银杏叶提取物对拟血管性痴呆大鼠海马CA1区的保护作用

为了观察银杏叶提取物(EGb761)对拟血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马CA1区神经细胞的保护作用,本研究通过反复夹闭再通大鼠双侧颈总动脉,同时腹膜腔内注射硝普钠制作拟血管性痴呆大鼠模型,选出造模成功者随机分为模型组及用药组,各为30只。另以条件匹配的30只大鼠为假手术组。采用Morris水迷宫和尼氏染色方法分别观察大鼠空间学习记忆能力及海马CA1区细胞形态学改变和细胞数目。结果显示:模型组大鼠在1、2和4月不同时间点测得的Morris水迷宫逃避潜伏期(EL)均较假手术组明显延长(P<0.01),药物组EL均显著短于模型组,但仍长于假手术组(P<0.05或P<0.01);各时间点模型组海马CA1区锥体细胞及其树突丢失,但药物组锥体细胞数多于模型组。上述结果说明EGb761对海马CA1区的保护作用可能是其改善VD大鼠学习记忆障碍的重要机制。     

EGb761对血管性痴呆大鼠海马齿状回神经干细胞增殖分化的影响

目的:探讨中药银杏叶提取物(EGb761)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马齿状回(DG)NSCs增殖分化的影响及机制。方法:采用双侧颈总动脉夹闭再灌注同时腹腔注射硝普纳建立VD模型,在15 d,1,2,4个月等时间点,采用Morris水迷宫检测和BrdU和/或神经颗粒素(Ng)标记的免疫荧光单标和双标技术分别观察大鼠的学习记忆能力变化和NSCs的增殖与功能分化情况。结果:(1)模型组大鼠的逃逸潜伏期(EL)均明显长于假手术组(P<0.01),药物组大鼠的EL较模型组明显缩短(P<0.05),但仍长于假手术组(P<0.01)。(2)免疫荧光标记显示,各个时间点,药物组DG区NSCs在增殖分化的数量、强度和持续时间上,都明显优于假手术组和模型组。结论:EGb761能促进VD模型大鼠神经干细胞的增殖分化,显著改善VD大鼠的学习记忆能力。     

银杏叶提取物对血管性痴呆大鼠空间学习记忆和海马NMDAR1表达的影响

目的:观察银杏叶提取物(EGb761)对血管性痴呆(VaD)大鼠空间学习记忆和海马N-甲基-D-天冬氨酸型离子型谷氨酸受体1型亚单位(NMDAR1)表达的影响。方法:采用四血管阻断法制备VaD大鼠模型,设立假手术组、模型组、尼莫地平组(10 mg/kg/d,灌胃30 d)和银杏叶提取物组(50 mg/kg/d,灌胃30 d)。利用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆的改变,采用免疫组化和Western blot技术检测大鼠海马神经元NMDAR1蛋白水平的变化,实时荧光定量PCR技术检测大鼠海马NMDAR1的mRNA表达变化。结果:与假手术组相比,模型组大鼠水迷宫逃避潜伏期延长,撤后台靶象限平均探索次数减少(P<0.05),银杏叶提取物明显改善了VaD大鼠在Morris水迷宫中的学习记忆成绩(P<0.05);假手术组、尼莫地平组与银杏叶提取物组之间比较无统计学差异(P>0.05)。模型组大鼠的NMDAR1蛋白及其mRNA在海马CA1区的表达水平较假手术组明显降低(P<0.05);银杏叶提取物组大鼠海马的NMDAR1蛋白及mRNA表达水平较模型组明显升高(P<0.05)。结论:银杏叶提取物可以减轻脑缺血再灌注对海马CA1区神经元的损伤,这可能与上调海马组织内NMDAR1蛋白及mRNA的表达密切相关。     

银杏叶提取物预处理对VD模型大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1表达的影响

目的:探讨银杏叶提取物(EGB761)预处理对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马CA1区P-糖蛋白(P-GP)及谷氨酸转运体1(GLT-1)的影响。方法:大鼠分为假手术组、模型组和EGB761预处理组。EGB761预处理组在造模前7 d给予EGB761生理盐水混悬液灌胃,假手术组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃。采用重复夹闭双侧颈总动脉(CCA)同时腹腔注射硝普钠溶液方法复制VD大鼠模型。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,用神经颗粒素(Ng)/P-GP和胶质细胞酸性蛋白(GFAP)/GLT-1免疫荧光双标法,观察海马CA1区神经元P-GP和胶质细胞GLT-1表达水平的变化,Western Blot技术检测VD大鼠海马区P-GP和GLT-1蛋白的表达量。结果:(1)Morris水迷宫检测显示,与假手术组相比,模型组大鼠的逃逸潜伏期(Escape latency,EL)明显延长(P0.01),而EGB761预处理组大鼠EL明显缩短(P0.01)。(2)阳性细胞计数观察到,与假手术组相比,模型组海马CA1区Ng/P-GP的阳性细胞数明显减少,GFAP/GLT-1的阳性细胞数则显著增多(P0.01),EGB761预处理组海马CA1区Ng/P-GP和GFAP/GLT-1的阳性细胞数较模型组均明显增多(P0.01)。(3)积分光密度值测定观察到,模型组和EGB761预处理组的Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞的IOD值较假手术组均明显增大(P0.01);EGB761预处理组的Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞IOD值均显著高于模型组(P0.01)。(4)Western Blot分析结果显示,模型组和EGB761预处理组大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1蛋白表达的灰度值均比假手术组增大(P0.01),EGB761预处理组大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1蛋白表达的灰度值均显著大于模型组(P0.01)。结论:EGB761预处理可能通过上调VD模型大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1的表达来预防VD的发生。     

血管性痴呆大鼠海马Ng及其磷酸化水平的动态变化

目的:观察血管性痴呆(VD)模型大鼠海马神经颗粒素(Ng)及其磷酸化水平的动态变化,探讨Ng在VD学习记忆功能障碍中的作用及其机制。方法:采用双侧颈总动脉夹闭再灌注同时腹腔注射硝普纳建立血管性痴呆模型,在15d,1,2,4个月等时间点,采用Morris水迷宫和免疫荧光方法分别观察大鼠空间学习记忆能力及海马Ng及其磷酸化水平的变化。结果:模型组大鼠各时间点的逃逸潜伏期(EL)比假手术组均明显延长(P0.01);海马CA1区Ng及其磷酸化Ng免疫阳性神经细胞数表达较假手术组明显减少(P0.01,P0.05),而且随造模手术后时间的延长,以上变化逐渐加重。齿状回仅在2个月和4个月时间点的免疫阳性神经细胞数比假手术组显著减少(P0.01,P0.05)。结论:模型组大鼠的空间学习记忆功能障碍可能与海马(特别是CA1区)的Ng及其磷酸化Ng表达水平持续降低有关。     

依那普利增加糖尿病大鼠海马组织内突触素的表达

目的 观察依拉普利对糖尿病大鼠空间学习和记忆能力，以及海马组织内突触素表达的影响。方法 随机将40只大鼠分为对照组、糖尿病组、糖尿病+依拉普利组。建立STZ糖尿病大鼠模型，依拉普利干预12周，Morris水迷宫测试大鼠的空间学习和记忆能力，并用免疫组化和RT-PCR技术分别检测大鼠海马组织内突触素的蛋白和mRNA表达。结果 与糖尿病组比较，依拉普利组大鼠在Morris水迷宫测试中逃避潜伏期明显缩短（P<0.05），中心区停留时间百分比和通过原平台位置次数显著增加（P<0.05），大鼠海马组织内突触素蛋白和mRNA表达水平明显增加(P<0.05)。结论 依拉普利改善糖尿病大鼠空间学习和记忆的能力可能与海马组织内突触素表达增加有关。     

血管性痴呆大鼠海马synapsinⅠ及其磷酸化水平的动态变化

目的：观察血管性痴呆大鼠海马区突触结构和突触蛋白synapsin I及其磷酸化水平的变化，探讨血管性痴呆大鼠突触传递障碍的可能机制。方法: 采用双侧颈总动脉夹闭再灌注同时腹腔注射硝普纳建立血管性痴呆模型，在15 d、1月、2月和4月等时点，电镜观察大鼠海马CA1区突触结构的病理改变，应用免疫组织化学染色法测定血管性痴呆大鼠海马synapsinⅠ及其磷酸化水平的变化。结果: 假手术组大鼠海马CA1区未见明显病理改变，突触前小泡聚集成簇，模型组突触前后膜界限不清，突触后致密物减少，突触前囊泡分布分散、聚集囊泡簇减少，并随造模时间的延长，病理改变加重；模型组大鼠海马CA1区synapsin I阳性产物表达明显减少(P<0.01)，DG区分子层无明显变化(P>0.05)；模型组大鼠海马磷酸化synapsin I（p-synapsin I）阳性细胞明显减少(P<0.01,P<0.05)，15 d和1月时点大鼠海马DG区和CA1区p-synapsin I阳性细胞表达较假手术组增强(P<0.01)，2月和4月时点CA1区p-synapsin I阳性细胞表达较假手术组减弱(P<0.01)，而DG区无明显变化(P>0.05)。结论: VD模型大鼠海马突触结构受损，突触小泡簇减少；synapsinⅠ及其磷酸化水平表达降低，突触传递前机制受损可能是VD突触传递障碍的机制之一。     

穹窿海马伞切断鼠脑突触素动态变化及Morris水迷宫重复训练对其影响

目的在Morris水迷宫(MWM)重复训练的过程中观察穹窿海马伞切断大鼠的突触素(SYN)动态变化探讨阿尔茨海默病(AD)的发病机制和MWM重复训练学习和记忆能力对AD的影响,为临床应用提供实验依据。方法采用wistar大鼠60只,随机分为对照组、模型组和实验组,建模后连续四周给予Morris水迷宫重复训练定位航行和探索训练,分别评定大鼠空间学习和记忆能力,后进行海马突触素(SYN)免疫组化染色和超微电镜观察并进行统计学处理。结果随着训练次数的增加,对照组、模型组、实验组逃逸时间均逐渐缩短,实验组短于模型组,长于对照组(P0.05),提示空间学习能力得到提高。对照组、模型组和实验组大鼠在靶象限活动时间(s)百分比无明显差异(P0.05),提示空间记忆能力无明显提高。SYN免疫组化实验组SYN表达高于模型组,弱于对照组。结论MWM重复训练增加海马SYN表达可能与提高穹窿海马伞切断大鼠空间学习能力有关。     

鼠脑穹窿海马伞切断突触素动态变化及Morris水迷宫重复训练对其影响

目的在Morris水迷宫(MWM)重复训练的过程中观察穹窿海马伞切断大鼠的SYN动态变化探讨AD的发病机制和MWM重复训练学习和记忆能力对AD的影响,为临床应用提供实验依据。方法采用Wistar大鼠60只,随机分为对照组、模型组和实验组,建模后连续4周给予Morris水迷宫重复训练定位航行和探索训练,分别评定大鼠空间学习和记忆能力,后进行海马突触素(SYN)免疫组化染色和超微电镜观察并进行统计学处理。结果随着训练次数的增加,对照组、模型组、实验组逃逸时间均逐渐缩短,实验组短于模型组,长于对照组(P<0.05),差异有统计学意义,提示空间学习能力得到提高。对照组、模型组和实验组大鼠在靶象限活动时间(s)百分比差异没有统计学意义(P<0.05),提示空间记忆能力无明显提高。免疫组化结果显示实验组SYN表达高于模型组,弱于对照组。结论MWM重复训练增加海马SYN表达可能早提高穹窿海马伞切断大鼠空间学习能力的重要机制。     

葛根素对血管性痴呆大鼠海马锥体细胞和BDNF表达的影响

为了观察葛根素对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马锥体细胞和BDNF表达的影响及其作用机制,本研究采用双侧颈总动脉缺血再灌注,同时腹腔注射硝普钠建立血管性痴呆大鼠模型,选出造模成功者随机分为模型组及葛根素干预组,各为24只,另以条件匹配的24只大鼠为假手术组。分别在造模术后15d,1、2和4个月等时间点,采用水迷宫检测大鼠学习记忆能力的变化,HE染色和免疫组化染色观察大鼠海马神经元的形态学改变及BDNF表达的变化。结果显示:(1)模型组大鼠的逃逸潜伏期(EL)均明显长于假手术组(P<0.01),葛根素干预组大鼠的EL较模型组明显缩短(P<0.05),但仍长于假手术组(P<0.05);(2)模型组大鼠海马CA1区锥体细胞数比假手术组明显减少(P<0.01),葛根素干预组2个月和4个月时点锥体细胞数较模型组明显增多(P<0.01),但仍少于假手术组(P<0.01);(3)模型组大鼠海马BDNF阳性细胞明显减少(P<0.01),除15d和1个月组DG区外,葛根素干预组大鼠海马BDNF阳性细胞数较模型组明显增多(P<0.05),但仍低于假手术组(P<0.05);(4)模型组大鼠海马BDNF阳性细胞平均吸光度值较假手术组明显降低(P<0.01),而葛根素干预组比模型组和假手术组均明显降低(P<0.05)。本研究结果提示,脑缺血再灌注后,海马BDNF阳性神经元和锥体细胞持续减少,在VD学习记忆障碍的发生和发展过程中起重要作用;葛根素对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与葛根素上调BDNF的表达、减少锥体细胞的丢失有关。     

补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马GluR1蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察补阳还五汤对血管性痴呆(VD)大鼠海马α-氨基羟甲基恶丙酸受体(AMPA)GluR1亚单位蛋白及mRNA表达的影响,探讨补阳还五汤治疗VD的机制。方法:四血管阻断法制备VD大鼠模型。设立假手术组、VD模型组、尼莫地平组(20mg·kg-1.d-1,灌胃30d)和补阳还五汤治疗组(50g·kg-1.d-1灌胃30d)。Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力的改变,免疫组化和Westernb lotting技术检测大鼠海马神经元GluR1蛋白的变化,实时荧光定量PCR技术检测大鼠海马GluR1mRNA表达的变化。结果:与假手术组相比,VD模型组大鼠逃避潜伏期延长和平均探索次数减少(P0.05);补阳还五汤明显改善了模型大鼠上述学习、记忆成绩(P0.05);假手术组、尼莫地平组与补阳还五汤治疗组之间差异无显著(P0.05)。VD模型组大鼠的GluR1蛋白及其mRNA表达水平较假手术组明显降低(P0.05);补阳还五汤治疗组大鼠海马的GluR1蛋白及其mRNA表达水平较模型组的表达明显升高(P0.05);假手术组、尼莫地平组与补阳还五汤治疗组之间差异无显著(P0.05)。结论:补阳还五汤可以改善VD大鼠学习记忆能力,其机制可能与减轻脑缺血再灌注对海马CA1区神经元的损伤及恢复海马组织GluR1蛋白及其mRNA的表达有关。     

Ginkgo biloba extract EGb 761 attenuates hippocampal neuronal loss and cognitive dysfunction resulting from chronic restraint stress in ovariectomized rats

We have recently found that a combination of ovariectomy (OVX) and chronic restraint stress causes cognitive dysfunction and reduces hippocampal CA3 neurons in female rats and that estrogen replacement suppresses the OVX/stress-induced behavioral and morphological changes. In this study, we examined the effect of Ginkgo biloba extract (EGb 761), a popular herbal supplement, on the cognitive dysfunction and neuromorphological change in OVX/stress-subjected rats. Female Fisher 344 rats were randomly divided into three groups: vehicle-treated OVX, EGb 761 (50 mg/kg) -treated OVX and vehicle-treated sham-operated control groups. Two months after ovariectomy, all animals received restraint stress for 21 days (6 h/day), and were then subjected to a novel object recognition test followed by morphological examination by Nissl staining. EGb 761 was orally administered once daily until the behavioral analysis was done. Treatment with EGb 761 improved memory impairment and neuronal loss of hippocampus in the OVX/stress-subjected group in the same ways as 17beta-estradiol. On the other hand, EGb 761 did not affect the loss of bone mineral density and increase in body weight after OVX, although 17beta-estradiol attenuated them. These results have important implications for neuroprotective and cognition enhancing effects of EGb 761 in postmenopausal women and suggest that the effects are mediated by a different mechanism from estrogen.     

依达拉奉对血管性痴呆大鼠海马突触可塑性的影响

目的：探讨依达拉奉(edaravone,Eda)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马CA1区神经元突触可塑性的调节作用及分子机制。方法：成年雄性SD大鼠30只,随机分成3组：假手术组、VD组、VD+Eda组,每组10只。应用Morris水迷宫(Morris water maze,MWM)测试各组大鼠的空间认知功能。MWM后,分别记录每只大鼠海马CA1区神经元长时程增强(long-term potentiation, LTP)并进行分析比较;电生理记录后,大鼠断头取脑,制备脑冰冻切片,免疫组织化学测定海马CA1区神经生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达情况。结果：VD组大鼠有明显的空间认知障碍;Eda治疗后,VD+Eda组大鼠的空间认知障碍得到显著改善。VD+Eda组兴奋性突触后电位(excitatory postsynaptic potential,EPSP)斜率增加百分比显著高于VD组(P<0.05)。VD组GAP-43的表达量显著低于假手术组(P<0.01),VD+Eda组GAP-43的表达量显著高于VD组(P<0.05)。结论：依达拉奉可通过提高VD大鼠海马CA1区的突触可塑性改善空间认知障碍,其机制与依达拉奉上调VD大鼠海马CA1区GAP-43的表达有关。     

银杏叶提取物对1型糖尿病大鼠认知功能及海马神经细胞凋亡的影响

目的： 探讨银杏叶提取物(EGB)对1型糖尿病脑病大鼠海马神经细胞的保护机制。方法: 36只SD雄性大鼠随机分为正常对照组（C组）、糖尿病模型组(DM组)、银杏叶提取物治疗组（EGB组）。用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建立糖尿病动物模型,EGB组腹腔注射银杏叶提取物注射液,其余2组给予同等体积的生理盐水。于12周末通过Morris水迷宫法评价各组大鼠学习记忆能力并测定血清中的血糖和胰岛素浓度;用Image-Pro Plus 6.0图像分析技术检测大鼠海马组织神经细胞密度;Western blotting和免疫组织化学法检测其Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白的表达。结果: DM组大鼠血糖浓度(P<0.01)、海马神经细胞中Bax(P<0.01)、caspase-3(P<0.01)蛋白的表达、Bax/ Bcl-2比例 (P<0.01)及Morris水迷宫潜伏期(P<0.01)均高于C组,而胰岛素水平(P<0.01)、海马CA1和CA2区域的神经细胞密度(P<0.05) 及Morris水迷宫搜索策略能力(P<0.01)均低于C组。EGB干预治疗后大鼠胰岛素水平(P<0.05)、海马CA1和CA2区域的神经细胞密度(P<0.05) 及Morris水迷宫搜索策略能力(P<0.01)均高于DM组,而血糖浓度(P<0.01)、海马组织中Bax(P<0.05)、caspase-3(P<0.05)蛋白的表达、Bax/ Bcl-2比例 (P<0.01) 及Morris水迷宫潜伏期(P<0.05)均低于DM组。各实验组大鼠Bcl-2蛋白的表达没有明显变化。结论: 银杏叶提取物提高糖尿病大鼠的空间学习记忆能力,可能通过减少Bax、caspase-3蛋白表达、降低Bax/ Bcl-2比例,从而减少神经细胞的凋亡,提高神经细胞密度而发挥作用。提示通过有效调节神经元凋亡相关基因是EGB治疗糖尿病脑病的的重要作用机制之一。