磷脂酰肌醇3(PI3K)激酶信号途径对血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原表达的影响

目的 观察磷脂酰肌醇3激酶特异性抑制剂（LY294002），对血小板源生长因子（PDGF-BB）促大鼠肝星状细胞（HSC）增殖与Ⅰ型胶原表达的影响，并探讨其作用机制。方法用不同浓度的PDGF-BB和LY294002对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）进行处理，MTT法检测细胞的增殖，逆转录聚合酶链反应方法（RT-PCR）检测HSC-T6内Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果PDGF-BB在浓度1～10ng／ml时呈剂量依赖性地促进HSC细胞增殖（P〈0．05），当浓度大于10ng／ml时处理组间无显著差异（P〉0．05），其促增殖作用达到饱和。5μmol／L、10μmol／L、25μmol／L的LY294002均能显著且剂量依赖性地抑制PDGF-BB刺激的HSC-T6增殖（P〈0．001）。PDGF-BB能促进HSCI型胶原mRNA表达，24h、48h时相对于对照组的表达量为112．2％。182．5％。LY294002能显著抑制PDGF-BB促Ⅰ型胶原表达，24h、48h时相对表达量为76．4％，52．6％。结论磷脂酰肌醇3激酶信号途径是调节血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与分泌胶原的重要通道，抑制该通路可以抑制肝星状细胞增殖和胶原表达，具有抗肝纤维化的作用，对防治肝纤维化有一定的意义。     

丹参素对PDGF-BB刺激下肝星状细胞的抑制作用

目的观察丹参素对PDGF-BB刺激下大鼠肝星状细胞活化增殖,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成与分泌,ERK1/2和PI3K通道蛋白表达的影响,探讨丹参素抑制肝纤维化的分子机制。方法用不同浓度丹参素(0.250、0.125、0.062 mmol/L)、ERK通道特异性抑制剂UO126(20 nmol/L)和PI3K通道特异性抑制剂LY294002(20 nmol/L)分别作用于经血小板衍生生长因子PDGF-BB(10 ng/ml)处理的大鼠肝星状细胞(HSC)48 h,CCK8法检测HSC增殖活性,免疫化学染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原合成,酶联免疫吸附法观察Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌,Western blot测定ERK1/2、p-ERK1/2、AKT和p-AKT蛋白表达。结果 PDGF-BB 10 ng/ml处理后,HSC增殖明显增加(0.139±0.009),丹参素能抑制PDGF-BB刺激大鼠HSC增殖的作用,并随丹参素浓度增加(0.062、0.125、0.250 mmol/L)细胞增殖受到的抑制作用越强(0.102±0.008、0.083±0.007、0.066±0.014,P<0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及分泌均显著减少(P<0.05),p-ERK1/2和p-AKT蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论丹参素可通过抑制PDGF-BB诱导的HSC增殖和活化,同时抑制与肝纤维化密切相关的MAPK、PI3K途径中ERK、AKT蛋白的磷酸化,负性调控肝纤维化过程,其机制可能与抑制ERK1/2和PI3K信号转导通路有关。     

丹参素对肝星状细胞ERK1/2信号转导通路的影响

目的:观察丹参素对血小板衍生生长因子-BB(Platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖、Ⅰ型胶原合成、磷酸化细胞外信号调节激酶1,2(Phosphoryhted extracellular signal-regulated kinase 1/2,P-ERK1/2)表达的影响,探讨丹参素抗肝纤维化的分子机制.方法:四甲基偶氮唑盐法检测大鼠HSC增殖活性;免疫细胞化学染色法测定大鼠HSC Ⅰ型胶原合成的表达;Western blot测定大鼠肝星状细胞P-ERK1/2的表达.结果:丹参素有抑制PDGF-BB刺激大鼠HSC增殖,Ⅰ型胶原表达,p-ERK1/2表达的作用.结论:丹参素可抑制PDGF-BB刺激的大鼠HSC增殖,Ⅰ型胶原合成,其机制可能与抑制ERK1/2信号转导通路有关.     

磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂对人宫颈癌细胞株生长的影响

目的运用磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K）特异性抑制剂LY294002[2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]作用于宫颈癌细胞株SiHa,探讨其对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。方法培养宫颈癌细胞株SiHa,分为对照组和LY294002干预组（LY294002 5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L）分别作用6h、12h、24h、48h;MTT比色法检测体外使用抑制剂对宫颈癌细胞株SiHa生长的作用;运用流式细胞技术检测SiHa凋亡抑制率。结果 LY294002能抑制宫颈癌体外培养细胞系SiHa的生长,并以剂量-时间依赖方式诱导凋亡,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 LY294002能有效抑制SiHa细胞的增殖,呈时间-剂量依赖性。PI3K/Akt介导的信号转导通路可能宫颈癌的发生发展起作用。     

汉防己甲素对脂多糖刺激的大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的观察汉防己甲素对脂多糖刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及瘦素表达的影响,并观察Ⅰ型胶原表达的变化。研究汉防己甲素抗肝纤维化过程中的作用和机制。方法用脂多糖刺激大鼠肝星状细胞后,加汉防己甲素分组培养。采用MTT法测定细胞增殖,ELISA法检测其上清液瘦素和Ⅰ型胶原水平。结果脂多糖可刺激HSC增殖,汉防己甲素抑制脂多糖刺激的HSC增殖,并抑制瘦素和Ⅰ型胶原的表达。结论汉防己甲素可能通过抑制HSC增殖和抑制瘦素的分泌发挥抗纤维化作用。     

糜酶抑制剂在体外对肝星状细胞增殖及肝纤维化相关基因表达的影响

[目的]探讨糜酶抑制剂(Chy-I)在体外对肝星状细胞(HSC)增殖及肝纤维化相关基因表达的影响及作用机制.[方法]取HSC-T6细胞,分为对照组(DMEM)、模型组(TGF-β1)和Chy-I大、中、小剂量(TGF-β1+100 g/L Chy-I,TGF-β1+10 g/L Chy-I,TGF-β1+1 g/L Chy-I)组,检测Chy-I对HSC-T6细胞的增殖抑制率,采用Western blot法检测纤维化相关因子α-SMA及TGF-β1蛋白表达水平,应用实时定量PCR法检测α-SMA及I型胶原mRNA的表达情况.[结果]与模型组比较,Chy-I各剂量组HSC-T6细胞增殖明显受到抑制(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖性;Western blot法检测结果显示,与模型组比较,Chy-I各剂量组HSC-T6细胞中α-SMA及TGF-β1蛋白表达明显受到抑制,亦呈剂量依赖性,Chy-I各组HSC-T6细胞内α-SMA及I型胶原mRNA表达水平明显降低.[结论] Chy-I在体外对HSC发挥抗肝纤维化作用,其机制认为可能与抑制HSC增殖水平及肝纤维化相关因子的表达有关系.     

甲基阿魏酸对PDGF—BB刺激的肝星状细胞增殖的影响

目的观测甲基阿魏酸(meth-ferulic acid,MFA)对PDGF-BB刺激的肝星状细胞(HSC-T6)增殖的影响。方法采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测MFA对HSC-T6增殖的影响并计算抑制率。结果 MFA可以抑制HSC的增殖,呈现一定的剂量依赖性。结论 MFA能抑制PDGF-BB刺激HSC的增殖作用从而减轻肝纤维化。     

蛋白芯片技术研究吲哚-3-原醇抗肝纤维化的分子机制

目的:利用高通量蛋白芯片技术,观察吲哚-3-原醇(I3C)对活化肝星状细胞(HSCs)内多种蛋白表达的影响,初步探讨I3C抗肝纤维化作用的分子机制。方法:培养永生化肝星状细胞株HSC-T6,该细胞具有活化的HSC表型,用100μmol/L的I3C处理细胞24h。高通量蛋白芯片技术观察HSC中与细胞周期、DNA损伤修复、细胞凋亡、骨架蛋白和细胞外基质等相关的主要蛋白的表达变化,分析变化达2倍以上的蛋白分子。结果:I3C可抑制炎症过程,减少HSC活化;阻滞细胞周期的进展,抑制HSC增殖;抑制NF-"B相关信号通路,促进HSC凋亡;调节细胞骨架和细胞外基质的合成与分解,减少肝脏胶原沉积。结论:I3C可通过多途径发挥其抗肝纤维化作用。     

玉郎伞多糖对肝星状细胞增殖和Ⅰ型胶原合成的影响

目的 研究玉郎伞多糖(YLS)对肝星状细胞(HSC)增殖和Ⅰ型胶原合成的影响.方法 选择肝星状细胞系作为体外研究对象,MTT法测定肝星状细胞的增殖,LDH法检测YLS对肝星状细胞的毒性作用,ELISA法测定Ⅰ型胶原含量.结果 YLS(12.5～100μg/mL)可明显降低培养上清液中Ⅰ型胶原水平,抑制肝星状细胞的增殖,并呈剂量依赖性.结论 YLS可能通过抑制HSC的增殖及Ⅰ型胶原的合成等机制从而抑制肝纤维化的形成.     

去甲肾上腺素和酚妥拉明对肝星状细胞增殖和细胞外基质的影响

目的探讨肾上腺素激动剂（NA）和拮抗剂（PTL）对细胞因子刺激大鼠肝星状细胞（HSC-T6）的影响。方法HSC-T6的复苏和传代;MTT法检测HSC-T6的增殖;放射免疫法（RIA）检测HSC-T6分泌透明质酸（HA）和前胶原的水平（PC）;糖原染色（PAS）用来检测HSC-T6内糖原水平。结果在体外实验中,NA（10^-5、10^-7、10^-9mol／L）能促进PDGF-BB诱导的HSC-T6的增殖、TGF-诱导的HA及PCIII的分泌并且能增强细胞内糖原的表达;PTL（10^-5、10^-7、10^-9mol／L）能抑制PDGF-BB诱导的HSC—T6的增殖、TGF-诱导的HA及PCIII的分泌并且能减弱细胞内糖原的表达。结论NA能促进HSC—T6增殖及基质的分泌,PTL则抑制HSC-T6的增殖及基质的分泌。     

转谷氨酰胺酶3(TGM3)促进肝细胞肝癌(HCC)增殖侵袭的潜在机制及其临床意义

 目的 研究转谷氨酰胺酶3 （transglutaminase 3，TGM3）在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）发生、发展过程中的作用及其预测HCC预后的临床价值。方法 收集复旦大学附属中山医院HCC患者标本和临床资料进行分析，用qRT-PCR和Western blot方法检测28例HCC患者癌和癌旁TGM3表达差异，利用组织芯片染色结果及临床随访资料对92例HCC患者行Kaplan-Meier及Cox回归分析，探究TGM3不同表达水平对患者预后的影响。shRNA下调HCC细胞系Huh7和97H的TGM3表达水平，利用CCK-8法、克隆形成实验、Transwell小室实验、裸鼠皮下成瘤实验分析干扰后细胞增殖、迁移、侵袭及皮下成瘤能力的变化，Western blot检测PI3K/AKT、MAPK/EPK、NF-κB信号通路、上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）及凋亡相关蛋白的变化。结果 TGM3在HCC中高表达，Kaplan-Meier生存分析表明TGM3高表达组的中位复发时间和中位生存期均较低表达组显著缩短（15.00个月vs.49.25个月，P<0.05；38.63个月vs.未达到；P<0.05）；多因素Cox回归分析发现TGM3表达水平是HCC患者术后复发和死亡的独立预后因素（HR=2.31，P=0.029；HR=2.78，P=0.009）。体内外实验表明TGM3表达下调可以抑制HCC细胞的增殖、侵袭及皮下成瘤能力。TGM3下调使AKT、ERK、p65蛋白磷酸化水平降低，cleaved caspase 3水平增高，EMT相关指标E-钙黏素表达增加，N-钙黏素、纤维连接蛋白及波形蛋白表达下降。结论 TGM3可能通过影响多条信号通路和EMT过程促进HCC的增殖和侵袭，并可作为HCC患者潜在的预后指标及治疗靶点。     

胃癌中水通道蛋白3的表达与淋巴结转移的关系

目的:探讨水通道蛋白3(AQP3)在胃腺癌不同分期中的差异表达与淋巴结转移的关系?方法:采用定量PCR?Western blot法对80例不同分期的胃腺癌组织及作为对照的癌旁非肿瘤组织中AQP3 mRNA和蛋白的表达分别进行检测,并与各临床病理分期中淋巴结转移情况进行分析?结果:AQP3在胃腺癌不同分期中的差异表达影响胃癌的淋巴结转移,有淋巴结转移的T1?T2?T3?T4期(UICC,2010)肿瘤组织中AQP3的表达明显高于无淋巴结转移者?结论:胃腺癌肿瘤组织中高表达的AQP3可能对患者淋巴结转移的发生有促进作用,因此AQP3有望成为预测胃腺癌转移和评估预后的重要指标,并可能是胃癌治疗靶点之一?     

Significance of decoy receptor 3 in sera of hepatocellular carcinoma patients

Objective

Decoy receptor 3 (DcR3), a member of the tumor necrosis factor receptor superfamily, is amplified and over-expressed in various cancers. The objective of the present study was to investigate the concentration of DcR3 in sera of hepatocellular carcinoma (HCC) patients and its clinical significance.

Methods

Serum concentrations of DcR3 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 67 patients with HCC, 8 with liver cirrhosis, 17 with cholecystitis, and in 28 healthy individuals. Immunohistochemistry was employed to access protein expression of DcR3 in the corresponding HCC tissues.

Results

Serum concentrations of DcR3 in patients with HCC or cirrhosis were significantly higher than in healthy individuals (P < 0.01). Moreover, serum concentrations of DcR3 in HCC patients were associated with TNM stage, para-cirrhosis, capsular infiltration, and metastasis or recurrence of disease (P < 0.05). There was a positive correlation between the serum concentration of DcR3 and protein expression in HCC tissues (r = 0.472, P < 0.01).

Conclusions

The high serum concentration of DcR3 might play a certain role in pathogenesis, progress, and metastasis of HCC. Moreover, DcR3 might serve as a valuable molecular indicator in early diagnosis and contribute to predicting the clinical outcome in HCC patients.     

脑胶质瘤中磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B以及同源磷酸酶-张力蛋白表达水平

目的 探讨PI3K、AKT、PTEN 在脑胶质瘤中的表达。方法 选择2017 年1~12 月在我院及华山医院手术治疗的脑胶质瘤患者66 例的病理标本进行分析,另选择50 例患者的正常脑组织病理标本为参照。应用免疫组化方法检测磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B 及同源磷酸酶-张力蛋白表达,比较脑胶质瘤组织中以及正常脑组织中三者的表达水平,分析脑胶质瘤组织中三者阳性表达的相关性。结果 PI3K 及AKT 在正常脑组织的阳性表达率显著低于低级别脑胶质瘤及高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义（P<0.05）;低级别脑胶质瘤显著低于高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义（P<0.05）。正常脑组织PTEN 蛋白阳性率100.0%,显著高于低级别脑胶质瘤与高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义（P<0.05）;低级别脑胶质瘤显著高于高级别脑胶质瘤,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 PI3K、AKT 在脑胶质瘤中呈高表达,PTEN 呈低表达,且与恶性程度有关。     

Significance of decoy receptor 3 in sera of hepatocellular carcinoma patients

Abstract

Objective. Decoy receptor 3 (DcR3), a member of the tumor necrosis factor receptor superfamily, is amplified and over-expressed in various cancers. The objective of the present study was to investigate the concentration of DcR3 in sera of hepatocellular carcinoma (HCC) patients and its clinical significance.

Methods. Serum concentrations of DcR3 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 67 patients with HCC, 8 with liver cirrhosis, 17 with cholecystitis, and in 28 healthy individuals. Immunohistochemistry was employed to access protein expression of DcR3 in the corresponding HCC tissues.

Results. Serum concentrations of DcR3 in patients with HCC or cirrhosis were significantly higher than in healthy individuals (P < 0.01). Moreover, serum concentrations of DcR3 in HCC patients were associated with TNM stage, para-cirrhosis, capsular infiltration, and metastasis or recurrence of disease (P < 0.05). There was a positive correlation between the serum concentration of DcR3 and protein expression in HCC tissues (r = 0.472, P < 0.01).

Conclusions. The high serum concentration of DcR3 might play a certain role in pathogenesis, progress, and metastasis of HCC. Moreover, DcR3 might serve as a valuable molecular indicator in early diagnosis and contribute to predicting the clinical outcome in HCC patients.     

PHBV/HA骨修复材料的研究

利用硝酸钙与磷酸钠的水溶液制备羟基磷灰石(HA)，同时在HA生成过程中与聚羟基丁酸一戊酸酯(PHBV)复合，探索了HA增强PHBV使之适于作为骨修复材料的一种新途径。结果表明，HA的均匀分散增进了复合材料中两相问的相互结合，能明显地提高复合材料的力学性能。     

孕周与母儿血甲状腺激素含量的关系

目的：观察不同孕周与母儿血甲状腺激素的关系。方法：应用放射免疫分析法对67例中、晚期妊娠要求引产患者，10例早产及78例孕足月自然分娩患者进行了母血及胎儿脐静脉、脐动脉血中TSH、T3、T4的测定。结果：TSH值在母血及胎儿血中随着孕周的增加而增加．T3值在胎儿血中与母血中比较，显示低T3血症，T4值接近正常母体水平。结论：测定母血中的甲状腺激素，可动态观察不同孕周甲状腺激素变化，可及时发现胎儿低甲血症。     

正五聚体蛋白-3(PTX-3)评估多发性大动脉炎(TA)病情活动性的价值

 目的  探索正五聚体蛋白-3(pentraxin-3,PTX-3)在评估多发性大动脉炎(Takayasu′s arteritis,TA)病情活动性方面的价值。 方法  选取2010年10月至2012年3月就诊于复旦大学附属中山医院风湿科的TA患者45名、健康体检者25名及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者10名,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISAs)检测血浆PTX-3水平,采用Kerr指标作为疾病活动性评定的金标准。结果   TA患者血浆PTX-3水平显著高于健康人［(18.5±13.9) ng/mL vs. (0.52±0.26) ng/mL,P<0.01］和RA患者［(18.5±13.9) ng/mL vs. (0.73±0.47) ng/mL,P<0.01］;且活动期患者PTX-3水平显著高于稳定期患者［(26.7±16.8) ng/mL vs. (6.2±4.7) ng/mL,P< 0.01］,并与疾病活动性评分呈正相关(Rho=0.78,P<0.01);而健康人与RA患者血浆PTX-3水平差异无统计学意义。结合其他实验室检查及影像学结果分析后发现,TA患者血浆PTX 3水平与血清基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP) 9水平(Rho=0.65,P<0.01)、全身血管磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)上受累血管管腔狭窄程度(Rho=0.67,P=0.04)及管壁增厚程度(Rho=0.54,P=0.05)呈正相关。ROC曲线分析表明,PTX-3(≥10.71 ng/mL)在评估TA活动性方面的敏感性为88.89%,特异性为77.78%,准确性为84.44% ( ROC 曲线下面积=0.95,95% CI:0.89~1.00)。结论   PTX-3有望成为一种评估TA病情活动性的有效的血清学指标,且其血浆水平可能反映了患者血管损伤情况,用于监测疾病活动性。     

高碘和低碘甲状腺肿小鼠血清T3,T4和TSH的变化比较

本研究观察了给高碘和低碘饲料20～360天中6组小鼠血清T_3、T_4和TSH的变化,并对二者进行了比较。发现高碘动物组血清T_4升高,低碘组T_3升高,T_4 降低,低碘组实验中期TSH升高。结果提示,高碘甲状腺肿的发病机理与低碘甲状腺肿不同。     

血清T_3，T_4测定在喉癌病人中的应用

应用放射免疫测定法对６１例喉癌病人、３例喉良性肿瘤病人及４０例正常人进行了血清Ｔ＿３，Ｔ＿４及ＴＧ的测定。结果发现：喉癌病人血清Ｔ＿３值明显低于正常人（Ｐ＜０．０１），Ｔ＿４值则较正常人略升高，但Ｐ＞０．０５。ＴＧ值与正常人无区别。喉部良性肿瘤病人的血清Ｔ＿３，Ｔ＿４及ＴＧ与正常人无差异。在Ｔ＿３下降的喉癌患者中，经手术治疗后，Ｔ＿３值随病情的好转有所恢复，但对术后并发咽瘘者则相反。然而，应用甲状腺素可使咽痊愈合加速。提示：喉癌患者血清Ｔ＿３的测定，有助于观察病情变化，并为治疗提供参考。