cbfa1在人牙乳头细胞中的免疫组织化学研究

目的：构建pcDNA3-cbfal重组质粒，瞬时转染人牙乳头细胞，观察cbfal在转染前后的表达。方法：用EcoRV和XbaⅠ双酶切pcDNA3空载体和pGEM-5z-f-cbfal质粒，电泳回收后进行连接，连接产物转化DH5α，进行酶切鉴定和PCR分析。采用脂质体法瞬时转染人牙乳头细胞，制备细胞爬片。免疫组织化学染色。结果：共挑出7个阳性转化子，酶切和PCR分析结果均显示重组质粒构建成功。正常人牙乳头细胞中cbfal表达阴性，瞬时转染24h后，cbfal表达阳性。结论：成功构建了pcDNA3-cbfal真核表达载体。人牙乳头细胞无cbfal的表达，当转染正义的cbfal重组质粒后出现cbfal的表达。为进一步研究cbfal在牙乳头细胞中的作用奠定了基础。     

稳定表达cbfal的人牙乳头细胞模型的建立和鉴定

目的：建立能稳定表达核心结合因子a1(cbfal)的人牙乳头细胞模型。方法：体外培养人牙乳头细胞，脂质体法转染重组质粒，G418筛选抗性克隆，并从基因(原位杂交和RT-PCR)和蛋白水平(免疫组化和western blot)进行鉴定。结果：共获得三个G418抗性克隆，其中PC-3克隆能够稳定表达cbfal基因和蛋白。结论：成功建立了稳定表达核心结合因子a1的人牙乳头细胞模型PC-3。     

1稳定表达cbfa1的人牙乳头细胞模型的建立和鉴定

目的 :建立能稳定表达核心结合因子a1(cbfa1)的人牙乳头细胞模型。方法 :体外培养人牙乳头细胞 ,脂质体法转染重组质粒 ,G418筛选抗性克隆 ,并从基因 (原位杂交和RT -PCR)和蛋白水平 (免疫组化和westernblot)进行鉴定。结果 :共获得三个G418抗性克隆 ,其中PC -3克隆能够稳定表达cbfa1基因和蛋白。结论 :成功建立了稳定表达核心结合因子a1的人牙乳头细胞模型PC -3。     

cbfa1对人牙乳头细胞增殖和矿化能力的影响

目的 :观察核心结合因子 (cbfa1)对人牙乳头细胞增殖和矿化能力的影响。方法 :建立稳定表达cbfa1的人牙乳头细胞模型 ,分别采用MTT、FCM、cAMP检测以及ALP和骨钙素放射免疫等方法检测转染前后相关指数的变化。结果 :稳定转染cbfa1后 ,牙乳头细胞的MTT值、PrI指数明显降低 ,而cAMP含量、ALP活性和OC含量明显增高。结论 :稳定转染cbfa1后牙乳头细胞的增殖能力明显降低 ,矿化指标明显增高。     

核心结合因子α1在BMP-2调控细胞外基质蛋白表达中的作用

目的:探讨核心结合因子α1(cbfa1)在BMP-2调控体外培养的牙乳头细胞表达细胞外基质蛋白中的作用.方法:采用反义核酸技术,体外阻断培养的牙乳头细胞中cbfα1的表达,分别用RT-PCR、Western印迹等方法观察200ng/mL BMP-2作用6h后细胞中相关基质蛋白,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、骨连蛋白(ON)、骨桥素(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)以及牙本质涎磷蛋白(DSPP)的表达,采用SPSS 11.0软件包对数据进行方差分析.结果:外源性BMP-2能明显上调牙乳头细胞中ALP、OC含量以及OPN、BSP和ON的表达,当反义阻断cbfα1的表达时,ALP、OC、OPN和BSP的表达显著降低(P<0.01).结论:cbfα1参与了BMP-2调控体外培养的牙乳头细胞表达细胞外基质蛋白的信号转导过程.     

LIM矿化蛋白1对牙周膜细胞生物学特性的影响

目的以LIM矿化蛋白1（LIM mineralization protein 1,LMP-1）基因构建真核表达载体PET43.1a-LMP-1,转染人牙周膜细胞,观察对其生物学特性的影响。方法采用基因工程技术构建真核表达载体pET43.1a-LMP-1,脂质体法转染人牙周膜细胞,四唑盐比色法和酶联免疫吸附测定法测定真核表达载体pET43.1a-LMP-1转染对牙周膜细胞活性以及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的影响。结果与空质粒转染组和空白对照组相比,pET43.1a-LMP-1真核表达载体转染后牙周膜细胞中LMP-1 mRNA和蛋白表达显著增强（P〈0.05）;细胞增殖明显增加;ALP表达明显增强,并随时间延长逐渐上升。结论外源性LMP-1转染进入牙周膜细胞能够促进细胞的增殖和矿化能力。     

cbfα1对非牙源性细胞表达牙本质特异性蛋白的影响

目的：观察Hela细胞转染核心结合因子α1（core binding factor α1,cbfα1）后牙本质特异性蛋白表达的变化。方法：采用细胞培养、瞬时转染、荧光染色等实验方法,研究Hela细胞转染cbfα1后DSP、DPP蛋白表达的变化。结果：在Hela细胞转染cbfα1后,DSP、DPP蛋白表达量明显增强。结论：cbfα1可以调控非牙源性细胞表达牙本质特异性蛋白。     

四种生长因子对体外培养的人牙乳头细胞表达核心结合因子a1的研究

目的：探讨4种生长因子对体外培养的人牙乳头细胞中核心结合因子a1（core binding factor al，cbfal）表达的影响。方法：体外培养人牙乳头细胞，转染pcDNA3-cbfal重组质粒，G418筛选建立稳定表达cbfal的细胞模型PC-3，分别在正常细胞和PC-3细胞中加入不同浓度的BMP-2、TGF-β1、FGF-2、EGF，采用RT-PCR、Western blot、免疫组织化学的方法，观察这4种生长因子在人牙乳头细胞中对cbfal基因表达、蛋白合成、蛋白表达部位的影响。结果：200ng／mLBMP-2和50ng／mL的FGF-2刺激正常人牙乳头细胞6h后cbfal的表达明显升高，而20和40ng／mL的TGF-β1作用12h，能抑制稳定转染cbfal基因的细胞中cbfal mRNA的表达；EGF则对人牙乳头细胞中cbfal的表达没有显著影响。结论：BMP-2和FGF-2可以上调人牙乳头细胞中cbfal的表达，TGF-β1对cbfal的表达有抑制作用，EGF则对人牙乳头细胞中cbfal的表达没有显著影响。     

人牙乳头细胞内Smad5蛋白表达的免疫组化研究

目的：观察Smad5蛋白在体外原代培养的人牙乳头细胞内的表达及其在转化生长因子－β超家族信号转导中的作用。方法：原代培养的人牙乳头细胞,分别以骨形成蛋白－2（bone morphogenetic protein-2,BMP－2）和转化生长因子－β1（transforming growth factor－β1,TGF－β1）刺激,免疫组化检测Smad5的表达,图像分析仪半定量。结果：人牙乳头细胞（空白对照组）胞浆内可见Smad5阳性表达,胞核内未见阳性表达;BMP－2实验组胞核内Smad5强阳性表达,胞浆内为弱阳性表达;TGF－β1实验组细胞胞浆Smad5阳性,胞核未见表达。结论：人牙乳头细胞内存在Smad5的表达,Smad5能转导BMP－2信号至核内发挥作用,但不能TGF－β1信号,提示BMP－2在牙齿发育过程中信号传递可能是通过Smad5的信号途径实现的。     

核心结合因子α1对牙本质涎磷蛋白基因转录调控的影响

目的观察核心结合因子α1(corebindingfactorα1,cbfα1)对牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein,DSPP)基因启动活性的影响。方法选择小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23为实验细胞,DSPP基因上游2.6kb片段(-2475bp～ 53bp)为启动子。通过采用瞬时转染、报告基因等方法,用SPSS10.0统计软件包对结果进行统计学分析,观察在MDPC-23中,cbfα1对DSPP基因启动子启动活性的影响。结果在MDPC-23细胞中,pGL3-Enhancer-2.6K pcDNA3-cbfα1共转染组荧光素酶的表达量显著小于pGL3-Enhancer-2.6K pcDNA3共转染组(P<0.01)。结论cbfα1对DSPP基因上游-2475bp～ 53bp区域的启动活性有抑制作用。     

甲状旁腺激素对人牙乳头细胞牙本质基质蛋白1表达的影响

目的：观察甲状旁腺激素(parathyroid hormone，PTH)对体外培养的人牙乳头细胞(human dental papilla cells，HDPC)牙本质基质蛋白1(dental matrix protein，DMP1)合成分泌的影响。方法：原代方法培养出人牙乳头细胞，用不同浓度的甲状旁腺激素刺激培养的第5代人牙乳头细胞，免疫组化观察结果，并采用图像分析的方法，进行半定量分析。结果：PTH可刺激人牙乳头细胞DMP1的表达，诱导的DMP1主要表达于细胞胞浆内，呈一定的浓度依赖性，0．3μg／mL为刺激最佳浓度。结论：PTH能够刺激人牙乳头细胞产生DMP1，对牙乳头细胞向成牙本质细胞分化有一定促进作用，可能是成牙本质细胞分化的重要介质之一。     

BMP2作用下人牙乳头细胞内Smad 1 mRNA表达的变化

目的：观察人牙乳头细胞内Smad1 mRNA的表达及在BMP2作用下,细胞内Smad1 mRNA的表达变化,探讨人牙乳头细胞内Smad1信号途径在BMP2调控牙乳头细胞分化中的作用。方法：原代培养的人牙乳头细胞用BMP2处理后,提取总RNA,采用Northern blot法,从mRNA水平观察Smad1基因的表达及含量变化。结果：从mRNA水平观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达,但在BMP2作用6、12、24h后,Smad1 mRNA表达量无显著变化。结论：人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径,牙乳头细胞内Smad1 mRNA表达量不受BMP2调控。     

骨形成蛋白-2对人牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量的影响

目的：观察人牙乳头细胞内Smad1蛋白的表达及骨形成蛋白－2（bone morphogenetic protein-2,BMP2)对人牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量影响，方法：原代培养的人牙乳头细胞用BMP2处理6h,12h,24h,48h后，提取总蛋白质，采用Western Bolt法，从翻译水平观察Smad1基因的表达变化。结果：从翻译水平观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达，但在BMP2作用48h内，Smad1蛋白表达量无显著变化，结论：人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径，牙乳头细胞内Smad1蛋白表达量不受MBP2影响。     

The expression of TGF-beta receptors on cultured human dental papilla cells]

OBJECTIVE: To observe the expression of TGF-beta receptors on cultured human dental papilla cells and the effects of TGF-beta on TGF-beta receptors of the cells. METHODS: The expression of TGF-beta receptors on cultured human dental papilla cells and the effects of TGF-beta on TGF-beta receptors of the cells were examined by cell culture and immunohistochemical technique and image analysis. RESULTS: Type I, type II receptors for TGF-beta in human dental papilla cells were stained strongly and type III was weakly positive. Image analysis indicated that all experimental groups had no obvious difference with control groups (P > 0.05). CONCLUSIONS: Cultured human dental papilla cells express TGF-beta type I, type II and type III receptors. TGF-beta has no obvious effects on the cell receptor expression.     

Cbfa1/Runt2在牙髓组织和牙髓干细胞中的表达研究

目的:检测Cbfa1/Runt2在成人牙髓组织及牙髓细胞的表达,以便进一步探讨其在成牙本质细胞分化过程中所起的作用.方法:选取因正畸拔除的第一前磨牙牙髓,一部分用于免疫酶标检测,一部分用酶消化法进行细胞培养.取第4代细胞进行Cbfa1/Runt2的免疫荧光检测.选取牙龈组织和牙龈成纤维细胞作为对照.结果:Cbfa1/Runt2在牙髓组织的表达集中在成牙本质细胞下层和血管周围.在牙髓细胞的表达集中在细胞核.结论:Cbfa1/Runt2可能参与成牙本质细胞分化的调控,但其在成牙本质细胞分化过程中所起的作用还需进一步研究.     

Estradiol induces osteoprotegerin expression by human dental pulp cells

Estrogen deficiency is associated with increased inflammation related periapical bone resorption. The present study aimed to evaluate the effect and intracellular mechanism(s) of estrogen on osteoprotegerin (OPG) and receptor activator of nuclear factor κB ligand (RANKL) expression in human dental pulp cells (HDPs). HDPs were treated with estradiol at a concentration of 0.1–10 μM. The results showed that estradiol induced OPG expression at both the mRNA and protein levels in a dose-dependent manner. However, no influence on RANKL expression was observed. An estrogen receptor (ER) inhibitor failed to attenuate the estradiol-induced OPG expression. Furthermore, ER-α and ER-β agonists did not simulate estradiol’s effects on OPG expression by HDPs. However, a significant OPG upregulation was observed in HDPs treated with an estradiol-BSA conjugate or a GPR30 agonist. An ERK inhibitor significantly enhanced estradiol-induced OPG expression, whereas a p38 inhibitor markedly attenuated this expression. In conclusion, OPG expression by HDPs may be regulated by estradiol binding a membrane receptor and the balance between the ERK and p38 signaling pathways.