白细胞介素-6和白细胞介素-10在不同细菌性血流感染小鼠模型中的表达及意义

目的:探讨白细胞介素(IL)-6和IL-10在不同病原菌所致细菌性血流感染中的表达及其意义.方法:建立金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌ICR小鼠血流感染模型,以注射相应剂量磷酸盐缓冲液的小鼠作为对照组,采用Luminex液相悬浮芯片系统检测各实验组和PBS对照组感染后0.5、1、3、6、12、24和48h时IL-6和IL-10的含量.结果:细菌感染小鼠后0.5 h时,各实验组IL-6的含量与对照组相比均明显升高(P＜0.05).各实验组IL-10的水平与对照组相比,感染后0.5h均明显升高(P＜0.05).大肠杆菌组、肺炎克雷伯菌组IL-10的含量在感染后1h达最大值.金黄色葡萄球菌组感染后3h达到最大值,粪肠球菌组在感染后6h达到最大值,且大肠杆菌组和肺炎克雷伯菌组IL-6和IL-10含量升高的幅度明显高于金黄色葡萄球菌组和粪肠球菌组(P＜0.05).对照组小鼠血清中IL-6和IL-10的含量在此过程中无明显变化.结论:IL-6和IL-10的含量在4种细菌性血流感染模型早期均明显升高.大肠杆菌组、肺炎克雷伯菌组IL-6和IL-10的含量升高幅度明显高于金黄色葡萄球菌组和粪肠球菌组.联合运用IL-6和IL-10有可能用于区分革兰阳性或革兰阴性细菌感染.     

白细胞介素-10与器官移植

白细胞介素 1 0 (IL 1 0 )是近年发现的细胞因子网络中为数不多的抑制性细胞因子 ,主要由TH2细胞产生 ,能够抑制IL 2、IL 1、IFN γ、TNF α等多种细胞因子的合成及活性。越来越多的证据表明器官移植后产生免疫耐受时出现IL 1 0的高表达 ,而移植后发生排异反应时则表现为IL 1 0的低表达。移植后应用IL 1 0或将IL 1 0基因转染移植物能够延长移植物的存活。     

人白细胞介素-10/人肝再生增强因子融合基因的构建及在肝细胞中的表达

目的 利用人自细胞介索(IL)-10和肝再生增强因子(ALP)构建融合基因hIL-10／ALR和真核表达载体,验证其在肝细胞中的表达。方法 以富含疏水氨基酸(Gly-Ser)n的相应寡核苷酸接头序列为媒介,通过hIL-10和hALR克隆载体构建真核质粒表达载体pcDNA3hIL-10／ALR,纯化后转染L02肝细胞,并以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其表达。结果 成功构建hIL-10／ALR融合基因,其真核表达载体pcDNA3hIL-10／ALR可在L02肝细胞中有效表达。结论通过融合基因转导方法可能实现IL-10和ALR的各自功能,为肝纤维化、肝硬变的基因治疗探索有效手段。     

白细胞介素10基因表达对肝再生过程的影响

探讨白细胞介素１０基因表达及脾脏对肝再生过程的影响。方法 通过大鼠７０％肝切除制备肝再生模型，以流式细胞仪检测肝细胞ＤＮＡ的复制，分子杂交显示ＩＬ－１０的基因表达，免疫组化以及形态测量学方法了解ＩＬ－１０在肝内的分布，经统计学分析判断肝损伤和切脾后ＩＬ－１０对肝再生的影响。     

白细胞介素-10基因治疗在炎症性病变中的应用

白细胞介素鄄10(interleukin10,IL鄄10)是一具多效性的细胞因子,可调节巨噬细胞、T细胞和自然杀伤细胞的功能,且其既可抑制Th1细胞产生肿瘤坏死因子(TNF鄄α)、白细胞介素鄄1α(IL鄄1α)和γ干扰素(IFN鄄γ),同时可刺激胸腺细胞、肥大细胞和B淋巴细胞的增生[1]。IL鄄10被称为细     

白细胞介素-1受体拮抗蛋白和白细胞介素-10联合基因转染人骨关节炎软骨细胞的研究

目的探讨逆转录病毒载体PLXRN介导的人白细胞介素-1受体拮抗蛋白（hIL-1Ra）和白细胞介素-10（hlL-10）联合基因转染在人骨关节炎（OA）关节软骨细胞中稳定表达的可行性。方法构建含目的基因的表达载体PLXRN-IL-1Ra和PLXRN—IL-10，经酶切及测序鉴定正确后单个或联合转染人OA软骨细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞内目的基因的表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中hlL-1Ra和hlL-10蛋白表达量的水平。结果酶切和测序表明获得了与预期结果一致的PLXRN—IL—IRa和PLXRN—IL-10真核表达载体。稳定转染软骨细胞后，RT-PCR检测到了细胞内hIL-1Ra和hIL-10mRNA片段。ELISA检测发现基因转染组均有相应的一定量的hlL．1Ra和hIL-10表达，单个基因转染组中分别为（60．47±15．13）和（19．73±4．10）ng／L；联合基因转染组为（67．15±11．47）和（16．76±9．96）ng／L。未转染组及PLXRN空质粒转染组均无hIL—IRa和hlL-10表达，基因转染组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），而单个基因转染组和联合基因转染组组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论逆转录病毒载体PLXRN介导的hlL-1Ra和hlL-10联合基因可有效地感染人OA关节软骨细胞并获得稳定表达，为将表达hIL-IRa和hlL-10目的基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了依据。     

曲马多对致痛小鼠血清β-内啡肽、白细胞介素-4和白细胞介素-10的影响

目的 研究曲马多对福尔马林致痛小鼠血清β-内啡肽(β-EP)、IL-4、IL-10的影响,进一步探讨曲马多对疼痛所致应激及炎症反应的作用.方法 91只昆明清洁级小鼠,体重25～30 g,分为假给药组(S组,n=28)、曲马多组(T组,n=28)、吗啡组(M组,n=28)和空白对照组(C组,n=7).S、T、M三组小鼠制作疼痛模型并记录60 min内疼痛评分,疼痛模型制备后分别给予皮下注射生理盐水0.3 ml、曲马多50mg/kg和吗啡5mg/kg,并于制模后1、3、12、24 h时采集四组小鼠眶静脉血,应用ELISA测定血清β-EP、IL-4、IL-10浓度,热板法测痛阈.结果 与S组比较,M、T组时相Ⅱ疼痛评分明显升高(P＜0.05);T组制模后24 h IL-4浓度和制模后3、12、24 h的IL-10浓度明显升高(P＜0.05).与M组比较,制模后各时点T组和制模后3、12、24hS组β-EP浓度明显降低(P＜0.05);制模后3hT组和S组IL-4浓度明显降低(P＜0.05);制模后3、12、24 hT组的IL-10浓度明显升高(P＜0.05).结论 曲马多和吗啡均可产生良好的镇痛效果,曲马多能有效降低手术、疼痛引起的应激反应,降低β-EP和IL-4的浓度.     

消炎痛对阻塞性黄疸患者外周血淋巴细胞白细胞介素-10、白细胞介素-2水平的影响

目的研究阻塞性黄疸患者外周血淋巴细胞白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-2(IL-2)水平和血浆中前列腺素E2(PGE2)水平的变化,同时观察消炎痛对上述指标的影响。方法给阻塞性黄疸患者口服消炎痛(25mg,1次/8小时),用药前和用药后7d取外周血,分别用放射免疫和ELISA法测血浆中PGE2水平及外周血淋巴细胞IL-10、IL-2水平。结果用药前阻塞性黄疸患者血浆中PGE2水平及外周血淋巴细胞IL-10水平较正常人明显升高,而IL-2水平明显下降,且IL-10、IL-2的水平与PGE2水平显著相关;用药后,患者血淋巴细胞IL-2水平明显升高,而IL-10水平及血浆中PGE2水平明显下降,与用药前相比差异有统计学意义。结论阻塞性黄疸患者淋巴细胞IL-10、IL-2水平的变化与其血浆中PGE2水平升高有关,消炎痛能够明显缓解这种作用。     

舒芬太尼术后镇痛对新生儿外周血白细胞介素-6和白细胞介素-10的影响

目的 观察舒芬太尼应用于新生儿术后镇痛的临床效果及对新生儿外周血白细胞介素-6(IL-6)和IL-10的影响.方法 选择足月新生儿60例,巨结肠根治等手术后根据镇痛方法随机均分成三组:舒芬太尼组(S组,舒芬太尼0.6～0.8 μg·kg-1·d-1)、芬太尼组(F组,芬太尼6～8μg·kg-1·d-1镇痛)和对照组(N组,未用镇痛药).记录术毕、术后4、8、12、24 h的RR、HR、SpO2、BP、镇痛评分(CRIES评分)及镇痛满意率等;检测术毕、术后12、24 h新生儿外周血IL-6、IL-10含量;并观察术后24 h内恶心、呕吐、呼吸抑制等并发症.结果 与术毕时比较,术后8、12、24 h N组CRIES评分明显升高(P＜0.05),也明显高于S、F组(P＜0.05).S、F组镇痛满意率明显高于N组(P＜0.05).术后12 h三组IL-6含量均较术毕升高(P＜0.05或P＜0.01),但S、F组明显低于N组(P＜0.01),术后24 h N组IL-6含量仍高于术毕(P＜0.05);术后24 h S组IL-10含量较术毕升高(P＜0.05),N组IL-10含量较术毕降低(P＜0.05),S、F组IL-10含量均高于N组(P＜0.05).三组之间恶心呕吐、呼吸抑制等并发症的发生率差异无统计学意义.结论 舒芬太尼持续静脉输注用于新生儿术后镇痛安全、效果满意,并可减轻手术后的炎性反应.     

白细胞介素-10对内毒素血症大鼠肝损伤的影响

目的 评价白细胞介素-10(IL-10)对内毒素血症大鼠肝损伤的影响.方法 清洁级雄性Wistar大鼠100只,10 ～ 14周龄,体重250 ～ 300 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=20)∶对照组(C组)、内毒素血症组(LPS组)、1L-10组(IL-10组)、HO-1诱导剂钴原卟啉Ⅸ组(Co组)和HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ组(Zn组).LPS组、IL-10组、Co组和Zn组腹腔注射脂多糖(LPS) 20 mg/kg,IL-10组、Co组和Zn组于给予LPS前3h腹腔注射重组人IL-10 1 μg,Co组和Zn组分别于给予重组人IL-10后2h腹腔注射钴原卟啉Ⅸ和锌原卟啉Ⅸ25 mg/kg.每组于注射LPS后24 h时取10只大鼠,采集心脏全血,测定血清谷草转氨酶(ALT)、谷丙转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;然后取肝组织,测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA表达.每组取10只大鼠,记录给予LPS后72 h内大鼠生存情况.结果 与C组比较,LPS组、IL-10组、Co组和Zn组血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β水平和肝组织MDA含量升高,肝组织GSH-Px、SOD活性和生存率降低(P＜0.05);与LPS组比较,IL-10组和Co组血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β水平和肝组织MDA含量降低,肝组织GSH-Px、SOD活性、HO-1 mRNA表达和生存率升高(P＜0.05);与IL-10组比较,Zn组血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β水平和肝组织MDA含量升高,肝组织GSH-Px、SOD活性和生存率降低(P＜0.05),Co组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-10可减轻内毒素血症大鼠肝损伤,其机制与诱导HO-1表达有关.     

间充质干细胞联合输注促进造血干细胞移植后的造血重建

目的探讨间充质干细胞(MSCs)与造血干细胞(HSCs)共同移植对造血重建的影响。方法将扩增的Balb/c小鼠骨髓MSCs与骨髓共同经尾静脉输入经致死剂量照射的同系小鼠体内(联合输注组),并设单输骨髓细胞的HSCs组、单输间充质干细胞的MSCs组以及输培养基的对照组,每隔5d计数白细胞,计算动物死亡率。将乙酰乙酸碳氧荧光素标记的人间充质干细胞输入SCID小鼠尾静脉,24h后取肺、心、肝、脾、肾和小肠组织做冰冻切片;取骨髓、肝脏及脾脏,制成单细胞悬液,涂片,在荧光显微镜下观察计数;用逆转录聚合酶链反应测定鼠骨髓中人特异性β2-微球蛋白。结果细胞输注后,联合移植组的白细胞恢复快,12d左右恢复正常,死亡率(3/11)低于HSCs组(5/10)、MSCs组(4/4)、输培养基的对照组(11/11)。人MSCs输入SCID小鼠后24h,其在体内的分布依次为肺、肾、脾、肝,小肠及心脏组织中几乎无阳性细胞,骨髓中有极少MSCs。结论MSCs与造血干细胞共输能促进造血恢复。     

Pre-transplant co-infusion of donor-adipose tissue derived mesenchymal stem cells and hematopoietic stem cells may help in achieving tolerance in living donor renal transplantation

Transplantation tolerance is still a Utopian dream for many transplanters. Mesenchymal stem cells (MSC) have shown immuno-modulatory and tolerogenic effects in experimental models. We present a 29-year-old male with end stage renal disease (ESRD) who was transplanted with HLA 4/6 matched kidney from 51-year-old father in June 2010 preceded by co-infusion of donor-adipose tissue derived mesenchymal stem cells (AD-MSC) and bone marrow derived hematopoietic stem cells (BM-HSC) under non-myeloablative conditioning for deleting rejecting T and B-cells. He has maintained fairly stable graft function with serum creatinine (SCr) between 1.5 and 1.8?mg/dL at 3 years post-transplant with absence of donor specific antibodies (DSA), normal protocol graft biopsy, and peripheral T-regulatory cell levels (pTregs) (CD127^low/?CD25^highCD4⁺) of 4.57% on zero immunosuppression since 6 months.     

Human-induced pluripotent stem cells derived hematopoietic progenitor cells for treatment of hematopoietic failure among trauma hemorrhagic shock patients

Hematopoietic failure (HF) has been observed in trauma hemorrhagic shock (T/HS) patients. Multiple factors are involved. Elevated serum levels of cytokines, catecholamine, granulocyte colony stimulating factor, peripheral blood hematopoietic progenitor cells (HPCs) and decreased expression of erythropoietin receptor are associated with HF among T/HS. HF leads to anaemia, susceptibility to infection, sepsis and multi-organ failure. There is a lack of molecular understanding of HF and its potential therapeutic strategies. Cell-based therapy has ability to modulate the production of inflammatory cytokines, vascular dysfunction, tissue damage and apoptosis. Human-induced pluripotent stem cells (iPSC) derived HPCs may have the ability to restore HF in T/HS. Autologous cell-based iPSC have great promises for various diseases such as Alzheimer's disease, Parkinson's disease, cardiovascular disease, diabetes, amyotrophic lateral sclerosis, and spinal cord injury without ethical concerns. Similarly, treatment with iPSC derived hematopoietic stem cells can used for the treatment of HF among T/HS and may also improve the outcome. Here, we review the potential of human iPSC derived HSC to reversed HF following T/HS.     

Transplantation of bone marrow-derived hepatocyte stem cells transduced with adenovirus-mediated IL-10 gene reverses liver fibrosis in rats

Bone marrow stem cells (BMSCs) transplantation alone may not be sufficient for treatment of liver fibrosis because of complicated histopathologic changes in the liver. Interleukin-10 (IL-10) is an anti-fibrosis cytokine. IL-10 gene transfer of beta2m(-)/Thy-1+ bone marrow-derived hepatocyte stem cells (BDHSCs) may be useful for treating liver fibrosis. To determine the effect of liver fibrosis in rats by transplanting BDHSCs transduced with adenovirus-mediated IL-10 gene (AdIL-10), rat BDHSCs were isolated by magnetic bead cell sorting, characterized for liver-associated phenotypes, transduced with AdIL-10, and transplanted into liver-fibrotic rats. We show that BDHSCs secreted high-level IL-10 and retained their albumin expression after AdIL-10 transfer in vitro. Intra-portal-infused BDHSCs were implanted into the liver 2 weeks after transplantation. Transplanting AdIL-10-transduced BDHSCs into liver-fibrotic rats downregulated inflammatory response, promoted liver regeneration, suppressed activation of hepatic stellate cells and improved liver histopathology and liver function. These findings demonstrated the potential utility of this novel combined strategy of IL-10 gene and BDHSCs for the treatment of liver fibrosis.     

Role of plasmacytoid dendritic cells in immunity and tolerance after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Dendritic cells (DC) may play an important role in the pathogenesis of alloimmune reactions, such as graft-vs.-host disease after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). In humans, two types of DC-myeloid DC (mDC) and plasmacytoid DC (pDC) have been characterized and have distinct origins and functions. The data obtained from studies in vitro suggest that pDC are involved in the regulation of immunity, including the induction and maintenance of tolerance, as well as in the defence against viruses. The authors will review all the evidence currently available from reports exploring the role of pDC in clinical allogeneic HSCT.     

白细胞介素10基因转染抑制小鼠心脏移植排斥反应的实验研究

目的　探讨白细胞介素 1 0 (IL 1 0 )基因转染对小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用。方法　采用小鼠颈部心脏移植模型。随机将心脏移植后的小鼠分为 4组 :(1 )对照组 :心脏移植后每天用生理盐水 1ml灌胃 ;(2 )环孢素A(CsA)组 :心脏移植后每天用CsA 5mg/kg 灌胃 ;(3)IL 1 0组 :心脏移植时用IL 1 0重组腺病毒 30 0 μl(腺病毒滴度为 5× 1 0 1 1 pfu/ml)经主动脉根部灌注小鼠供心。(4)IL 1 0 CsA半剂量组 :在IL 1 0组的基础上 ,每天用CsA 2 .5mg/kg灌胃。观察移植心脏的存活时间及心脏跳动情况。结果　IL 1 0组、IL 1 0 CsA半剂量组和CsA组移植心脏存活时间均较对照组显著延长 (P <0 .0 1 ) ;IL 1 0组移植心脏存活时间较CsA组明显延长 (P <0 .0 5 ) ;IL 1 0 CsA半剂量组移植心脏存活时间最长 ,优于IL 1 0组 (P <0 .0 5 )和CsA组 (P <0 .0 1 )。结论　IL 1 0基因转染对心脏移植排斥反应有较强的免疫抑制作用 ,可明显延长移植心脏的存活时间 ,并且与CsA有协同作用 ,共同应用时 ,可减少CsA的用量。     

白细胞介素-10对人牙囊细胞RANKL表达的影响

目的:研究人牙囊细胞白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)蛋白的表达及其对破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)表达的影响.方法:采用组织块加胶原酶消化法培养人牙囊细胞,进行IL-10免疫组化染色.2 5ng/m1IL-10作用于牙囊细胞0、1、3、6 h,用RT-PCR检测RANKL mRNA表达的变化.结果:人牙囊细胞IL-10表达阳性.25ng/ml IL-1 0降低人牙囊细胞PANKL的表达,且具有时间依赖性.结论:人牙囊细胞表达IL-10,IL-10通过降低人牙囊细胞RANKL的表达,在牙齿萌出过程中起重要的调控作用.     

伏立康唑在造血干细胞移植所致真菌感染二级预防中的应用

目的探讨伏立康唑对造血干细胞移植所致真菌感染二级预防的作用。方法收集北京军区总医院血液科2007年1月以来收治的造血干细胞移植患者160例,分为伏立康唑注射液组（治疗组）和氟康唑口服组（对照组）,每组各80例,观察两组患者造血干细胞移植后发生真菌感染的情况。结果治疗组经过伏立康唑注射液二级预防,移植后3个月内共发生真菌感染者6例,发生率为7.5%（6/80）;对照组80例中发生真菌感染者16例,发生率为20%（16/80）,治疗组移植后真菌感染发生率显著低于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论伏立康唑的二级预防能显著降低移植后真菌感染的发生率,疗效确切、应用安全。     

腺病毒介导的NT-3基因在骨髓间质干细胞中的表达

目的:研究腺病毒介导的NT-3基因在培养的大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)中的表达.方法:在293细胞中培养扩增NT-3重组腺病毒(adenovirus vector for NT-3,Ad-NT-3),测定病毒滴度,然后用Ad-NT-3感染传代培养的MSCs,RT-PCR技术检测NT-3基因的表达.结果:Ad-NT-3扩增后获得了较高滴度的病毒,MSCs经Ad-NT-3感染后有NT-3 mRNA的转录.结论:腺病毒介导的NT-3基因可转入培养的MSCs并高效表达,为NT-3基因治疗的研究奠定了基础.     

CD34+造血干细胞移植后体内向肝样细胞分化

目的观察人脐血CD34^＋造血干细胞移植后在体内向肝样细胞分化的情况。方法CD34^＋造血干细胞分离自足月妊娠产妇脐血,实验动物采用6～8周的非肥胖糖尿病／重症联合免疫缺陷（nonobese diabetic/severe combined immunodeficiency disease, NOD/SCID）dx鼠,20μlCCl4腹腔注射建立小鼠急性肝损伤模型,其中部分小鼠24h后通过尾静脉注射入肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）的裸DNA质粒,建模48h后将CD34^＋造血干细胞通过尾静脉注入小鼠体内,观察各组死亡率、肝功能恢复情况,并通过RT-PCR、免疫组化、HSH等手段检测小鼠肝组织内人源性的、分泌白蛋白的肝样细胞。结果实验各组之间肝功能恢复无明显差异。各组存活率相近。肝组织石蜡切片显示,同时注射HGF质粒及CD34^＋造血干细胞的实验组,其肝组织损伤程度最轻,单独注射HGF质粒或CD34^＋造血干细胞的两个实验组结果相近,对照组最重。在注射CD34^＋造血干细胞的两组小鼠肝组织中,通过RT-PCR、免疫组化、HSH等方法均可检测到人源性的肝样细胞,联合应用HGF的实验组中,此种分化细胞数量更多,分布更广。另外与此同时可观察到融合细胞的存在。结论脐血中CD34^＋的造血干细胞可以分化成肝样细胞,HGF可以促进这一分化进程。