杨四瘿螨诱导的美洲黑杨抑制消减文库

采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,以杨四瘿螨诱导48、72 h的美洲黑杨无性系为实验方(tester),以未经诱导的美洲黑杨无性系为驱动方(driver)构建杨四瘿螨诱导差异表达的抑制消减cDNA文库,共获得了710个克隆,所建cDNA文库的插入片段主要集中在200~1 000 bp之间。通过序列测定拼接和同源性对比分析,获得了美洲黑杨涉及信号传递、能量代谢、胁迫响应、物质运输等功能的差异基因。     

杨树抗杨四瘿螨相关基因的表达分析

采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,在构建杨四瘿螨诱导差异表达的抑制消减cDNA文库的基础上,通过RTPCR技术对候选基因进行了验证,其中有6条差异表达候选基因在4个时间点表达量有明显的增强。运用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术克隆获得了一段全长2 053 bp的cDNA克隆,命名为PtWRKY,编码588个氨基酸。     

干旱胁迫下开花期玉米消减文库的构建及分析

分别以1d干旱和7d干旱处理的开花期玉米顶叶cDNA为tester,正常生长的玉米顸叶cDNA为driver,利用抑制性差减杂交技术构建了两个干旱胁迫下开花期玉米消减文库．两个文库的重组率均高于95％,插入片段集中在300—600bp之间．对两个文库部分克隆进行测序发现,文库中含有脱水素、蔗糖合成酶、甜菜碱醛脱氢酶。DRE结合因子等大量的抗旱相关基因,说明两个干旱胁迫下开花期玉米抑制性消减文库已经构建成功。且具有重要意义．     

杜洛克与梅山猪大卵泡消减文库的构建

为了鉴定杜洛克猪相对于梅山猪在大卵泡中高表达的基因,本研究应用抑制性消减杂交技术成功构建了以梅山大卵泡c DNA为driver,杜洛克大卵泡c DNA为tester的消减c DNA文库。结果显示:以G3PDH和β-actin为指标检测文库的消减效率为25,从该文库中获取了350个有效的阳性克隆,PCR检测插入片段主要分布在150-750 bp。克隆测序得到74个有效的EST序列,GO分析表明主要与细胞信号、细胞结构、代谢、细胞分化、基因/蛋白质合成、细胞组织防护等功能相关。利用q PCR技术验证了ELTD1、Grb14、SNRPE、CSDE1、ALDH18A1、e IF4E、BMPR-IB等基因在梅山和杜洛克大卵泡中的表达模式。结果发现在两猪种的大卵泡间存在显著性差异。本研究有助于揭示影响猪卵泡发育和生殖数量控制的分子基础。     

眼斑芫菁在斑蝥素合成期的抑制性消减杂交文库构建及分析

斑蝥素是芫菁科昆虫合成的一种倍半萜类物质,对于治疗肿瘤和其他疾病有特别的疗效.通过构建抑制性消减杂交文库(SSH),筛选眼斑芫菁在斑蝥素合成期的差异表达基因.用斑点杂交对消减文库中的1 500个克隆进行筛查,130条特异表达序列标签(ESTs)进行分析.34条(26%) ESTs与NCBI中标注的假设基因有很高的同源性; 45条(35%) ESTs与NR数据库中的序列没有同源性,可能代表新的基因; 51条(39%) ESTs与已知基因的序列同源性很高,这些基因参与了生物调控、应激反应和解毒、信号转导、代谢与合成.最后通过实时定量逆转录PCR对文库中的9个上调表达基因进行验证.对眼斑芫菁在斑蝥素合成期的表达进行研究,为最终阐明斑蝥素的生物合成提供帮助.     

美洲黑杨南方种源的遗传变异

本文对美洲黑杨15个南方地理种源进行了种源—子代测定。5年试验结果表明,不同地理种源对树高、胸径和树干通直度的总变异分别占64％、21％。同一种源的不同林分对树高、胸径和通直度总变异无显著影响。树高、胸径和通直度随着种源经度由东向西而增大,但随着种源纬度由北向南,只有树高生长相应增大。各性状的狭义遗传力较低,由于非加性方差很小,广义遗传力仅略大于狭义遗传力。通过种源—子代测定而建立的插穗生产区,树高和胸径的遗传增益比实生种子园高6～7％;树于通直度的遗传增益比实生种子园高2％。树高与胸径之间的遗传相关高达0.9以上,而树干通直度与树高或胸径的相关性很小(0.01～0.31)。     

甘蓝型油菜突变体Cr3529抑制性消减文库的构建

应用抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization，SSH）技术构建了甘蓝型幼叶黄化油菜突变体Cr3529和其野生型3529品系幼叶期的正、反向消减文库．经茵落PCR检测，正向消减文库的有效重组率为55．5％；反向消减文库的有效重组率为76．5％．为进一步克隆消减文库中的差异表达基因和研究这些基因的功能奠定了基础．     

美洲黑杨种质资源遗传多样性的SSR分析

利用12对SSR引物对美洲黑杨种质资源库的11个半同胞家系的137个子代进行遗传分析,共检测到了103个等位基因,平均每对引物检测到的等位基因数（A）为8．67,平均有效等位基因数（NP）为5．37,观测杂合度平均值（Ho）为0．39,平均期望杂合度（He）为0．75（其中10对引物的期望杂合度均大于0．65）,基因分化系数（Gst）平均值为0．22,基因多样度（h）为0．55～0．72。利用UPGMA方法进行聚类分析的结果表明,家系间的遗传相似性与其地理位置差异基本相符。     

美洲黑杨×欧美杨杂种无性系生长分析

对16个美洲黑杨(Populus deltoides Marsh.)×欧美杨(P.×euramericana)无性系单株进行了树干解析,计算树高、胸径和材积的平均生长量、连年生长量与胸高形数;得到对树高、胸径和材积历年生长的拟合Logistic生长曲线。结果表明:(1)无性系748、893和6585干形最好,其胸高形数都在06以上;(2)树高、胸径和材积的生长用Logistic方程拟合精度高,R2分别为09999、09980和09956;(3)树高、胸径和材积速生点分别为:第3、4、9年,速生期分别为1~6、1~7、5~13a,最大生长速率分别为:275m／a、359cm／a和0081m3／a.     

美洲黑杨维管形成层活动周期性及细胞超微结构的动态变化

美洲黑杨维管形成层活动周期可分为休眠期、恢复活动期、活动期和转化期4个时期。休眠期维管形成层区约由3层细胞组成,细胞壁较厚,细胞内具有大量小液泡,其内包含一些电子密度较高的物质;细胞质内充满了游离的核糖核蛋白体,脂粒圆球形,散布在小液泡之间;内质网光滑型,多为短片状,只有近质膜处才呈网格状;线粒体内嵴不清晰,高尔基体数量较少,一般由3~5层扁平囊组成,周围未分泌形成高尔基小泡。恢复活动期维管形成层的细胞壁变薄,细胞内逐渐形成大液泡,内含物降解,细胞质的电子透明度增高。活动期维管形成层区细胞层数可达8~9层,细胞壁非常薄,细胞高度液泡化,细胞质和细胞核贴壁分布,或通过原生质索悬垂在细胞的某一位置,细胞器结构清晰,细胞质膜大量内折,与壁物质的形成有关。转化期维管形成层区细胞停止分裂,细胞壁逐渐增厚,液泡数目增多,体积减小,细胞开始积累淀粉、脂类和蛋白质等类物质。休眠期和活动期细胞超微结构特征相反,而恢复活动期与转化期细胞结构特征相似,互为可逆过程。     

麻疯树胚乳cDNA文库的构建与分析

以等质量比的不同发育阶段的麻疯树（Jatropha curcas L.）胚乳为材料构建麻疯树胚乳cDNA文库.初级文库滴度为1.5×106 Pfu/mL,重组率为99.7％,插入片段大小为0.4～4 kb,平均约1 kb.全长基因的比例达到20％.推测的蛋白质序列种类主要包括贮存蛋白相关、转录表达调控相关、脂肪酸合成相关及信号传导相关等同源基因序列.编码功能基因的类型与分布情况同Joseph A White等构建的蓖麻胚乳cDNA文库基本一致,个别类型如贮存蛋白合成相关基因的比例相比较低,信号传导     

人18周胎儿脑cDNA文库的构建及鉴定

许多脑基因的特异性表达对人脑的发育，分化有着重要的作用，为了研究这些基因的结构和功能，构建了一个人１８周胎儿脑ＣＤＮＡ文库，抽提总ｍＲＮＡ后，经过一系列的酶促反应合成ｃＤＮＡ，分有分离柱除去小片段后克隆到λｇｔ１０载体中，转染宿主菌Ｃ６００ｊｆｌ后文库包装效率为４．６×１０＾６ｐｆｕ／μｇ，ｃＤＮＡ平均郫在于１．２ｋｂｐ已知序列设计引物，从ｃＤＮＡ文库中扩增出神经生长因子（ＮＧＦ）的生长编码基因     

离子交换-反相色谱法脱除胸腺肽α1盐离子

分两步脱除胸腺肽α1纯化过程中引入的盐离子.采用离子交换-反相色谱法脱除胸腺肽α1中的有机盐,再以反相液相色谱法除去无机盐,低温冷冻干燥最终获得胸腺肽α1产品,纯度为99.2%,收率为92.0%,含量为99.9%。结果表明,以离子交换-反相色谱法脱除有机盐,反相色谱法脱除无机盐,最终得到合格胸腺肽α1产品,为其他多肽的脱盐提供了新的思路.     

Construction of cDNA library from iron-deficiency induced maize roots and screening and identification of iron-stress geneFdr3

To isolate Fe-deficient related (Fdr) genes, an expression cDNA library of 4.5×10⁵ pfu/μg has been constructed from maize roots in iron-stress. 6 clones have been screened from the cDNA library by differential hybridization screening. It is proved that anFdr3 cDNA clone expressed stronger under iron-deficient condition than under iron-sufficient one by Northern blot and Western blot.     

基于SSR标记的美洲黑杨杂交子代的鉴定

杂交子代的纯度直接影响到遗传图谱的质量,因而在遗传图谱构建前要对杂交子代进行鉴定与选择。笔者从300对SSR标记中,筛选出11对能明确显示亲本来源的标记,利用这11对标记对380株美洲黑杨杂交子代进行了鉴定。结果表明:有372个个体因同时具有亲本各1条等位基因而被认定为亲子代可用于图谱构建,其余8个个体因产生了非亲本来源或额外的等位基因,这些个体可能源于花粉污染或染色体异常,在作图过程中宜从作图群体中排除。     

Construction of cDNA library from iron-deficiency induced maize roots and screening and identification of iron-stress gene Fdr3

To isolate Fe-deficient related (Fdr) genes, an expression cDNA library of 4.5×105 pfu/μg has been constructed from maize roots in iron-stress. 6 clones have been screened from the cDNA library by differential hybridization screening. It is proved that an Fdr3 cDNA clone expressed stronger under iron-deficient condition than under iron-sufficient one by Northern blot and Western blot.