食品过敏原羽扇豆成分的环介导等温扩增检测方法

目的建立食品过敏原羽扇豆成分的环介导等温扩增检测方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。方法根据羽扇豆的ITS基因设计羽扇豆的特异性引物,进行特异度、灵敏度、稳定性测试,建立LAMP检测方法。结果本文建立的食品过敏原羽扇豆成分LAMP检测方法能有效对羽扇豆成分进行快速检测,具有较强的特异度和稳定性,灵敏度可达0.001%(w:w)。结论该方法特异度强、灵敏度高,可以快速、准确检测食品中过敏原羽扇豆成分。     

环介导等温扩增技术在食品过敏原检测中的应用

随着食品过敏性疾病发生率呈上升趋势,食品过敏已经成为备受关注的食品安全问题。适当的检测技术可以评估食物过敏的潜在风险,同时验证过敏原标签的准确性。环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术作为一种检测手段,因灵敏度高、特异性强、无需高昂仪器等优势已经在食品安全检测中发挥了重要的作用。文章概述了LAMP技术的原理,总结了LAMP技术的改进和发展,重点阐述了LAMP技术在食品过敏原检测中的应用和标准化进程,以期为食品过敏原检测、过敏原标识制度的执行和监管提供技术参考。     

环介导等温扩增技术快速检测食品过敏原牡蛎成分

目的建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)方法快速检测食品中的过敏原牡蛎成分。方法根据国家生物技术信息中心的牡蛎线粒体序列,通过Primer Explorer version 5.0软件设计引物并筛选出LAMP特异性扩增引物。并进一步对反应体系优化,对该方法的灵敏度、特异性以及稳定性进行验证。对10种牡蛎阳性样品、14种阴性样品、4类牡蛎相关食品进行检测。结果该方法可以检测出含牡蛎成分0.1%, DNA浓度为0.01 ng/μL的样品。在实验时间上大幅缩短,反应可在25～45 min内结束,并且可以在微量体系下完成,对于食品相关产品的检出率为100%。结论该方法操作简单、成本较低、特异性高、灵敏度好,适用于食品中过敏原牡蛎成分的检测。     

小麦成分环介导等温扩增现场快速检测方法的建立和应用

目的建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法现场快速检测小麦过敏原成分的分析方法,有助于食品安全突发事件现场和食品企业生产过程中的样品检测小麦成分。方法运用LAMP建立食品过敏原小麦成分LAMP现场快速检测方法,采用实时浊度仪和显色法进行结果判断,并进行反应条件优化。结果本方法特异性强,对35个对照样品无交叉反应;方法的灵敏度高,检测限可达到0.01%小麦;方法稳定性好,对0.1%和0.01%小麦样品重复检测结果稳定。通过对市场采集70份样品检测结果显示,该方法与食品标签标示的过敏原成分结果一致。结论本方法操作简单,检测时限短,结果判断准确,可用于过敏原小麦成分的快速检测。     

环介导等温扩增技术检测花生过敏原

花生引起的过敏已经越来越受到重视,因此对花生过敏原进行检测也变得越来越重要。目前对花生过敏原的检测大多数采用抗原抗体法或PCR方法,抗原抗体法耗时比较长,而PCR方法需要昂贵的仪器设备。本项目通过建立环介导等温扩增快速检测技术来检测食物中花生过敏原的基因,为食品中花生过敏原成分检测提供方便。该方法快速,简便,灵敏度高,可以很好的应用到现实检测中去,这个方法的建立具有很重大的意义,为食品的安全检测提供了很大的方便。     

环介导等温扩增检测技术的应用与方法改进

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近些年发展起来的一种新型核酸扩增技术,其原理是利用在线软件设计4条特异性引物,在具有强链置换活性的DNA聚合酶作用下,使模板两端引物的结合处循环出现环状单链结构,以实现恒温条件下的连续快速扩增,该方法具有特异性强、灵敏度高、耗时短且无需昂贵的热循环设备等优点。目前该技术在国内外已经广泛应用于细菌、病毒及寄生虫等病原体的检测以及鉴定胚胎性别。本文从LAMP技术的原理、方法改造、检测应用以及与其他检测方法的比较这4方面进行综述,为今后LAMP技术的应用提供理论依据并对未来的发展进行了展望。     

环介导等温扩增技术检测创伤弧菌方法的建立与应用

根据创伤弧菌vvhA基因设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增方法(LAMP)建立创伤弧菌快速检测方法。结果表明,建立的LAMP方法具有高度特异性,经对13株细菌进行扩增,创伤弧菌为LAMP阳性,其他菌株均为LAMP阴性。该方法对培养的创伤弧菌的检测下限为51CFU/mL,可在60min内完成扩增反应。用建立的LAMP方法对120份海产品进行检测,共检出37份LAMP阳性样本,与传统培养方法结果一致。该方法与传统方法相比,可节省大量时间,且对实验仪器和操作人员的要求低,具有良好的实用性。     

食品过敏原羽扇豆成分的环介导等温扩增 检测方法

目的 建立食品过敏原羽扇豆成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法 根据羽扇豆的ITS基因设计羽扇豆的特异性引物,进行特异性、灵敏度、稳定性测试,建立LAMP检测方法。结果 本文建立的食品过敏原羽扇豆成分LAMP检测方法能有效对羽扇豆成分进行快速检测,具有较强的特异性和稳定性,灵敏度可达0.001%(w/w)羽扇豆粉。结论 该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测食品中过敏原羽扇豆成分。     

环介导等温扩增技术快速检测食品中变形杆菌的研究

采用环介导等温扩增(LAMP)技术,快速检测食品中的变形杆菌。以变形杆菌(CMCC49027)的atpD基因作为靶序列,设计内、外引物,通过肉眼观察白色沉淀,判断检测结果。共对11株致病菌进行特异性实验。结果表明,变形杆菌为阳性,其他10株菌为阴性。采用FTA滤膜制备模板进行LAMP反应,其方法的灵敏度为6.4×102CFU/mL。利用LAMP技术直接检测人工污染的肉制品中的变形杆菌,其检出限为3.6×103CFU/g。本实验所建立的快速检测变形杆菌的LAMP检测方法具有较高的特异性和敏感性,能够满足变形杆菌快速检测的需要。      

环介导等温扩增技术在致病性弧菌检测中应用的研究进展

弧菌属是海洋环境中的最主要的细菌,分布于全球的河口、港湾和近海水域。弧菌属中的大部分细菌为食源性致病菌,人类通过摄食生食或未经加工的海产食品导致感染。弧菌属的细菌可污染不同的食品种类,包括海产品、肉制品。随着全球贸易化趋势的增强,弧菌属细菌导致的食品污染事件不断增加,不仅造成公共卫生安全问题,也会导致水产养殖业重要的经济损失。弧菌的传统检测方法为培养方法,检测时间较长且耗费人力,限制了其在现场检测的应用,急需简便、快速、灵敏度高、特异性好的检测方法。环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）是一种快速的等温核酸扩增技术,在细菌、病毒、转基因成分鉴定中得到了广泛应用。本文介绍了LAMP 技术的扩增原理,对LAMP技术在弧菌属中主要致病性弧菌的应用进行了梳理总结,分析了近年来LAMP技术在致病性弧菌检测中的应用特点,包括常规LAMP方法、可视化LAMP方法、多重LAMP方法以及LAMP技术与其他技术的结合,探讨了LAMP技术在致病性弧菌检测中的发展趋势,以期为弧菌属快速致病性弧菌快速检测方法检测的开发和应用提供建议思路。     

食品中芥末过敏原成分LAMP检测方法的建立

目的：建立食品过敏原芥末成分环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）检测方法,并与实时荧光-聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）检测方法比对。方法：针对白芥的主要过敏原基因Sin A1,设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与RT-PCR检测方法比对。结果：建立的LAMP检测方法,经特异性验证,与所测试的13 种植物,无交叉反应。通过添加实验,方法的检测灵敏度为0.5%,与RT-PCR方法检测灵敏度相当。检测了25 份实际样品,检测结果与RT-PCR检测结果一致。结论：建立的食品过敏原芥末成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于芥末过敏原成分
的检测,具有良好的应用前景。     

环介导等温扩增技术在肠杆菌科致病菌检测中的研究进展

环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术是近年来新发展起来的一种恒温核酸扩增技术,该技术具有设备简单、检测速度快、灵敏度高、特异性强以及扩增效率高等优点,已被广泛地应用于食源性致病菌的检测研究。本文重点阐述近年来国内外学者应用LAMP技术在肠杆菌科中常见致病菌的检测研究进展。     

环介导等温扩增技术快速检测变形杆菌属的研究

建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测变形杆菌属(Proteus)的方法——环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。通过对GenBank中变形杆菌属atpD基因序列(AX109601)进行分析,设计了6条引物(2条内引物、2条外引物、2条环引物),在Bst大片段聚合酶的作用下,对模板DNA进行梯状等温扩增,产生白色沉淀,并且优化LAMP的反应体系,检验其灵敏性与特异性。扩增产物用限制性内切酶Psp1406Ⅰ(AclⅠ)酶切,观察酶切片段大小,验证方法的正确性。结果表明,该方法在61℃保温50 min即可完成,最低检测限为5.4 CFU/mL,灵敏度高于常规PCR 10倍。对其它食品病原菌进行检测,结果均未出现目的条带。表明LAMP法检测变形杆菌属灵敏度高、特异性好,操作简便,无需特殊的仪器设备,有恒温加热设备就可以满足检测条件,极适合在我国广大基层实验室开展应用。     

环介导等温扩增技术检测食品中酸土环脂芽孢杆菌

目的：利用环介导等温扩增技术建立食品中酸土环脂芽孢杆菌快速检测方法。方法：针对酸土环脂芽孢杆菌16S序列设计特异引物,再优选反应体系,用显色法检测实验结果。结果：该方法能够在63 ℃条件下1 h内检出食品中酸土环脂芽孢杆菌,所设计的引物有良好的特异性;灵敏度达6.7 CFU/mL（弱阳性）。结论：该方法具有高效、特异性强和敏感性高等特点,可满足酸土环脂芽孢杆菌快速检测筛选的要求。     

环介导等温扩增技术在转基因成分检测中的应用

随着全球转基因作物商业化种植面积持续增长,转基因成分检测作为转基因作物安全管理的重要技术支撑受到越来越多的关注,世界各国与地区不断致力于转基因成分检测技术的开发。环介导等温扩增（loop-mediatedisothermal amplification,LAMP）技术由于简单快速等特点,近年来在转基因检测领域备受青睐。本文对LAMP技术在转基因成分检测中的最新研究与应用及其发展前景加以综述。     

环介导等温核酸扩增技术快速检测食物中的大肠杆菌O157

建立了环介导等温核酸扩增技术(LAMP)检测食源大肠杆菌O157,并对该方法的灵敏度和特异性进行了评价。分别针对大肠杆菌O157三个特异基因rfbE,stx1和stx2的8个独立靶区域设计了外引物、内引物和环引物进行LAMP扩增检测,同时将检测结果与PCR方法做比较。研究结果表明,rfbE,stx1和stx2基因的LAMP方法检测限分别为100,100和10 fg DNA/管,灵敏度是PCR方法的10倍以上;将建立的环介导等温扩增法用于417株食物分离的大肠杆菌的检测,发现LAMP检测rfbE,stx1和stx2基因的灵敏度分别为100%,95.3%和96.3%,对3个靶基因的阴性预测率分别为100%,96.7%和97.1%,特异性和阳性预测率均为100%。结果表明,该方法用于大肠杆菌O157的检测具有特异性强、灵敏度高、操作简便的优越性,在食品安全检测方面具有良好的实际应用前景。     

环介导等温扩增技术快速检测沙门菌

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种在等温条件下高特异、高效、快速地扩增靶序列的DNA扩增新技术.以沙门菌(Salmonella spp.)为研究对象,根据其特异性的invA基因,设计了一套特异性引物对该基因进行了LAMP,同时优化了其反应条件,建立了沙门菌的LAMP快速检测技术.结果表明,LAMP的最佳反应条件为外引物浓度5 pmol/L、内引物浓度40pmol/L,Mg2 浓度6mmol/L,dNTP浓度0.8mmol/L,甜菜碱浓度0.8mmol/L,Bst DNA聚合酶8u,反应温度63℃,反应时间1 h.在此条件下,LAMP检测沙门菌DNA的敏感度达10fg/反应,且与其他常见的细菌无交叉反应.其对牛奶样品的检出量为102cfu/mL,适合于食品中污染沙门菌的快速检测.     

环介导恒温扩增法检测肉制品中致病微生物

目的:建立一种食品中微生物核酸快速检测技术,在此基础上开发的简便、快速、灵敏,不依赖仪器适合基层应用的核酸快速检测试剂盒;并探索该试剂盒在肉及肉制品微生物检测中的应用。方法:根据单核细胞增生李斯特氏菌特有的靶序列vir R基因设计引物,采用环介导恒温扩增技术构建检测体系,优化、验证检测的特异度、检出限等指标,并与传统分离培养法比较。结果:本研究中的检测方法及试剂盒能专一的检出肉制品中的单增李斯特菌,对其他近源菌株检测呈阴性结果,检出限达1.81×103CFU/mL,与传统方法具有相同的灵敏度;检测操作简便快速,极少的设备依赖,适合规模推广。