子宫内膜间质细胞体外蜕膜化的激素调节

目的 探讨甾体激素、黄体生成素释放激素（LHRH）、人绒毛膜促性腺激素（hCG）、促卵泡激素（FSH）在子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中的作用。方法 取18例育龄期妇女的增殖期子宫内膜,行体外分离、培养其间质细胞,加入生理剂量的雌二醇（E2）、孕酮(P)、睾酮（T）,以及LHRH、hCG、FSH,在相差显微镜下观察细胞的形态学改变,采用放射免疫法测定培养液中泌乳素（PRL）的含量。结果 E2、P、T对子宫内膜间质细胞的生长及分化均有调节作用,RPL开始上升与多角形细胞出现的时间相一致,P、T对子宫内膜膜间质细胞蜕膜化、分泌PRL起主要作用（P＜0.01）,P与E2、T有协同作用。LHRH hCG、FSH对子宫内膜间质细胞蜕膜化、分泌PRL均有促进作用（P＜0.01）,以hCG的作用最强。结论 P、T、E2在子宫内膜间质细胞生长分化过程中起重要作用,LHRH、hCG、FSH直接作用于子宫内膜本身而参与蜕膜化的调节。     

子宫内膜蜕膜化过程的调节机制

子宫内膜蜕膜化是胚泡植入、胎盘形成以及妊娠维持的必备条件之一。蜕膜化时,子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)在形态和功能上都发生明显改变。生理情况下,ESCs主要受卵巢雌、孕激素的影响向蜕膜间质细胞转化;在体外实验中,多种细胞因子、激素、免疫细胞、转录因子等都参与调节ESCs模拟蜕膜化过程,有利于人们对蜕膜化机制的理解。     

葡萄糖转运体1在人子宫内膜及蜕膜组织中的表达

葡萄糖转运调节在子宫内膜蜕膜化过程中起着重要作用。采用免疫组化方法检测9例增生期子宫内膜、11例分泌期子宫内膜、16例早期妊娠流产的蜕膜组织中葡萄糖转运蛋白异构体1(GLUT1)表达,用RNA酶保护测定法检测增生期(14例)、分泌早期(15～18 d,7例)、中期(20～24 d,8例)、晚期(25～28 d,6例)的子宫内膜及妊娠7～8周、9～10周蜕膜组织(各5例)中GLUT1 mRNA表达水平。结果:免疫组化提示,增生期及分泌早期子宫内膜无GLUT1阳性着色,蜕膜组织中度阳性着色,胎盘组织呈强阳性着色;GLUT1 mRNA在增生晚期及分泌早期子宫内膜呈低水平表达,分泌晚期表达量增加近2倍,在妊娠早期,尤其是9～10周蜕膜组织中表达量     

子宫内膜蜕膜化调节机制的研究现状

子宫内膜蜕膜化是子宫为了适应妊娠而做出的最早改变之一。围着床阶段,子宫内膜在生化、细胞、生理及功能等各个水平发生了复杂变化,使得自身具有可接受性,能为胚胎着床及生长提供合适的微环境。多种激素、细胞因子、转录因子、免疫细胞等参与调节子宫内膜间质细胞向蜕膜细胞的转变。     

一种高效分离原代人子宫内膜间质和上皮细胞的方法

目的建立一种高效分离子宫内膜上皮细胞与间质细胞的方法。方法收集全子宫切除患者的健康子宫内膜组织,将子宫内膜组织剪碎后,采用二次酶消化-二次过滤-差时贴壁的方法将人子宫内膜间质细胞(HUSC)与上皮细胞(HUEC)分离。采用流式细胞仪鉴定分离所得人子宫内膜基质和上皮细胞;并进一步对原代子宫内膜间质细胞进行诱导蜕膜化。结果流式细胞术检测分离的间质细胞波形蛋白阳性率为(97.0±2.5)%,上皮细胞角蛋白阳性率为(90.0±4.1)%。此外,使用环磷酸腺苷(c AMP)联合醋酸甲羟孕酮(MPA)体外诱导子宫内膜间质细胞产生了良好的蜕膜化反应。结论成功建立了一种高效分离原代人子宫内膜基质和上皮细胞的方法。     

人子宫内膜基质细胞的体外蜕膜化及其与腺体细胞的关系

体外分离、培养人子宫内膜基质细胞和腺体细胞,待基质细胞生长融合后,加入孕酮刺激,使其蜕膜化。结果显示,孕酮（ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ,Ｐ）组基质细胞胞体变大、变圆,尤以含胎牛血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ,ＦＢＳ）组显著。用酶免疫分析法检测培养液中催乳素（ｐｒｏ－ｌａｃｔｉｎ,ＰＲＬ）含量发现,培养ｄ１７～２０ＰＲＬ分泌量达到高峰;免疫细胞化学染色可见基质细胞ＰＲＬ免疫反应阳性。在此基础上,将同期培养的腺细胞匀浆液加入到已蜕膜化的基质细胞中,结果发现,在加入腺体匀浆液３ｄ后蜕膜细胞胞体变小,ＰＲＬ分泌量减少,而对照组的ＰＲＬ产量则递增。结果提示,子宫内膜腺细胞对蜕膜反应有一定的抑制作用,其作用方式和机制有待于进一步探讨。     

人子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞永生化细胞系的建立及鉴定

目的建立人子宫内膜异位症（Endometriosis,EMs）患者在位内膜间质细胞永生化细胞系。方法将原代培养的EMs患者在位内膜间质细胞转染质粒PCD2SV40T,G418筛选并进行单克隆细胞挑选,采用核型分析、免疫细胞化学、RT-PCR、裸鼠成瘤实验等方法对传代培养后的抗性单克隆细胞进行鉴定。结果首次建立了EMs患者在位内膜间质细胞永生化细胞系hEM15A,该细胞系具有子宫内膜间质细胞特征,可连续传代,表现为正常二倍体核型,未观察到致瘤性。结论 hEM15A细胞系易获得、培养难度小、细胞均一性高、存活时间长,可成为EMs的研究工作中实用的体外模型。     

单核细胞趋化蛋白1对子宫内膜间质细胞分泌血管内皮生长因子的影响

子宫内膜异位症(EM)以进行性发展为特点，常造成女性不孕和盆腔疼痛，发病率呈逐年上升趋势，但病因尚未完全阐明。近年来，有学者提出EM发生的诱导学说，使细胞因子和趋化因子等特定的诱导因子成为当前研究的热点。具有功能及活性的子宫内膜组织异位生长，并伴有血管生成，是EM的基本病理表现，这一过程受到血管内皮生长因子(VEGF)的调节^[1]。另有研究表明，VEGF可能在EM发生的早期阶段起重要作用^[2]；而Yih等^[3]发现，EM患者腹腔液中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)较非EM患者高。本研究采用离体培养的子宫内膜间质细胞，观察MCP-1对其分泌VEGF的影响，以探讨炎症在诱导和促进EM发生、发展中的作用。     

孕激素对人子宫内膜间质细胞moesin表达的影响

目的:探讨孕激素(P)对人子宫内膜间质细胞(hESC)中细胞骨架调节蛋白moesin的调节作用,为胚胎着床提供理论依据。方法:从因子宫肌瘤行全子宫切除术的妇女子宫标本中获取分泌期子宫内膜组织,分离、鉴定后建立人类子宫内膜间质细胞(hESC)体外模型。根据细胞培养液中添加激素不同分组为空白对照组(A组)、孕激素组(B组,P 10-5 mol/L)、雌、孕激素组(C组,E210-8 mol/L+P 10-5 mol/L)及米非司酮联合雌、孕激素组(D组,E210-8 mol/L+P 10-5mol/L+Mif 10-5 mol/L),培养3 d后应用细胞化学免疫方法和免疫印迹方法检测hESC moesin蛋白定位和定量的变化。结果:细胞化学荧光检测显示moesin主要分布于hESC的细胞胞质及胞膜突起、皱褶、细胞间接触等特殊细胞皮质膜部位,各实验组和对照组moesin定位无显著变化。免疫印迹方法显示B组、C组hESC中moesin表达显著均高于A组(P<0.05);B组和C组间表达无显著差异(P>0.05);D组hESC中moesin蛋白较C组表达显著降低(P<0.05)。结论:孕激素促进hESC的moesin表达上调,进一步通过调节细胞骨架重塑介导胚胎着床;米非司酮通过拮抗孕激素作用,抑制hESC moesin上调。     

肥胖影响子宫内膜蜕膜化机制的研究进展

子宫内膜蜕膜化是胚胎植入、胎盘形成以及维持妊娠的必要条件,蜕膜化受损与多种不良妊娠结局有关。目前肥胖人群显著增多,对健康有不同程度的损害,肥胖女性子宫内膜间质细胞中蜕膜化标志物催乳素和胰岛素样生长因子结合蛋白1的mRNA表达明显降低,且肥胖对蜕膜化过程中涉及的孕激素相关蛋白、胰岛素受体底物2、信号转导与转录激活因子3、Wnt蛋白等相关因子及蜕膜免疫细胞均有影响,认为肥胖与蜕膜化受损具有密切的关系。研究肥胖与子宫内膜蜕膜化受损的相关性,有助于进一步了解子宫内膜蜕膜化受损的发病机制,对预防蜕膜化受损、改善不良妊娠结局具有重要意义。深入开展此方面的研究可能为肥胖型反复妊娠丢失患者的诊治提供新思路。     

2-甲氧雌二醇抑制子宫蜕膜化基质细胞VEGF表达的研究

目的:研究2-甲氧雌二醇对子宫蜕膜化基质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:采用醋酸甲基孕酮及双丁酰环磷酸腺苷诱导子宫内膜基质细胞蜕膜化。诱导成功后,分别加入3个浓度的2-甲氧雌二醇,给药48 h后收集细胞上清液,采用ELISA法测定VEGF分泌情况;同时抽提细胞RNA,Real-Time RT-PCR检测VEGF mRNA水平;免疫细胞化学法测定细胞雌激素受体(ER)的表达。结果:ELISA检测表明1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L浓度的2-ME2均可降低蜕膜化基质细胞分泌VEGF的水平;Real-Time RT-PCR同样支持上述结果;免疫细胞化学结果表明,2-ME2对蜕膜化基质细胞ER表达无影响。结论:2-甲氧雌二醇可降低蜕膜化基质细胞VEGF的表达,但与ER表达不相关。     

人子宫内膜细胞体外诱导蜕膜化的效果观察

目的:观察孕激素(progestogen,P)、雌激素(estrogen,E_2)和8-溴-环磷酸腺苷(8-Br-cAMP)不同组合的3种方法对人子宫内膜细胞体外诱导蜕膜化的效果。方法:收集因子宫良性疾病行全子宫切除术患者的子宫内膜,分离纯化子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cell,ESC),进行细胞体外培养并传代,免疫荧光鉴定细胞类型。分别采用P+E_2(PE组)、8-Br-cAMP(PC组)、P+E_2+8-BrcAMP(PEC组)3种不同组合方法蜕膜化诱导处理第3代ESC,并以空白对照为对照组。显微镜下观察蜕膜化过程中的细胞形态变化,化学发光法检测3种不同蜕膜化诱导方法处理24h.48h及96h后细胞培养液中催乳素(PRL)水平,比较3种蜕膜化方法的效果。结果:蜕膜化过程中ESC形态从长梭形逐渐变为圆形,细胞体积变大,胞核增大,部分出现双核或多核,细胞边界变模糊。随着培养时间延长,各蜕膜化诱导组培养液中PRL呈不同水平升高。其中PC组PRL水平及蜕膜化细胞形态均较PE组和PEC组升高明显(P0.05)。结论:P+8-Br-cAMP法,较P+E_2、P+E_2+8-BrcAMP法能更有效地诱导子宫ESC体外发生蜕膜化,是高效可靠、更合适的蜕膜化诱导方法。     

P300/CBP相关因子(PCAF)表达水平对人子宫内膜间质细胞增殖的影响

目的:观察P300/CBP相关因子(P300/CBP associated factor,PCAF)对人子宫内膜间质细胞增殖的调控作用。方法:通过Western blotting、实时定量PCR及Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖实验,观察分析Ad-FLAG-PCAF重组腺病毒介导的PCAF过表达及PCAF-siRNA介导的PCAF低表达对体外培养的人子宫内膜间质细胞增殖的影响。结果:获得滴度为8×1010ifu/ml的重组Ad-FLAG-PCAF腺病毒,转染体外培养的人子宫内膜间质细胞后,可有效介导细胞内FLAG-PCAF融合蛋白的高表达;而转染PCAF特异的siRNA后,可有效抑制人子宫内膜间质细胞中PCAF的表达。PCAF过表达的人子宫内膜间质细胞中,其细胞周期标志蛋白cyclinD1和cyclinD3的表达水平显著降低(P<0.05),而PCAF低表达的人子宫内膜间质细胞中,其cyclinD1和cyclinD3的表达水平显著升高(P<0.05);此外,CCK-8实验结果显示,PCAF过表达能显著抑制由雌、孕激素共同刺激所引起的人子宫内膜间质细胞的增殖,而基因沉默人子宫内膜间质细胞中内源性PCAF的表达后,间质细胞的增殖增加>20%(P<0.05)。结论:PCAF可能通过蛋白乙酰化修饰作用,参与调控人子宫内膜间质细胞的增殖过程。     

Human endometrial stromal cell plasticity: Reversible sFlt1 expression negatively coincides with decidualization

Preeclampsia (PE) is a major complication of pregnancy in which the placenta is known to have shallow implantation into the uterine decidua. Studies have implicated soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt1), a soluble vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor protein, in the pathogenesis of PE. sFlt1 has the ability to bind to and neutralize the angiogenic functions of VEGF and placental growth factor (PlGF). The presence of sFlt1 and its action in the endometrium is yet to be determined. We hypothesize that endometrial stromal cells (ESC) at the maternal–fetal interface may play a role in sFlt-1 regulation during pregnancy. In this study, we seek to understand the dynamic regulation of sFlt1 production in primary human ESC as a result of hormone stimulation and withdrawal. To mimic a biphasic menstrual cycle, ESC were treated with cAMP to induce endometrial decidualization that occurs during the luteal secretory phase, followed by cAMP withdrawal reflecting the follicular proliferative phase. Here, we present data to show that (1) ESC produce detectable amounts of sFlt1, (2) sFlt1 expression is turned off during decidualization at both the protein and RNA level (3) ESC decidualization and resulting sFlt1 expression are reversible phenomenon, and (4) Decidualization markers prolactin (PRL) and VEGF expressions in ESC are negatively correlated with sFlt1. These findings may have important implications in diseases such as PE that involve abnormal decidualization, implantation and angiogenesis at the maternal-fetal interface.     

激活素A对子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞的调节作用

目的:探讨激活素A(activin A)对子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者在位子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)活性的调节作用。方法:分别用RT-PCR和Real-timePCR的方法检测5例正常、45例EMs在位、异位组织中激活素AβA亚基和芳香化酶CYP19A1mRNA的表达。分离培养5例正常、5例EMs在位、异位组织ESCs,用不同剂量的激活素A刺激EMs在位ESCs不同时间后,应用免疫电化学发光法检测ESCs分泌雌二醇(E2)的水平,MTT检测ESCs活性,流式细胞仪检测ESCs凋亡和细胞周期。结果:激活素AβA亚基在EMs异位ESCs的表达明显高于正常对照ESCs和EMs在位ESCs。经25 ng/ml激活素A刺激24 h后,与正常对照组相比,在位ESCs的E2分泌和芳香化酶CYP19A1mRNA的表达均显著升高。但激活素A未引起ESCs增殖活性的显著变化,对细胞凋亡和细胞周期亦无影响。结论:激活素A可能通过促进芳香化酶表达而增加ESCs的E2分泌,这可能是EMs异位灶存活和病理发生的机制之一。     

孕激素及间质细胞培养液对原代培养内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响

目的:探讨间质细胞是否参与了孕激素对子宫内膜腺上皮的调控,及其初步的作用机制。方法:将增生期子宫内膜间质细胞经激素处理后进行培养,提取培养液。用浓度为30%的提取培养液对腺上皮细胞进行原代培养,当细胞生长融合时,加入孕酮或孕雌激素培养4h、24h。提取细胞总RNA,用半定量RT-PCR方法检测腺上皮细胞HOXA11基因表达量。结果:当内膜腺上皮细胞中含有30%经孕激素处理的间质细胞培养液时,加入孕激素或孕、雌激素后其HOXA11基因,在培养4h时表达量有下降趋势;24h时,表达量下降明显;而用RU486预处理后再加入孕激素或雌孕激素,腺上皮细胞HOXA11基因表达量与对照组无差异;当上皮细胞中含有30%经RU486预处理后,再加入孕激素处理的间质细胞培养液时,孕激素或孕、雌激素对内膜腺上皮HOXA11表达的负调控作用在4h时消失;24h时,转为正调控(HOXA11基因表达量增加)。结论:孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因的负调控作用需要问质细胞分泌的孕激素依赖因子的参与,而且由间质细胞和内膜腺上皮中的孕激素受体共同介导完成这一负调控作用。     

上海市宫腔镜下宫内节育器取出死亡病例分析

目的:探讨宫腔镜下取出宫内节育器(IUD)手术的死亡原因,寻找提高宫腔镜下取器安全性的措施。方法:回顾性调查上海市87所医院2001.01.01～2007.12.31期间所有宫腔镜下IUD取出术11110例,其中意外死亡4例。结果:4个病例的死亡原因均为肺栓塞(空气栓塞)。与死亡相关的主要因素有:手术前准备不充分;2次手术时间间隔太短;手术操作不规范;术中观察不仔细;抢救不及时等。结论:建立与宫腔镜下手术配套的抢救设备、操作规范和提高医务人员临床经验资质是非常必要的。     

月经周期中不同类型人子宫内膜体外培养的细胞形态学特点

目的:探讨不同类型子宫内膜细胞体外培养的细胞形态学特点。方法:在月经周期的不同时期,通过B超检测判断患者子宫内膜的厚度和类型,取不同形态分型的人子宫内膜进行体外培养,倒置显微镜下观察子宫内膜体外培养的细胞形态学特性,并通过免疫荧光法进行鉴定,采用培养板单层贴壁细胞的原位计数方法,计算子宫内膜间质细胞和腺上皮细胞数量及比例。结果:不同类型子宫内膜经培养后,其中间质细胞形态呈扁平状,胞质透明,核圆、居中,波形蛋白表达阳性;腺上皮细胞呈多角形或蝌蚪形,旋涡状排列,核圆而大,角蛋白表达阳性。A型子宫内膜组织腺细胞贴壁率为85.8±5.7%,贴壁培养后腺上皮细胞的比例占43.3±11.7%,间质细胞比例占56.7±11.7%;B型子宫内膜组织腺细胞贴壁率为8.7±3.9%,贴壁培养后腺上皮细胞的比例占13.3±3.3%,间质细胞比例占86.7±3.3%;C型子宫内膜组织腺细胞贴壁率为6.0±1.9%,贴壁培养后腺上皮细胞的比例占12.3±3.0%,间质细胞比例占87.7±3.0%。A组与B组、C组两组腺上皮细胞贴壁率及贴壁后腺细胞比例有明显统计学差异(P0.05),B、C组之间腺上皮细胞贴壁率及腺细胞比例无明显统计学差异(P0.05)。结论:B、C型子宫内膜体外培养腺上皮细胞贴壁比例低于间质细胞,体外培养后以间质细胞为主;A型子宫内膜细胞培养所得的间质细胞及腺细胞均较多,腺细胞贴壁率及腺细胞比例明显高于B、C型子宫内膜,是用于胚胎着床机制等实验研究较好的标本来源。