重组人IL-15促人脐血CD34+造血干细胞定向分化为NK细胞

目的 探讨IL－15促CD34^ 造血干细胞定向分化为NK细胞的作用。方法 采用MACS法分离脐血中CD34^ 细胞，分别用IL－15、SCF（造血干细胞因子）和IL－15 SCF体外培养，流式细胞仪测定CD3、CD16、CD56分子，MTT法检测NK细胞杀伤活性。结果 IL－15可以促进CD34^ 细胞分化为以CD56^ CD16^-为主的NK细胞，SCF具有较强的协同作用。结论 IL－15具有促使NK细胞定向分化的作用。     

两阶段法体外诱导人动员外周血CD34~+细胞分化为巨核细胞

本研究提出两阶段法巨核细胞分化模型:首先将人外周血来源CD34+细胞在Cocktail或CC100两种增殖培养液中培养3、4、5或6 d,然后转入含有TPO和SCF的分化培养液中继续培养7、8或9 d。培养结束后通过比较细胞增殖、分化及成熟情况,优化培养条件。结果显示最优的诱导分化条件是,CD34+细胞在Cocktail培养液中扩增3 d后转入分化培养液中继续培养7 d;所获得的CD41+细胞和多倍体细胞数量是起始CD34+细胞的16倍和3倍;该条件下获得的CD41+和多倍体细胞数量显著高于常用的TPO法和TPO+SCF培养法。因此,运用本研究优化的两阶段培养模式能获得比单阶段直接诱导法更多的CD41+细胞和多倍体细胞,为巨核细胞和血小板相关的理论、临床研究提供新的更高效的巨核细胞体外扩增、分化模型。     

转染IL-21的CD34~+脐血造血干细胞抗裸鼠卵巢癌作用研究

目的 探讨IL-21转染的脐血造血干细胞(CD34~+UBSC·IL-21)对荷卵巢癌裸鼠的治疗作用.方法 从脐血分离CD34~+造血干细胞,体外培养扩增后用于重组体pIRES2-IL-21-EGFP转染.以肿瘤大小、荷瘤鼠生存期判断CD34~+UBSC-IL-21对荷瘤裸鼠的治疗效应.以RT-PCR、免疫荧光、ELISA、Western blot、脾细胞增殖试验及免疫组化法分别鉴定CD34~+UBSC和肿瘤组织中IL-21的表达及活性.裸鼠脾细胞中NK细胞含量及脾细胞的杀伤效应、血清中IFN-γ和TNF-α水平分别用FCM与ELISA检测.结果 pIRES2-IL-21-EGFP成功转染CD34~+UBSC.CD34~+UBSC-IL-21能抑制肿瘤生长,延长荷瘤裸鼠生存期,治疗鼠肿瘤局部能表达IL-21、血清IFN-γ和TNF-α水平升高,NK细胞含量及NK细胞杀伤活性明显增强,与其他组相比,差异有统计学意义(P<0.01).结论 转染IL-21的CD34~+UBSC有良好的抗裸鼠卵巢癌作用,该结果为临床使用UBSC为载体的基因治疗卵巢癌研究奠定了基础.     

FL、rIL-6、rIL-6R对脐血CD34+细胞的体外分化增殖作用

目的探讨FL、rIL-6、rIL-6R对CD34+细胞的体外分化增殖作用.方法用磁性细胞分离仪富集人脐血CD34+细胞.加入FL、rIL-6、rIL-6R及其不同组合因子,不同时间取样计数CD34+细胞集落数及细胞数.结果FL、rIL-6、rIL-6R扩增细胞形成集落的主要成分为CFU-GM,但在rIL-6+rIL-6R及FL+rIL-6+rIL-6R作用下,也可形成一定数量的BFU-E及CFU-M,而CFU-MK则未见形成.FL+rIL-6+rIL-6R可刺激红细胞生成.可使CD34+细胞总数在第7天时扩增6.4倍.结论FL+rIL-6+rIL-6R可扩增脐血CD34+细胞数量并可促进其分化.     

IL-10对U937细胞CD14、CD11b、CD23和HLA-DR表达的影响

Ｋ２〗ＩＬ１０是１９８９年Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏ等首先发现的一种免疫负调因子,由Ｔｈ２细胞产生,可抑制Ｔｈ１细胞产生ＩＦＮγ［１］。又发现它对单核巨噬细胞、Ｔ细胞、ＮＫ细胞和Ｂ细胞等都有免疫调节作用,但ＩＬ１０对原始细胞免疫调节的研究还很少。Ｕ９３７细胞是一种人原始单核系白血病细胞,代表了单核细胞分化的早期阶段［２］。本文观察了ＩＬ１０对Ｕ９３７细胞固有和ＩＦＮγ诱导下ＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ２３和ＨＬＡＤＲ表达的影响。１　材料和方法１－１　细胞系　人原始单核系Ｕ９３７细胞在含１０％…     

人脐带血CD34+细胞体外诱导分化为嗜酸粒细胞的研究

目的： 探讨人脐血CD34+细胞在体外培养条件下向嗜酸粒细胞分化的规律。 方法： 从人脐血中分离纯化CD34+细胞，分成阴性对照组、IL-5组和变应性鼻炎血清组。各组分别于第1 d、2 d和第7 d、14 d、28 d行CD34+流式细胞仪分析、HE染色和电镜观察。 结果： IL-5组和 血清组CD34+细胞比例在第2 d时就明显减少，至 28 d 时已剩余较低比例，其中加血清组明显低于IL-5组。在体外培养条件下加入IL-5和病人血清后，在第2 d即可见典型的嗜酸粒细胞结构，至28 d时已大部为嗜酸粒细胞，其中加病人血清组明显高于IL-5组。 结论： 人脐血CD34+细胞在体外培养条件下经过IL-5和病人血清刺激可早期分化为嗜酸粒细胞。可作为有效的相关研究模型。     

脐血CD34+细胞体外定向诱导分化为T淋巴细胞的实验研究

目的：建立利用人造血干／祖细胞体外定向诱导分化为T淋巴细胞的方法，为研究T细胞生物学特性及细胞免疫提供技术平台。方法：MACS方法分离人脐带CD34^ 细胞接种到人胎儿胸腺基质单层细胞上，IMDM液体培养基含20％人AB血清并加入FL、IL-12、IL-7和IL-2细胞因子组合，于培养7、14、21、28、35、42天取非贴壁细胞利用流式细胞仪对细胞表型进行检测，并进行细胞形态学分析。结果：2周后，CD4^ CD8^ 非成熟T淋巴细胞占细胞总数的0．3％-13．3％，4-5周CD4^ CD8^ T淋巴细胞达到高峰占16．6％-26．5％，且CD3^ CD4^ CD8^ 和CD3^ CD4^-CD8^ T淋巴细胞逐渐增多，6周后达26．5％～64．9％和11．6％-38．9％。培养成熟的T淋巴细胞经PHA IL-2刺激后瑞氏染色鉴定可见大原始淋巴细胞存在。结论：利用人脐血CD34^ 在体外人胎儿胸腺基质单层细胞上加FL、IL-12、IL-7和IL-2细胞因子组合条件下，可诱导分化出T淋巴细胞，并且培养的T细胞对有丝分裂素刺激有增殖反应。     

TAT-HOXB4蛋白对脐血CD34~+细胞的体外扩增实验研究

目的:研究TAT-HOXB4蛋白对脐血CD34+细胞的体外扩增效果。方法:采用磁珠阳性分离(MiniMARCS)纯化法分离纯化脐血CD34+细胞;用造血干细胞体外悬浮培养法以及流式细胞术检测法,观察应用TAT-HOXB4蛋白对脐血CD34+细胞的体外扩增能力。结果:加入TAT-HOXB4蛋白组的CD34+细胞数为对照组的13倍,MNC为对照组的6倍,并且在实验的第4天体外扩增效果最明显。结论:TAT-HOXB4蛋白对脐血CD34+细胞的体外扩增效果显著。     

早期作用造血因子对人脐血CD34+细胞的体个扩增作用

为了观察早期作用造血细胞因子SCF、FL、IL-3、IL-6、TPO单独及联合应用,对脐血CD34+细胞的体外扩增作用.我们用吸附单克隆抗体-磁珠分离系统富集人脐血CD34+细胞,在体外液体培养体系中加入不同的细胞因子扩增4周,每周取样计数有核细胞总数及集落形成细胞(CFC)数.结果表明:用磁性细胞分离仪富集脐血CD34+细胞纯度为80%～87%;一些细胞因子有明显的协同效应,其联合应用的扩增作用显著高于单因子作用;SCF+FL存在下,IL-3是有效扩增有核细胞总数及CFC的关键因子;细胞因子SCF+FL+IL-3和SCF+FL+IL-3+IL-6组合对有核细胞总数及CFC均有良好的扩增效应,培养2周时对CFC的扩增倍数分别为38.3±4.4 和29.6±2.7倍,可满足成人移植及基因治疗等的需要.     

佛波醇酯加离子霉素诱导脐血和成人外周血CD4+CD25+ T细胞分泌IL-2的相关机制研究

目的：以佛波醇酯加离子霉素作为刺激剂,验证CD4+CD25+ 调节性T细胞本身并不存在分泌IL-2障碍；同时通过对脐血和成人外周 血的比较性研究，了解脐血CD4+CD25+ T细胞的成熟度。方法：以au toMACS从足月婴儿脐血（CB）和成人外周血（PB）分选CD4+CD25+和CD4+CD25-T细 胞，以PDB+ionomycin作为刺激剂，培养45 h后流式细胞术检测各组细胞表达CD69和CD25水 平，并以Luminex多重细胞因子检测技术检测培养上清中7种细胞因子的浓度。结果:经PDB+ionomycin刺激后，CB、PB的CD4+CD25+ 和CD4+CD25- T细胞均 发生增殖，但在培养 45 h 后CD4+CD25+ T细胞均出现细胞状态变差或死亡倾向。C B、PB 的CD4+CD25+ T细胞活化后CD25分子表达进一步上调，高于CD25-细胞活化后的CD25分 子密度。经PDB+ionomycin刺激后，PB CD4+CD25+和CD4+CD25- T细胞均分泌高水平 的IFN-γ、IL-2和TNF-α，但CD25+ 细胞分泌IL-5、IL-4和IL-10水平远远高于CD25-细 胞；CB CD4+CD25+和CD4+CD25- T细胞亦分泌高水平的IL-2和TNF-α，但IFN-γ水 平远远低于PB，基本不分泌IL-5、IL-4和IL-10。结论：CD4+CD25+ T细胞本身并不存在合成和分泌IL-2障碍，其可能具有与传统T细胞不同的T细胞受体信息转 导模式；脐血CD4+CD25+ T细胞功能尚未完全成熟。     

重组人IL-12和SCF促进新生儿脐带血中CD34~+细胞的分裂增殖

目的分析IL-12及SCF对CD34+细胞分裂增殖及IL-12Rβ的表达。方法分离正常足月产新生儿脐带血与健康成年人外周血中的单个核细胞,采用流式细胞术(FACS)比较2组中CD34+细胞的频率,分析IL-12及SCF对CD34+细胞的作用。结果健康成年人外周血中CD34+细胞平均频率为0.13%,显著低于新生儿脐带血中CD34+细胞的平均频率1.53%(P<0.001)。进一步研究表明,SCF可以促进CD34+细胞表达CD25;IL-12及SCF可以显著促进CD34+细胞的分裂增殖以及IL-12Rβ1的表达。结论新生儿脐带血中CD34+细胞的频率明显高于成年人外周血中CD34+细胞的频率。IL-12及SCF可以促进CD34+细胞的分裂增殖以及IL-12Rβ1的表达。     

Preterm cord blood CD4+ T cells exhibit increased IL-6 production in chorioamnionitis and decreased CD4+ T cells in bronchopulmonary dysplasia

BackgroundChorioamnionitis (CA) is associated with premature delivery and bronchopulmonary dysplasia (BPD). We hypothesize that preterm infants exposed to CA have reduced suppressive regulatory T cells (Treg) and increased non-regulatory T cell pro-inflammatory cytokines, increasing risk for BPD.ObjectiveTo evaluate cord blood CD4⁺ T cell regulatory phenotype and pro-inflammatory cytokine production in CA and BPD groups.Study designCord blood mononuclear cells from infants (GA ⩽32 weeks), with or without placental histological evidence of CA (hChorio), were analyzed by flow cytometry. Clinical information was collected by retrospective chart review. Numbers of putative Treg (CD4⁺FoxP3⁺CD25⁺CD127Dim), CD4⁺ non-Tregs, and CD4⁺ T cell intracellular cytokine content following in vitro stimulation were compared with CA status and oxygen requirement at 36 weeks postmenstrual age.ResultAbsolute Treg numbers were not different in CA and non-CA exposed samples. However, the infants who developed BPD had a significant decrease in Treg and non-regulatory T cell numbers. Greater IL-6 production was observed in hCA group.ConclusionA pro-inflammatory CD4⁺ T cell status is noted in CA and BPD but the later disease is also associated with decrease in Tregs, suggesting that the development of BPD is marked by distinct inflammatory changes from those of CA exposed infants.     

抗CD40抗体联合诱导人脐血CD34+造血干细胞向DC2分化的作用

目的 探讨从脐血CD34^＋造血细胞诱导DC2的方法及CD40分子在DC2分化诱导中的作用。方法 运用磁珠从脐血中分离出CD34^＋造血干细胞,以rhIL-3（10ng／mL）、rhFlt-3L（100ng／mL）和rhGM-CSF（100ng／mL）诱导其向DC2分化,采用流式细胞仪分析DC2表型,并观察抗人CD40单克隆抗体诱导DC2分化成熟的作用。结果 人脐血CD34^＋造血细胞在rhIL-3、rhFlt-3L和rhGM-CSF联合诱导培养12d,获得具有DC2样（淋巴样DC）形态的细胞,然后分别加入rhIL-3＋抗人CD40 mAb（Ⅰ组）或rhIL-3＋TNF-α（Ⅱ组）诱导DC2的分化成熟,流式细胞仪分析细胞表型,发现Ⅰ组和Ⅱ组Lineage^-（CD3、CD14、CD16、CD19、CD56）CD123^＋细胞的HLA-DR、CD83、CD86、CD80表达率分别为88．78％、37．38％、32．83％和99．08％;78．87％、32．29％、29．57％和98．86％。结论 体外联合多种细胞因子从CD34^＋造血细胞成功地诱导出富集DC2表型的细胞,抗人CD40 mAb可以促进DC2的分化成熟。     

人CK8&18阳性胸腺上皮细胞对脐血CD34~+细胞向T细胞分化的影响

目的:通过CK8/18阳性胸腺上皮细胞与人脐血单个核细胞在Transwell板的共培养,探讨CK8/18阳性TEC对T细胞增殖分化的影响。方法:用胶原酶消化法分离纯化胸腺上皮细胞、免疫组化鉴定分离纯化的TEC,采用密度梯度离心法分离获得脐血单个核细胞,并采用免疫磁珠分选CD34+细胞,将TEC种植培养于Transwell双层培养板上层,使其均匀平铺于上层板底部,再将分选后的细胞加入上层小室,经过48小时的共培养,流式细胞术检测进入下室细胞的表型变化。结果:分离纯化的TEC经免疫组化鉴定CK8/18阳性。TEC与脐血单个核细胞共培养后,CD3+CD4-CD8-双阴性、CD3+CD4+CD8-单阳性细胞显著增加,CD3+CD4+CD8+双阳性细胞亚群细胞减少,CD8单阳性细胞增加不明显;CD45RA阳性细胞比率无显著变化,CD45RO阳性细胞比率显著增加。结论:CK8/18阳性TEC能选择促进脐血单个核细胞CD4+T细胞和CD45RO+细胞增殖。     

Antigen-independent adhesion of CD4 CD45RA T cells from cord blood

Antigen-independent adhesion of resting adult CD4⁺ CD45RO⁺ T cells to B lymphocytes has been shown to be transient and can be down-regulated by CD4 major histocompatibility complex (MHC) class II molecule interactions. Conversely, adhesion of adult CD4+ CD45RA+ subpopulation to B cells is not regulated by ligands of CD4. We have investigated the regulation of adhesion of cord blood CD45RA⁺ CD4⁺ T lymphocytes. In contrast to adult CD45RA⁺ CD4⁺ T cells, cord blood CD45RA⁺ CD4⁺ T cells were strongly sensitive to the down-regulation of adhesion mediated by the CD4-HLA class II interaction, since adhesion to MHC class II(⁺) B cells was transient and inhibited by an anti-CD4 antibody. In addition, human immunodeficiency virus gpl60, synthetic gpl06-derived peptides encompassing a CD4 binding site inhibited conjugate formation between cord blood CD45RA⁺ CD4+ T cells and B cells. Following activation of the cord blood CD4 T cells by an anti-CD3 antibody, a conversion from a transient to a stable adhesion pattern of cord blood CD4 T cells to B cells occurred in 2 days. The reversal to a transient adhesion occurred at day 8 following anti-CD3 activation in correlation with a complete shift to a CD45RO phenotype of the cord blood CD4 T cells. These data suggest that CD4 T cell adhesion can be developmentally regulated.     

Biological activity of dendritic cells generated from cord blood CD34+ hematopoietic progenitors in IL-7- and IL-13-conditioned cultures

Introduction  Dendritic cells (DCs) are required for initiation of the immune response and may therefore be used for the production of cancer vaccines. As mature DCs (mDCs) are the most potent antigen-presenting cells, there is increasing interest in generating them ex vivo. The present study was designed to obtain mDCs from CD34⁺ hematopoietic progenitors by culturing them in different media. Materials and Methods  Cord blood CD34⁺ hematopoietic progenitors were expanded for 7 days in FST medium ontaining fms-related tyrosine kinase 3 ligand (Flt3-L), stem cell factor (SCF), and thrombopoietin (TPO). Then the cells were divided into three parts and cultured for 21 days in different media: FST medium or FST enriched in interleukin (IL)-3 (FST3 medium) or supplemented with IL-7 and IL-13 (FST713 medium). At the end of culture part of the cells was harvested, counted, and analyzed while the other part was matured with proinflammatory cytokines for 2 days. The cells’ phenotypes, ability to induce proliferation of allogeneic lymphocytes in the mixed lymphocyte reaction (allo-MLR), chemotaxis, phago–cytosis, and O₂ ⁻ production were determined. Results  The average fold increase of DCs at the end of culture in FST medium was 127, in FST3 1043, and in FST713 71. In comparison with the other media, FST713 medium supported the generation of mDCs that were characterized by higher expression of CD83, costimulatory molecules, and HLA-DR, enhanced ability to induce allo-MLR and migration to –macrophage inflammatory protein (MIP) 3β poor phagocytosis, and O₂⁻ production. Conclusions  This study indicates that FST713 medium allows the generation of limited numbers of more mature DCs, while FST3 medium leads to the production of immature DCs in high numbers.     

CD34免疫亲合柱在脐血造血干/祖细胞分离与扩增中的应用

目的 :观察CD34免疫亲合柱对脐血造血干 祖细胞分离纯化的效果及纯化后CD34 细胞的增殖分化特性。方法 :采用CD34免疫亲合柱分离脐血单个核细胞 (MNC)中的CD34 细胞 ,流式细胞技术 (FACS)进行细胞表面标志测定。将分离前后的细胞加入造血生长因子进行液态扩增培养和多向祖细胞集落 (CFU GEMM)培养。结果 :经CD34免疫亲合柱分离后脐血中CD34 细胞为 49 6 2 %± 17 6 9% ,明显高于脐血MNC(1 17%± 0 6 8% ) ,细胞回收率为 5 4 38%± 11 91%。分离后CD34 细胞和脐血MNC经造血生长因子刺激培养 2 0d分别扩增 5 6 1 0 0倍和 44 44倍。培养至 12d时 ,免疫亲合柱分离组CD34 细胞阳性率为 5 3 38% ,对照组为 7 91%。分离组CFU GEMM产率明显高于对照组 (P <0 0 0 1)。结论 :CD34免疫亲合柱应用于脐血造血干 祖细胞的分离可充分富集CD34 细胞 ,且分离后的CD34 细胞具有明显的增殖效应和CFU GEMM形成能力。