农抗5102产生菌工程菌株WH─1的稳定性

无论是在连续传代的过程中，还是在不同温度条件下保存的过程中，工程菌株ＷＨ－１均不稳定，其不稳定性主要表现在培养特征的变化和产生抗生素性能的衰退两个方面，且都是一个由量变逐渐转化为质变的过程。采用连续多次单孢子分离筛选的方法可以获得比较稳定的高产菌株。本实验主要通过５次单孢子分离筛选，得到了ＷＨ－１－１、ＷＨ－１－２、ＷＨ－１－３、ＷＨ－１－４和ＷＨ－１－５共５个较稳定的高产菌株     

提高西索米星生产菌产量的遗传育种

在西索米星产生菌橄榄星孢小单孢菌无锡亚种Ｍ－４１的选育过程中，以常规诱变育种为主，结合一些综合处理方法，如原生质体再生、在８－甲氧基补骨酯存在下用近紫外光照射、氯化锂和紫外线的复合处理，筛选自身产物抗性解除反馈调节突变株，同时结合单菌落自然分离纯化法经几十代选育，得到了稳定高产菌株９６－３７，比原始野生型菌株产量提高近３０倍，主组分含量提高到８５％以上。经２０吨规模发酵罐试验，证实菌株９６－３７是一株高产、稳产的工业生产菌种。     

螺旋霉素高产菌种的推理选育

根据螺旋霉素的生物合成途径对螺旋霉素产生菌产二素链霉菌进行推理选育，并获得了高产菌种。首先在紫外线诱变的基础上，筛选豆油耐性变株，得到菌株ＸＣ２－３７，其发酵效价较出发菌株ＸＣ１－２９提高９％。通过培养基优化，菌株ＸＣ２－３７的发酵效价提高６１．８％。再以紫外线处理菌株ＸＣ２－３７，并筛选缬氨酸诱导变株，得到菌株ＸＣ３－１１，其发酵效价较菌株ＸＣ２－３７提高２０％。菌株ＸＣ３－１１经自然分离得到菌株ＸＣ４－１８，发酵效价达到４５００ｕ／ｍｌ，为原始出发菌株ＸＣ１－２９的２．２５倍。传代试验表明菌株ＸＣ４－１８的高产遗传特性稳定。菌株ＸＣ４－１８应用于５０ｍ３发酵罐进行工业化生产，与原始出发菌株ＸＣ１－２９相比，发酵效价和发酵指数分别提高８４．９％和４３．６％。     

利用亚硝酸诱变原生质体筛选L—亮氨酸高产菌株的研究

本实验以Ｌ－亮氨酸产生菌黄色短杆菌ＣＦＮ－１９为出发菌株。我们首先对ＣＦＮ－１９菌株制备原生质体，原生质体制备率为９５．１％，再生率为２５％，然后对原生质体进行亚硝酸、利福平、氯化锂复合诱变处理，从再生菌株中筛选出一株高产菌株Ｈ６－６６，产酸量由原来的２３．１ｍｇ／ｍｌ提高到３２．６ｍｇ／ｍｌ，提高率达４１％。同时又对Ｈ６－６６菌株进行遗传稳定性考察，考察结果Ｈ６－６６菌株是高产稳定菌株。     

Avermectin产生菌异亮氨酸诱导变种的选育

用紫外线处理ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ（ＡＶＭ）产生菌ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓＸＣ１－２５，并在含有Ｌ－异亮氨酸（Ｌ－Ｉｌｅ）的平板培养基上筛选Ｌ－Ｉｌｅ诱导变种。结果表明：Ｉｌｅｉ变株发酵产生的ＡＶＭＢ１ａ效价高于自然分离株与紫外线诱变株，其中Ｉｌｅｉ变株ＸＣ２－２６的ＡＶＭＢ１ａ效价较亲株提高２２％。该变株经自然分离获得菌株ＸＣ３－８，其ＡＶＭＢ１ａ效价比出发菌株提高５０％以上，传代试验表明菌株ＸＣ３－８的形态和高产性能稳定，它在７ｍ３发酵罐生产试验，产生ＡＶＭＢ１ａ效价与发酵指数均比出发菌株提高５６％。     

农抗5102产生菌工程菌株WH－1的生物学特性

通过重组ＤＮＡ技术，从农抗５１０２产生菌１０－２２菌株中得到１株工程菌株ＷＨ－１，它的培养特征与出发菌株１０－２２有明显差别，前者气生菌丝白色，不吸水，基内菌丝浅黄色，可溶性色素淡黄；后者气生菌丝深灰，在大多数培养基均能吸水，基内菌丝暗柠檬色，可溶性色素淡褐。两者在２８℃和３７℃均可良好生长。菌株ＷＨ－１能产生菌株１０－２２所产生的３种５１０２抗生素，而且活性均更强，尤其是５１０２－Ⅰ几乎要高出１０倍。菌株ＷＨ－１尚能产生菌株１０－２２不产生的１种活性物质（５１０２－Ⅳ）。该活性物质只能在琼脂培养基上产生，却不能在液体培养基中得到重复     

利福霉素B产生菌─—地中海诺卡氏菌的推理选育

利福霉素Ｂ的生物合成受芳香族氨基酸（Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ）的反馈抑制。用紫外线处理Ｎ．ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉＸＣ－１０２菌丝悬浮液后，并在含０．１％芳香族氨基酸的琼脂平板上分离芳香族氨基酸抗性变种。结果表明，芳香族氨基酸抗性变种的发酵效价高于自然分离株和紫外线诱变株；色氨酸抗性变种（Ｔｒｐｒ）的发酵效价又高于酪氨酸抗性变种（Ｔｙｒｒ）和苯丙氨酸抗性变种（Ｐｈｅｒ）；０．５％Ｔｒｐｒ变种比０．１％Ｔｒｐｒ变种更高产。其中０．５％Ｔｒｐｒ变种ＸＣ－５４０的生产能力较出发菌株ＸＣ－１０２增加４２．１６％。传代试验表明ＸＣ－５４０的遗传特性稳定，在７ｍ３罐做发酵放大，与出发菌株相比，发酵效价和发酵指数分别提高５１．１１％和５１．０２％。     

农抗5102产生菌工程菌株WH—1的生物学特性

通过重组ＤＮＡ技术，从农抗５１０２产生菌１０－２２菌株中得到Ｉ株工程菌株ＷＨ－１，它的培养特征出出发菌株１０－２２有明显差别，前埂气生菌丝白色，不吸水，基内菌丝线黄色，可溶性色素淡黄；后者所生菌丝灰，在大多数培养基均能吸水，基内菌丝暗柠檬色，可溶性色素淡褐。两者在２８℃和３７℃均可良好生长。菌株ＷＨ－１生菌株１０－２２所产生的种５１０２抗生素，而且活性均晚强，尤其是５１０２－１几乎要高出１０倍。菌     

生技霉素E（4″—异戊酰螺旋霉素Ⅰ）的分离和结构鉴定

为获得高产的４″－异戊酰螺旋霉素,将４″－异戊酰基转移基因整合入螺旋霉素产生菌Ｓｓｐｉｒａｍｙｃｅｌｉｃｕｓ Ｆ２１染色体,构建成功卫株稳定的生物工程菌ＷＳＪ－１,继从该菌株代谢产物中分离获得生技霉素Ａ１（４″－异戊酰螺旋霉素Ⅲ）,生技霉素Ｂ１（４″－异戊酰螺旋霉素Ⅱ）,又分离获得一主要组分生技霉素Ｅ。     

放线菌G0041─3菌株的初步分类、发酵及产物的提取和分离

Ｇ００４１－３菌株是从印度新德里市郊的土壤中分离得到的１株放线菌。初步的分类研究认为：Ｇ００４１－３菌株归属为链霉菌属。该菌株的发酵液具有很强的抗革兰氏阳性菌活性，且对肿瘤ＫＢ细胞有较强的杀伤作用。发酵液经提取与分离，得到５个组分。结构分析结果表明均为蒽环类抗生素。分别被鉴别为：ｃｏｓｍｏｍｙｃｉｎＢ、β－ｒｈｏｄｏｍｙｃｉｎＩＶ，ｉｒｅｍｙｃｉｎ。另外２个组分Ｇ００４１－３ａ和Ｇ００４１－３ｃ被鉴别为新的蒽环类抗肿瘤抗生素     

选育紫杉醇高产菌种链格孢单孢变种

以从红豆杉树皮中分离得到的高产紫杉醇(paclitaxel)菌株013为出发菌株,采用紫外线诱变、亚硝基胍诱变交替进行的方法,同时复合含1%乙酰胺的理性化筛选模型,获得一株遗传性状稳定的链格孢单孢变种ST 026,摇瓶发酵产量可稳定达到227mg/L,比出发菌株产量提高81.6%。     

海洋嗜盐微生物的研究开发：Ⅱ.嗜盐细菌产生β—胡萝卜素

从各种海泥分离纯化到多株海洋嗜盐细菌，经筛选发现其中Ｆ－５菌株等属于嗜盐杆菌属，能产生胡萝卜素，在经选定的最适条件下发酵时，其所产生的胡萝卜素经提取和纯化，获得紫红色的结晶，通过现代化波谱技术，包括紫外和红外吸收光谱，质谱，质子和碳－１３－磁共振谱的鉴定，确认是β－胡萝卜素，除Ｆ－５菌株外，还有一些待鉴定的菌株也能产生胡萝卜素。这是嗜盐细菌能产生β－胡萝卜素的首例报告。     

普那霉素产生菌的推理选育

根据普那霉素的生物合成途径对普那霉索产生菌始旋链霉菌进行推理选育，原始出发菌株Streptomyces pristinaespiralis ATCC25486经过12次单菌落分离，其间经历5次UV诱变并分别筛选0．1％AA^r突变株、0．3％AA^r突变株、0．1％VH^r突变株、200u／ml KTM^R突变株、0．1％DOG^r突变株，获得了突变株S．pristinaespiralis 12-55，其生产能力较原始出发菌株S．pristinaespiralis ATCC25486提高了100倍，达到3000u／ml。传代试验表明普那霉素高产突变株S.pristinaespiralis 12-55的高产性能遗传特性稳定。     

高产CL—UACA酰化酶菌侏的获得及其培养条件的研究

从假单胞菌的野生菌侏ＳＰ－８２１出发，经化学、物理诱变，获得ＣＬ－７ＡＣＡ酰化酶高产菌株７９ｕ－１８，酶活性７００ｕ／Ｌ。在菌株选育过程中一个突破性进展是分离获得构成型ＧＬ－７ＡＣＡ酰化酶产生菌株，即该菌在培养中不需加入戊二酸作诱导剂。本文介绍上述菌株的获得及培养条件的研究。     

2，4－二氨基5－氟－6－取代苄氨基喹唑啉的合成及生物活性

本文报道２，４－二氨基－５－氟－６－取代苄氨基喹唑啉类化合物的合成及抗疟、抗肿瘤和抗菌活性，这类化合物的合成是由５－氟－２，４，６－三氨基喹唑啉（６ａ）与取代苯甲醛缩合成Ｓｃｈｉｆｆ碱，然后经还原、甲酰化、亚硝化或甲基化制得。５－氟－２，４，６－三氨基喹唑啉（６ａ）尚未见文献报道，由５－氟－２，４－二氨基喹唑啉（４）经硝化生成异构体５ａ和５ｂ分离得５ａ后再经还原制得。经对伯氏鼠疟原虫Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｂｅｒｇｈｅｉ抑制性治疗筛选，有６个化合物Ｉ２，４．５，６和ＩＩ５，６以每日１ｍｇ·ｋｇ－１，给药４天，抑制率为１００％；体外抗肿瘤活性以Ｉ４最强，对Ｌ１２１０白血病细胞的ＩＣ５０为９．８６×１０－４μｇ·ｍｌ－１，优于氨甲蝶呤（ＭＴＸ）；经对１８种常见菌进行体外筛选，发现对肺炎双球菌Ｄｉｐｌｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ活性较好。     

金葡球菌细胞结合青霉素酶的研究

对１９８６年从南京地区临床分离的金葡球菌中筛选出的１株耐药株的细胞结合青霉素酶进行了研究。不同生长条件对实验菌株细胞结合青霉素酶的产酶影响表明，在１％ＣＹ培养基中，含０．０４ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸钠，３７℃培养１８ｈ为有利产酶条件。应用冻融法破壁，细胞结合青霉素酶活力为处理前的２．１４倍。破壁后，细胞结合青霉素酶的溶解度与溶液的ｐＨ值和ＴｒｉｔｏｎＸ－１００浓度有关，在ｐＨ７．５含０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液中，细胞结合青霉素酶的溶解度为２０．７％。     

微生物来源的胆固醇生物合成酶抑制剂Ⅶ.抗生素SIPI┐8917┐Ⅰ的研究

应用胆固醇生物合成的体外酶反应筛选系统，从１０００多株真菌中筛选出具有抑制胆固醇生物合成活性的ＳＩＰＩ－８９１７菌株；对ＳＩＰＩ－８９１７菌株的代谢产物进一步研究，应用丙酮浸泡、溶媒萃取、硅胶柱分离和ＬＨ２０凝胶层析等方法，从其菌丝体中分离出ＳＩＰＩ－８９１７－Ⅰ化合物。通过元素分析和质谱，确定其分子式为：Ｃ２２Ｈ２０Ｏ７（分子量３９６．２９０５），综合ＵＶ、ＩＲ、１Ｈ－ＮＭＲ、１３Ｃ－ＮＭＲ及ＨＭＢＣ和ＨＭＱＣ等图谱数据的解析，确定其结构为蒽环类化合物，与文献报道的１，３－二甲醚奥佛尼红素（１，３－Ｄｉ－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌａｖｅｒｕｆｉｎ）结构一致。     

微生物来源的胆固醇生物合成酶抑制剂：VI.抗生素SIPI—8926…

应用胆固醇生物合成的体外酶反应筛选系统，从１０００多株真菌中筛选出具有抑制胆固醇生物合成活性的ＳＰＩＰ－８９２６菌株；对ＳＩＰＩ－８９２６菌株代谢产物研究，应用溶媒萃取、硅胶柱分离、ＬＨ２０凝胶层析和重结晶等方法，从其发酵液中分离出活性成分ＳＩＰＩ－８９２６－Ⅳ。通过元素分析和质谱，确定其分子式为：Ｃ３０Ｈ５０Ｏ３（分子量为：４５８．３７６），综合紫外光谱、红外光谱、＾１Ｈ－ＮＭＲ和＾１３Ｃ－ＮＭ     

微生物来源的胆固醇生物合成酶抑制剂：Ⅶ.抗生素SIPI—8917— …

应用胆固醇生物合成的体外酶反应筛选系统，从１０００多株真菌中筛选出具有抑制胆固醇生物合成活性的ＳＩＰＩ－８９１７菌株；对ＳＩＰＩ－８９１７菌株的代谢产物进一步研究，应用丙酮浸泡、溶煤萃取、硅胶柱分离和ＬＨ２０凝胶层析等方法，从其菌丝体中分离出ＳＩＰＩ－８９１７－Ⅰ化合物。通过元素分析和质谱，确定其分子式为：Ｃ２２Ｈ２０Ｏ７（离子量３８６．２９０５），综合ＵＶ、ＩＲ、＾１Ｈ－ＮＭＲ、＾１３Ｃ－ＮＭＲ     

头孢菌素C产生菌产黄顶孢霉高产变株419—6的选育研究

生产头孢菌素C的工业生产菌株产黄顶孢霉C_B经氯化锂加紫外线加博莱霉素三重复合处理后,结合筛选工艺的改进,选育得到一株高产变株419。对419菌株采用单孢子分离技术稳定其高产性状,最后得到稳产高产变株419-6。其摇瓶发酵水平较原种提高16.37％,头孢菌素C百分含量提高3％。本文报道了419-6高产变株的选育研究。