脑源性神经营养因子对缺氧胚脑皮质神经元发挥保护作用的细胞内信号传导机制

目的:通过胚脑皮质神经元的体外培养,探讨遭受缺氧刺激时,脑源性神经营养因子(Brain derivedneurotrophic factor,BDNF)对神经元发挥保护作用时所启动的细胞内信号传导通路。方法:对胚鼠皮质神经元进行体外培养,提取不同缺氧时间点单纯缺氧的对照组及BDNF干预组的细胞蛋白,采用免疫印记(western blotting)方法检测两组神经元在细胞外信号调节激酶(extracellular signal-related kinase,ERK1/2)/磷酸化ERK1/2、蛋白激酶Akt/磷酸化Akt、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 Mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)/磷酸化P38MAPK表达上的差别。结果:与单纯缺氧组比较,加入BDNF可引起磷酸化ERK1/2和磷酸化AKT表达的增强,而磷酸化的P38MAPK在两组均没有表达。结论:BDNF引起磷酸化ERK1/2及磷酸化AKT表达的上调可能为BDNF发挥对缺氧神经元保护作用的机理之一。     

硫化氢对去甲肾上腺素诱导的心肌细胞肥大SD乳鼠的心肌保护作用机制研究

目的观察硫化氢对去甲肾上腺素(NE)诱导的心肌细胞肥大SD乳鼠的心肌保护作用,并探讨其机制。方法利用胶原酶消化分离培养SD大鼠乳鼠的心肌细胞,设置硫化氢组(100μmol/L NE+10μmol/L硫氢化钠)、模型组(100μmol/L NE+等量生理盐水)、对照组(等量生理盐水+等量生理盐水)、硫化氢对照组(等量生理盐水+10μmol/L硫氢化钠)。观察乳鼠原代心肌细胞光镜下变化;培养3 d后观察各组心肌细胞形态学变化,检测心肌细胞表面积、增殖和凋亡率,检测并对比丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量,对比鞘氨醇激酶1(Sph K1)、1-磷酸鞘氨醇受体1(S1P1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT) mRNA和Sph K1、S1P1蛋白的相对表达量、磷酸化PI3K (p-PI3K)/PI3K、磷酸化AKT (p-AKT)/AKT蛋白表达相对值。结果培养期间细胞逐渐趋于心肌细胞的特性;对照组心肌细胞均正常生长,硫化氢对照组与对照组相近,模型组严重异常;心肌细胞表面积、凋亡率、MDA含量、Sph K1、S1P1 mRNA的相对表达量、Sph K1、S1P1蛋白的相对表达量比较,模型组最高,硫化氢组次之,对照组和硫化氢对照组均最低; OD值、SOD含量、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达相对值比较,对照组最高,硫化氢组次之,模型组最低,除对照组和硫化氢对照组差异无统计学意义(P 0. 05),上述指标其余两组间对比差异均有统计学意义(P 0. 05);各组PI3K、AKT mRNA的相对表达量差异均无统计学意义(P 0. 05)。结论硫化氢能够控制NE诱导的心肌细胞肥大病变,促进增殖、抑制凋亡,减轻心肌细胞氧化应激损伤,推测与通过S1P/S1P1信号通路降低Sph K1、S1P1表达,上调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达相对值有关。     

胰岛素急性刺激对 PI3K／Akt 和 ERK 通路的分子调节作用

【目的】研究胰岛素（insulin）急性刺激对PI3K/Akt和ERK信号的调节作用及其意义。【方法】HepG2细胞、6只8周龄BALB/C雄性小鼠分别都给予急性胰岛素刺激和磷酸盐缓冲液（PBS）刺激,细胞提取总蛋白、小鼠提取肝组织总蛋白用 Western blotting 法分析 Akt磷酸化水平和 ERK 磷酸化水平,并用免疫沉淀法检测TERT磷酸化水平。【结果】胰岛素急性刺激组 HepG2细胞和肝组织p-Akt、p-ERK水平均较PBS组上调,抑制PI3K/Akt信号通路后 TERT 活性下降。【结论】胰岛素急性刺激可以激活 PI3K/Akt和 ERK信号通路,抑制PI3K/Akt通路可减弱端粒酶活性,这可能为临床肝癌的诊断与治疗提供依据。     

PI3K/AKT/FKHRL1信号通路对CXLCl6诱导的平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨PI3K/AKT/FKHRL1信号转导通路在CXCL16诱导的血管平滑肌增殖中的作用。方法 运用细胞计数法及MTT法检测CXCL16对于平滑肌细胞增殖的影响;免疫组化法观察CXCL16对PI3K/AKT/FKHRL1信号转导通路的作用,同时观察PI3K/AKT抑制剂LY294002对CXCL16诱导的上述变化的影响。结果 CXCL16可明显诱导平滑肌细胞增殖,作用高峰时间在第4天,并且可增加磷酸化AKT及磷酸化FKHRL1的表达。PI3K/AKT阻断剂LY294002可明显抑制CXCL16诱导的平滑肌增殖,同时下调磷酸化AKT及磷酸化FKHRL1的表达。结论 CXCL16可能是通过激活平滑肌细胞的AKT通路,诱导AKT及FKHRL1的磷酸化,从而影响平滑肌细胞的增殖。LY294002可以阻断PI3K/AKT/FKHRL1通路而抑制CXCL16诱导的平滑肌细胞增殖。     

双歧杆菌的脂磷壁酸对巨噬细胞MAPK的影响

目的探讨双歧杆菌的脂磷壁酸(LTA)对巨噬细胞丝裂源活化蛋白激酶(MAPK)活性的影响。方法选取6~8周龄巴比赛(BALB/c)小鼠90只,按随机数字表达法分为九组,每组10只,A组腹腔注射磷酸缓冲盐溶液(PBS);B组腹腔注射LTA;C组腹腔注射LTA+细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂;D组腹腔注射LTA+c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂;E组腹腔注射LTA+p38抑制剂;F组腹腔注射LTA+ERK及JNK抑制剂组;G组腹腔注射LTA+ERK及P38抑制剂组;H组腹腔注射LTA+JNK及P38抑制剂;I组腹腔注射LTA+3种抑制剂。九组小鼠注射5d,每天注射1次,饲养7d后,处死全部小鼠,采用免疫印迹法检测九组小鼠腹腔巨噬细胞MAPK家族中ERK1/2、p38MAPK和JNK蛋白的磷酸化水平。结果 (1)B组小鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平较A组明显升高,差异有统计学意义(P0.05);两组小鼠腹腔巨噬细胞p38MAPK和JNK平均荧光强度差异无统计学意义(P0.05);(2)向小鼠腹腔注射抑制剂的其他七个组别,其相应的蛋白表达水平几乎为零,且对其他蛋白表达无影响。结论 LTA可能是通过活化巨噬细胞MAPK家族中ERK1/2来激活巨噬细胞表达、合成和分泌细胞因子,抑制剂能够有效阻断蛋白表达通路,对其他蛋白表达无影响。     

微电场对胎盘滋养细胞迁移/侵袭相关信号通路活性的影响

目的探讨滋养细胞迁移/侵袭相关促分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶(MAPK/ERK),磷酸肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)和蛋白酪氨酸激酶/信号转导和转录活化因子3(JAK/STAT3)信号传导通路在微电场刺激下的活化水平。方法将胎盘滋养细胞用场强为150mV/mm的直流微电场加以刺激,通过蛋白质印迹法(Western blot)测定电刺激前和后各时间点滋养细胞MAPK/ERK、PI3K/Akt和JAK/STAT3信号传导通路相关活性分子的活化水平。滋养细胞在加电前分别用MAPK抑制剂PD980599(100μmol/L)和Akt抑制剂LY294002(20μmol/L)处理1h,在上述相应含抑制剂的培养基中用场强为150mV/mm直流微电场刺激5h,观察抑制剂对微电场刺激细胞行为的影响。结果 Western blot结果显示,滋养细胞在150mV/mm微电场作用下,p42/44MAPK Thr202/Thr204位点、Akt Ser473位点于5min开始活化,10~60min内逐渐加强,STAT3S727位点在微电场作用下上述各时间点无明显磷酸化水平改变。相应信号通路抑制剂处理后滋养细胞对微电场刺激的应答反应均受到明显抑制。结论微电场对滋养细胞迁移/侵袭功能的影响与MAPK/ERK、PI3K/Akt信号通路的活化有关。     

ERK1/2信号传导通路介导碱性成纤维细胞生长因子诱导人晶状体上皮细胞中环氧合酶2的表达

背景：碱性成纤维细胞生长因子在各种白内障形成中都起着重要的作用,可促进晶状体上皮细胞的增殖并化生为纤维细胞,但其信号通路尚不清楚。目的：探讨ERK1/2信号转导通路在碱性成纤维细胞生长因子诱导的人晶状体上皮细胞环氧合酶2表达中的作用。方法：使用10μg/L的碱性成纤维细胞生长因子干预培养的人晶状体上皮细胞0,1,3,6,12,24h,RT-PCR检测刺激不同时间人晶状体上皮细胞环氧合酶2mRNA的表达,Western blot检测细胞中环氧合酶2及磷酸化ERK1/2的表达。在阻断实验中应用特异性ERK1/2的阻断剂PD98059阻断ERK信号转导通路1h,再用10μg/L碱性成纤维细胞生长因子刺激细胞6h,Western blot检测细胞中环氧合酶2的表达。结果与结论：碱性成纤维细胞生长因子刺激后的人晶状体上皮细胞中环氧合酶2mRNA及其蛋白的表达显著增加（P〈0.01）,同时碱性成纤维细胞生长因子诱导人晶状体上皮细胞磷酸化ERK1/2活性增强,表达水平随作用时间而增加,30min时达到最高峰（P〈0.01）,6h后恢复至基线水平;PD98059可抑制人晶状体上皮细胞环氧合酶2的表达（P〈0.01）。说明ERK1/2信号转导通路参与了碱性成纤维细胞生长因子诱导的人晶状体上皮细胞中环氧合酶2的表达,在后发性白内障的形成过程中起着重要作用。     

促红细胞生成素对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素（EP0）对心肌细胞缺氧／复氧（HR）损伤的保护作用及其机制。方法对乳鼠心肌细胞进行原代分离培养，并缺氧2h，复氧1h，建立HR损伤模型。心肌细胞随机分为四组：正常细胞培养组（空白组），HR组，HR＋EPO 10U／ml组（EPO组），HR＋EPO10U／ml＋U0126 10μmol／L组（U0126组）。全自动生化分析仪检测各组细胞培养液LDH活性；MTT法检测心肌细胞活性；TUNEL法：流式细胞仪Annexin—V—FITC法检测凋亡心肌细胞；Westem—blot法测定各组心肌细胞ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白含量。结果EPO显著降低心肌细胞HR损伤后LDH的漏出，增强细胞的活性，减少细胞的凋亡比例，提高ERK。蛋白磷酸化水平；而经过U0126（MAPK的阻滞剂）的处理，心肌细胞LDH外溢量增加，细胞活性显著下降，凋亡细胞的比例明显增加，且ERK1/2蛋白磷酸化水平显著降低。结论EPO对心肌细胞HR损伤有一定的保护作用，其机制与ERK1/2信号通路的激活及抑制心肌细胞凋亡有关。     

重组人促红细胞生成素与骨髓间充质干细胞的迁移及黏附☆

背景:促红细胞生成素可促进内皮祖细胞的增殖分化并增强其黏附性。目的:观察重组人促红细胞生成素干预对人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力及相关细胞信号传导通路的影响。方法:体外培养人骨髓间充质干细胞,使用重组人促红细胞生成素干预第6代人骨髓间充质干细胞。分别用PI3K/Akt通路特异抑制剂Ly294002或p38MAPK通路特异激动剂anisomycin或ERK1/2通路特异抑制剂U0126预处理。结果与结论:重组人促红细胞生成素可使人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路磷酸化水平升高,抑制p38MAPK通路磷酸化水平,对人骨髓间充质干细胞的ERK通路和总Akt、总p38MAPK水平无明显影响。重组人促红细胞生成素作用组中迁移细胞数目显著高于对照组(P<0.01),黏附细胞数亦明显增加(P<0.01),PI3K/AKT通路特异抑制剂Ly294002预处理后重组人促红细胞生成素对迁移能力的作用消失,p38MAPK通路特异激动剂anisomycin预处理对两种作用影响均不明显。提示重组人促红细胞生成素具有增强人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力的作用,其增强迁移能力的作用与激活人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路有关,但是它对黏附能力的作用与PI3K/Akt和p38MAPK通路均无关。     

缺血后处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌功能和PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨缺血后处理(I-postC)对心肌缺血再灌注大鼠心肌功能及磷酸肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响,并对其中可能存在的机制进行研究。方法选择24只SD大鼠,随机均分为4组,每组6只。正常组:无缺血再灌注损伤。缺血再灌注组:采用Langendorff离体大鼠心脏建立缺血再灌注损伤模型。缺血后处理组:大鼠施行缺血后处理,缺血前灌注K-H液平衡20 min后,灌注4℃ST. Thomas停跳液,使全心停跳缺血40 min,然后续灌K-H液60 min。缺血后处理+抑制剂组:大鼠施行缺血后处理+LY294002(PI3K信号通路抑制剂)。观察各组大鼠平衡末及灌注末的心功能指标变化情况,TUNEL法及电子显微镜下观察各组大鼠心肌细胞凋亡与超微结构变化,Western-Blot检测细胞凋亡相关蛋白及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平。结果缺血再灌注组、缺血后处理组与缺血后处理+抑制剂组于灌注末时的心率(HR)、左室发展压(LVDP)、心脏收缩性和效率(dP/dt max)水平均较平衡末降低,左心室舒张末期压力(LVEDP)含量较平衡末升高;与正常组相比,其他3组大鼠的HR、LVDP、+dP/dt max水平降低,LVEDP含量、Flameng评分、心肌细胞凋亡率、Caspase-9/3/6/7、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白水平升高(P 0. 05);与缺血再灌注组相比,缺血后处理组、缺血后处理+抑制剂组的HR、LVDP、+dP/dt max、p-AKT、Bcl-2蛋白上升,LVEDP含量、Flameng评分、心肌细胞凋亡率、Caspase-9/3/6/7、细胞色素-C(Cyto C)、Bax蛋白降低(P 0. 05)。结论缺血后处理可以改善心肌缺血再灌注大鼠心肌功能损伤,可能与降低心肌细胞凋亡、调节PI3/Akt信号通路有关。     

Genetic polymorphism of cytochrome P450 1A1 (Cyp1A1) and glutathione transferases (M1, T1 and P1) among Africans.

The co-ordinate expression and regulation of the drug metabolising enzymes, cytochrome P4501A1 (CYPlAl) and glutathione transferases (GSTM1, GSTT1 and GSTP1), and their metabolic balance in the cells of target organs may determine whether exposure to carcinogens results in cancer. Besides showing variability in activity due to induction and inhibition, these enzymes also exhibit genetic polymorphism that alter enzyme levels and activity. We determined frequencies of common allelic variants of CYP1A1 and glutathione (M1, T1 and P1) among Tanzanians, South African Venda and Zimbabweans using PCR/restriction fragment length polymorphism techniques. The CYP1A1 Val462 mutant variant was found at a frequency of 1.3% among 114 subjects. The GSTM1*0 genotype was found at a frequency of 29% and 33% among Tanzanian psychiatric patients and healthy volunteers, respectively. Similarly, the GSTT1*0 polymorphism was present with a frequency of 25% in both the psychiatric patients and healthy controls. The frequency of GSTP1 Val105 variant was 16%, 12% and 21% among Tanzanians, South African Venda and Zimbabweans, respectively. We conclude here that CYP1A1 Val462 polymorphism is very rare among Africans. This is the first report of the GSTP1 Val105 variant frequency in African populations. We show here that there are no differences in frequencies of the variant alleles for CYP1A1, GSTM1, GSTT1 and GSTP1 in the three African populations.     

高频超声对急性肠系膜淋巴结炎的诊断价值

我院超声室于１９９７年以来用高频超声显像在对急腹症的鉴别诊断中,诊断肠系膜淋巴结炎１３例,全部病例经非手术治疗痊愈,超声随访肿大的淋巴结消失或缩小至５ｍｍ以下。１资料与方法本组１３例,男７例、女６例,年龄５～２１岁。患者均以腹痛就诊。使用Ｐｅｒｆｏｒ...     

乳腺摄影选用钼、铑滤光器滤过技术的临床效果

乳腺摄影是利用钼靶低千伏Ｘ线对女性乳房进行摄影的方法。本文采用钼滤光器和铑滤光器二种不同的滤过方式,对不同类型的乳房进行摄影,增加乳腺影像的层次,提高了影像的清晰度,大大地提高了乳房摄影的质量。１滤过技术原理Ｘ线滤过通常分为固有滤过和附加滤过二种,滤...     

彩色多普勒对椎动脉和颈动脉病变的分析

本文应用彩色多普勒血流技术对２０例对照组,３６例眩晕组及１６例脑梗组病人的椎动脉和颈动脉进行了观察,对比,分析。对晕眩症及脑梗塞的诊断和治疗提供了客观的依据。１资料与方法本文２０例对照组均为症状性眩晕,临床上排除脑血管病变。眩晕组３６例,临床上排除颈...     

重视磁共振扫描前的准备

我院自开展磁共振检查以来,迄今已有３５００多的病例。通过对各个部位的扫描检查,我们发现,扫描前的准备工作看似简单而又与整个检查过程紧密相关,是保证扫描质量的前提与基础,不容忽视,在实际的工作中,我们有如下几点体会。１提高接诊质量１１仔细审阅申请单重...