长蛸胃肠道产蛋白酶菌的筛选及粗酶性质研究

通过透明圈法从长蛸胃肠道内筛选出4株产蛋白酶的菌株, L 1、L 2、L 3、L 5, 采用偶氮酪蛋白法测定粗酶液蛋白酶活力, 采用SDS PEAG活性电泳测定粗酶液中具有蛋白水解活性的蛋白酶的种类及分子量. 菌株L 2产蛋白酶比酶活最高, 达到4.80U/μg, 菌株L 1比酶活最低为3.31 U/μg. 菌株L 2粗酶液中含有4种酶活较高的蛋白酶, 分子量分别为105.2、86.9、69.3、37.8kD, 其他3株菌株的粗酶液中各蛋白酶分子量相近. 菌株L 1和L 2蛋白酶最佳反应温度为40℃, 最佳反应pH为8.0; L 3产蛋白酶的最佳反应温度为50℃, 最佳pH为7.0; 菌株L 5产蛋白酶在温度为60℃, pH为8.5时有最大酶活力.     

患病草鱼主要消化酶活性变化的研究

分析了健康鱼和患肠炎病草鱼的淀粉酶和蛋白酶活性。其淀粉酶最适pH值均为7.2，蛋白酶最适pH值分别为7．0和6．0；其淀粉酶最适温度分别为30℃和35℃，蛋白酶最适温度均为40℃，且患肠炎病草鱼蛋白酶和淀粉酶活性较健康鱼低，但pH值在5．7以下时，患病鱼的蛋白酶活性较健康鱼高；温度在28℃以下时，患病鱼的淀粉酶活性比健康鱼高。     

产碱性冷适蛋白酶菌株Chryseobacterium sp.vv8的鉴定及粗酶性质

为鉴定金黄杆菌属(Chryseobacterium)菌株vv8及分析其胞外蛋白酶的酶学特性,首先,通过分子及生理生化特性对菌株vv8进行鉴定;然后,采用明胶平板筛选法和Lowry法对菌株vv8进行产酶筛选和蛋白酶活性测定;最后,研究pH值、温度、金属离子和抑制剂对该蛋白酶活性的影响.研究结果表明:菌株vv8的16S rDNA与比目鱼黄杆菌(C.scophthalmum)具有98.24%的序列相似性,属于Chryseobacterium属;菌株vv8的最适生长条件是温度为22℃,NaCl质量浓度为0 mg·mL~(-1),pH值为6.0;菌株vv8的胞外蛋白酶在pH值为5.0～10.0,温度为0～90℃范围内均具有酶活性,其最适酶活温度和pH值分别为40℃,8.5;在最适条件下,蛋白酶具有较高的稳定性,在冻干过程中,添加葡萄糖具有明显的酶活保护作用;Fe~(3+),Fe~(2+),Cu~(2+)等金属离子及乙二胺四乙酸(EDTA)对酶活性有明显的抑制作用,该酶对洗衣液和尿素具有较好的耐受性.     

发酵大豆中产碱性蛋白酶菌株鉴定及其部分酶学性质研究

从自然发酵的大豆中分离一株产蛋白酶活性较高的菌株BN-2,经16SrRNA基因序列分析初步确定该菌株为Bacillus subtilis subsp.natto BEST195。将该菌株中碱性蛋白酶(Alkaline protease,AP)基因,插入pBE2R中构建成重组表达载体pBE2R-AP,并转染枯草芽孢杆菌WB600进行分泌性表达。以糊精、可溶性淀粉作为碳源,每毫升发酵液中重组蛋白酶比出发菌株中蛋白酶酶活高1.2倍。该酶的最适作用pH为8.0,在pH 8.0缓冲液中保存24h,残余酶活力为94%;酶的最适作用温度为50℃,但在50℃中处理30min时残余酶活性降至51%;Ca2+、Mn2+能有效激活酶活力;洗涤剂组分中1%的TritonX-100、Tween20、Tween80对该酶活性的抑制作用相对较小。     

南极产低温蛋白酶菌株Marinobacter sp.R2的发酵条件及酶学性质研究

从南极海域沉积物中筛选到一产蛋白酶的菌株R2，经细菌学形态特征鉴定及16S rDNA序列分析鉴定，该菌株属于海杆菌属(Marinobacter)．生长特性研究表明该菌株属于兼性嗜冷菌，其最适生长温度为10～15℃．R2菌株能利用多种碳源产酶，最适产酶温度为20℃．粗酶液经硫酸铵盐析、DEAE cellulose-52柱层析进行初步分离纯化后进行酶学性质的研究．该菌株所分泌蛋白酶的最适作用温度为20℃，最适pH值为9～10，对热敏感．是典型的低温碱性蛋白酶．Ca^2 、Mn^2 、Cu^2 对该蛋白酶有较为明显的激活作用，而Cd^2 、Co^2 则能抑制酶活．高浓度的变性剂、PMSF、AEBSF和EDTA都能抑制该蛋白酶，表明该酶属于丝氨酸蛋白酶，且金属离子对酶活性中心构象有关键性的影响．     

BT—37蛋白酶的初步研究

BT—37是从土壤中分离出的一株对多种鳞翅目昆虫有较高毒力的苏芸金芽孢杆菌。在PB培养基中振荡培养,蛋白酶活性随着细胞的生长而增强,培养36小时,芽孢晶体开始脱落时达到高峰。所产蛋白酶为中性蛋白酶。酶作用的最适条件:最适温度为50℃,60℃保温1.5小时酶活性降低70％;最适pH7.0;在pH6.0℃—10.6范围内稳定。1.5×10~3M时,Mn~+显著提高酶活。在蛋白酶活性高的培养基中获得了较高毒力的培养物。     

枯草芽孢杆菌培养液水解鱼蛋白质制备蛋白胨的初步研究

对枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶的产生条件及其培养液水解鱼蛋白质制备蛋白胨进行了初步研究．结果表明,适宜枯草芽孢杆菌产蛋白酶的培养基初始pH值7．0、培养温度30℃、250mL三角瓶中的装液量为60mL,培养时间为24h;用枯草芽孢杆菌培养液为蛋白酶源水解蛋白质时,应控制反应体系的温度为55℃,pH9．0,加入低浓度的Mg^2＋、Ca^2＋并去除Cu^2＋、Fe^3＋、Pb^2＋和Ag^＋,对枯草芽孢杆菌产酶有促进作用．用枯草芽孢杆菌培养液分别水解鳕鱼粉和罗非鱼,蛋白质制备蛋白胨的得率分别为13．95％和14．96％,与目前的工业水平基本相当．     

两株芽孢杆菌对萘、菲、芘的降解特性研究

目的:研究枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌在不同pH、温度和盐度条件下对多环芳烃萘、菲、芘的降解.方法:将多环芳烃萘、菲、芘做为惟一碳源,以活性炭为吸附载体,通过实验测定菌株对萘、菲、芘的降解能力和脱氢酶活性大小,为进一步研究多环芳烃的降解提供理论依据.结果:两株芽孢杆菌在不同的温度、pH、盐度下培养48 h后,得到各单因素的最适降解条件为温度在35℃(pH=7.0、盐度为80 mmol/L)时,枯草芽孢杆菌对萘、菲、芘的降解率和脱氢酶活性达到最高.在温度为30℃(pH=7.0、盐度为40 mmol/L)时,苏云金芽孢杆菌对萘、菲、芘的降解率和脱氢酶活性达到最高.结论:枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌在不同的温度、酸度和盐度条件下对萘、菲、芘的降解能力和脱氢酶活性各不相同,其中,酸度对枯草芽孢杆菌的影响最大,温度对苏云金芽孢杆菌的影响最大.而在相同条件下,两种菌株对萘、菲的降解能力和脱氢酶活性均大于对芘的降解能力和脱氢酶活性,可见萘和菲的降解效果比芘的降解效果好.     

真鲷幼鱼消化酶活性与温度的关系

报告了真鲷幼鱼３种消化酶在不同的反应温度和不同的饲养温度下活性变化的研究结果．在１８～３８℃反应温度范围内,蛋白酶和淀粉酶的活性随温度的升高而增大．其中蛋白酶活性在１３０℃以上增加较快,淀粉酶在２３～３０℃时增加较快．脂肪酶在１８～３０℃时活性随温度上升而增大,其中２３～２６℃时上升较快,超过３０℃,酶活性略有下降．在２３～３０℃饲养水温下,３种酶活性随水温升高而增大．但增幅不同．与反应温度比较脂肪酶活性增幅前者略大于后,蛋白酶活性增幅则前者远大于后者,淀粉酶活性增幅前者略小于后者．作者认为,饲养温度除了直接影响酶的活性外,还通过调节机体的代谢,改变体内的离子浓度、ｐＨ等,从而间接影响了酶活性．     

XG32菌株产ACC脱氨酶的培养条件和酶活影响因素

为了明确具1-氨基环丙烷-1-羧酸(1-aminocyclopropane-1-carboxylate ACC)脱氨酶活性细菌菌株XG32的产酶条件和酶活影响因素,以ACC为底物,研究了诱导培养基中底物的浓度、温度、pH对该菌株产酶的影响及产酶的时程;分别在不同温度、不同pH及添加8种金属离子的条件下测定了酶的活力和稳定性.结果表明:菌株XG32在有底物ACC存在时才能被诱导产酶,温度上升至5℃及pH>5 5时酶活性才开始被诱导,在25℃和pH 7 0～8 0时酶活性最高;诱导初始至24h内是酶产生的上升期,24h后酶产生呈下降趋势.酶的最适反应温度为30℃,高于35℃酶的活力下降,在65℃酶的活力趋于零;该酶在pH 7 5～9 5之间有较好的稳定性;金属Cu2 、Zn2 对ACC脱氨酶有激活作用,而Hg2 、Ag 则有抑制作用.因此,认为ACC脱氨酶酶活性的出现对底物的存在非常敏感,在自然界中少量的酶就可以催化ACC的分解.但酶活力受条件影响较大,仅能在一定的范围内保持酶活的稳定性.     

超滤膜浓缩重组α-乙酰乳酸脱羧酶及酶法清洗

采用聚醚砜超滤膜对重组枯草芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶液进行超滤浓缩,研究了温度和pH值对膜通量的影响,进行了化学法和酶法对超滤膜的清洗再生条件的试验.结果表明:酶液pH值对膜通量影响显著,浓缩10倍时,pH =5.1的膜通量仅为pH =7.1的20.3％;在压力为0.1MPa、酶液温度35℃、pH=7.1条件下,超滤可保持较高膜通量,酶活力回收率可达89.6％.酶法清洗超滤膜时,中性蛋白酶活性超过1.25 ×104U·L-1可对超滤膜形成二次污染;活性为1.25 ×104 U·L-1的中性蛋白酶与体积分数1％的次氯酸钠复合清洗可达到最佳的清洗再生效果,膜通量恢复率提高到97.0％.     

红曲霉固态发酵产糖化酶及酸性蛋白酶条件的优化

从8株红曲霉中筛选出红曲霉MQ7作为高产糖化酶和酸性蛋白酶的供试菌株,采用固态发酵方法测定在不同发酵温度、底物料液比、大米和麸皮比例条件下的产酶情况.利用正交实验优化固态发酵产酶过程,确定该菌株产酶最佳发酵条件为:发酵温度30,℃,底物料液比(g∶mL)20∶25,大米麸皮比例(g∶g)17∶3.在此条件下,糖化酶活力达1,641.69,U/g,酸性蛋白酶活力达151.09,U/g.同时研究了NaCl含量对红曲霉酶活力的抑制作用,当NaCl质量分数达到18.92%时,红曲霉MQ7产糖化酶活力下降64.8%,酸性蛋白酶活力下降85.6%.     

豆豉中β-甘露聚糖酶高产菌的分离、鉴定及其酶学性质

通过对传统曲霉型豆豉菌群分离纯化,结合刚果红显色及DNS筛选法,共得到高产β-甘露聚糖酶且形态学差异较大的细菌4株、真菌1株,其中真菌的酶活力为2 016 U?mL^-1.经过序列鉴定与比对,细菌鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus)不同种,真菌为黑曲霉(Aspergillus niger).酶学性质研究表明:黑曲霉的最适温度和pH值分别为60 ℃和5.0; 4株芽孢杆菌最适作用温度和pH值范围为40～55 ℃和6.0～7.0,其中1株芽孢杆菌在65 ℃时保温240 min或在pH值为9.0时保留30 min,残留相对酶活仍可达61.4%或84.3%.     

高温和高盐对Nitrosomonas nitrosa WH-1氨氧化活性的联合影响

自养氨氧化细菌是污水处理中的重要细菌,但高温和高盐对其氨氧化活性的联合影响研究仍较为匮乏.该文以纯培养的自养氨氧化细菌Nitrosomonas nitrosa WH-1为例,采用响应面法测定了温度与盐浓度对N.nitrosa WH-1亚硝氮积累速率的联合影响,还测定了不同盐浓度条件(3～18 g·L^-1)和不同温度条件(36℃～48℃)下的最适温度、半数抑制温度和半数抑制盐度.发现高温与高盐对亚硝氮积累速率存在明显的交互作用,当温度由36℃升至42℃,半数抑制盐浓度由8.84 g·L^-1增至10.45 g·L^-1,而盐浓度为15～18 g·L^-1时的最适温度和半数抑制温度也显著高于盐浓度为3～12 g·L^-1时的情况.上述结果说明,高温可以缓解高盐所引起的抑制,且适度的高盐也可以提高自养氨氧化细菌的耐热性.     

响应面法优化章鱼内脏酸性蛋白酶提取条件

首先,以章鱼内脏为原料,通过单因素实验,分析pH值、温度、料液比、抽提时间对提取粗酶液中酸性蛋白酶活性的影响.然后,通过响应面法优化,得到多项式拟合回归方程,并对酶活的预测值和实测值进行验证.最后,测定粗酶液中蛋白酶的种类和活性.结果表明:酸性蛋白酶的最优抽提条件为pH值5.0、温度30 ℃、时间2.5 h、料液比1∶5,由此得到的粗酶液酶活为917.2 nkat·g^-1,对应比活为28.5 nkat·mg^-1;响应面回归方程计算的预测值与实际值位于误差范围内,说明该方程具有预测作用;粗酶液中,蛋白酶大部分为酸性蛋白酶,占总蛋白酶76.0%.     

嗜盐淀粉酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究

【目的】筛选分离新的嗜盐淀粉酶产生菌,并对其进行酶学性质研究。【方法】从广西大学奶牛厂的奶牛粪便土壤中分离得到一株能产耐盐淀粉酶的菌株,利用16SrRNA序列对比进行鉴定,经破胞提取胞内总蛋白测定嗜盐淀粉酶酶学性质。【结果】经16SrRNA初步鉴定该菌株为阴沟肠杆菌属(Enterobacter cloacae)。该菌株是非嗜盐菌株,却能产生一种胞内嗜盐淀粉酶。酶学性质研究表明该酶在NaCl终浓度为4mol/L时,酶活力最强,当盐浓度为5.5mol/L时,仍能保持最高酶活的60%;以MOPS-NaCl配制的1%可溶性淀粉溶液为底物时,其最适反应温度为50℃,最适pH值为6.5,pH值在4.5~8.5时均能保持60%以上的相对活力;在35~45℃的温度范围内显示较好的稳定性,相对酶活保持在80%以上,但当温度达到50℃时,酶活力急剧下降;Ca2+浓度对酶活力几乎没有影响;EDTA浓度在10~140mmol/L时酶活力变化不大,大于140mmol/L之后,酶活力逐渐下降。【结论】该菌株是在非嗜盐菌株中发现的具有嗜盐淀粉酶基因的菌株,其嗜盐淀粉酶在高盐环境下具有很高的酶活力。     

采用数值仿真实验的“透光”镜制造原理

对“透光”镜造型进行检测分析，探明“透光”现象的关键原因为镜面整体上凸，镜面存在微观结构.对镜体材质、铸造残余应力、研磨量和研磨方式等关键因素进行分析，逐步探明制镜工艺特点.以ABAQUS软件为平台，通过数值仿真实验分析镜面研磨过程中残余应力引起的镜体变形效果.仿真结果表明：随着“透光”镜的镜面研磨去除量和去除曲率逐渐增大，镜面微观结构的高度差将逐渐增大，形貌特征将更加明显；在平面研磨过程中，随着镜体刚度逐渐下降，铸造残余应力克服镜体刚度使镜面产生拱起变形和应变差异；在曲面精磨过程中，随着镜面弯曲曲率的增大，镜体内部残余应力更易释放，镜面上的微观结构也更加明显，最终形成镜面“透光”现象.     

温度和pH对可口革囊星虫消化酶活力的影响

采用酶学分析方法研究了温度和pH值对可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)肠道蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶活力的影响.结果表明:在5～65℃温度范围内,温度显著影响可口革囊星虫肠道中蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶的活力(P<0.01),蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶活力的最适温度分别为50...     

康氏木霉固体发酵生产纤维素酶条件的研究

为利用康氏木霉(Trichoderma.koningii)降解稻草提供工艺参数,以康氏木霉(T.koningii)N18为菌株,进行了固体发酵产纤维素酶条件的优化。确定了康氏木霉(T.koningii)的最佳固体发酵培养条件:稻草:麸皮的最佳比例为6:2,最佳氮源为(NH)SO,碳氮比为6:1,含水量为200%,最适产酶pH为6.0,最佳产酶温度为28℃,最佳产酶时间为7d,康氏木霉(T.koningii)所产纤维素酶各组分酶活力分别为:羧甲基纤维素酶活力为321.64U.mL,滤纸分解酶活力为59.58U.mL。4 2 4-1-1     

低温脂肪酶产生菌筛选与鉴定、产酶条件及酶学性质研究

 昆明东站一家屠宰厂冷库中筛选到14株产脂肪酶低温菌株.选取1株胞外低温脂肪酶高产菌,进行显微形态及生理生化特征、16S rRNA基因序列分析,将其初步鉴定为Yersinia enterocolitica的一株菌,命名为KM1.对该菌发酵产酶条件研究,发现其最佳产酶发酵条件为:培养温度13℃,pH7.2,摇瓶培养时间54h.在最佳产酶发酵条件下酶活由1.8U/mL提高到3.1U/mL,提高了72%.对该菌脂肪酶的酶学性质研究表明:在0℃时仍具有最高酶活的20%,最适反应温度37℃,最适反应pH为9.0.在25℃以下,pH7.2～10范围内均能保持良好的稳定性.该酶在有机溶剂中较稳定,即使在50%的甲醇中仍能保持60%以上的活性,该酶的最适底物为C₈的酯化物,且对C₄～C₁₂的酯化物均有较好的催化能力.