血小板衍生生长因子-BB体外促进破骨细胞样细胞形成

目的 获得大量和高纯度破骨细胞样细胞。方法 从急性单核细胞性白血病(M5a亚型)患者骨髓中分离前体单核细胞，与血小板衍生生长因子(PDGF)-BB共同培养，获得多核细胞；利用免疫电镜、免疫荧光、扫描电镜等技术鉴定多核细胞的生物学特性。结果 多核细胞表达抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)，细胞膜具有Vitronectin受体，能够形成骨吸收陷窝。结论 所获得的多核细胞是破骨细胞样细胞，PDGF-BB能够促进前体破骨细胞向破骨细胞转化。     

血小板衍生生长因子-BB在成骨细胞-破骨细胞培养体系中的生物学作用

目的　探讨血小板衍生生长因子（PDGF）-BB在成骨细胞-破骨细胞培养体系中对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法　体外分离、培养成人成骨细胞和破骨细胞,利用复合培养系统使二者生活在同一环境中;在复合培养体系中施加不同浓度的PDGF-BB或者PDGF-BB+L-单甲基精氨酸(L-NMMA);酶动力学法测定培养上清中抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的活性;利用甲苯胺蓝对骨吸收陷窝染色并在图像分析仪下测定骨吸收陷窝的面积和数目。结果　在PDGF-BB单独作用下,复合培养体系中TRAP的活性不随POGF-BB的浓度发生明显变化（P>0.05）,骨吸收陷窝的面积和数目PDGF-BB均与对照组比较,无明显变化（P>0.05）;在加入L-单甲基精氨酸后,随着PDGF-BB的浓度递增,培养上清中TRAP活性从1.46U/L±0.10U/L升高至最高为2.47U/L±0.38U/L（P<0.01）;骨吸收陷窝的面积和数目分别从436μ     

转化生长因子β1/Smad信号通路在破骨细胞分化发育中的研究进展

破骨细胞是来源于单核造血髓系细胞的多核巨细胞,它的激活在炎症性骨破坏及骨质疏松症的发生和发展中起着十分重要的作用。破骨细胞的分化和功能受到多种细胞因子和生长因子的调节,已有研究表明,TGF-β1与其下游信号转导蛋白Smad2/3、Smad1/5可促进或抑制破骨细胞分化、发育和成熟,其机制与调节核因子κB受体激活蛋白配体（RANKL）/核因子κB受体激活蛋白（RANK）信号通路及其下游介质有关。本文主要针对TGF-β1/Smad信号通路在破骨细胞分化和发育中的作用进行综述。     

血小板衍生生长因子、骨保护素、破骨细胞活化因子在骨折愈合中的作用研究进展

骨折愈合是一个复杂的过程，受多种因素影响。随着现代分子生物学研究方法的深入，发现细胞因子在骨折愈合中发挥了越来越重要的作用。本就血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor，PDGF）、骨保护索（osteoprotegerin，OPG）、破骨细胞活化因子RANKL（receptor activator of NF-KB ligarid，RANKL）在骨折愈合中的作用研究进展进行综述。     

白藜芦醇对LPS刺激下RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响

目的 探讨白藜芦醇对LPS刺激下体外破骨细胞形成的作用途径和作用机制。方法 小鼠RAW264.7巨噬细胞分3组培养,即空白组(Sham组)、LPS组[空白组+LPS(1μg/ml)]和Res组[LPS组+白藜芦醇(10μmol/L)]。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法检测各组成熟破骨细胞数量,酶联免疫吸附试实验(ELISA)法检测各组上清液中TNF-α和IL-1β的含量,荧光定量聚合酶反应法(Q-PCR)检测各组中TNF-α和IL-1β mRNA的表达,Western blot法检测各组核转录因子κBp65(NF-κBp65)与IκBα中磷酸化蛋白的水平。结果 TRAP染色:Res组TRAP染色阳性的破骨细胞数目相比LPS组明显减少;ELISA检测:LPS组中各炎性细胞因子表达水平较Sham组显著升高(P＜0.05),Res组较LPS组各炎性细胞因子表达显著降低(P＜0.05);Q-PCR检测:LPS组TNF-α和IL-1β mRNA的表达水平较Sham组明显升高(P＜0.05),Res组中TNF-α、IL-1β的基因表达明显被抑制(P＜0.05);Western blot法检测结果显示,Res组IκBα和p65的磷酸化水平相对于LPS组显著降低(P＜0.05)。结论 白藜芦醇可以通过NF-κB信号通路下调LPS刺激下小鼠RAW 264.7巨噬细胞中TNF-α与IL-1β的表达,进而影响破骨细胞的形成,有望作为治疗无菌性松动引起的炎性骨溶解的关键靶点。     

CD147对体外破骨细胞分化成熟的影响

目的建立破骨细胞(osteoclasts,OCs)体外分化成熟的模型,研究CD147对OCs分化成熟的影响。方法从外周血分离单个核细胞贴壁培养,使用破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclear factor-κβligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导OCs生成。实验分为对照组、诱导组(RANKL+M-CSF)及阻断组(RANKL+M-CSF+CD147Ab),应用免疫荧光染色和流式细胞术检测CD147在破骨前体细胞(osteo-clast precursor cells,OPCs)的表达;抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察OCs的分化成熟情况及Real-time PCR技术检测CD147及TRAP mRNA在OPCs中的表达变化。结果①CD147分子在OPCs细胞膜上表达。②流式细胞术测得细胞膜表面平均荧光强度对照组(159.55±1.65)、诱导24 h组(171.18±3.46)、诱导48 h组(1...     

血小板衍生生长因子对肝细胞游离钙浓度影响

目的观察血小板衍生生长因子（PDGF）对SD大鼠肝细胞内游离钙浓度（[Ca2 ]i）的影响,同时观察钙拮抗剂（Ca－A）对PDGF作用的影响。方法应用Fura－2／AM荧光示踪法检测肝细胞（n=15）内[Ca2 ]i的变化;及PDGF存在下和PDGF、Ca－A同时存在下细胞内[Ca2 ]i变化。结果PDGF可明显升高细胞内[Ca2 ]i,Ca－A具有抑制PDGF的增钙作用。结论PDGF参与SD大鼠肝细胞内Ca2 浓度的转运,Ca－A对肝细胞具有保护作用。     

血小板衍生生长因子及其受体对肝癌细胞生长的作用

目的 探讨血小板衍生生长因子(PDGF)及其受体(PDGFR)在HepG2细胞中的表达及其对细胞增殖及凋亡的作用. 方法 免疫组织化学法检测HepG2细胞PDGF及其受体的表达并予分型.经外源性PDGF作用后,用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布;免疫组化半定量分析NF －κB和PDGFR表达情况,电镜观察细胞超微结构变化.结果 HepG2细胞表达PDGF－A、PDGF－B及其受体PDGFR－α、PDGFR－β.PDGF－A及PDGF－B均可促进HepG2细胞增殖,抑制其凋亡,并促进NF－κB的表达,对PDGFR有上调作用,且PDGF－B作用强于PDGF－A.结论 PDGF对肝癌细胞的发生发展起着重要促进作用.     

Toll 样受体4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制

目的:探索Toll样受体(Toll like receptor,TLR)-4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制。方法:Percoll密度梯度离心法分离原代大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),流式细胞术鉴定细胞表面标志物CD34、CD44、CD54、CD90。用Transwell小室建立干细胞(上室)-成骨细胞(下室)共培养体系,在此体系下对BMSCs进行破骨细胞诱导培养。将共培养体系分为TLR-4激活组和空白组,前者以TLR-4激动剂LPS(10 ng/m L)激活,后者加入等体积PBS。在诱导培养第6天,对上室细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色,计数并比较各组破骨细胞数。同时,蛋白质印迹检测各组下室细胞悬液中核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)的蛋白表达,观察电泳条带并行定量分析。结果:密度离心法获得原代大鼠BMSCs,流式细胞分析检测显示CD34阴性、CD44、CD54和CD90阳性。TRAP染色阳性细胞为破骨细胞,细胞计数显示,TLR-4激活组破骨细胞数明显多于空白组(t=13.556,P<0.05)。蛋白质印迹结果显示,TLR-4激活组RANKL的表达明显多于空白组(t=17.630,P<0.05)。结论:在成骨细胞共培养体系下,激活TLR-4能够促进BMSCs向破骨细胞分化,其机制可能与TLR-4促进成骨细胞分泌RANKL有关。     

RANKL浓度对破骨细胞形成与活性的影响

目的 探讨不同浓度RANKL对骨髓单核细胞向破骨细胞分化和活性的影响.方法 50、100和150 μg/L三种RANKL浓度诱导骨髓单核细胞向破骨细胞分化.抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞形态并计数,抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒检测上清中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性,骨板吸收实验检测破骨细胞骨吸收活力.结果 100 μg/L和150 μg/L RANKL浓度组在破骨细胞数量、细胞大小、核数目,抗酒石酸酸性磷酸酶活性和骨吸收率方面均明显高于50 μg/L组（P＆lt;0.01）,而100 μg/L和150 μg/L组间没有明显差异.结论 100 μg/L RANKL浓度下破骨细胞形成和活性能力强且相对较经济,是破骨细胞诱导培养的理想浓度值.     

骨保护素基因敲除对小鼠左心室收缩功能的影响

目的探讨左心室收缩功能与骨保护素配体(RANKL)和雌激素在骨保护素(OPG)基因敲除小鼠引起骨质疏松之间的关系。方法建立OPG基因敲除小鼠模型,并设对照组;ELISA法检测小鼠血清OPG和RANKL水平,放射免疫法检测血清雌激素水平;利用心脏超声对心功能进行评价。结果与对照组比较,OPG基因敲除组小鼠的心脏质量、心脏质量与体质量的比值、左室心肌细胞的横切面积均明显增大(P<0.01),左心室收缩末期内径和左心室收缩末期容积也明显增大(P<0.05)。OPG基因敲除组小鼠血清RANKL浓度明显高于对照组(P<0.001),两组血清雌激素水平则无显著差异(P>0.05)。结论OPG缺乏导致血清RANKL水平升高,左心室心肌细胞肥大,但不影响血清雌激素水平。     

RANKL/RANK/OPG系统造成人工关节假体无菌性松动的机制

人工关节假体无菌性松动是影响关节置换术长期疗效的重要因素。许多研究表明,无菌性松动与RANKL/RANK/OPG系统的关系密切。该系统是在破骨细胞分化、激活和凋亡过程中的一个重要信号调节系统,将骨代谢、免疫系统和内分泌系统紧密地联系起来。研究发现,体内多种激素和细胞因子等均直接或间接地调节该系统的表达,调控RANKL、OPG二者之间的平衡,从而介导破骨细胞的分化和功能而达到影响骨代谢的作用。该文就近年RANKL/RANK/OPG系统与人工关节无菌性松动机制的研究进展作一综述。     

CaMKIIγ 在破骨细胞分化中的表达规律

目的：研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶γ(CaMKIIγ)在破骨细胞分化中的表达规律,以揭示其作用。 方法：用50 ng/mL核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,于诱导后第0,1,3,5 天收获细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评价破骨细胞生成情况,并用RT-PCR、Western印迹、免疫荧光细胞 化学法检测CaMKIIγ mRNA和蛋白表达。结果：多核破骨细胞在诱导后第3天开始出现,第5天达到最多。分化第0, 1,3,5天,CaMKIIγ mRNA相对表达水平分别为(1.067±0.179),(1.840±0.070),(9.493±0.453)和(30.767±0.573);蛋白 相对表达水平分别为(0.454±0.065),(0.613±0.021),(0.858±0.019)和(0.980±0.023);除第1天的蛋白相对水平外,其他 时间点CaMKIIγ mRNA和蛋白表达差异均有统计学意义,且呈时间依赖性增强(P<0.01)。免疫荧光细胞化学法检测也 显示CaMKIIγ蛋白表达在破骨细胞分化过程中逐步增加。结论：CaMKIIγ表达随破骨细胞分化呈时间依赖性增加,提 示其在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用。     

RANKL/OPG在高原低氧条件下兔牙周炎发病机制中的作用

目的 研究模拟高原低氧条件下兔牙周炎的病理改变以及与破骨细胞相关的核因子κB受体活化子配体( receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegenn,OPG)的相关性.方法 40只家兔完全随机分成4组:平原实验组、平原对照组、高原实验组、高原对照组,每组各10只.通过钢丝结扎切牙方法建立家兔牙周炎模型,动物于分组饲养8周后处死,制作牙周组织石蜡切片,HE染色观察牙周组织病理变化、破骨细胞的表达,荧光免疫组化检测牙周组织中RANKL、OPG的表达.免疫荧光组化采用激光扫描共聚焦显微镜对实验组与对照组RANKL、OPG进行半定量分析,并比较其差异.结果 高原实验组与平原实验组、高原对照组和平原对照组RANKL灰度值分别为(1.799±0.036)、(1.519±0.061)、(1.242 ±0.078)、(0.963±0.098),差异有统计学意义(P＜0.05),与高原对照组比较,高原实验组OPG表达降低无统计学意义.高原实验组RANKL与牙周指数呈正相关(P＜0.01).结论 高原低氧条件下可能通过改变破骨细胞的RANKL/OPG调节途径促进牙周炎的发生、发展.     

鼻咽癌患者血循环血管内皮生长因子-D的水平

目的:探讨鼻咽癌(NPC)患者血循环血管内皮生长因子-D(VEGF-D)的水平及其临床意义。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定初治29例鼻咽癌患者以及15例健康人血清VEGF-D水平,观察该指标与患者临床病理特征的关系。结果:初治鼻咽癌患者血清VEGF-D含量为(546.28±206.97)pg/ml,明显高于健康人血清VEGF-D(174.56±59.54)pg/ml,差异具有统计学意义(P<0.01);N1～N3期患者血清VEGF-D含量(605.02±191.93)pg/ml,显著高于N0期患者血清VEGF-D(321.13±33.11)pg/ml(P<0.01),患者血清VEGF-D含量随着肿瘤TNM分期的升高而升高(r=0.660,P<0.01)。结论:鼻咽癌患者血循环VEGF-D的水平随着鼻咽癌进展而升高,可在一定程度上判断肿瘤进展。     

缺氧对人牙周膜细胞OPG和RANKL 基因表达的影响

目的：研究缺氧对人牙周膜细胞骨保护素（OPG）和核因子κb受体活化因子配体（RANKL）基因表达的影响,揭示缺氧在正畸牙移动压力侧骨吸收中的作用。方法采取酶消化法结合组织块法培养人牙周膜细胞。取3～5代细胞,分别在常氧（O2浓度为20％,对照组）和缺氧（O2浓度为2％）状态下培养3、6、12、24 h ,采用RT‐PCR检测OPG、RANKL mRNA的表达情况。采用SPSS15．0软件包,对RT‐PCR数据进行单因素方差分析。结果在培养3、6 h时,缺氧组和对照组OPG、RANKL mR‐NA的表达水平比较差异无统计学意义（P＞0．05）;在培养12、24 h时,缺氧组OPG mRNA 表达水平低于常氧组,而缺氧组RANKL mRNA的表达水平高于常氧组,缺氧组RANKL／OPG的比值较常氧组升高,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论缺氧可以影响人牙周膜细胞OPG、RANKL mRNA的表达,在正畸牙移动压力侧骨吸收中起促进作用。     

重组人骨保护素对牙周炎大鼠牙槽骨RANKL 、OPG蛋白表达的影响

目的：探讨重组人骨保护素（rhOPG）对牙周炎大鼠牙槽骨RANKL、OPG蛋白表达的影响,为rhOPG应用于牙周炎的治疗提供实验依据。方法选择22只Wistar大鼠,采用随机数字表法选择2只健康大鼠作为健康组;其余20只作为实验组,建立牙周炎大鼠模型,再将其分为实验对照组（n＝10）和rhOPG组（n＝10）,rhOPG组大鼠于上颌第2磨牙牙周袋间隙局部注入10 mg／kg rhOPG治疗。实验对照组大鼠于相同部位注射等体积灭菌注射用水。采用链霉素抗生物素蛋白‐过氧化物酶（SP）检测牙槽骨RANKL、OPG蛋白的表达。结果与健康组比较,实验组大鼠牙槽骨OPG表达水平较低,差异有统计学意义（P＜0．05）,而RANKL表达水平两组差异无统计学意义（P＞0．05）。与实验对照组比较,rhOPG组大鼠牙槽骨组织OPG蛋白的表达水平明显上调,而RANKL蛋白的表达明显下调（P＜0．05）。治疗后rhOPG组大鼠牙槽骨中OPG表达水平明显高于治疗前,而RANKL表达水平明显低于治疗前,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 rhOPG能调节牙周炎大鼠牙槽骨RANKL、OPG的表达。     

术前血清OPG、sRANKL对经皮冠状动脉介入术患者危险分层与评估预后的价值

目的 探讨术前血清骨保护素（OPG）、可溶性核因子κB受体活化因子配基（sRANKL）对经皮冠状动脉介入术（PCI）患者危险分层与评估预后的价值。方法 选取确诊为冠心病且行PCI患者223例,根据患者术前血清sRANKL/OPG比值将所有患者分为3组：A组、B组和C组。运用Gensini评分对患者血管狭窄程度进行判断。术后6个月内对患者进行随访,记录患者的主要心血管事件及分析患者血清OPG、sRANKL水平、sRANKL/OPG比值和血管病变支数、Gensini评分及主要不良心脏事件（MACE）和其他冠心病危险因素的关系。结果 3组患者在高血压病和血清OPG、sRANKL水平及sRANKL/OPG比值差异均有统计学意义（P<0.05）;术前血清OPG、sRANKL水平及sRANKL/OPG比值与高敏肌钙蛋白T（hs-cTnT）水平呈正相关（r=0.345、r=0.369、r=0.398,P=0.000、P=0.000、P=0.000）,而血清OPG、sRANKL水平及sRANKL/OPG比值与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）则呈负相关（r=-0.182、r=-0.165、r=-0.176,P=0.005、P=0.006、P=0.006）;随着患者Gensini评分的升高,血清OPG、sRANKL水平及sRANKL/OPG比值亦升高（P<0.05）,Gensini评分为重度血管狭窄和中度、轻度血管狭窄患者血清OPG、sRANKL水平、sRANKL/OPG比值差异均有统计学意义（P<0.05）。双变量Spearman相关分析表明,术前血清OPG、sRANKL水平、sRANKL/OPG比值与Gensini评分的相关系数分别为0.22（P<0.05）、0.20（P<0.05）、0.17（P<0.05）。术后6个月内3组患者MACE发生率比较差异有统计学意义（P<0.05）,且3组患者靶病变血运重建率的比较差异有统计学意义（P<0.05）。术前血清OPG、sRANKL水平、sRANKL/OPG比值是患者发生MACE的独立危险因素（OR=2.17、2.23、2.26,95% CI：1.33~3.46、1.45~3.77、1.55~3.89,P=0.006、0.005、0.003）。结论 术前血清OPG、sRANKL水平及sRANKL/OPG比值与高血压、肌钙蛋白、冠脉病变呈正相关,与HDL-C呈负相关,为PCI术后心脏不良事件的独立危险因素,为PCI术后患者的危险分层和预后评估增添临床指标。