毒三素链霉菌生产利普司他汀的发酵与提取工艺

研究了以豆油为主要碳源和能源的培养基中毒三素链霉菌的发酵代谢特性。在考察了乳化剂、温度等因素对利普司他汀生产的影响后，发现前期降低温度有利于保持菌种后期生产能力。最终变温发酵利普司他汀的产量达1．32g／L，比28℃恒温发酵提高了62％。并使用丙酮萃取与超声破碎细胞、乙酸乙酯萃取利普司他汀的提取工艺，简化了匀浆过程，提取效率为甲醇提取的3倍。     

产利普斯他汀菌株Streptomyces toxytricini FIM-17-16发酵条件的优化

目的 Streptomyces toxytricini FIM-17-16菌株生物合成利普斯他汀发酵条件的优化。方法采用单因素试验和正交设计实验相结合的方法,优化Streptomyces toxytricini FIM-17-16发酵培养基和发酵参数。结果确定了适宜发酵培养基配方和发酵参数:葵花籽油7%,甘油2%,黄豆粉3.25%,麸皮1%,卵磷脂1%,硫酸锌0.01%,碳酸钙0.08%,初始pH自然,装料系数80mL/500mL,种龄20h,接种量15%,摇床转速230r/min,发酵温度28℃,发酵时间168h,产利普斯他汀的水平达到了9667μg/mL,提高了20.6%,发酵周期缩短24h。结论经过优化发酵条件,S. toxytricini FIM-17-16生物合成利普斯他汀能力大幅提高,为该菌株的工业化生产奠定了基础。     

Lipstatin高产菌株筛选

以毒三素链霉菌XC-lp-2的变株OT-3为出发菌株,经UV和微波复合诱变处理,并在含豆油的平板上定向筛选耐豆油突变株,获得了高产突变株XC-lp-69,其lipstatin发酵效价达到911μg/ml,较出发菌株OT-3提高了71.6%。传代试验表明突变株XC-lp-69的高产遗传特性稳定。     

毒三素链霉菌发酵产物中有关物质的结构鉴定

目的对由毒三素链霉菌发酵法生产Lipstatin时所产生的有关物质进行结构鉴定。方法使用制备型HPLC法分离，用波谱法进行结构鉴定。结果该有关物质被鉴定为：[二（2-乙基-己酯）]-邻苯二甲酸。结论该化合物与Lipstatin无直接关联，它是一种常用的增塑剂，可能是生产过程中的污染物。     

表面活性剂PEG600对毒三素链霉菌发酵的影响

用PEG600代替毒三素链霉菌发酵培养基中的卵磷脂作为豆油的乳化剂，在其他发酵条件不变的情况下。PEG600较卵磷脂降低毒三素链霉菌发酵过程中溶氧水平，提高了豆油利用率，细胞向胞外分泌lipstatin的能力提高23．2％，lipstatin发酵效价提高35％。     

毒三素链霉菌发酵产物中有关物质的结构鉴定

目的对由毒三素链霉菌发酵法生产Lipstatin时所产生的有关物质进行结构鉴定。方法使用制备型HPLC法分离,用波谱法进行结构鉴定。结果该有关物质被鉴定为:[二(2-乙基-己酯)]-邻苯二甲酸。结论该化合物与Lipstatin无直接关联,它是一种常用的增塑剂,可能是生产过程中的污染物。     

抗生素链霉菌合成喷司他汀发酵工艺的关键原料研究

目的 通过抗生素链霉菌对发酵培养基和发酵工艺优化,对发酵过程中所用的关键原料进行了研究,提高喷司他汀的发酵产量。方法 考察和评估抗生素链霉菌发酵生产喷司他汀发酵培养基中的关键原料,研究关键材料的供应商及用量,提高喷司他汀产量,于5000L发酵罐上进行发酵工艺验证试验。结果 喷司他汀摇瓶发酵单位达232mg/L,结果较原始工艺提高了28%;在5000L发酵罐发酵单位达210mg/L,较原始工艺提高了74%。 结论 控制发酵培养基中的植物油种类、来源和用量,能有效提高喷司他汀的生物合成。     

利普斯他汀高产菌株毒三素链霉菌AP617-N12CA的全基因组测序与分析

摘要：目的 解析利普斯他汀(lipstatin)高产菌株毒三素链霉菌AP617-N12CA (S. toxytricini AP617-N12CA)的基因组序列信息,为深入研究该菌株高产lipstatin的分子机理与调控机制奠定基础。方法 联合应用三代单分子测序技术和二代高通量测序技术对AP617-N12CA菌株进行全基因组测序,使用相关软件对测序数据进行进基因组组装、基因预测和功能注释,并对lipstatin及其他次级代谢产物生物合成基因簇进行分析预测。结果 AP617-N12CA菌株整个基因组大约6.99Mb,GC含量73.76%,含有6134个编码序列;基因组由一条长约6.38Mb的线型染色体和一个长约0.61Mb的线型质粒组成;同时预测得到22个次级代谢产物合成基因簇,其中lipstatin基因簇定位在线型质粒右臂区域而非在染色体上。结论 首次完成了AP617-N12CA菌株全基因组完成图绘制,在S. toxytricini菌中首次发现和描述了线型质粒,在线型质粒上定位并鉴定分析了lipstatin基因簇。为S. toxytricini的功能基因组学研究和lipstatin高产机理解析提供了基础数据,对后续相关研究具有重要意义。     

RP-HPLC测定利普司他汀的含量

目的建立奥利司他中间体利普司他汀发酵效价的RP—HPLC内标检测法。方法采用ODS色谱柱（4．6mm×250mm，3μm），以83％乙腈-水溶液为流动相，以奥利司他为内标物，进样量10止，检测波长为195nm。结果在0．0～1．0mg／mL范围内，利普司他汀浓度与峰面积线性关系良好（r=0．9992）。结论本方法可准确检测发酵液中利普司他汀效价。     

紫外和微波结合诱变选育lipstatin产生菌

以紫外和微波结合诱变选育lipstatin产生菌Streptomyces toxytricini SIPI-HJ-80，获得高产突变株SIPI-UM-5，其lipstatin摇瓶发酵单位是出发株的3．25倍。菌株经多次传代，遗传性状稳定。     

红霉素链霉菌抗噬菌体菌株的选育

目的筛选红霉素链霉菌抗噬菌体菌株。方法以红霉素链霉菌B-27#为出发菌株,采用经过紫外诱变过的孢子悬浮液与噬菌体接触的方法进行处理。结果筛选到一株抗噬菌体高产菌株。通过噬菌体的侵染试验和摇瓶发酵生产能力验证,其抗噬菌体能力十分稳定,红霉素发酵摇瓶效价比对照有所提高。该菌株经纯化后投入生产,有效地控制和预防了噬菌体的污染。结论采用经过紫外诱变过的孢子悬浮液与噬菌体接触的方法进行处理,可以有效的获得抗噬菌体菌株。在试验中我们还发现,在紫外灯(253.7 nm、15 W、30 cm)下照射120 s,菌株出现抗噬菌体突变的几率最高。     

小儿健胃消食颗粒剂提取工艺的研究

目的 :优化小儿健胃消食颗粒剂的提取工艺。方法 :分别以熊果酸含量和干浸膏率为指标 ,运用正交设计 ,对脂溶性成分和水溶性成分的提取工艺进行优化。结果 :脂溶性部位的最佳工艺是 4倍药材量的 70 %乙醇提取 3h。熊果酸含量为3.2 35mg·g-1药材。水溶性部位提取工艺中煎煮次数有显著性影响 ,其最佳工艺是 15倍药材量的水提取 2次 ,每次 1h。结论 :脂溶性、水溶性部分提取工艺稳定、可行。     

离子注入选育灵芝多糖高产菌株及发酵条件优化

以美国大灵芝为出发菌株,利用N+离子注入技术选育出一株遗传性状稳定的灵芝多糖高产菌株。结果表明:在20 KeV2、×1016ions/cm2的注入条件下灵芝菌株G13的胞外多糖的产量为2.71 g/L,比对照菌株提高了15.32%。采用单因素法和正交实验法得到的培养基组分质量浓度优化组合为:葡萄糖45 g/L,玉米粉40 g/L,黄豆粉10 g/L,酵母膏0.5 g/L,VB125μg/L,KH2PO40.5 g/L,MgSO4.7H2O 0.1 g/L。进行分批发酵实验,发酵120 h灵芝胞外多糖的产量达到3.38 g/L。     

粉红黏帚霉固体发酵工艺的研究进展

粉红黏帚霉（Gliocladium roseum）是1种丝状真菌,分布于环境中,主要存在于植物表面和土壤中;其对多种病原菌都有很强的重寄生作用,且能产生多种生物活性物质,因此,有其较大的生物防治潜力。该霉菌的生物学特性、生物防治作用及发酵工艺的研究进展作一综述。     

骨松宝片生产工艺研究

目的：研究并确定骨松宝片生产工艺。方法：采用正交试验的方法,通过测定主要活性成分淫羊藿苷含量,考察水煎煮最佳提取工艺参数,考察片剂处方组成。结果：最佳提取工艺参数为加16、14、14倍药材量水煎煮3次,提取时间分别为2、l、l小时。结论：淫羊藿苷转移率大于45％,片荆成型较好,各项质量指标符合中国药典以及骨松宝片质量标准的规定。     

重组人肝细胞生长因子α高效表达工程菌筛选及发酵工艺研究

将人肝细胞生长因子α重组质粒转化至不同E.coli菌株，在相同培养条件下比较其表达量，筛选高表达工程菌株；在15L的发酵罐内，采用分批补料培养的方法，研究表达菌株的发酵培养条件，检测改变发酵培养基成分、种子液接种量、诱导时间等参数对菌液密度以及蛋白表达的影响，同时检测质粒传代的稳定性。实验结果表明筛选出的高表达工程菌在优化的发酵培养条件下，菌体收获量可达52g/L，目的蛋白表达量约占菌体可溶性总蛋白的25％，且质粒和蛋白表达均具有良好的稳定性。高效表达工程菌和优化发酵工艺可以较好地提高菌体收率，为规模化生产奠定了基础。