菠萝茎蛋白酶的纯化及酶活力受超声处理影响的机理

对菠萝茎蛋白酶进行纯化和鉴定,并研究酶活力受超声处理影响的机理。采用羧甲基纤维素柱层析纯化、PAGE鉴定纯度,测定纯化的酶经超声波处理后的酶活性、动力学参数以及紫外和荧光光谱。柱层析分离出3个蛋白峰区域,其中第二蛋白峰经电泳鉴定纯度较高。酶经超声处理后Km变小,Vm也减小;紫外吸收光谱不变,而差示光谱出现了明显的正峰和负峰,荧光发射光谱基本不变。羧甲基纤维素柱层析对菠萝茎蛋白酶纯化效果较好,超声处理可能通过改变菠萝茎蛋白酶的构象从而改变酶活力。     

影响菠萝蛋白酶活力因素的研究进展

菠萝蛋白酶作为一种典型的巯基类蛋白酶,具有稳定性差、易失活的特性。本文主要从物理因素、化学因素及生物学因素等几个方面对影响菠萝蛋白酶的活力作一概述。     

超高压对木瓜蛋白酶构象及酶活力的影响

为研究超高压对木瓜蛋白酶构象变化与酶活力的影响,本研究利用红外光谱法和荧光光谱法对木瓜蛋白酶经超高压处理后的结构变化及特定氨基酸微环境变化进行了分析。结果表明：与常压相比,超高压处理对木瓜蛋白酶活力均有显著影响（P＜0.05）。其中,200 MPa、37 ℃、20 min处理时,酶活力在所选处理范围内达到最大,较常压下的酶活力提高了6.8%;红外光谱结果表明：超高压处理后,木瓜蛋白酶二级结构变化与酶活力变化相关性较差;荧光光谱结果显示：200 MPa、37 ℃处理木瓜蛋白酶20 min,228 nm波长激发后木瓜蛋白酶的外源性荧光强度达到最低（2 023）,荧光强度变化与酶活力变化规律有良好的相关性。因此,木瓜蛋白酶活性变化与疏水性氨基酸的暴露程度有关,暴露程度越小,酶活力越大。     

超高压处理引发乳糖酶活力变化与荧光强度变化的关系

目的:以中性乳糖酶为原料,研究超高压处理引发酶活力变化与荧光强度的关系.方法:采用不同超高压条件(不同压力(0.1、100、200、300、400、500、600 MPa)和温度(室温(18℃)、20、25、30、35、40、45℃)下处理不同时间(10、20、30、40、50、60 min))处理乳糖酶,利用邻硝基苯...     

超高压处理对菠萝汁中菠萝蛋白酶纤溶活性的影响

为保留菠萝汁中菠萝蛋白酶的纤溶活性,探讨了超高压处理中压力、保压时间和温度对菠萝蛋白酶纤溶活性的影响,并考察其在模拟胃肠道环境中的稳定性。结果表明:压力、保压时间和温度均对菠萝汁中菠萝蛋白酶纤溶活性的影响显著,压力300MPa、温度30℃、保压10min时菠萝蛋白酶的纤溶活性比未处理样高65.54%;300MPa保压10min(30℃)处理的菠萝汁在模拟胃液和肠液各处理4h后,纤溶活性残留率分别为37.91%和85.33%,均高于鲜榨汁。说明,通过调整超高压处理条件,可以提高菠萝汁中菠萝蛋白酶的纤溶活性及其对模拟胃肠液的耐受性。      

超高压处理对辣根过氧化物酶二级结构及其活力的影响

本文研究了超高压处理对辣根过氧化物酶活力的影响，测定了其CD谱，并分析了酶的二级结构与酶活力的关系。试验压力为0.1～500MPa，温度为20～60℃，保压时间为10min，酶溶液pH7．0。试验结果表明：(1)在处理温度为40℃、保压时间为10min和酶溶液pH7．0的条件下，压力对酶活力有显著影响；在100MPa附近的低压处理时，酶活力会反常升高；大于400MPa处理时，酶活力下降趋势缓慢。(2)在处理压力为500MPa、保压时间为10min、酶溶液pH7．0条件下，在40℃以下的温度范围内，酶的活力下降趋势缓慢：40℃以后，酶活力随温度升高下降迅速。(3)辣根过氧化物酶的活力与β-折叠的含量密切相关；超高压处理将降低酶构象中的β-折叠构象比例，从而使酶失活；温度协同超高压处理将加剧β-折叠的含量的下降，从而加速辣根过氧化物酶活力的降低。     

超声波、超高压对白鲢鱼肌肉脂肪氧合酶构象及酶活力的影响

本研究采用超声波、超高压对白鲢鱼肌肉中的脂肪氧合酶（lipoxygenase,LOX）进行处理,通过测定 LOX活力、圆二色谱、荧光光谱变化,考察超声波、超高压处理对白鲢鱼肌肉LOX构象及活力的影响。实验结 果表明：随着超声波功率的增加、超声时间的延长,LOX分子内α-螺旋和β-折叠含量降低,荧光强度不断增强, 说明其二级结构和三级结构明显发生变化,使LOX活力不断降低,最适超声条件为300 W、3 h,此时酶活力降低 66.07%;随着超高压压力的增加、超高压时间的延长,LOX分子内α-螺旋和β-折叠含量降低,荧光强度不断减弱, 说明LOX分子二级结构和三级结构发生显著变化,LOX活力迅速降低,最适超高压条件为300 MPa、20 min,此时 酶活力降低93.10%。     

菠萝蛋白酶应用的性质研究

本文研究了pH、温度、金属离子、EDTA、还原剂对菠萝蛋白酶单宁复合物酶促反应速度的影响 ,结果表明 ,该酶的最适pH为 7.1,最稳定的pH范围为 3.9～ 4 .2 ,最适反应温度为 5 5℃ ,一般的金属盐NaCl、kCl对酶反应影响不大 ,MgCl2 、CaCl2 在高浓度下对酶有一定程度的抑制作用 ,在低浓度下影响不显著 ,半胱氨酸在一定浓度的范围内 ,对酶反应速度有促进作用。EDTA本身对菠萝蛋白酶没有激活作用 ,它能鳌合酶反应所需的金属离子 ,使酶活降低。     

菠萝蛋白酶应用的性质研究

本文研究了pH、温度、金属离子、EDTA、还原剂对菠萝蛋白酶单宁复合物酶促反应速度的影响，结果表明，该酶的最适pH为7．1，最稳定的pH范围为3．9－4．2，最适反应温度为55℃，一般的金属盐NaCl、kCl对酶反应影响不大，MgCl2、CaCl2在高浓度下对酶有一定程度的抑制作用，在低浓度下影响不显著，半胱氨酸在一定浓度的范围内，对酶反应速度有促进作用。DETA本身对菠萝蛋白酶没有激活作用，它能鳌合酶反应所需的金属离子，使酶活降低。     

菠萝蛋白酶软膏对豚鼠三度烧伤酶溶痂作用的观察

目的观察菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度实验性烧伤的酶溶痂作用。方法用豚鼠造成三度烧伤模型,以湿润烧伤膏为阳性对照,菠萝蛋白酶软膏基质为阴性对照,观察菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤的平均脱痂时间,并对脱痂组织进行病理学检查。结果菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤的平均脱痂时间同阳性对照组,明显少于阴性对照组(P<0.01)。光镜下显示菠萝蛋白酶软膏组的病理结果与阳性对照组相同。结论菠萝蛋白酶软膏用于豚鼠三度烧伤具有良好的酶溶痂作用。     

超高压对脂肪酶活性及构象的影响

研究了压力、保压时间、pH值等对脂肪酶活性的影响,并且通过圆二色光谱和内源荧光光谱研究了脂肪酶的构象变化。结果表明,经过70℃、pH 7.5、压力200 MPa、保压时间15 min的处理后,脂肪酶的酶活力比常压对照提高了32%;200 MPa下,随着保压时间延长,脂肪酶活性较稳定,相对酶活性均保持在120%以上;最适pH增加了0.5个单位。光谱分析显示,高压处理后,脂肪酶二级结构中α-螺旋含量明显升高,β-折叠含量降低,内源荧光中的色氨酸特征峰的荧光强度增强10%～20%。     

高压处理诱发虾原肌球蛋白结构变化与致敏性的关系

以凡纳滨对虾原肌球蛋白为原料,研究不同高压条件下引发构象的变化与致敏性的关系。采用不同高压条件(压力0.1~800.0 MPa,处理时间10~40 min,温度10~37℃)处理原肌球蛋白(tropomyosin,TM),用圆二色谱法检测二级结构变化,荧光光度法检测三级结构变化,间接酶联免疫吸附法检测致敏性。结果显示,超高压处理能够引发TM的致敏性和三级结构变化,而对二级结构无显著影响;高压条件下TM致敏性的变化与其三级结构的改变有显著相关性。在实验压力范围内,20℃、300 MPa处理40 min TM疏水性氨基酸暴露程度最小,且致敏性最低(OD_(492 nm)为0.210±0.005);700 MPa条件下暴露程度最高,且致敏性最高(OD_(492 nm)为0.328±0.004)。因此,TM致敏性与其三级结构有关,与二级结构无关。     

超高压处理对不同品种猕猴桃浆多酚含量及其抗氧化活性的影响

对4种猕猴桃浆(黄心猕猴桃、绿心猕猴桃、红阳猕猴桃、聚香猕猴桃)进行超高压(500MPa,20min)处理,分析超高压处理前后猕猴桃浆中游离酚、结合酚含量及其抗氧化活性变化。结果表明:超高压处理能显著提高猕猴桃浆多酚含量(P<0.05),其中,黄心猕猴桃游离酚含量增加了78.68μg/mL,聚香猕猴桃结合酚含量提高了15.58μg/mL。DPPH自由基清除率、还原力和ABTS+清除率实验表明:4种猕猴桃游离酚抗氧化活性强于其结合酚的,超高压处理可提高其抗氧化活性,但效果不显著。     

不同添加物对菠萝蛋白酶酶活稳定性和抑制作用的影响

选择几种添加物于菠萝蛋白酶酶液中,并在不同pH值缓冲液中保存,定期测定其酶活力,研究添加物及缓冲液对菠萝蛋白酶的稳定性和抑制作用的影响。结果显示:VB1、L-半胱氨酸、异抗坏血酸钠、NaCl对菠萝蛋白酶酶活均有促进作用。保存的第1天,添加0.100g/100mL VB1的酶活比对照组提高了22%。添加0.2g/100mLL-半胱氨酸、0.005g/100mL异抗坏血酸钠的酶活比对照组分别提高了60%、37%。而NaNO2、乙酸锌、ZnCl2对菠萝蛋白酶酶活都有一定的抑制作用。随着NaNO2浓度的升高,抑制作用逐渐增强。乙酸锌、ZnCl2能将菠萝蛋白酶酶活分别降低到原酶活力的11%、1%。而KCl和NaNO3对菠萝蛋白酶活力影响不显著。     

果蔬产品超高压加工的研究进展

采用超高压技术能在较低温度下达到一定的杀菌、灭酶作用,避免高温处理对食品营养物质造成的损失,受到越来越多的研究人员的关注。基于对大量外文资料的综合分析,本文综述了超高压对果蔬产品中微生物、内源酶、产品质地、感官品质、营养等方面影响的研究进展,分析超高压在果蔬产品加工中的应用前景。     

超高压处理对草莓果浆品质的影响

草莓果浆经两种不同参数超高压处理后,通过测定果浆中细菌总数、酚类物质含量、酶活性(过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、多聚半乳糖醛酸酶(PG)及营养成分(还原糖、可溶性固形物、VC含量)指标,研究超高压处理对草莓果浆品质的影响。结果表明:随着处理压力上升细菌总数逐渐减少,400MPa压力条件下处理10min即可达到商业无菌;还原糖含量、可溶性固形物含量、可滴定酸含量与对照相组比无显著性差异(P>0.05);除400MPa、25min超高压处理的草莓果浆VC含量下降之外,其他处理组均有显著增加;超高压处理后草莓果浆的抗氧化能力增强,亮度提高,其中400MPa、15min的超高压处理组能最好地保持草莓果浆的原有色泽。