单克隆抗体检测猪肉组织液中猪囊尾蚴特异性抗原的实验…

应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，对猪肉组织液中的猪囊尾蚴循环抗原进行检测，实验结果表明，猪体一旦感染猪囊尾蚴，无论距结远近，其组织液中均可检测到特异性循环抗原，其检出的蛋白含量与虫体感染密度的高低成正比，与虫体发育的程度成反比。该检测方法对旋行虫病猪，肉孢子虫病猪和健康猪的检测结果均为阴性。     

组织内猪囊尾蚴循环抗原量与虫体发育阶段之间的关系

为了解猪囊尾蚴在宿主体内产生的循环抗原含量与其虫体发育阶段之间的关系，本文应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，以反向间接血凝法对不同感染密度和不同发育程度的猪囊尾蚴病猪进行了特异性循环抗原的检测。结果表明：（１）发育成熟的囊尾蚴；低密度感染６头猪，１８份样品，血凝效价为１：２（＋＋）￣１：６４（＋＋＋＋），其囊尾蚴循环抗原蛋白含量为０．１５￣４．０μｇ／ｍｌ，中密度感染猪５头，１０份样品，血凝效价１：８（＋     

组织内猪囊尾蚴循环抗原含量与虫体发育阶段之间的关系

为了解猪囊尾蚴在宿主体内产生的循环抗原含量与其虫体发育阶段之间的关系，本文应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，以反向间接血换法对不同感染密度和不同发育程度的猪囊尾蚴病猪进行了特异性循环抗原的检测。结果表明：（1）发育成熟的囊尾蚴：低密度感染6头猪，18份样品，血凝效价为1：2（＋＋）～1：64（＋＋＋＋），其囊尾蚴循环抗原蛋白含量为0．15～4．0μg／ml；中密度感染猪5头，10份样品，血凝效价1：8（＋＋）～1：128（＋＋＋＋），其循环抗原蛋白含量为0．4～6．4μg／ml；高密度感染猪3头，6份样品，血凝效价为1：128（＋＋）～1：256（＋＋＋＋），其检出的蛋白含量为6.4～12．8μg／ml；（2）发育幼稚期的囊尾蚴：高密度感染猪2头，4份样品，血凝效价为1：2（＋＋）～1：4（＋＋＋＋），其循环抗原蛋白含量为0．15～0．3μg／ml。显示处于同一发育程度的囊尾蚴，感染密度越高，其被检出的蛋白含量越高；高密度感染的幼稚期囊尾蚴，其产生的抗原明显低于中、高密度感染的成熟期囊尾蚴者。提示了囊尾蚴产生的循环抗原量并非单纯地随虫荷的增加而增高，而与虫体发育阶段有密切关系。     

囊虫病快速免疫色谱测试法的建立和初步应用

目的：建立一种敏感，特异，简便快速的囊虫病免疫诊断方法。方法：以胶体金标记抗猪囊尾蚴抗原单克隆抗体，将另一抗猪囊尾蚴抗原单克隆抗体在硝酸醋酸混合纤维素膜上固定成一条线，制成免疫测试条，待测抗原与金标单克隆抗体结合后沿着硝酸醋酸混合纤维素膜移动，与膜上的特异性单克隆抗体结合形成肉眼可见的褐红色线，结果：当猪囊尾蚴囊液抗原量为5ng时，测试条仍呈阳性反应，检测脑囊虫病患者脑脊液（CSF）的阳性率为82．60％，检测健康人CSF的阴性符合率为100％，将本法检测CSF结果与ELISA比较，两方法的敏感性和特异性相似，结论：本方法敏感，特异，操作简便快速，试剂稳定，重复性好，在囊虫病的诊断中具有很好的应用前景。     

抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体的研制及初步应用

目的制备抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体并研究其初步应用。方法用广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,经融合,筛选分泌高滴度、高特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用所得的单克隆抗体以Western blotting检测广州管圆线虫病患者血清,并建立双抗体夹心ELISA法检测感染大鼠血清。结果获得3株分泌高滴度抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株(2A2、3F1、4H2),其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫、猪囊尾蚴、旋毛虫抗原均不发生交叉反应。3株单克隆抗体均可识别广州管圆线虫成虫可溶性抗原蛋白Mr 15 000,以及患者血清中两种循环抗原Mr24 000和Mr15 000。双抗体夹心ELISA检测阳性率为76.5%。结论制备的抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度、高特异性的单克隆抗体,且在循环抗原的检测方面有应用前景。     

抗猪囊尾蚴单抗、双特异单抗建株及检测血清循环抗原的研究

目的：检测猪囊尾蚴病人的血清循环抗原。方法：制备两株分泌抗猪囊尾蚴单克隆抗体杂交瘤细胞系和两株分泌抗猪囊尾蚴和抗绵羊红细胞双特异单克隆抗体杂交瘤细胞系，分别命名为Ⅱ０３、Ⅰ０６Ｄ５、Ⅱ０３Ｇ２和Ⅱ０３Ｆ４。应用Ⅱ０３细胞株分泌的单抗和Ⅱ０３Ｇ２分泌的双特异单抗，用反向ＩＨＡ法检测血请循环抗原。结果：检测猪囊尾蚴病治疗前病人１２０例，经吡喹酮治疗４个疗程病人３２例、经吡喹酮治疗７个疗程的病人２３例和绦虫病人１５例，单抗检测血清循环抗原阳性率分别为９０％、３７．５％、１７．４％、４０％；双特异单抗检测血清循环抗原阳性率分别为９１．７％、３７．５％、１３％、４６．７％。检测４１例其他寄生虫感染者和５０例健康人血清，未出现任何交叉反应。两种单抗检测结果亦无显著差异（Ｘ２＝０．０１３９，Ｐ＞０．０５）。结论：Ⅱ０３单抗和Ⅱ０３Ｇ２双特异单抗检测血清循环抗原具有较高的特异性和敏感性，并对疗效考核有一定参考价值。     

IFAT和McAb—LAT诊断囊虫病的诊断

本文采用猪囊尾蚴冰冻切片抗原间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ）和抗猪囊尾蚴单克隆抗体乳胶凝集试验（ＭｃＡｂ－ＬＡＴ）对囊虫病患者进行特异性抗体和抗原的检测，囊虫病患者抗体检出率为８３．７１％，分型抗体检测，混合型及脑型检出率明显高于皮肌型（Ｐ〉０．０１）；患者循环抗原的检出率为７３．０５％，脑型患者囊虫活动期的循环抗原的阳性率明显高于囊虫钙化期（Ｐ〈０．０１），药物治疗３个月以上患者循环抗原的阳性率降为     

囊虫病免疫诊断候选抗原研究进展

猪囊尾蚴免疫诊断抗原的研究是囊虫病免疫诊断的基础。猪囊尾蚴抗原成分复杂,特别是虫体粗抗原,与多种寄生虫存在明显的交叉抗原成分,影响检测的特异性。近年来随着分子生物学的发展,重组抗原制备简单,检测效果良好,已成为囊虫病免疫诊断研究的热点。本文对近年来囊虫病免疫诊断抗原的分子生物学研究进展进行了综述。     

IFAT和McAb-LAT诊断囊虫病的研究

本文采用猪囊尾蚴冰冻切片抗原间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ）和抗猪囊尾蚴单克隆抗体胶乳凝集试验（ＭｃＡｂ－ＬＡＴ）对囊虫病患者进行特异性抗体和抗原的检测，囊虫病患者抗体检出率为８３．７１％，分型抗体检测，混合型及脑型检出率明显高于皮肌型（Ｐ＜０．０１）；患者循环抗原的检出率为７３．０５％，脑型患者囊虫活动期的循环抗原的阳性率明显高于囊虫钙化期（Ｐ＜０．０１），药物治疗３个月以上患者循环抗原的阳性率降为４４．１１％。ＩＦＡＴ和ＭｃＡｂ－ＬＡＴ在囊虫病临床诊断中具有较高价值，循环抗原的检测在脑型囊虫病活动期诊断和疗效考核中具有重要意义     

抗华支睾吸虫代谢抗原单克隆抗体的制备及鉴定研究

目的建立分泌抗华支睾吸虫代谢抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株。方法用华支睾吸虫成虫代谢抗原免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，筛选分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株，测定单抗免疫球蛋白亚类和单抗效价，检测单抗与日本血吸虫全虫可溶性抗原、卫氏并殖吸虫成虫抗原和猪囊尾蚴抗原的交叉反应。结果获得3株分泌高滴度抗华支睾吸虫代谢抗原的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫和猪囊尾蚴抗原均不发生交叉反应，3株单抗均属IgG。结论制备的抗华支睾吸虫代谢抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗，为制备免疫诊断试剂盒奠定了基础。     

免疫金银法标记抗猪囊尾蚴囊液抗原McAb与猪囊尾蚴特异性结合的定位研究

McAb F_3在猪囊尾蚴上的结合部位经免疫金银法标记定位,冰冻及石腊切片均显示出清晰的结合位点。囊壁部位颗粒均匀呈双层分布,头节折叠部位皱襞的凹陷处黑色颗粒呈密集的小片状。免疫金银法所标记的抗猪囊尾蚴囊液与其相应抗原的结合部位与囊尾蚴细胞层的分布相一致。     

猪囊虫囊液游离氨基酸组分的研究

应用氨基酸自动分析仪测定猪囊虫囊液的游离氨基酸组分及含量。从14只猪的皮下肌肉囊虫及10只猪的脑囊虫的囊液进行测定。在两者囊虫囊液所测定的18种氨基酸中,均以内氨酸含量最高;在皮下肌肉囊虫囊液,其次为甘氨酸和脯氨酸,在脑囊虫囊液,则以苏氨酸为次。用配对T检验方法比较7只猪的皮下肌肉和脑囊虫囊液中各种氨基酸含量表明,在不同部位囊虫囊液所含的15种氨基酸中,有12种含量存在显著差异,特别是苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸、锁氨酸和酪氨酸出现差异非常显著。本研究结果提示上述氨基酸代谢差异,可能与猪囊虫在宿主的寄生部位不同有关.     

免疫金银法标记抗猪囊尾蚴囊液抗原McAb与猪囊尾...

A study was undertaken on the localization of specific combination of McAb against cystic fluid antigen of Cysticercus cellulosae by immunogold silver staining method (IGSS). It was shown that the combination sites of McAb F3 were distinct in the frozen and paraffin sections of Cysticercus cellulosae. The black granules in the bladder walls presented double-layer distribution and those in the scolex folded sites concentrated into pieces. The combination sites of McAb labeled by IGSS against cystic fluid antigen of Cysticercus cellulosae were consistent with the distribution of the cell layers of Cysticercus cellulosae. The sections in the control group had scarce and irregular distribution, which could be differentiated distinctly from those in the experimental group.     

猪囊尾蚴液、固相多种抗原对囊虫病免疫诊断效果评价

目的　筛选适合多种寄生虫病流行区使用的特异性较高的囊虫病免疫诊断抗原。　方法　制备猪囊尾蚴各类型液相抗原和固相抗原 ,用ELISA或IEST检测囊虫病流行区患者阳性血清抗体 ,比较各种抗原的敏感性和特异性。　结果　猪囊尾蚴全囊及囊液尿素溶性抗原与水溶性纯化抗原ELISA检测囊虫抗体的特异性差异无显著性 (P >0 .0 5 )。固相抗原IEST有敏感性好、操作简易的特点。　结论　猪囊尾蚴全囊尿素溶性纯化抗原是较理想的囊虫病ELISA诊断抗原 ,有诊断应用价值。固相石腊切片抗原IEST较为适合流行区现场或基层应用。     

抗华支睾吸虫单克隆抗体的制备和鉴定

目的：建立分泌抗华支睾吸虫成虫的单克隆抗体杂交瘤细胞株并进行鉴定。方法：用华支睾吸虫成虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，筛选分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株，测定单抗免疫球蛋白亚类和单抗效价，检测单抗与日本血吸虫虫卵抗原、卫氏并殖吸虫成虫抗原和猪囊尾蚴抗原的交叉反应，用ＩＦＡＴ进行单抗识别的抗原定位。结果：获得５株分泌高滴度抗华支睾吸虫成虫单抗的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫和猪囊尾蚴抗原均不发生交叉反应；５株单抗均属ＩｇＭ；单抗所识别的抗原定位于华支睾吸虫肠管壁。结论：制备的抗华支睾吸虫成虫的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

应用酶联免疫吸附试验检测猪囊虫病特异抗体的研究

用猪囊虫粗抗原、B 抗原、等电聚焦技术分离的抗原组份和特异单克隆抗体亲和层析抗原,以ELSA间接法检测猪囊虫病血清抗体,结果特异性均不理想。应用单克隆抗体分析查明,在某些囊虫抗原分子上既有特异性抗原位点,又有非特异性位点。用特异单克隆抗体以ELISA抑制法检测猪囊虫病血清抗体,结果完全消除了假阳性反应,病猪血清检出率为86.41％(89/103)。     

阿苯哒唑对体外培养孵化猪囊尾蚴的超微结构、氨基酸和生物元素的影响

将已孵化的猪囊尾蚴培养于含阿苯哒唑100μg／ml的培养液中,于72h对其超微结构、氨基酸和生物元素种类及含量分别进行了观察和测定。结果表明,在体外条件下,该药使猪囊尾蚴的超微结构出现病理性改变甚至致正常结构消失,使虫体组织中的多种氨基酸和某些种生物元素的含量发生变化。     

金标特异抗原单克隆抗体斑点免疫金染色用于检测脑囊虫病循环抗原的研究

应用金标记猪囊尾蚴囊液抗原为探针,以抗猪囊尾蚴抗原的McAb为联桥,建立了非常规Dot-IGS用于检测脑囊虫病患者CAg的方法,用4G_2McAb检测84例脑囊虫病人脑脊液(CSF),CAg阳性率为88.09％。检测63例其他疾病患者,出现2例假阳性。以1F_(11)McAb检测14例脑囊虫病人,13例检出CAg,阳性率为92.86％。检测其他疾病患者36例,均为阴性。用4G_2与1F_(11),株McAb可分别检出最小抗原量为1ng/ml和0.25ng/ml。本法敏感、特异、操作简单,可用于脑囊虫病的诊断。     

猪囊尾蚴抗原基因GP50的表达及鉴定

目的为了寻找猪囊尾蚴病新的免疫学候选诊断分子,克隆猪囊尾蚴抗原GP50编码基因,并进行表达、鉴定。方法设计合成引物,用PCR法从猪囊尾蚴cDNA文库中扩增出猪囊尾蚴抗原GP50基因编码序列,将其克隆入pGEM-T载体,然后在真核表达载体pBKCMV中亚克隆,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot观察表达结果。结果RT-PCR法扩增出一条大小约897bp的特异性片段,克隆质粒pGEM-GP50和真核表达质粒pBKCMV作BamHⅠ和XhoⅠ双酶切和以重组质粒为模板进行PCR扩增,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段。诱导表达后,经SDS-PAGE可见一条约36kDa大小的融合蛋白条带,Western blot结果显示其可与猪囊尾蚴病人血清起反应。结论本实验成功地克隆了猪囊尾蚴抗原GP50编码基因,并在原核细胞中进行了表达及鉴定,为进一步的免疫诊断研究奠定了基础。