高糖环境HGF和TGF-β表达对肾成纤维细胞周期的影响

目的：探讨HGF和TGF－β对高糖作用下的肾间质成纤维细胞周期的影响，以及作用机理。方法：取肾肿瘤切除的政党极肾脏组织，贴壁法培养肾间质成纤维细胞。细胞分别培养于不同的葡萄糖培养液中，另设相同渗透压的甘露醇组。采用流式细胞仪检测细胞 ,MTT产殖，RT－PCR方法对细胞表达HGF和TGF－β进行检测。结果：高浓度葡萄糖作用早期，细胞增殖旺盛，然而随着高糖的持续刺激，细胞增殖发生停滞，同时诱导细胞发生肥大反应。同时观察到高糖作用的早期HGF表达升高，随着作用的持续时间延长，其表达量下降，而GF－β出现持续的高表达，同时外源加入HGF可以抑制TGF－β的表达。结论：高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞，出现肥大。这与HGF和TGF－β的表达差异相关。     

HGF对高糖诱导肾间质成纤维细胞增殖的影响

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对高糖诱导肾间质成纤维细胞损伤的修复作用.方法将人肾脏间质成纤维细胞培养于不同浓度的葡萄糖中,其中25 mmol/L葡萄糖组培养液中加入不同浓度的rhHGF,分别于不同时间段收集细胞,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期.结果高糖作用早期细胞增殖旺盛,随着高糖的持续刺激,细胞增殖发生停滞,同时细胞出现肥大.外源性加入HGF后,对高糖造成的细胞损伤具有修复作用.结论高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞,出现肥大.HGF可以通过促进细胞增殖,抑制由于高糖诱导的细胞肥大.     

HGF对糖尿病肾病TGF-β1 mRNA表达的影响

目的通过检测肾脏TGFβ-1mRNA的表达及其病理变化,研究肝细胞生长因子(HGF)对2型糖尿病肾病不同阶段的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病肾病组、治疗组(HGF组),HGF组分别于注射链脲佐菌素后2个月和6个月时给予HGF 500μg/(kg.d),连续1个月后处死。取一侧肾脏HE染色作病理切片,另一侧肾脏用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGFβ-1mRNA的表达。结果HGF能明显抑制糖尿病大鼠肾脏TGFβ-1mRNA表达的上调。结论HGF可抑制早期糖尿病肾病进一步发展,减轻临床糖尿病肾病的蛋白尿,使肾小球基膜(GBM)明显变薄和细胞外基质降解从而改善并逆转临床糖尿病肾病大鼠肾脏的功能和形态的变化。     

活性维生素D3对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1和HGF表达的影响

目的:探讨活性维生素D3对糖尿病大鼠肾脏(Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)和肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)表达的影响.方法:雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组(NC),糖尿病模型组(DM),活性维生素D3治疗组(DC),每组10只.12周后,观测肾组织形态学和肾功能变化,尿白蛋白排泄率等指标的变化,用免疫组化法检测肾脏TGF-β1表达水平的变化,RT-PCR法检测肾皮质TGF-β1mRNA、HGFmRNA表达水平的变化.结果:与NC组比较,第12周末DM组大鼠肾脏肥大指数(KW/BW)、平均肾小球体积(MGV)、系膜面积比(FMA)、尿白蛋白排泄率(UAER)、血肌酐(Scr)均明显升高(P＜0.05),肾组织TGF-1mRNA及蛋白表达水平也显著升高(P＜0.05),同时肾皮质HGFmRNA表达也有所增加(P＜0.05).DC组HGFmRNA的表达水平较DM组显著升高(P＜0.05),而上述其他指标与DM组比较,则有明显的降低(P＜0.05).结论:活性维生素D3对于糖尿病肾脏病变至少具有部分保护作用,其机制可能为通过抑制糖尿病大鼠肾脏TGF-β1的过度表达,而上调HGF的表达,从而对糖尿病大鼠肾脏起保护作用.     

TGF-β1对肾间质成纤维细胞SDF-1表达的影响

目的 探讨大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F)基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)的表达及转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)对其表达的影响.方法 采用RT-PCR和 Western blot及免疫组化方法检测NRK49F细胞 SDF-1表达及不同浓度、不同时间的 TGF-β1 刺激对SDF-1表达的影响.结果 正常NRK49F细胞低表达SDF-1 mRNA,TGF-β1呈时间依赖性增加其表达,在24 h表达最高,为刺激前(2.924±0.235)倍,差异有统计学意义(P<0.05).在剂量反应曲线上,5 ng/mL TGF-β1刺激作用最强,为未刺激组的(2.113±0.314)倍,差异有统计学意义(P<0.05).与SDF-1 mRNA表达一致,正常NRK49F细胞SDF-1蛋白低表达,5 ng/mL TGF-β1 呈时间依赖性的增加SDF-1蛋白表达,24 h已非常明显,36 h达高峰,为刺激前的(2.572±0.238)倍,差异有统计学意义(P<0.05).加入TGF-β1中和抗体后, SDF-1蛋白的表达明显下降.结论 正常NRK49F细胞有SDF-1低表达.TGF-β1以剂量依赖及时间依赖的方式刺激NRK49F细胞表达SDF-1.SDF-1作为一个炎症趋化因子,可能参与了肾脏炎症反应及纤维化的发生发展.     

糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织HGF表达的影响

目的 探讨糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)表达的影响。方法 采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,根据小鼠随机血糖,采用分层随机法分为模型组、缬沙坦组和糖肾宁组,以C57BL/6J小鼠作为空白组,每组均为20只。药物连续干预12周,测定糖化血红蛋白(hemoglobin A1c, HbA1c)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine, SCr),采用Western blotting法检测肾组织HGF蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组HbA1c、BUN、SCr明显升高(P<0.05),肾组织HGF表达明显降低;与模型组比较,缬沙坦和糖肾宁组HbA1c无明显变化(P>0.05),肾组织HGF表达明显升高,BUN、SCr均有不同程度的降低(P<0.05),缬沙坦和糖肾宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 糖肾宁可降低糖尿病小鼠BUN、SCr,升高肾组织HGF蛋白表达量,抑制肾脏纤维化,具有防治糖尿病肾病的作用。     

HGF和TGF-β1在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的：探讨HGF和TGF-β1在非小细胞肺癌（ NSCLC）中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测73例非小细胞肺癌患者癌组织中及30例癌旁正常肺组织中HGF及TGF-β1的表达;分析HGF及TGF-β1表达情况及与临床病理参数之间的关系。结果73例肺癌组织中HGF的阳性表达率为67．1％,在30例癌旁正常组织的阳性表达率为16．7％,两者差异有显著性意义（ P＜0．05）;HGF的表达与肺癌淋巴结转移密切相关（P＜0．05）,而与病理组织类型及肿瘤的分化程度无显著相关（P均＞0．05）。73例肺癌组织中TGF-β1的阳性表达率为49．3％,在30例癌旁正常肺组织的阳性表达率为16．7％,两者比较差异也有显著性意义（ P＜0．05）;TGF-β1的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关（P均＜0．05）,而与病理组织类型无显著相关（P＞0．05）。经Spearman相关分析, HGF与TGF-β1在NSCLC组织中的表达呈显著正相关（r＝0．340,P＜0．05）。结论在NSCLC中存在HGF与TGF-β1的高表达,两者的高表达可能促进了肿瘤的恶性增殖及淋巴结转移;联合检测HGF及TGF-β1对判断NSCLC恶性程度、转移潜能及预后有重要临床意义。     

中药复方糖肾康对实验性糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探讨中药复方糖肾康胶囊对早期糖尿病肾病的肾脏保护机制.方法:大鼠随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、糖脉康治疗组(C组)、伊那普里治疗组(D组)、糖肾康治疗组(E组),每组12只.观察56 d后,用RT-PCR检测各组肾皮质TGF-β1 mRNA的表达.检测体重、血溏、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、尿白蛋白排泄率(UAER)、肾重指数.结果:B组56 d后出现体重显著降低(P＜0.01);血糖、肾重指数、血BUN与Cr水平显著升高(P＜0.01);肾皮质TGF-β1 mRNA的表达明显增高(P＜0.01).经过糖肾康56 d的治疗后,体重显著回升(P＜0.01);血糖、肾重指数、UAER显著降低(P＜0.01);肾皮质TGF-β1 mRNA的表达明显降低(P＜0.01).结论:糖肾康对早期糖尿病肾病的肾脏具有保护作用.其机制可能为糖肾康下调TGF-β系统的表达,后者有抑制细胞肥大、减少细胞外基质成分的合成的作用.     

2型糖尿病肾病大鼠肾小管间质病变及TGF-β1、HGF和CTGF表达的变化及意义

目的通过2型糖尿病肾病(T2DN)大鼠模型,探讨早期糖尿病肾病(DN)肾小管间质的病理变化及转化生长因子β1(TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)和结缔组织生长因子(CTGF)表达变化及意义。方法高热量饲料喂养加腹腔注射链脲佐菌素(STZ),复制T2DN模型。14周和20周时用HE染色及PASM染色方法观察肾小管及间质的病理变化;用免疫组织化学的方法观察肾小管间质中TGF-β1、HGF和CTGF的表达变化,并进行半定量分析。结果模型组大鼠具有血糖异常、胰岛素抵抗及肾小球高滤过率、白蛋白尿等特点;部分肾小管上皮细胞萎缩、脱落、空泡化,基底膜增厚及小管间质纤维化。免疫组织化学方法提示TGF-β1和HGF14周及20周时在2组大鼠小管间质的表达差异有统计学意义(P<0.01);CTGF在2组大鼠肾小管间质有少量表达,差异无统计学意义。结论早期DN大鼠模型中肾小管间质已开始出现纤维化改变;TGF-β1、CTGF和HGF在早期DN的肾小管及间质中的表达发生变化,提示TGF-β1、CTGF和HGF在肾小管间质的表达失衡与DN肾小管病变的进展相关。     

高糖环境对HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞IL-18、TGF-β1表达的影响

目的:观察高糖环境下肾小球系膜细胞白细胞介素18(IL-18)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的变化及其相互关系。方法:将HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常葡萄糖(NG组:葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)和高糖浓度(HG组:葡萄糖浓度为25 mmol/L)环境中,荧光定量PCR检测各组IL-18和TGF-β1 mRNA的表达量,而后分组加入不同浓度的IL-18(浓度分别为1、10、50、100 ng/dL)和IL-18抗体(浓度为100μg/dL),荧光定量检测TGF-β1 mRNA的表达量。结果:与NG组比较,HG组细胞IL-18、TGF-β1表达增加,TGF-β1表达水平随IL-18浓度增高而增加,用IL-18抗体阻断IL-18后TGF-β1的表达受到抑制。结论:高糖可导致IL-18、TGF-β1表达升高;TGF-β1表达升高依赖于IL-18,且有剂量依赖性;阻断IL-18可抑制TGF-β1的升高。     

黄芪卫矛合剂调节糖尿病肾病大鼠HGF和TGF-β1平衡研究

目的探讨黄芪卫矛合剂对糖尿病肾病大鼠的干预作用。方法用单侧肾切除并链脲佐菌素尾静脉注射建立大鼠糖尿病肾病模型,随机分为假手术组、糖尿病肾病组、糖尿病肾病+黄芪卫矛合剂组和糖尿病肾病+氯沙坦钾组。共持续12周,蛋白印迹法检测各组大鼠肾组织中肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达。结果糖尿病肾病模型组HGF表达减少,TGF-β1蛋白表达增多,与假手术组比较均有非常显著性差异(P0.01),两治疗组可增加HGF蛋白表达,降低TGF-β1蛋白表达,与模型组比较有显著性或非常显著性差异(P0.01或P0.05)。结论黄芪卫矛合剂能够通过增加糖尿病肾病大鼠肾组织中HGF蛋白表达,抑制TGF-β1蛋白表达,起到防治糖尿病肾病的作用。     

高糖诱导人肾间质成纤维细胞c-met的表达及黄芪对其的调节作用

目的：体外研究高糖对人肾脏间质成纤维细胞c-met表达的影响，并观察黄芪药物血清对其的调节作用。 方法：体外培养人肾脏间质成纤维细胞，按培养液不同分为正常对照组、高糖组和甘露醇组。于作用后6、12、24、48和96h，采用逆转录-聚合酶链反应方法检测c-met和转化生长因子βl（transforming growth factor-betal，TGF-β1）mRNA表达，蛋白印迹分析检测c-met蛋白的表达。制备含药血清，将成纤维细胞分高糖组、对照血清组和10％黄芪含药血清组，作用24h和48h后，检测c-met蛋白和mRNA表达情况。 结果：与正常对照组比较，高糖组细胞培养12h时c-metmRNA表达增加（P〈0．05），24h达高峰（P〈0．01），之后表达逐渐下降；高糖组细胞培养24h时，TGF-β1的表达开始增加（P〈0．05），96h达到高峰（P〈0．01）。与高糖组以及对照血清组比较，黄芪含药血清可使细胞c-met mRNA和蛋白表达增加（P〈0．01，P〈0．05）。 结论：高糖刺激早期诱导c-met表达，之后表达下降。黄芪可以通过诱导c-met表达延缓糖尿病肾病的进展。     

芪术胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1和CTGF表达的影响

目的 观察芪术胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏保护作用.方法 采用单侧肾脏切除和腹腔注射链脲佐菌素的方法来建立大鼠糖尿病肾病模型,随机分为正常（NC）组、模型组（DM）、芪术胶囊（QZ）组、氯沙坦钾（LSTJ）组;成模1周后,QZ组按 1 g·kg-1给药,LSTJ组按 1.67 mg·kg-1给药.实验8周末观察各组大鼠血尿素氮BUN、血肌酐（Scr）、糖化血红蛋白（HbAlc）、胱抑素（CysC）以及24 h尿蛋白定量,并进行肾组织病理形态学观察以及免疫组化法检测肾组织中转化生长因子β1（TGF-β1）与结缔组织生长因子（CTGF）的蛋白表达.结果 与DM组相比：QZ组大鼠血清 BUN、Scr、HbAlc、Cys-c和24 h尿蛋白定量明显减低,肾组织病理形态学改变程度均明显改善,大鼠肾小球TGF-β1和CTGF表达均减弱.结论 芪术胶囊可以减少尿蛋白,降低血糖,改善肾功能,下调肾组织TGF-β1和CTGF表达,起到保护肾脏,延缓DN进展的作用.     

高糖环境中肾小管上皮细胞c-met的表达及意义

目的研究高糖作用下人近端肾小管上皮细胞c-met的表达，探讨HGF／c-met系统在糖尿病肾病中的作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞。细胞分别培养于不同的条件培养基中，采用MTT方法检测细胞增殖，RT-PCR方法分析c-met mRNA水平。结果在不同的条件培养基中人近端肾小管上皮细胞在12h和24h细胞增殖无明显差异（P〉0、05）。而在96h细胞增殖出现明显的变化，在HGF组细胞增殖旺盛（P〈0、05）。此外，12h在不同的条件培养基中c-met mRNA表达无差别（P〉0．05），而在24h和96hHGF组c-met mRNA出现持续高表达（P〈0．01）。结论外源性加入HGF能抑制高糖诱导的细胞凋亡，促进高糖环境中的近端肾小管上皮细胞的增殖，并能诱导其受体c-met表达。说明HGF／c-met系统局部上调在糖尿病肾脏损伤修复过程中有重要作用。     

高糖及己酮可可碱对肾间质成纤维细胞作用的研究

目的：探讨糖尿病肾病肾间质病变的机理以及己酮可可碱对肾间质成纤维细胞的作用。方法：为研究高糖对肾间质成纤维细胞的作用,应用MTT比色法检测细胞的增殖,应用流式细胞仪检测细胞周期变化,并应用ELISA法检测细胞上清液中的纤维连接蛋白。同时,本研究也观察了己酮可可碱（Pentoxifylline),一种非选择性的磷酸二酯酶抑制剂对肾间质成纤维细胞的作用。结果：高糖和己酮可可碱均可抑制细胞增殖,影响细胞周期,但高糖可促进成纤维细胞分泌细胞外基质纤维连接蛋白,而己酮可可碱可减少其分泌,且可抑制高糖对成纤维细胞的作用。结论：高糖可能通过促进肾间质成纤维细胞分泌细胞外基质在糖尿病肾病的间质病变中起作用。而己酮可可碱抑制细胞增殖及细胞外基质的分泌将有利于肾间质病变的防治。     

TGF-β1对IL-1β诱导人牙周膜成纤维细胞分泌HGF影响的研究

目的研究转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-1β（IL-1β）干预人牙周膜成纤维细胞后HGF的基因表达的水平变化,为HGF网络调控人牙周膜成纤维细胞功能的研究提供新资料。方法分别采用IL-1β梯度浓度、IL-1β最佳干预浓度和TGF-β1梯度浓度干预第5代人牙周膜成纤维细胞,并运用RT-PCR法检测人牙周膜成纤维细胞中HGF的基因表达。结果经IL-1β单独作用,人牙周膜成纤维细胞中HGF的基因表达水平上调,并优选出IL-1β的最佳干预浓度为10ng/ml（P〈0.05）;当一定浓度的TGF-β1和10ng/ml的IL-1β共同作用于人牙周膜成纤维细胞后,该细胞中HGF的基因表达水平比单独IL-1β作用组低（P〈0.05）。结论 TGF-β1能够抑制IL-1β所诱导的人牙周膜成纤维细胞中HGF的基因表达。     

高糖刺激对体外培养大鼠肾小球系膜细胞表达TGF-β_1和PDGF-BB的影响

目的探讨高糖刺激对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)表达转化生子因子(TGF-β1)和血小板源性生长因子(PDGF-BB)的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,传代后分为正常组(葡萄糖浓度为5.6mmol/L)、高糖A组(葡萄糖浓度为15mmol/L)、高糖B组(葡萄糖浓度为30mmol/L),分别培养12h、24h、48h后,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组细胞TGF-β1和PDGF-BB mRNA的表达水平,应用免疫细胞化学法检测各组细胞中TGF-β1和PDGF-BB蛋白的表达。结果①正常组细胞可表达TGF-β1及PDGF-BB;②与正常组相比,高糖各组细胞TGF-β1和PDGF-BB的mRNA及蛋白表达均升高(P<0.01);③与高糖A组比较,高糖B组系膜细胞中TGF-β1和PDGF-BB的mRNA及蛋白表达均升高(P<0.01)。结论高糖刺激可以上调大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1和PDGF-BB的表达。     

肝炎平对血吸虫性肝纤维化家兔肝组织HGF和TGF-β1表达的影响

目的 观察肝炎平对日本血吸虫感染致肝纤维化家兔肝组织肝细胞生长因子（HGF）和转化生长因子β1（TGF—β1）表达的影响。方法 实验分为3组：正常对照组、模型组及肝炎平治疗组。模型组及肝炎平治疗组通过腹部贴片法感染日本血吸虫（180条／只），6周后用吡喹酮200mg／d，整片喂服，共2d，进行杀虫治疗，杀虫治疗后肝炎平治疗组予以肝炎平治疗6周。苏木精-伊红染色观察肝脏病理形态改变。免疫组化法检测各组HGF、TGF-β1在肝内的表达；RT—PCR和Western blot法分别检测各组HGF、TGF—β1 mRNA和蛋白表达水平。结果 血吸虫性肝纤维化家兔经肝炎平治疗后肝组织内TGF-β1的蛋白和mRNA表达降低，而HGF的表达增强，与模型组比较差异有显著性意义（均P〈0．05）。结论 肝炎平抑制血吸虫性肝纤维化家兔肝组织TGF—β1的表达，促进HGF的表达，这可能是其抗血吸虫性肝纤维化作用的机制之一。     

肝细胞生长因子对高糖条件下系膜细胞基质降解酶系统及转化生长因子β1的影响

目的通过体外培养大鼠肾系膜细胞,研究肝细胞生长因子(hepatocyte grouth factor,HGF)对高糖条件下系膜细胞表达及分泌转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)及其抑制物金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,从而探讨HGF在糖尿病肾病中肾脏保护作用的机制。方法体外培养大鼠肾系膜细胞,分为正常对照组、高糖刺激组及HGF干预组,通过MTT比色测定不同时间、不同HGF浓度对大鼠肾系膜细胞增殖的影响;采用ELISA法测定细胞上清中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、HGF以及Ⅳ型胶原(Ⅳcol)的含量;以RT-PCR法检测系膜细胞MMP-9,TIMP-1、TGF-β1及HGF基因的表达。结果同正常对照组相比高糖刺激系膜细胞增生,HGF可以抑制高糖引起的系膜细胞增生。通过外源添加HGF可以显著抑制高糖条件下系膜细胞Ⅳcol、TIMP-1及TGF-β1的分泌,但对高糖条件下系膜细胞MMP-9的分泌则无显著影响。同高糖刺激组相比,外源HGF使系膜细胞MMP-9及HGF基因表达明显增强,而显著抑制系膜细胞TIMP-1及TGF-β1基因的表达。结论HGF对于高糖条件下的大鼠肾系膜细胞可能具有保护性作用,这一作用可能同以下途径有关:HGF抑制高糖刺激所导致的系膜细胞增生;HGF抑制TIMP-1mRNA表达及蛋白合成,促进MMP-9mRNA表达,从而调节MMP-9与TIMP-1之间的比例促进ECM降解;HGF显著抑制TGF-β1mRNA表达及蛋白合成,并且促使内源HGFmRNA表达增高,从而恢复TGF-β1与HGF之间的平衡。     

HGF对高糖诱导肾间质成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对高糖诱导肾间质成纤维细胞损伤的修复作用。方法 将人肾脏间质成纤维细胞培养于不同浓度的葡萄糖中，其中25mmol／L葡萄糖组培养液中加入不同浓度的rhHGF，分别于不同时间段收集细胞，采用MTT法检测细胞增殖．流式细胞仪检测细胞周期结果高糖作用早期细胞增殖旺盛，随着高糖的持续刺激，细胞增殖发生停滞，同时细胞出现肥大外源性加入HGF后，对高糖造成的细胞损伤具有修复作用。结论 高糖作用下的肾间质成纤维细咆早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞，出现肥大HGF可以通过促进细胞增殖，抑制由于高糖诱导的细胞肥大。