PUMA在大肠癌中的作用及临床意义

自PUMA发现以来，因具有强大的促凋亡功能而倍受瞩目，近年来对其分子结构、转录机制的研究取得了较大进展，其是否可以作为肿瘤治疗新靶点也一直备受关注，本文就其在大肠癌中研究进展做一简要综述。     

PUMA的研究进展

PUMA(p53 up-regulated modulator of apoptosis)是近年发现的可被内外源性p53快速诱导、具有强大促凋亡作用的Bcl-2蛋白家族一员。它通过BH3结构域与其他Bcl-2家族蛋白相互作用,诱导细胞色素c释放,引起凋亡。PUMA引起的凋亡有两种(p53依赖的和p53不依赖的)调控通路,已有研究表明PUMA敲除可显著抑制细胞凋亡。对于该基因的调控机制、作用机制及在肿瘤治疗中的应用等方面的问题,正待深入研究。     

Cyclin G1在小鼠卵巢颗粒细胞的表达及调控

目的:探讨cyclinG1在小鼠卵巢颗粒细胞的表达以及促性腺激素对其表达的调控作用。方法:以免疫组化方法检测小鼠卵巢颗粒细胞中cyclinG1的表达情况;取性成熟小鼠的颗粒细胞进行体外培养,分别加入卵泡刺激素(FSH)和绒毛膜促性腺激素(hCG)作用12h后,收集细胞,提取细胞总RNA,采用半定量RTPCR检测cyclinG1表达水平的变化。结果:免疫组化结果显示cyclinG1在不同发育阶段卵泡的颗粒细胞和卵丘细胞中均有较强表达,而黄体细胞中表达较少。RTPCR结果显示,FSH与hCG分别作用于体外培养的颗粒细胞12h后,与对照组比较,hCG可使cyclinG1的表达水平明显降低(P<0.01),FSH对其表达水平影响不明显(P>0.05)。结论:小鼠卵巢颗粒细胞中存在cyclinG1表达;hCG可降低cyclinG1在颗粒细胞中的表达水平,提示cyclinG1在颗粒细胞增殖分化过程中可能发挥正调节作用。     

粒细胞集落刺激因子在人卵泡颗粒细胞中的表达

粒细胞集落刺激因子(GCSF)属于糖蛋白生长因子家族，为造血细胞的生存、生长和分化所必需，而且能影响外周成熟血细胞的功能。人们发现，一些非造血组织，如胎盘、卵巢肿瘤和胎儿的器官组织等，也能表达GCSF和GCSF受体(GCSSFR)。有些研究显示，GCSF能使内皮细胞迁移和增生，提示GCSF在非造血组织中生长、发育的调节作用以及在肿瘤发生中的可能作用。本研究旨在揭示GCSF在人卵泡生长发育中的作用。     

微小RNA在卵巢中的调控作用

内分泌激素和卵巢内调控因子对正常的卵泡发育和其他的卵巢功能有重要作用。这些调控因素的紊乱可以导致不同的卵巢功能障碍,从而引起不孕、多囊卵巢综合征以及卵巢肿瘤发生。微小RNA(MicroRNA,miRNA)是近年来发现的一种转录后调节因子,本文对正常和病理条件下miRNAs在卵巢中的表达以及潜在的调控功能作一综述,以了解miRNA在卵母细胞的成熟、卵泡发育及卵巢病理中的调控作用。     

Smad2/Smad3蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达及FSH对其活化的影响

目的 研究Smad2/Smad3蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达及FSH对其活化的影响.方法 21d SD雌性大鼠,注射PMSG 20IU,48h后对卵巢颗粒细胞进行原代培养,用TGFβRⅡ抗体及不同浓度的FSH对细胞进行不同时间的处理,通过免疫细胞化学方法观察TGFβ信号通路中Smad2/Smad3和P-Smad2/P-Smad3(磷酸化Smad2/3)表达的变化.结果 1.Smad2/Smad3主要定位于卵巢颗粒细胞胞质,其活化形式P-Smad2/P-Smad3有少量表达;2.经FSH处理后, Smad2/Smad3向核内转移增多,P-Smad2/P-Smad3的表达增强,并与FSH的作用时间及剂量呈正相关性;3.TGFβRⅡ被抗体完全中和后再用FSH处理,Smad2/Smad3的核阳性率无显著增多, P-Smad2/P-Smad3的表达未见明显增强.结论 1.FSH促进Smad2/Smad3的磷酸化;2.FSH对 Smad2/Smad3的激活作用与TGFβ受体密切相关.     

pifithrin-α抑制大鼠肝缺血再灌注早期PUMA蛋白的表达*

背景：pifithrin-α是一种可逆性p53抑制剂,应用pifithrin-α抑制p53通路对肝脏缺血再灌注损伤的影响尚不清楚。 目的：探讨核转录因子p53抑制剂对大鼠肝缺血再灌注后PUMA蛋白表达的影响。 方法：96只雄性Wistar大鼠随机分为对照组,缺血再灌注组,缺血再灌注+二甲亚砜溶媒对照组(二甲亚砜组),缺血再灌注+p53抑制剂pifithrin组(PFT组)。建立70%肝缺血模型,PFT组于60 min的肝血流阻断结束时立即给予pifithrin-α,二甲亚砜组给予等量二甲亚砜溶液,对照组和缺血再灌注组给予等量生理盐水。 结果与结论：大鼠肝缺血再灌注后1,3,6 h肝组织PUMA蛋白表达明显,PFT组可以明显抑制PUMA蛋白的表达,但缺血再灌注24 h PFT组PUMA蛋白的表达高于其他3组。结果可见pifithrin-α对肝脏缺血再灌注损伤有一定保护作用,其通过抑制p53从而诱导PUMA蛋白表达下调主要是在缺血再灌注早期。     

卵巢组织冷冻移植在女性生育力保存中的研究进展

医疗技术的发展使得癌症患者的存活率越来越高,但放化疗治疗会导致女性卵巢功能早衰,出现过早绝经甚至丧失生育能力。卵巢组织冷冻保存是保存女性生育力的一种方式,甚至是有些患者唯一的生育力保存的选择。目前在世界范围已有17例婴儿是来自冷冻/解冻-移植后的卵巢组织,这给我们带来了希望,同时也带来了挑战,因为这项技术还存在一定的局限性。目前使用的冷冻方法可以保存卵巢内大量的始基卵泡,但是在移植的初期,因组织缺血缺氧会导致大量的卵泡丢失,影响了移植物的存活,缩减了卵巢组织在体内发挥功能的时间。卵巢组织移植存活程度的影响因素很多,包括移植前个体因素和基础疾病及治疗对卵巢的损伤,冷冻的损伤和移植组织块的大小,移植后血管再生情况等。这篇文章将对卵巢组织冷冻作为女性生育力保存方式的研究进展做一综述。     

人造卵巢的研究进展

由于女性生殖器官的易衰老性,如何延缓卵巢功能减退乃至重塑卵巢功能已成为生殖医学领域的研究热点。随着生物医学工程的进一步发展,人造卵巢的出现为重塑卵巢功能提供了一个崭新的选择。     

己烯雌酚对未成熟大鼠卵巢卵泡颗粒细胞分化的形态学观察

取出生后21～26天Sprague-Dawley未成熟雌性大鼠,分为实验与对照两组。实验组只/天注射己烯雌酚(DES)0.5mg(溶于芝麻油中),并按注射天数分为2、3、4、5天组;对照组注射等量的芝麻油。注射2天后,逐日取材固定,用光镜和电镜观察两组动物的卵巢和卵泡颗粒细胞。同时从各组卵巢中分离出卵泡颗粒细胞,用无血清McCoy 5a培养基培养,加入不同的激素,分为对照组、FSH组、DES+FSH组、FSH+hCG组。培养3天后,取材固定,用光镜、透射电镜、扫描电镜观察各组的细胞形态,结果为:1.实验组卵巢比对照组的大,卵泡也大。卵泡细胞增多,细胞体积大,分裂象多见。2.注射3天以上DES的卵巢中,闭锁卵泡和退化的卵泡细胞增多。3.电镜下,实验组卵泡细胞中与蛋白质合成有关的细胞器比对照组发达。4.体外培养的卵泡颗粒细胞,对照组细胞排列分散;FSH组细胞集聚成团,细胞表面微绒毛增多;细胞质内与合成蛋白质有关的细胞器比对照组的发达。DES+FSH组的细胞排列和结构与FSH组的相似。FSH+hCG组细胞体积增大,细胞表面微绒毛减少或消失。细胞质内出现滑面内质网,细胞开始黄体化。5.注射2～5天DES的各组细胞形态和结构均相似。从形态学来看,经DES处理的未成熟雌鼠的卵泡颗粒细胞的形态、排列和对不同激素作用下的变化,与文献报道的去垂体雌鼠的同类细胞相似。因此我们认为,未成熟雌鼠的卵泡颗粒细胞也能作为研究细胞分化的一种模型。     

趋化因子受体在人卵巢黄素化颗粒细胞中的表达

为探讨人卵巢黄素化颗粒细胞中趋化因子受体的表达,收集生殖中心接受卵母细胞胞浆单精子注射(intracellularsperm injection ICSI)治疗的妇女卵巢黄素化颗粒细胞,于体外分离培养。免疫细胞化学检测细胞纯度,RT-PCR检测颗粒细胞中趋化因子受体的转录水平,流式细胞术检测蛋白表达水平。结果显示,经过免疫细胞化学鉴定,原代培养的颗粒细胞纯度达95%以上;趋化因子受体以CXCR4转录水平最高,另外,CXCR6、CCR2、CCR6、CCR7转录水平也较高;流式细胞术检测CXCR4及CXCR6蛋白水平高表达,CCR3表达相对较低。人卵巢黄素化颗粒细胞中表达多种趋化因子受体,它们可能在卵泡液局部免疫调节、卵泡发育和卵母细胞成熟中发挥了重要的作用。     

DNA聚合酶Y家族在跨损伤复制中的作用

普通的DNA聚合酶可以对正常的DNA完成复制,但是当DNA发生损伤,损伤位置就会成为DNA复制的阻滞点,普通的DNA聚合酶就无法完成基因组的复制。为了应对这种情况,生物体内还拥有另一类DNA聚合酶:聚合酶Y家族,又被称为跨损伤复制(TLS)聚合酶,它们的主要功能就是跨越损伤位点,完成基因组复制,解救濒死细胞。本文主要对Y家族聚合酶的结构特点、功能效应、作用机制等方面做一综述。     

靶向DNA损伤修复延缓衰老的研究进展

基因组不稳定是衰老的首要特征,而DNA损伤作为影响基因组稳定性的主要原因之一,长期被认为是诱发衰老的关键因素。本文综述了DNA损伤修复与衰老的内在关联,总结了DNA损伤诱导衰老发生的机制的最新研究进展,还探讨了靶向DNA损伤修复以延缓衰老的可能性及潜在风险。     

炎症在衰老与衰老相关疾病中的作用及机制研究进展

中国人口老龄化问题日趋严峻。延缓组织器官衰老,预防和治疗衰老相关的疾病,制定干预和延缓衰老的安全有效策略已成为亟待解决的重要科学问题。慢性炎症累积促进细胞及机体衰老,是多组织器官衰老的共性特征之一。本文综述了炎症在衰老及衰老相关疾病中的作用及调控机制,以及靶向干预炎症信号延缓衰老的最新研究进展。     

C-kit在卵巢早衰大鼠卵巢中的变化

目的探讨抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠卵巢中c-kit表达的影响,为卵巢早衰的发病机制及临床治疗的研究提供参考依据。方法选用20只10周龄具有正常动情周期的SD大鼠随机分为2组:实验组采用腹腔注射环磷酰胺负荷计量50 mg/kg后以8 mg~(-1)·kg·d~(-1)的维持计量连续注射14 d;对照组注射0.9%的生理盐水。应用苏木精-伊红(HE)染色、免疫组织化学技术,观察卵巢形态学变化、c-kit在各级卵泡数的分布情况和表达。结果 (1)大鼠卵巢体积缩小,卵泡损数目减少,间质增多;(2)免疫组化结果显示c-kit在大鼠卵巢各级卵泡的卵母细胞中均有表达,但在原始卵泡的表达最强。(3)免疫组化结果显示实验组c-kit在各级卵泡的表达均有所下降,其中原始卵泡的卵母细胞中的表达降低最为显著。结论环磷酰胺可致大鼠卵巢早衰可能和通过下调卵母细胞c-kit的表达有关。     

LC3蛋白在小鼠卵泡颗粒细胞中的表达及定位研究

目的:探讨自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)在小鼠卵泡颗粒细胞中的表达及定位。方法:昆明小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)前及注射后的第1、2、3、4、5天,采用免疫组织化学染色方法检测自噬相关蛋白LC3和凋亡相关蛋白cleaved caspase-3在卵泡中表达及共定位情况;促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)处理颗粒细胞后,Western blot检测LC3和cleaved caspase-3在颗粒细胞中的水平,免疫荧光方法对LC3在颗粒细胞中的亚细胞定位进行研究。结果:在小鼠卵泡发育的各个阶段,LC3蛋白主要在颗粒细胞中表达;免疫荧光显示在闭锁卵泡的颗粒细胞中cleaved caspase-3和LC3的蛋白水平较高;在PMSG腹腔注射后第1、2天,颗粒细胞cleaved caspase-3和LC3-II的蛋白水平减少(P0.05);在PMSG腹腔注射后第3、4、5天,颗粒细胞的cleaved caspase-3和LC3-II蛋白水平依次增加;LC3-II和cleaved caspase-3的蛋白水平具有相关性(r~2=0.8299,P0.05)。FSH处理后,LC3-II定位于颗粒细胞胞浆并呈点状分布。结论:LC3主要在卵泡颗粒细胞中表达,其表达具有细胞特异性和区域特异性,提示自噬在卵泡发育过程中主要在颗粒细胞中发生。卵巢颗粒细胞自噬和凋亡具有相关性,均呈促性腺激素依赖性。     

甲状腺激素在卵泡发生中作用的研究进展

甲状腺功能紊乱会影响新陈代谢、生长和发育,严重的影响人类繁殖,包括干扰卵泡生成、排卵障碍、影响受精、早产和流产等等,甚至会使卵巢衰竭。因此,甲状腺激素(THs)在卵泡发育过程中起着非常重要的作用。     

TopBP1和ATR-ATRIP在细胞周期中的作用及联系

TopBP1(topoisomeraseⅡbeta-bindingprotein1)和ATR(ataxia-telangiectasiamutated-andrad3-re-lated)-ATRIP(ATR-interactingprotein)通过调节一些因子在DNA损伤检控点(DNAdamagecheckpoint)中起着关键的作用,其中TopBP1可以激活ATR-ATRIP的复合体。文章着重阐述了TopBP1和ATR-ATRIP如何调控细胞周期并发挥其维护基因组完整性的作用。     

Kisspeptin/kiss1r系统在多囊卵巢综合征大鼠卵巢中的表达及其对卵泡发育障碍的可能作用机制

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢中kisspeptin/kisslr系统的表达及其对PCOS大鼠卵泡发育障碍的可能作用机制。方法:构建PCOS大鼠模型;免疫组织化学检测实验大鼠卵巢中kisspeptin/kiss1r的表达;免疫印迹和qRTPCR分别检测kisspeptin/kisslr蛋白和mRNA水平。结果:与正常组相比,PCOS组的体质量及卵巢质量明显增加,血清雄激素、黄体生成素水平明显增加,卵泡刺激素水平变化无统计学差异。PCOS大鼠卵巢中含有较多发育早期的小卵泡及闭锁卵泡,囊状扩张卵泡明显增加,颗粒细胞层数减少至2~3层,黄体数量明显下降;kisspeptin/kisslr蛋白和mRNA水平明显降低。结论:卵巢表达的kisspeptin/kisslr在PCOS大鼠卵泡发育障碍中可能通过调节颗粒细胞发挥作用,本研究将为进一步探讨PCOS的发病机制提供一定的理论基础。     

DNA甲基化对基因表达的影响及其在衰老过程中的表现

DNA甲基化是真核细胞基因组重要修饰方式之一,参与基因的表达调控。由甲基化结合蛋白参与的复合体在抑制基因表达中发挥着重要作用。DNA甲基化表型的维持需要DNA甲基转移酶以催化“半甲基化”DNA的甲基化。细胞在增龄过程中甲基化水平明显降低,对该过程的基因表达可能具有一定的调控作用。