与小鼠囊胚共培养后人子宫内膜癌细胞侵袭、粘附和运动性的变化

目的:了解小鼠囊胚体外对人子宫内膜癌细胞RL95 2侵袭力及粘附、运动性的影响作用.方法:建立小鼠囊胚与人子宫内膜癌细胞RL95-2共培养模型,分别采用Matrigel人工重建基底膜侵袭实验、MTT法粘附实验和Transwell小室趋化性运动模型,来研究与小鼠囊胚共培养后,人子宫内膜癌细胞RL95 2体外侵袭能力、粘附性和运动性的改变.结果:小鼠囊胚与人子宫内膜癌细胞RL95-2共培养后,RL95 2细胞穿过Matrigel人工基底膜的细胞数明显减少(14±5.66 vs 38.08±13.43,P＜0.01),30min和60min的粘附率均降低(P＜0.01),穿过Transwell小室聚碳酸脂微孔的细胞数也显著减少(24.69±1.57 vs 59.19±2.39,P＜0.01).结论:小鼠囊胚可降低恶性肿瘤细胞的侵袭能力,及侵袭相关的粘附性和趋化运动性.     

激活素A在围植入期小鼠子宫内膜的表达

目的 探讨激活素A(activin-A)在围植入期小鼠子宫内膜中表达的分布及生物学意义.方法 应用免疫组化SP法和图像分析方法检测分析孕2～6 d小鼠子宫内膜activin-A的表达情况,并以未孕动情期及假孕2～6 d小鼠子宫内膜作对照.结果 activin-A主要表达于小鼠子宫内膜的腔上皮、腺上皮和基质细胞.acti...     

胚胎着床的子宫内膜免疫学研究现状与展望

胚胎着床的过程极为复杂,包括定位、黏附和侵入三个阶段.着床仅发生在一个极其有限的时间与空间范围内(即所谓的"着床窗"),需要子宫内膜和胚胎准确的同步化、相互作用和配合.     

IL-1β对小鼠胚胎体外发育及着床窗口期子宫内膜MMP-9与ICAM-1表达的影响

目的通过不同浓度的IL-1β对小鼠胚胎体外发育的干预,探讨IL-1β在胚胎着床中的作用。方法将IL-1β稀释为1、10、100μg/L等浓度,研究其对2-细胞期小鼠胚胎囊胚形成率及囊胚孵出率的影响,并应用免疫组化方法检测不同浓度IL-1β对着床窗口期小鼠子宫内膜基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、细胞黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达的影响。结果经不同浓度的IL-1β干预后,各实验组培养72h的囊胚形成率明显高于对照组,差异均有显著性(χ2=21.050～25.441,P0.01),各实验组间比较差异无显著性(P0.05);IL-1β浓度为1、10μg/L组培养96h的囊胚孵出率明显高于对照组,差异均有显著性(χ2=6.705、7.192,P0.01)。与对照组比较,各实验组MMP-9、ICAM-1蛋白表达量明显增加,差异有显著性(F=149.854、318.097,P0.01)。结论合适的IL-1β浓度有助于体外培养小鼠胚胎着床。     

小鼠子宫内膜干细胞的研究进展

子宫内膜干细胞是一种成体干细胞,可通过不对称分裂对子宫内膜进行修复。现有许多学者致力于子宫内膜干细胞的研究,标记滞留细胞技术和Hoechst 33342-SP法是常用的子宫内膜干细胞研究的方法,这些方法在用于人和小鼠子宫内膜干细胞的研究中各有其局限性。人子宫内膜干细胞研究受多种因素的限制,而小鼠成为一个重要的替代模型。现就小鼠子宫内膜干细胞的研究现状进行论述,并对其今后的研究前景进行展望。     

小鼠囊胚在人羊膜上着床行为的实验研究

目的：探索用人羊膜作为胚胎着床模型支持材料的可行性。方法：将妊娠第上天的小鼠囊胚培养在人羊膜的基础面，并作病理观察。结果：小鼠囊胚能在羊膜上正常脱带、贴附和扩展，其脱带率和贴附率与在培养板中 结果没有差异，但扩展率显著低于在培养板中的值；滋养层细胞对羊膜的基膜有侵入，二者在结构上有交错。结论：人羊膜可用作胚胎体外着床模型的建立，是一种有特殊应用价值的生物膜。     

GFP小鼠对三维体外着床模型的定位及验证

目的 本研究将基于已经建立的三维小鼠体外胚胎着床模型,运用绿色荧光（GFP）小鼠胚胎替代ICR小鼠胚胎,验证三维着床模型的可行性。方法 将孕第4天GFP小鼠及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠的内膜组织进行体外共培养。观察两组胚胎黏着率的差异。对GFP小鼠囊胚组通过荧光显微镜进行观察,共培养后进行组织学研究。结果 GFP小鼠囊胚及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h后的胚胎黏着率分别为46.6%及54.8%;两组黏着率之间差异无统计学意义（P=0.364）。GFP小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h及40h后均可在荧光显微镜下见到胚胎,组织学研究证实GFP小鼠囊胚可以黏着于ICR小鼠子宫内膜。结论 三维着床模型确实能够实现不同来源小鼠胚胎的黏附着床。运用GFP小鼠胚胎还发现了胚胎与子宫内膜组织之间存在着信息及分子联系。     

控制性超排卵对胚胎植入前小鼠子宫内膜蛋白质表达的影响

目的研究控制性超排卵（COH）对胚胎植入前小鼠子宫内膜蛋白质表达的影响，探讨体外受精-胚胎移植时子宫内膜容受性的生物学标志物。方法将12只ICR雌性小鼠随机分为实验组和对照组，每组6只。实验组采取促排卵措施，对照组未作任何处理。通过双向电泳和质谱分析技术研究COH对小鼠子宫内膜蛋白表达的影响。结果实验组蛋白电泳图谱与对照组有明显差异，2倍以上差异表达蛋白总数为89个。截取其中16个蛋白质点进行了质谱分析，检测出9种有意义的差异表达蛋白。结论COH可导致子宫内膜多种蛋白质表达改变，通过筛选子宫内膜容受性的生物学标志物，可以为提高COH周期的胚胎种植率和妊娠率提供理论依据。     

胚泡着床前后小鼠子宫内膜中LN和FN的表达

选用未经产雌性昆明种小鼠,取未孕及孕４～８ｄ 的子宫作切片,用免疫组化染色及图像分析法观察着床前后子宫内膜中层粘连蛋白（ＬＮ）和纤连蛋白（ＦＮ）的分布状况及含量变化,探讨它们与着床过程的相关关系。结果显示,在未孕子宫,ＬＮ 主要分布于各类上皮基膜中,ＦＮ 存在于基膜和基质细胞之间;着床前后,各类上皮基膜中ＬＮ、ＦＮ 含量明显增多,与未孕小鼠差异有显著性。随着蜕膜发育,蜕膜细胞周围出现ＬＮ 和ＦＮ,呈不甚连续的线样膜环绕蜕膜细胞。ＬＮ 及ＦＮ 在着床前后子宫内膜中表达增多,提示这两种物质与着床过程及蜕膜细胞的功能有关     

不同氧浓度对三维体外着床模型中内膜间质细胞的影响

目的 本研究将基于已经建立的三维小鼠体外胚胎着床模型,将整个培养环境的氧浓度调整为2％,从而探究缺氧环境对胚胎着床的作用和影响.方法 将已经建立的小鼠体外着床模型分为两组,其中一组置于氧浓度2％的密封箱内进行培养.另外一组为对照组,直接置于培养箱中,按照原先的大气氧浓度进行培养.观察对比这两组之间胚胎与内膜的黏着率.并对着床胚胎及内膜进行组织切片,观察组织的形态学变化,检测其中细胞凋亡的情况.结果 小鼠囊胚在2％的氧浓度及大气氧浓度下的胚胎黏着率分别为41.4％及53.2％;这两组的胚胎黏着率比较,差异无统计学意义.两种情况下的小鼠胚胎均已经黏附于体外共培养的子宫内膜上皮层表面,未见明显形态学异常.但在2％氧浓度下,子宫内膜组织中很多间质细胞发生了细胞凋亡.结论 2％的氧浓度在三维体外胚胎着床模型的运用中,虽然没有导体外胚胎黏着率的显著降低,但却诱导了体外培养子宫内膜组织中细胞的凋亡.     

Transcription and Translation of Dickkopf-1 in Endometrium of Pregnant Mice during the Peri-implantation Period

Dickkopf1(DKK1),knowntobeoneoffamilymembersofDickkopf,isanexcretionprotein[1].Itplaysanimportantroleinthecarcinogenesisandembryonicdevelopment.Recently,somestudieshaveconfirmedthatDKK1washighlyexpressedinmidsecretoryphaseinhumanendometrium,whichwascoincid…     

去甲二氢愈创木酸对小鼠胚泡植入的影响

目的研究去甲二氢愈创木酸(NDGA)对小鼠胚泡植入的影响及其作用机制。方法孕2d小鼠随机分4组(A、B、C和对照组),A、B、C组分别经皮下注射1.0、3.0、9.0mg/kg的NDGA,对照组注射等量PBS溶液,孕4d处死一半,取子宫免疫组化检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达,透射电镜分析子宫内膜结构的变化;另一半于检孕8d处死,测子宫脏器系数,观察胚胎着床数。结果与对照组比较:A组子宫脏器系数和妊娠胚胎数无显著差异,B、C组子宫脏器系数显著下降,妊娠胚胎数明显减少;A组子宫内膜MMP-9阳性表达差异无显著性,而B、C组MMP-9阳性表达明显减少;A组子宫内膜细胞超微结构无显著变化,B、C组细胞超微结构均遭受不同程度的损伤。结论NDGA可能通过对子宫内膜细胞直接毒性作用干扰MMP-9的表达,抑制胚泡植入。     

骨桥蛋白(OPN)在围植入期小鼠子宫内膜中的表达

目的 检测骨桥蛋白在围植入期小鼠子宫内膜中的表达,明确OPN表达规律.方法 将清洁级性成熟期昆明小鼠44只,雌性24只,雄性20只,雌性小鼠阴道涂片检查为动情前期,在此期注射PMSG和HCG,4只雌鼠不合笼(孕D0,对照组),用颈椎脱臼法处死,剪取子宫组织,直接液氮保存和福尔马林固定保存,其余的雌:雄小鼠1∶1合笼,次日检查阴栓,发现阴栓计为妊娠第1天.分别于妊娠第4、5、6、7和8天用颈椎脱臼法处死,迅速剖腹,剪取子宫组织予以保存(实验组),采用免疫组化方法和Western-blotting技术分析围植入期小鼠子宫内膜中的骨桥蛋白表达规律,采用RT-PCR技术半定量分析围植入期小鼠子宫内膜骨桥蛋白mRNA表达特征.结果 小鼠整个围植入期子宫内膜中均有OPN表达,但表达的高峰在着床窗口期,即孕D5.孕D0(非孕)子宫内膜的OPN表达较弱,孕D4时表达增强,孕D5时表达最强,孕D6时表达突然回落,孕D7、孕D8时表达减弱,降至非孕水平.结论 骨桥蛋白在围植入期小鼠子宫内膜中的表达随着孕龄的增加逐渐增强,但表达的高峰在孕D5,与植入窗的开放相吻合,是子宫内膜接受性的客观标志,提示骨桥蛋白在胚泡着床过程中起重要作用,该研究为阐明胚泡着床机制提供了实验依据.     

凝集素半乳糖结合蛋白3在人子宫内膜的表达

目的探讨凝集素半乳糖结合蛋白3（galectin-3）在子宫内膜的表达与子宫内膜容受性的形成和胚泡着床的关系。方法用RT-PCR和蛋白印迹法（Western blot）检测galectin-3 mRNA和蛋白在增生晚期和分泌中期子宫内膜的表达。用免疫组化方法检测galectin-3蛋白在子宫内膜的定位和表达。结果galectin-3mRNA和蛋白在分泌中期子宫内膜的表达高于增生晚期,galectin-3蛋白定位于上皮细胞和间质细胞。结论结果提示galeetin-3在分泌中期子宫内膜的高表达可能与子宫内膜容受性的形成和胚泡着床的过程有关。     

Local immune regulatory effects of Bangdeyun on the endometrium of mice with embryo implantation dysfunction during the implantation time

This study examined the effects of Bangdeyun on the expressions of nuclear factor-kappaB （NF-κB）, interferon-gamma （IFN-y） and interleukin-10 （IL-10） in the endometrium of mice with embryo implantation dysfunction （EID） during the implantation time （namely on pregnancy day 5, 6, 7 and 8） and explored the local immune regulatory effects of Bangdeyun. The gestational mice were randomly divided into normal group, model group and Bangdeyun-treated group. EID models of mice were established by using indomethacin. The endometrial expression of NF-κB was detected by immunohistochemistry and Western blotting. IFN-γ and IL-10 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. The results showed that in the normal group, NF-κB and IFN-γ were weakly expressed and IL-10 was strongly expressed in the endometrium during the whole implantation period. In the model group, the expressions of NF-κB and IFN-T were increased on pregnancy day 5, 6 and 7, and IL-10 expression decreased during the whole implantation time when compared with those in the normal group （P〈0.01 for all）. In the Bangdeyun-treated group, little amount of NF-κB and IFN-γ was expressed and IL-10 expression was strong, much the way they were expressed in the normal group （P〉0.05）. The expressions of NF-κB and IFN-T were much lower in the Bangdeyun-treated group than those in the model group on pregnancy day 5, 6 and 7 （P〈0.01 for all）, while the expression of IL-10 was much higher than in the model group during the whole implantation time （P〈0.01）. It was suggested Bangderun may favor a shift from Thl- to Th2-type immune response, therefore inhibiting the maternal immune rejection, inducing the immune tolerance and improving the fetal implantation.     

人类发育欠佳胚胎在卵裂期及囊胚期移植后的临床结局比较

目的 比较分析人类体外受精后的发育欠佳胚胎,行卵裂期移植或囊胚培养后,哪一种策略更有利于改善患者的临床结局.方法 患者入选标准:体外受精第3天(d3)所有胚胎均为发育欠佳胚胎(胚胎卵裂球数＜6-细胞,或胚胎碎片为10％～20％).将患者随机分为两组:卵裂期移植组(n =114)及囊胚培养组(n=106).比较两组间的临床妊娠率、继续妊娠率及植入率.结果 卵裂期移植组与囊胚培养组的移植周期临床妊娠率(38.6％ vs 24.5％)、继续妊娠率(35.1％vs 24.5％)及植入率(24.5％ vs 17.9％)差异均无统计学意义.由于囊胚培养组具有较高的周期取消率(53.8％),卵裂期移植组的取卵周期临床妊娠率显著高于囊胚培养组(38.6％vs 11.3％).结论 人类发育欠佳胚胎在卵裂期进行移植更加适合.     

冻融周期囊胚移植的临床价值

目的：探讨冻融囊胚移植、冻融卵裂期胚胎复苏后行囊胚移植的临床价值。方法回顾性分析2012年9月至2013年8月在该院生殖医学中心接受冻融胚胎移植治疗患者共518个周期的临床资料,按移植冻融胚胎类型分为3组。A组：冻融囊胚移植,共129个周期;B组：卵裂期胚胎复苏后行囊胚培养后移植,共123个周期;C组（对照）：冻融卵裂胚移植,共266个周期。比较各组的临床结局及 A、B两组间新鲜周期胚胎和冻融周期的囊胚形成率和取消率。结果 A、B组的生化妊娠率、临床妊娠率和胚胎种植率（70．5％、61．2％、42．3％;67．5％、58．2％、40．2％）显著高于 C组（53．0％、42．5％、23．1％）（P＜0．05）;3组间流产率、异位妊娠率、多胎妊娠率差异无统计学意义（P＞0．05）。新鲜周期第3天优质胚胎与冻融胚胎复苏后的囊胚形成率（62．5％vs．57．7％）差异无统计学意义（P＞0．05）,均显著高于新鲜周期第3天非优质胚胎的囊胚形成率（20．3％）（P＜0．05）。结论冻融周期行囊胚移植可以获得较满意的临床结局;冻融卵裂期胚胎行囊胚培养后可获得较高的囊胚形成率和临床结局。     

巨噬细胞移动抑制因子在围植入期小鼠子宫内膜中的表达

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在围植入期小鼠子宫内膜中的表达分布状况及其意义。方法应用免疫组化SP法检测妊娠1～8d小鼠子宫内膜MIF的表达情况,并以动情期非妊娠小鼠子宫做对照。结果在小鼠子宫内膜的所有组织均可检测到MIF的表达,主要表达于腺上皮、腔上皮及基质中的细胞团。MIF在妊娠1～3d表达较强,妊娠4～5d表达较弱,主要表达于子宫内膜的腔上皮和腺上皮;妊娠6～8d,MIF表达再次增强,但主要表达于基蜕膜和次级蜕膜区。结论妊娠1～8d小鼠子宫持续表达MIF,提示MIF可能参与小鼠胚泡植入及胚泡植入后的发育过程。     

肿瘤转移抑制因子CD63/ME491基因在小鼠子宫内膜表达的动态观察

目的 了解小鼠动情周期和早孕子宫中CD63/ME491 mRNA和蛋白的表达规律,探讨CD63/ME491在胚胎着床过程中的作用.方法 应用RT-PCR和免疫组化技术分别观察CD63/ME491 mRNA和蛋白的表达.结果 在整个动情周期中,CD63/ME491 mRNA在动情间期表达最多,而在动情期表达最少,但蛋白质却是在动情前期和间期表达最丰富,子宫内膜上皮和基质细胞均呈阳性.早孕的小鼠子宫组织均有CD63/ME491 mRNA表达,且在胚胎开始植入的第4天表达最多,以后维持在较高的表达水平.CD63/ME491蛋白在妊娠第1～6天子宫内膜腔上皮细胞和腺上皮细胞呈阳性表达.但在基质细胞表达的量和范围却不同:妊娠第1天,无CD63/ME491蛋白的表达;妊娠第2天,子宫内膜基质细胞出现微弱阳性表达;以后CD63/ME491蛋白在基质细胞的表达量和表达范围逐渐增强.结论 在胚胎着床过程中,CD63/ME491 在小鼠子宫中呈动态表达,提示它可能参与了子宫内膜对滋养层细胞有限侵袭的调控.