶产酶条件优化和酶学性质

对芽孢杆菌2004 β-甘露聚糖酶进行了产酶条件优化、初步纯化及其酶学性质的研究.条件优化结果:1.5 g/dL槐豆胶,2 g/dL蛋白胨,培养温度为40 ℃,250 mL三角瓶装液量为70 mL,其他因素影响不大.此最佳产酶条件下,嗜热芽孢杆菌2004 12 h的产酶水平平均为41.92 U/mL,比原来提高了30倍.培养液离心得到上清液,经硫酸铵沉淀,Sephadex G-200分子凝胶过滤和DEAE纤维素离子交换,酶比活达到722 U/mg,纯化了23.94倍,收率为35.1 %.该酶的最适反应温度为70～80 ℃;反应的最适pH值为5.8～6.0;pH值稳定范围为4.0～9.0.金属离子Mg2 和K 对酶略有激活作用.适当浓度的Mg2 不仅对酶有激活作用,还对酶的热失活具有保护作用.     

一株产海藻糖合成酶嗜中温芽孢杆菌的鉴定及其酶学性质

由长白山温泉附近土壤中筛选得到产海藻糖舍酶菌株，为革兰氏阳性菌，具有芽孢和鞭毛，其最适生长温度为55℃，对这一菌株进行生理生化指标测定。进一步对该菌株所产海藻糖合酶的酶学性质进行研究，酶反应最适作用pH值为7．0，在pH6．6～7．4时该酶稳定，最适作用温度为35℃，在25-45℃时该酶可稳定保存。     

产β-葡聚糖酶淀粉液化芽孢杆菌的选育

通过对一株淀粉液化芽孢杆菌进行紫外和^60Co逐级诱变，使该菌株产β-葡聚糖酶酶活从80U／mL提高到105U／mL；对突变株进行多次单菌落分离及传代，对其传代稳定性的研究表明：该菌株产酶性能稳定；在5L发酵罐中突变株的产酶水平比摇瓶要高，可达120U／mL，产酶周期比摇瓶缩短了15h．     

高产环糊精葡萄糖基转移酶的枯草芽孢杆菌选育、产酶与酶学特性

选育了一株高产环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)的芽孢杆菌Sx菌株,经16S rRNA测序分析,结合菌体及菌落的形态特征,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).对其产酶条件与酶学特性进行了研究.结果表明,以l g/dL玉米淀粉和2 g/dL豆粕粉为碳氮源,pH 6.5,30℃,220 r/min,60 h的条件下,菌株所产CGTase酶活性可达5 596 U/mL;该酶在30～50℃,pH 5.5～9.0下保持稳定,在50℃,180 r/rain,pH 6.5,CGTase酶活力为1 107 U/mL的条件下对20 mg/ml,甜菊甙转化48 h,甜菊甙溶液中的昂莱鲍迪甙与甜菊甙的比值(RA/SS)从转化前的0.45上升到0.53.     

节杆菌10137产β-呋喃果糖苷酶条件及酶学性质

研究表明,节杆菌10137产β 呋喃果糖苷酶的最佳条件为:温度为30℃,pH值7 5,接种体积分数为2%,装液体积为40mL.该条件下β 呋喃果糖苷酶的转移酶活为177.78U/mL,酶作用最适pH值为6.5,最适温度为30℃,在pH值为6.0～8.0和45℃以下稳定.Ag+和Cu2+对该酶有较强烈的抑制作用,EDTA和Mg2+对酶活也有一定影响.     

纳豆芽孢杆菌的固态发酵条件

为了优化纳豆芽孢杆菌固态发酵条件,以活菌数和芽孢数为指标,采用微生物发酵技术,研究了种龄、接种量、培养基初始pH值和含水量对固态发酵的影响,并通过L9(34)正交试验确定了纳豆芽孢杆菌固态发酵最佳条件.试验结果表明:接种体积分数7%、种龄17 h、培养基初始pH值8.0、培养基初始水分质量分数70%,37℃固态发酵5 d效果最好,活菌数和芽孢数分别达到3.4×1010 cfu/g和1.8×109 cfu/g.     

培养基及培养条件对普鲁兰酶的影响

从土壤中分离出一株产普鲁兰酶的菌株,初步鉴定为芽孢杆菌．通过优化发酵培养基及发酵培养条件,在２５０ｍＬ的摇瓶中可达到４．５μｍｏｌ／（ｍｉｎ·ｍＬ）的普鲁兰酶酶活．优化后的发酵培养基成分如下：玉米支链淀粉２ｇ／ｄＬ,蛋白胨２ｇ／ｄＬ,牛肉膏１．５ｇ／ｄＬ,ＮａＣｌ０．５ｇ／ｄＬ,ＭｎＳＯ４２μｍｏｌ／Ｌ．摇瓶发酵工艺条件：接种量１７％,温度３７℃,摇瓶转速２２０ｒ／ｍｉｎ,ｐＨ６．０,发酵周期３２ｈ．通过２Ｌ容积的发酵罐批式发酵,酶活可稳定在３．３μｍｏｌ／（ｍｉｎ·ｍＬ）左右     

木薯醇腈酶部分酶学性质研究

对利用基因重组技术获得的木薯醇腈酶(HNL)的酶学特异性进行研究,确定了其部分酶学性质.重组木薯HNL的最适温度为50℃,最适pH值为5.5.重组木薯HNL在60℃条件下,保温30 min后仍具有90%的酶活力,说明温度稳定性较好;在pH 4.0～6.0的条件下,获得的相对酶活仍大于80%.     

耐热β-半乳糖苷酶基因bgaB在枯草芽孢杆菌中的整合表达

来源于嗜热脂肪芽胞杆菌Bacillusstearothermophilus的耐热β 半乳糖苷酶基因bgaB被克隆到大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭质粒pMA5中,然后将外源基因及其表达调控序列亚克隆到枯草芽胞杆菌整合载体pSAS144中,转化Bacillussubtilis受体菌BD170,在5μg/mL的氯霉素抗性平板上筛选抗性转化子.经摇瓶发酵后,得到耐热乳糖酶的比酶活为0.32U/mg,是出发菌株比酶活的2倍.     

半纤维素酶高产菌种的选育及产酶条件

以黑曲霉WA301为出发株,经过紫外诱变获得一株遗传性状稳定的半纤维素酶的高产突变株WA9024.通过对培养基中碳源、氮源、水分和起始pH值的优化,突变株WA9204以麸皮为基质的固态发酵产半纤维素酶的能力进一步得到提高.在较适的条件下,WA9024的甘露聚糖酶酶活达到8984U/g,木聚糖酶酶活达到503U/g,分别比出发菌株提高了1160%和210%.     

人类精子表面附睾蛋白激酶抑制剂Eppin和精囊凝固蛋白Semenogelin的相互作用研究

目的:探讨人类精子表面一种附睾蛋白激酶抑制剂Epp in和精囊凝固蛋白Sem enogelin(Sg)的相互关系。方法:①用抗Epp in的抗体与精子和精浆中Epp in蛋白进行免疫沉淀反应;②免疫荧光法在精浆和精子表面共同显色定位;③重组Epp in(rEpp in)和重组精囊凝固蛋白Sg(rSg)共同孵育,用抗Epp in抗体或抗Sg抗体进行免疫共沉淀;④W estern印迹检测rEpp in和rSg相互作用;⑤放射性125I-rSg与rEpp in结合达饱和后,用未标记的rSg竞争性结合分析;⑥放射性125I-rSg直接与印迹膜上的rEpp in行放射性自显影。结果:人精子表面蛋白Epp in与精囊蛋白Sg发生特异性结合,Sg分子结构中的半胱氨酸残基Cys-239是唯一的结合位点,Cys-239的还原及羧甲基化将阻碍125I-rEpp in与rSg的结合。结论:Epp in与Sg的结合是靠分子结构中二硫化键的参与。在人类射精后的精子表面,精囊蛋白Sg结合在精子表面的Epp in上。     

中性纤维素酶高产菌株的诱变选育及产酶条件

通过紫外线和γ射线交替诱变,筛选得到一株高产纤维素酶的突变菌株BE40 39.与出发株相比,其产酶能力提高1.3倍,发酵性状与出发菌株也有明显的差异.突变菌株发酵试验发现,Avicel是突变菌株产酶最合适的纤维素质碳源.通过对发酵培养条件的试验,得出最佳培养条件是:Avicel质量浓度为0.1g/dL,胰蛋白胨质量浓度为0.3g/dL,最适发酵温度为30℃,最佳培养基初始pH4.2,发酵5d达到产酶高峰.     

L-乳酸脱氢酶生产菌的选育及产酶条件

从泡菜汁中筛得一株胞内L 乳酸脱氢酶(L LDH)活性较高的植物乳杆菌RS2 2,采用亚硝基胍和超声波同时作用进行诱变,使其比活力由3.48U/mg提高到7.49U/mg,并对突变株的产酶条件进行了研究.     

纤维素分解菌BSX5的分离、鉴定及产酶条件

利用透明圈法从袋装降解的笋干中分离到一株分解纤维素的细菌菌株. 该菌株呈长杆状、革兰氏染色为阳性、产芽孢,命名为BSX5.其生理生化特征和16S rDNA序列同源性分析,发现该菌株与Bacillus subtilis的同源性为99%,系统发育树分析与Bacillus subtilis遗传关系最近,确定该菌株为Bacillus subtilis. 采用以3,5-二硝基水杨酸（DNS）为显色剂、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）为底物,测定不同培养条件下BSX5菌株的酶活力,结果最适产酶时间为8-12 h,最适产酶温度为50 ℃,最适产酶pH值为5.5～6.5.     

跨膜丝氨酸蛋白酶4对肝细胞癌增殖侵袭作用的影响

目的 探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4 (transmembrane protease serine 4,TMPRSS4)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)增殖侵袭的作用.方法 构建并鉴定慢病毒转染TMPRSS4过表达的人肝细胞癌细胞系BEL-7402.Western blot及RT-PCR检测TMPRSS4的表达.MTT实验检测TMPRSS4对BEL-7402细胞增殖能力的影响.Transwell实验检测TMPRSS4对细胞侵袭性的影响.结果 RT-PCR及Western blot结果显示TMPRSS4过表达组细胞TMPRSS4蛋白及mRNA表达均显著高于对照组及空白载体转染组.MTT实验结果显示,慢病毒转染后,对照组、空白载体转染组和TMPRSS4过表达组细胞增殖能力无显著差异(P＞0.05).侵袭实验显示TMPRSS4过表达组细胞穿过Matrigel胶到达Transwell小室膜背面的细胞数为49.3±7.4,显著高于对照组(23.3±5.0)和空白载体转染组(19.3±3.2)(P＜0.05).结论 HCC细胞表达TMPRSS4.TMPRSS4过表达可促进HCC细胞的侵袭能力,但是不影响HCC细胞增殖.     

法夫酵母色素的组成与性质

对法夫酵母色素的组成及其光谱特性和稳定性进行了研究.结果表明法夫酵母色素是由10多种类胡萝卜素组成,其中虾青素为78%;色素呈亮丽的红色,对热较敏感,对自然光、紫外光、氧很敏感,色拉油和抗氧化剂对其有一定的保护作用.     

Protease activated‐receptor 4 activation as a model of persistent bladder pain: Essential role of macrophage migration inhibitory factor and high mobility group box 1

Objectives

To develop a rodent model of persistent non‐inflammatory bladder pain and to test macrophage migration inhibitory factor and high mobility box group 1 as mediators of bladder pain.

Methods

Female C57BL/6 mice received intravesical instillations of protease activated receptor 4 (100 μmol/L, for 1 h) three times every other day and abdominal mechanical hypersensitivity (50% mechanical threshold) was tested on day 0 (baseline), and at days 1, 2, 3, 4, 7 and 9 after the first protease‐activated receptor 4 injection. At the end of the experiment, micturition changes were measured and bladders were examined for histological changes. Macrophage migration inhibitory factor antagonist (MIF098; 40 mg/kg i.p. b.i.d.) or high mobility group box 1 inhibitor (glycyrrhizin; 50 mg/kg i.p. daily) was administered from day 2 until day 8.

Results

There was a significant and persistent decrease in abdominal mechanical threshold starting from day 3 in the protease‐activated receptor 4‐treated group that persisted until day 9 (5 days post‐last instillation), but not in the control group. Glycyrrhizin fully reversed while MIF098 partially reversed abdominal mechanical hypersensitivity in protease‐activated receptor 4‐treated mice. The changes started on day 3 after the first protease‐activated receptor 4 instillation, and analgesic effects lasted throughout the rest of the testing period. None of the groups had significant micturition changes or overt bladder histological changes.

Conclusions

Repeated intravesical protease activated receptor 4 instillations produce persistent bladder pain without inflammation. Macrophage migration inhibitory factor and high mobility group box 1 are possible effective target molecules for bladder pain alleviation.