解决牛带绦虫卵教学封片卵裂的实验探索

牛带绦虫在新疆感染率较高达1.810％。所以带绦虫卵（牛带绦虫卵与猪带绦虫的虫卵不易区别，故统称带绦虫卵。有学者应用扫描电镜和透射电镜对其超微结构进行了观察，证实牛带绦虫卵的卵壳结构与猪带绦虫卵结构基本相同。是人体寄生虫实验教学的重要教学标本，但用常规固定液封制的带绦虫卵教学片，用不了多久就发生大量虫卵卵壳（胚膜）断裂破碎现象，无法观察虫卯实际形态，影响教学效果。以至该实验现在学生只能现做滴片观察，即费时又浪费实验材料。     

带绦虫虫卵长期保存标本的制作方法探讨

牛带绦虫和猪带绦虫是重要的人体寄生虫,其虫卵结构由外向内大致可分为卵黄层、胚膜层和六钩蚴,一般情况下带绦虫卵的卵黄层可丢失,我们常看到的虫卵为胚膜层包绕的六钩蚴[1].     

几种蠕虫卵和原虫包囊比重的测定

蠕虫虫卵和原虫包囊的比重,与粪便漂浮法和沉淀法的检出率密切相关。为此我们曾在1962年测定了蛔虫受精卵、蛔虫未受精卵、蛲虫卵、鞭虫卵、犬钩虫卵、姜片虫卵、短膜壳绦虫卵和犬体带绦虫卵等8种蠕虫卵及痢疾阿米巴包囊和兰氏贾第鞭毛虫包囊的比重。其中姜片虫卵、短膜壳绦虫卵和犬体带绦虫卵的比重的测定,目前尚未见有报导。     

猪带绦虫孕节内虫卵数量的观察

目的：了解猪带绦虫成虫成熟孕节内虫卵数量。方法：对10条猪带绦虫的50片成熟孕节以胃蛋白酶法消化，收集虫卵，以细胞计数板进行计数。结果：猪带绦虫每节成熟孕节内虫卵数量不等，最少为550个，最多为172500个，平均为26891个。不同虫体间孕节内虫卵数的差异较同一虫体间的差异显著。结论：猪带绦虫成虫成熟孕节内虫卵数量不等，可有悬殊的差别。     

广东省河源市龙川县紫市镇猫、犬、猪、鼠寄生虫感染情况调查

目的 了解广东省河源市龙川县猫、犬、猪、鼠寄生虫感染情况,为人体寄生虫病防治工作提供科学依据.方法 采用生理盐水直接涂片法和清水自然沉淀集卵法,检查猫、犬、猪、鼠粪便,查找寄生虫虫卵.结果 调查猫、犬、猪、鼠粪便271份,检出寄生虫卵89份,寄生虫总感染率为32.84%.以猫、犬寄生虫感染率最高.寄生虫感染度以猫粪中的曼氏迭宫绦虫最高,平均每张玻片检出虫卵580个.检出寄生虫卵6种:钩虫卵、蛔虫卵、鞭虫卵、曼氏迭宫绦虫卵、长膜壳绦虫卵和姜片虫卵.猫、犬、猪、鼠各种寄生虫感染情况,以钩虫、蛔虫、鞭虫和曼氏迭宫绦虫感染多见.猪感染寄生虫种类最多.结论 广东省河源市龙川县紫市镇猫、犬、猪、鼠寄生虫感染情况比较严重,以猫、犬为甚.寄生虫感染种类较多,提示当地人群也可能有同类寄生虫感染,应引起当地政府和卫生防疫部门的高度重视.     

都匀亚洲带绦虫感染免疫抑制小鼠的实验研究

目的：建立亚洲带绦虫囊尾蚴的小鼠动物模型，观察囊尾蚴的发育过程及形态变化。方法：将都匀亚洲带绦虫成熟孕节内虫卵经次氯酸钠孵化后经皮下注射、腹腔注射、灌喂三种方式感染小鼠，同时用地塞米松（1mg／d）皮下注射对小鼠进行免疫抑制。在30、40、5060d剖杀，观察小鼠的感染情况，囊尾蚴用胆汁进行头节翻出及组织压片，显微镜下观察其态变化。结果：皮下注射组的的感染率为46．7％，囊尾蚴总数359个；腹腔注射组小鼠感染为20％，囊尾蚴69个；灌喂组小鼠感染率为零。     

人体带绦虫的分子鉴定

目的：对采自云南大理的6条人体带绦虫进行虫种分子鉴定.方法：对云南省大理有排节片史的病人以槟榔-南瓜子法驱虫,对6条人体带绦虫成虫进行形态学鉴定;提取虫体基因组DNA,用亚洲带绦虫和牛带绦虫线粒体cox1基因片段的特异性引物对DNA进行常规PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测;将虫卵喂食2头幼猪（5×105/头）,40d后解剖检查.观察囊尾蚴寄生情况.结果：6条人体带绦虫的形态和牛带绦虫相似,亚洲带绦虫cox1片段PCR为阳性,扩增产物约260 bp,牛带绦虫cox1片段PCR均为阴性;只在感染幼猪肝脏发现有囊尾蚴寄生,其他组织和肌肉内没有囊尾蚴寄生.结论：形态学和分子生物学鉴定6条人体带绦虫标本均属于亚洲带绦虫.     

抗猪带绦虫六钩蚴兔血清的制备及重组质粒pcDNA3.1/TSO45-4B在小鼠骨骼肌的表达

目的:制备抗六钩蚴全虫可溶性抗原的兔血清,观察本室制备的猪带绦虫六钩蚴期特异性抗原基因TSO45-4B的重组核酸疫苗pcDNA3.1/TSO45-4B经肌肉接种后在宿主体内的表达.方法:用次氯酸钠法孵化六钩蚴,Dot-B1ot、ELISA检测兔血清中特异性抗体及滴度;以pcDNA3.1/TS045-4B进行体内转染,继之免疫组化法观察其在鼠体骨骼肌的表达.结果:抗六钩蚴兔血清多克隆抗体制备成功,抗体效价为1:20 100;免疫组化染色后在重组质粒注射部位肌肉组织的肌纤维内显示阳性的棕黄色分泌颗粒.结论:重组质粒在小鼠骨骼肌内成功地表达为猪囊尾蚴病多基因DNA疫苗的研制提供了体内表达的依据之一.     

用猪带颖虫卵诊断囊虫病的实验研究

用猪带绦虫卵诊断囊虫病，了解虫卵的抗原性和临床应用价值，以环卵沉淀试验方法共检查囊虫病人１１３例，阳性率７１．７６％，其他病人４１例，假阳性率７．３％，正常人３０例，假阳性率为３．３３％。证明本试验方法比较敏感特异，试验条件简单，便于应用。     

短膜壳绦虫病一例

患者男性,21岁,自诉一年多来食欲减退,饭后作呕,经常性腹疼、腹泻.平时自觉头晕、失眠、记忆力减退,自认为患神经袁弱症而多次就医,未见好转.1980年用饱和盐水漂浮法做粪便检查,发现大量的短膜壳绦虫卵.虫卵圆形或卵圆形,大小为51×40um.卵壳无色透明.胚膜较厚,由胚膜外缘两端各发出四根细丝,卵内含有一个六钩蚴.     

猪带绦虫不同发育阶段的同功酶及蛋白质组分的比较研究

本文报告猪带绦虫虫卵、囊尾蚴头节囊壁混合物、囊液、成虫未熟和成熟节片混合物及妊娠节片等不同发育阶段的酯酶同功酶和乳酸脱氢酶与蛋白质组分的带谱。结果表明,酯酶同功酶带以虫卵阶段最多,共四条酶带;乳酸脱氢酶同功酶带以囊尾蚴头节和囊壁混合物、囊液及成虫节片阶段为最多,各为四条酶带,且各有一条主带。蛋白质组分以虫卵阶段为最复杂,至少有19条区带。经 PAS 染色后,除囊液富含糖蛋白外,其余各发育阶段均未出现糖蛋白区带;同时将各不同发育阶段两种同功酶的活性作了比较。     

生物信息学法分析猪带绦虫苹果酸脱氢酶结构与功能

目的:分析和预测猪带绦虫苹果酸脱氢酶的结构和特性,用于指导其生物学功能的实验研究。方法:利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的工具,结合Pcgene和Vector NTI suite生物信息学分析软件包,从猪带绦虫全长cDNA质粒文库中识别苹果酸脱氢酶基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白质的理化特性、翻译后的修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等。结果:该基因编码332个氨基酸,为全长基因。Gen-Bank中与细粒棘球绦虫苹果酸脱氢酶序列同源性最高,理论分子量为36 459.2 Da。预测编码蛋白无跨膜区,无二硫键,稳定性较好。与吸虫属的苹果酸脱氢酶进化关系最近。结论:应用生物信息方法从猪带绦虫成虫cD-NA文库中筛选出了猪带绦虫核糖体cDNA全长序列并预测得到其结构与功能方面信息。     

Neurocysticercosis--two Australian cases

Two cases of neurocysticercosis, one with multiple small lesions and the other with a single cerebral cyst, are reported. Both patients presented with focal seizures and headaches years after likely exposure to Taenia solium eggs. These cases represent susceptible populations in Australia--migrants from and travellers in endemic areas.     

猪带绦虫六钩蚴期特异性抗原基因真核表达质粒pcDNA3.1/TSO45-4B的构建

目的：构建表达猪带绦虫六钩蚴期特异性抗原基因TS045-4B的真核表达质粒pcDNA3．1／TS045-4B。方法：全基因合成TSO45-4B的基因序列，并利用PCR扩增该基因序列，将其插入真核表达载体pcDNA3．1，经酶切、测序鉴定。结果：经酶切和测序鉴定表明所构建的重组表达质粒中含有TSO45-4B基因。结论：成功构建pcDNA3．1／TS045-4B重组质粒。     

猪带绦虫TSOL18基因在长双歧杆菌中的表达

目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSOL18基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSOL18电转化入长双歧杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX-TSOL18成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,目的蛋白相对分子质量（Mr）约为41KD,与预期结果相一致。Western blot显示,目的蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论猪带绦虫TSOL18基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的目的蛋白具有抗原性。     

用猪带绦虫卵诊断囊虫病的实验研究

用猪带绦虫卵诊断囊虫病，了解虫卵的抗原性和临床应用价值。以环卵沉淀试验方法共检查囊虫病人１１３例，阳性率７１７６％（８１／１１３），其他病人４１例，假阳性率７３％（３／４１），正常人３０例，假阳性率为３３３％（１／３０）。证明本试验方法比较敏感特异，试验条件简单，便于应用。     

猪带绦虫成虫凝溶胶蛋白基因的生物信息学分析

目的：分析猪带绦虫（Taenia solium）成虫凝溶胶蛋白（gelsolin,GEL）基因及编码蛋白的结构和功能。方法：利用生物信息网站美国国家生物技术信息中心（NCBI）和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统（ExPASY）中生物信息学分析工具,并结合其它分析软件,从获得的猪带绦虫成虫全长cDNA质粒文库的表达序列标签（EST）中识别凝溶胶蛋白基因,分析该基因的结构并预测其编码蛋白质的结构和功能特征。结果：猪带绦虫成虫凝溶胶蛋白基因与细粒棘球绦虫凝溶胶蛋白的一致性为88%,相似性为93%;全长1 514 bp,编码区为167~1 263 bp,编码365个氨基酸,无各种亚细胞定位序列,具有多个潜在的磷酸化位点,蛋白在溶液中性质稳定。结论：应用生物信息方法从猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中筛选出了猪带绦虫凝溶胶蛋白cDNA全长序列并预测其结构与功能。     

牛带绦虫成虫谷胱甘肽S-转移酶基因的生物信息学分析

目的:分析牛带绦虫成虫谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因结构并预测其编码蛋白的结构和功能。方法:利用生物信息学网站如NCBI和ExPASY系统中的生物信息学分析工具,并结合其它分析软件,分析该基因的结构并预测其编码蛋白质的结构和功能。结果:该基因全长908 bp,编码区为135～771 bp,编码212个氨基酸,无各种亚细胞定位序列;与猪带绦虫GST的一致性为93%,相似性为96%;预测3个主要的抗原表位33～53 aa,62～68 aa,179～184 aa位于空间结构上相距较远的分子表面。结论:从牛带绦虫成虫cDNA文库中筛选出GST基因,预测为胞浆型蛋白,可能具有较好的免疫学诊断抗原应用前景。     

Antigenic proteins associated with calcareous corpuscules of taenia solium: partial characterization of a calcium-binding protein

BACKGROUND: A protein fraction was isolated from calcareous corpuscles of Taenia solium cysticerci. The antigens in this fraction were recognized in ELISA and Western blot assays by all sera from a group of patients with active neurocysticercosis (NC) and were not recognized by the sera from patients with other neurological disorders. Western blot analysis also showed that several high molecular weight proteins were strongly recognized by antibodies in all the neurocysticercotic patient sera, suggesting a potential for serological diagnosis of neurocysticercosis. METHODS: In order to characterize these antigenic proteins, we used a monoclonal antibody raised against a high MW calcium-binding protein associated with calcareous corpuscles of Echinococcus granulosus (EgCaBP1). RESULTS: Western blot assays revealed the recognition of a protein band of about 260 kDa, appearing within the range of the high MW antigens recognized by the NC sera. Several cDNA clones were isolated through screening of a T. solium metacestode library with a DNA probe for EgCaBP1, containing partial coding sequences showing about 88% identity with the protein of E. granulosus. Moreover, a recombinant product expressed in bacteria from the partial coding sequence of T. solium showed the ability to bind Ca2+ and was recognized by the monoclonal antibody. This recombinant calcium-binding protein of T. solium was not recognized by the NC patient sera by ELISA and Western blot. CONCLUSIONS: Antigenic proteins in the calcareous corpuscles of T. solium metacestodes deserve further analysis as candidates in the development of diagnostic tools for neurocysticercosis.