TGF-β1对SKOV-3细胞EMT的影响及相关分子机制研究

目的 研究TGF-β1(TGF-β1)对上皮性卵巢癌SKOV-3细胞上皮间质转化(EMT)的影响及相关分子机制.方法 MTT法检测各浓度TGF-β1(1、2、5以及10 ng/ml)干预24、48 h后,SKOV-3细胞增殖所受影响(对照组TGF-β10 ng/ml);Transwell检测培养48 h后SKOV-3细...     

吡咯喹啉醌对人卵巢癌细胞SKOV-3上皮间质转化的影响

目的 观察吡咯喹啉醌(PQQ)对人卵巢癌细胞SKOV-3上皮间质转化(EMT)的影响,并探讨可能机制。方法 取对数期SKOV-3细胞,随机分为Control组、PQQ组、PQQ+LiCl[Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路激活剂]组。Control组不处理,PQQ组加入PQQ 16μmol·L^-1培养24 h, PQQ+LiCl组加入PQQ 16μmol·L^-1培养24 h后再加入LiCl 60 mmol·L^-1培养24 h。以Transwell实验检测细胞侵袭能力;以划痕实验检测细胞迁移能力;以蛋白质印迹法检测细胞β-catenin、反式激活活性蛋白(c-myc)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白表达量。结果 Control组、PQQ组、PQQ+LiCl组每个视野细胞数分别为(95.20±11.39),(29.40±4.25)和(46.00±5.97)个,迁移率分别为(99.58±1.24)%,(18.19±2.36)%和(62.67±7.50)%;这3组细胞β-catenin蛋白表达量分别为1.10...     

白藜芦醇通过Hippo-YAP信号通路在TGF-β1诱导胃癌细胞EMT过程中的作用及其机制

目的 探讨白藜芦醇（RSVL）通过Hippo-YAP信号通路在TGF-β1诱导胃癌细胞上皮间充质转化（EMT）过程中的作用及其机制。方法 选取胃癌细胞SGC-7901为研究对象,首先将其随机分为空白组、RSVL低剂量组（5μM）、RSVL中剂量组（10μM）、RSVL高剂量组（20μM）,通过细胞增殖（MTT）实验确定RSVL浓度,然后对细胞进行转染,分为si-NC组、TGF-β1+10μM RSVL组、TGF-β1+si-YAP组、TGF-β1+pc DNA3.1-YAP组、TGF-β1+10μM RSVL+pc DNA3.1-YAP组。采用MTT、细胞侵袭（Transwell）、划痕实验,分别检测细胞的增殖、侵袭和迁移;采用蛋白质印迹法（WB）和荧光定量PCR检测E-钙粘连蛋白（E-cadherin）、神经型钙黏附蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、Snali 1、HIP-PO/Yes相关蛋白（YAP）和m RNA。其次,选取24只裸鼠,将其分为模型组、RSVL组（10μM）、 RSVL+pcDNA3.1组、RSVL+pcDNA3.1-YAP组,每组各六只。...     

川芎嗪联合mTOR抑制剂调控卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭迁移的实验研究

目的 研究川芎嗪联合mTOR抑制剂对卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭迁移的作用.方法 分别设置对照组、40μmol/L川芎嗪组、5μmol/L雷帕霉素组、40μmol/L川芎嗪联合5μmol/L雷帕霉素组,各组SKOV-3细胞给药后继续培养48 h后,MTT法考察各组SKOV-3细胞的增殖抑制率,Transwell实验...     

槲皮素抑制TGF-β1诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生EMT的效果研究CSCD

目的旨在研究槲皮素抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生上皮-间质转化(EMT)的效果。方法将肝癌细胞分为对照组(10 ng/ml TGF-β1)、低剂量组(50 nmol/l槲皮素+10 ng/ml TGF-β1)、高剂量组(10 ng/ml TGF-β1+100 nmol/l槲皮素),分别处理6 h,光学显微镜观察肝癌细胞形态学变化。6、12和24 h后,观察肝癌细胞迁移及侵袭能力。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝癌细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA表达。Western blot法测定肝癌细胞E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白。结果经TGF-β1诱导后,肝癌细胞发生明显EMT。划痕实验结果显示,12和24 h时,高剂量组和低剂量组肝癌细胞迁移划痕空隙长度明显低于对照组(P<0.05)。侵袭实验中,与对照组比较,低和高剂量组每视野穿膜肝癌细胞数明显降低,且高剂量组穿膜高于低剂量组(P<0.05)。RT-PCR实验结果显示,对照组E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组和低剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组和低剂量组(P<0.01)。低剂量E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组(P<0.01)。Western blot实验结果显示,对照组E-cadherin蛋白表达明显低于高剂量组和低剂量组(P<0.01),N-cadherin、Vimentin蛋白明显高于高剂量组和低剂量组(P<0.01)。高剂量组E-cadherin蛋白表达明显高于低剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显低于低剂量组(P<0.01)。结论槲皮素通过增加E-cadherin蛋白表达表达,降低N-cadherin、Vimentin蛋白表达,使得TGF-β1诱导的肝癌细胞EMT得到明显抑制。     

TGF-β1诱导人肝癌细胞HepG2上皮间质转化及对JAK-STAT3信号通路的影响

目的探讨TGF-β1诱导人肝癌细胞HepG2上皮间质转化及对JAK-STAT3表达的影响。方法采用5μg·mL^-1 TGF-β1处理人肝癌细胞HepG2细胞,用倒置显微镜观察细胞形态变化,用Real time-PCR检测E-cadherin和Vimentin的mRNA表达变化;Western blot检测E-cadherin、Vimentin、JAK、p-JAK、STAT3及p-STAT3的蛋白表达变化。结果 TGF-β1可激活JAK-STAT3通路,上调Vimentin表达,同时下调E-cadherin的表达,并显著促进其上皮间质转化。结论 TGF-β1可以诱导人肝癌细胞HepG2上皮间质转化,其机制可能与JAK-STAT3信号通路激活有关。     

红花对肾小管间质纤维化大鼠TGF-β_1、TGF-β_1 mRNA及c-fos表达的影响

我们前期实验研究表明,单味红花能够保护肾功能,减轻肾小管-间质纤维化病变[1],为了进一步探讨其作用机制,本研究观察了红花对转化生长因子-β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)、TGF-β1mRNA及原癌基因c-fos表达的影响.     

miR-144通过TGF-β/Smad通路抑制前列腺癌细胞的增殖侵袭

摘要：目的:观察微小RNA（miR）-144对前列腺癌细胞增殖侵袭的影响及其对转化生长因子-β（TGF-β）/Smad信号通路的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LNCaP、PC-3、SW1990人前列腺癌细胞和RWPE-1人正常前列腺上皮细胞中miR-144的表达水平;以miR-144表达量最低的PC-3细胞和表达量最高的LNCaP细胞作为研究对象,转染miR-144 mimics-NC序列为NC组,转染miR-144 mimics序列为miR-144过表达（mimics）组,荧光显微镜观察转染情况; qRTPCR检测转染后miR-144的表达水平,细胞活力检测试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭能力,生物信息学预测及荧光素酶报告基因检验miR-144的潜在靶基因,蛋白免疫吸附法（Western Blot）检测TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果:与正常前列腺上皮细胞RWPE-1比较,LNCaP、PC-3、SW1990前列腺癌细胞中miR-144的表达水平均显著降低（P<0.05）,miR-144 mimics转染后细胞转染效率均达到90%以上。与NC组比较,mimics组细胞中miR-144的相对表达水平显著升高,细胞的增殖活性和侵袭能力显著降低（P<0.05或P<0.01）。与TGF-β-Wt+miR-144 mimics-NC共转染组比较,TGF-β-Wt+miR-144 mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P<0.05）。TGF-β转录本3’UTR区域具有miR-144的潜在靶点,miR-144潜在靶基因为TGF-β,在24～120 h,与miR-144 mimics-NC组相比,miR-144 mimics、miR-144 mimics+TGF-β组细胞活性显著降低（P<0.05）;与miR-144 mimics组相比,miR-144 mimics+TGF-β组细胞活性显著升高（P<0.05）。与NC组比较,mimics组细胞中p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平及TGF-β、TGF-βR蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论:miR-144可能通过TGF-β/Smad信号通路抑制前列腺癌细胞的增殖及侵袭。     

华蟾素对转化生长因子-β1诱导肝星状细胞激活的作用及机制研究

目的 研究华蟾素对人肝星状细胞(HSCs)LX-2活化的影响及其可能的分子机制。方法 将LX-2细胞分为空白组,对照组和华蟾素低、中、高实验组。空白组予以完全培养基进行培养,对照组予以含10 ng·mL^-1转化生长因子-β1(TGF-β1)的培养基处理,华蟾素低、中、高实验组在对照组的基础上分别予以0.5,1和2 mg·mL^-1华蟾素处理。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测华蟾素对人肝星状细胞系LX-2细胞增殖的影响;以蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞中α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原(Collagen-Ⅰ)蛋白的表达;以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测α-SMA和Collagen-ⅠmRNA的表达情况;以免疫荧光法检测各组细胞α-SMA蛋白的表达。结果 Western blot和RT-PCR结果显示随着TGF-β1浓度的递增,α-SMA、Collagen-Ⅰ在LX-2细胞中的表达增强,差异有统计学意义(P<0.01);表明TGF-β1可诱导LX-2细胞活化增殖。CCK-8实验测得华蟾素...     

雷帕霉素对TGF-β1诱导的Treg细胞的体外影响

目的体外观察雷帕霉素（Rapa）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的CD4^＋CD25^＋Treg细胞（i Treg）扩增的有效性及其相关性。方法以抗原提呈细胞（APC）、植物血凝素（PHA,10μg·L^-1）、TGF-β1（7.5 ng·L^-1）联合刺激诱导CD4^＋CD25^-T细胞转化为CD4^＋CD25^＋Treg细胞,培养第5日添加不同浓度Rapa刺激培养3d作为实验组,设阴性对照组（不加Rapa）和空白对照组（RPMI 1640培养基）,FCM检测各组中CD4^＋CD25^＋T细胞比例变化情况;MTT法测定各组诱导细胞的抑制功能。结果①阴性对照组CD4＋CD25＋T细胞比例较空白对照组增高（P〈0.01）,而实验组CD4^＋CD25^＋T细胞比例显著升高,Rapa（100 ng·mL^-1）增殖效应显著（P〈0.01）,CD4^＋CD25^＋T细胞增殖比例达到42.6%;②实验组i Treg细胞能够明显抑制同型CD4^＋CD25^-T细胞的增殖（P〈0.01）且不同浓度Rapa之间存在差异,100 ng.mL^-1Rapa抑制效应最明显（P〈0.01）。结论在体外条件下,Rapa可以促进TGF-β1诱导分化的Treg细胞增殖,且具有免疫抑制功能,这为体外回输Treg细胞治疗疾病开辟了新途径。     

TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化对细胞Wnt/β-catenin表达的影响

目的探讨TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化对细胞信号通路蛋白Wnt/β-catenin表达的影响。方法采用5μg·mL-1 TGF-β1诱导SMMC-7721发生上皮间质转化,分别采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA和总蛋白的表达。结果 TGF-β1能显著诱导肝癌细胞SMMC-7721发生上皮间质转化,细胞中Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA和相应总蛋白的表达均显著增加(P<0.05)。结论 TGF-β1诱导肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化时可促进细胞Wnt/β-catenin的表达。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对TGF-β1诱导的心房纤维化效应的影响

目的:观察丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡA sulfonate, STS)对转换生长因子-β1(TGF-β1)诱导的心房纤维化效应的影响。方法:培养新生乳鼠心房成纤维细胞。MTT比色法测定心房成纤维细胞增殖率,[³H]脯氨酸掺入测定心房成纤维细胞合成胶原速率。共聚焦荧光显微镜及Western blot检测Ⅰ/Ⅲ型胶原表达、Smad2磷酸化及核转移。结果:TGF-β1处理24 h后,心房成纤维细胞增殖明显增强,同时Ⅰ/Ⅲ型胶原表达及Smad2磷酸化/核转移亦明显增强。丹参酮ⅡA磺酸钠各浓度组以上效应均减弱。结论:丹参酮-ⅡIA磺酸钠能明显减轻TGF-β1诱导的心房纤维化效应,机制与调控Smad2磷酸化及核转移相关。     

中医药治疗哮喘对TGF-β_1水平的影响

气道重塑是哮喘发生发展到一定阶段出现的不可逆的气道改变,而TGF-β1是对哮喘上皮细胞损伤有影响的细胞因子之一,可直接参与哮喘气道炎症和重塑的发生、发展过程。中医药可以通过影响TGF-β1的水平来更好的治疗哮喘,干预气道重塑的发生发展,从而为哮喘的治疗提供新的研究思路。     

不同浓度TGF-β1对子宫内膜组织上皮细胞数量与转分化的影响研究

目的 探查不同浓度的转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)对子宫内膜组织上皮细胞(endometrial epithelium cells, EECs)数量和转分化的影响。方法 收集河南省直属机关第二门诊部手术获取的正常子宫内膜组织40例,分离上皮细胞,根据随机数字表法,将细胞分为正常对照组(只加培养液)10份与实验组(加培养液和不同浓度的TGF-β1)30份,其中实验组又细分为三组,即低剂量TGF-β1组10份,中等剂量TGF-β1组10份,高剂量TGF-β1组10份,高、中、低剂量组分别给予TGF-β1(9 ng/mL、6 ng/mL、3 ng/mL)。测定活细胞数量、细胞悬液中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)与纤黏连蛋白(FN)含量以及细胞胞质中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙黏附蛋白-E(E-cadherin)的含量。结果 正常对照组FN分泌量为(0.469±0.010) ng/L、ColⅠ分泌量为(0.532±0.033) ng/L;而各实验组测得的FN值与Col-Ⅰ值,差异有统计学意义(P<0.01);与正常对照组相...     

雌激素对成骨细胞增殖及TGF-β_1、IGF-1 mRNA表达的影响

目的初步探讨雌二醇(E2)在体外对大鼠成骨细胞(OB)增殖及转化生长因子-β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达的影响。方法以大鼠OB为体外实验模型,用MTT法检测OB的增殖情况,实时荧光定量PCR法检测成TGF-β1、IGF-1基因的表达。结果 10-9~10-6mol/L浓度E2的可促进OB的增殖,以10-7mol/L为最高峰值。10-5mol/L组与对照组比较有抑制作用,但差异无统计学意义(P>0.05)。E2可增加TGF-β1、IGF-1 mRNA的表达,且呈浓度依赖关系。结论雌激素促进OB增殖及TGF-β1和IGF-1基因的表达,这可能是雌激素促进骨形成的重要机制之一。     

TGF-β1与Smad4与胃癌关系的研究

目的研究转化生长因子（TGF）-β1及其下游调节因子Smad4在正常胃黏膜、慢性浅表性胃炎、肠上皮化生、非典型增生和胃癌组织中的表达情况,探讨两因子在胃癌发生中的作用。方法用免疫组织化学方法,检测TGF-β1与Smad4在上述组织中的表达情况,分析两者表达在不同组织中的差异,以及其表达的关联性。结果在正常胃黏膜、慢性浅表性胃炎、肠上皮化生、非典型增生及胃癌组织中,TGF-β1的表达呈不同程度的增强,差异有统计学意义（P〈0.05）,但进展期胃癌与早期胃癌相比又略有下降,有无淋巴结转移间表达差异无统计学意义（P〉0.05）;Smad4的表达在各组间呈不同程度的减弱,差异有统计学意义（P〈0.05）,进展期胃癌较早期胃癌表达减弱,差异有统计学意义（P〈0.05）。无淋巴结转移组较有淋巴结转移组表达增强,差异有统计学意义（P〈0.05）;在胃癌和非典型增生组织中TGF-β1与Smad4表达无相关性,且对所有病例进行等级相关分析仍无相关性。结论TGF-β1与Smad4可能在胃癌的发生中发挥了一定的作用。     

肠粘连大鼠血TGF-β1的变化

目的观察大鼠肠粘连模型血转化生长因子-β1（transforming growth factorβ1,TCF-β1）变化。方法选取60只SD雄性大鼠随机分为两组：正常对照组（n=30）、观察组（n=30）。除正常对照组外,观察组大鼠按E1lis法制备成肠粘连模型。各组于术后第2、5、9 d取血,酶联免疫吸附法测定TGF-β1水平。结果TGF-β1在大鼠肠粘连模型中术后2 d明显升高,与对照组相比有显著性差异（P〈0.01）;术后5 d时TGF-β1升至峰值,与术后2 d时相比有显著性差异（P〈0.01）;术后9 d时TGF-β1下降,与术后2、5 d相比,均有显著性差异（P〈0.05～0.01）。结论TGF-β1是影响肠粘连形成的细胞因子。     

雌二醇对大鼠肝星状细胞TGF-β1、CTGF表达的影响

目的 探讨雌二醇对肝星状细胞(HSC)的影响及其可能的作用途径.方法 培养大鼠HSC,初次传代后,HSC随机分为4组,分别加入不同浓度的雌二醇,加药后72小时,噻唑蓝(MTT)法检测雌二醇对HSC增殖的影响;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分析其对HSC的转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA表达的影响;免疫细胞化学分析其对HSC的α-SMA蛋白的表达的影响.结果 MTT法发现雌二醇抑制HSC的增殖;RT-PCR分析雌二醇干预组HSC TGF-β1mRNA、CTGFmRNA的表达明显下降;免疫细胞化学分析雌二醇干预组HSC α-SMA蛋白表达明显下降;并且都随浓度增加抑制作用增强,差异有显著性(P＜0.05).结论 雌二醇具有抑制肝纤维化作用是因为:①可以抑制HSC的增殖、活化;②抑制了致纤维化生长因子TGF-β1及其下游信号CTGFmRNA表达.     

丹参对体外培养肝星状细胞TGF-β的影响

肝纤维化是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生,导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉淀的病理过程,是所有慢性肝病共有的病理改变。目前认为肝星状细胞(HSC)的活化与增生是肝纤维化进展的中心环节,其中以转化生长因子β(TGF-β)最为重要[1]。为此我们拟观察注射用丹参(冻干)对体外培养HSC增殖及TGF-β1表达的影响。