供体血管内皮细胞胸腺修饰对猪-猴心脏移植的影响

目的　探讨胸腺修饰对大动物异种心脏移植的影响 ,建立猪—猴异种心脏移植模型。方法　受体猕猴随机分成 4组 :对照组、照射组、照射 +胸注 16 4 0组和照射 +胸注供体血管内皮细胞 (VECs)组 ,对受体进行不同预处理后 ,作猪—猴腹腔异位心脏移植。同时在移植前作供体VECs溶解率和供体VECs与受体淋巴细胞 (猴T细胞 )的混合细胞反应检测。结果　照射 +胸注猪VECs组平均供心存活时间 (MeanSurvivalTime,MST)显著延长(12 4 .2± 4 .2h) ,超过照射组 (6 5 .2± 6 .6h)、照射 +胸注 16 4 0组 (6 3.0± 4 .0h)和对照组 (36 .2± 5 .9h) (P <0 .0 5 )。同时 ,该组供体VECs溶解率显著下降 (P <0 .0 5 ) ,受体T细胞增殖显著受抑制 (P <0 .0 5 )。结论　供体VECs(猪VECs)胸腺修饰可通过抑制受体 (猴 )T细胞的识别与增殖 ,减轻供心VECs激活 ,最终缓解延迟性异种排斥反应(DelayedXenograftRejection ,DXR) ,从而使供心存活时间显著延长 ,但不能完全克服DXR。     

种植受者血管内皮细胞对抗异种移植超急性排斥反应的 …

为探讨种植受者血管内皮细胞在抗异种移植超急性排斥反应方面的意义,选用豚鼠→大鼠移植模型,先分离、培养大鼠动脉内皮细胞,然后将其种植于去内皮的豚鼠动脉内壁,并以免疫组化技术检测了种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉与大鼠血清反应的情况。结果显示：大鼠血清与正常的豚鼠动脉一起培养后,前者所含ＩｇＭ、Ｃ３沿后者内皮细胞表面沉积、种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉与大鼠血清反应后免疫荧光反应呈阴性,即无ＩｇＭ和Ｃ３。以上结     

种植受体血管内皮细胞在异种血管移植中的实验研究

To investigate the possible significance and usefulness of reseeding the endothelial cell of recipient for the prevention of hyperacute rejection (HAR) resulting from the xenograft. METHODS: Discordant xenotransplantation model (guinea pig-to-rat) was adopted in this study. Firstly endothelial cells from rat abdominal aorta were separated and cultured. Secondly the guinea pig abdominal aorta of which the endothelium had been removed was cultured with the suspension containing rat endothelial cells (4 x 10(6)/ml). The viability of cultured vessel was assessed using light microscopy and transmission electron microscopy. Thirdly, the guinea pig vessels reseeded with rat endothelial cells were transplanted to rat in vivo. The thrombrosis time was observed. The condition of deposit of IgM and C3 in the recipient's transplanted vessel endothelium was examined by immuno-fluorescence staining assay. RESULTS: The thrombrosis time of the guinea pig vessel reseeded with rat endothelial cells (20.3 + 4.42 h) was significantly prolonged as compared with that of the normal guinea pig vessel (0.35 + 0.284 h) and the guinea pig vessel that had been deprived of endothelium (0.165 + 0.77 h). No deposit of IgM and C3 was seen in the new endothelium of guinea pig vessel in the treated group, whereas deposit of IgM and C3 was observed in the untreated normal guinea pig aorta. CONCLUSION: Donor vessels reseeded with endothelial cells from the recipient will undergo less severe rejection and this technique may be very useful in the attenuation of HAR.     

种植受体血管内皮细胞在异种血管移植中的实验研究

目的　探讨种植受体血管内皮细胞在抗异种血管移植超急排斥反应 (HAR)方面的意义。方法　选用豚鼠→大鼠移植模型 ,先将分离、培养的大鼠动脉内皮细胞种植于去内皮的豚鼠动脉内壁 ,再将此豚鼠动脉植入大鼠体内 ,观察动脉血栓形成时间 ,并采用免疫组化技术检测了 Ig M、C3在移植后豚鼠动脉壁上沉积的情况。结果　已种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉血栓形成时间 (2 0 .3± 4.42 h)较植入大鼠体内的正常豚鼠动脉 (0 .35± 0 .2 84h)以及单纯去内皮豚鼠动脉血栓形成时间 (0 .16 5± 0 .0 77h)显著延长 (P<0 .0 0 1)。免疫组化结果显示 ,植入大鼠体内的正常豚鼠内皮细胞表面有 Ig M和 C3沉积 ,而预先种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉内壁无 Ig M和 C3沉积。结论　在异种供体血管壁上预先种植受者血管内皮细胞 ,可延长移植的异种供体血管通畅时间 ,该技术可能在抗异种血管移植 HAR方面具有重要意义     

种植受者血管内皮细胞对抗异种移植超急性排斥反应的初步探讨

为探讨种植受者血管内皮细胞在抗异种移植超急性排斥反应方面的意义,选用豚鼠→大鼠移植模型,先分离、培养大鼠动脉内皮细胞,然后将其种植于去内皮的豚鼠动脉内壁,并以免疫组化技术检测了种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉与大鼠血清反应的情况。结果显示：大鼠血清与正常的豚鼠动脉一起培养后,前者所含IgM、C3沿后者内皮细胞表面沉积;种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉与大鼠血清反应后免疫荧光反应呈阴性,即无IgM和C3。以上结果表明,血管内皮细胞可在异种血管壁上种植,如将受者血管内皮细胞预先种植于供者的血管内壁,可能避免超急性排斥反应的发生。     

脾切除延长大鼠异种移植心脏存活时间的实验研究

目的:采用小鼠至大鼠心脏移植模型,研究脾切除联用免疫抑制剂对异种移植物存活时间的影响。方法:动物随机分为组,分别采用脾切除、来氟米特()或二者联用以观察对异种移植心脏存活时间的影响。法检测血清。7LefELISAIgG用免疫组织化学法检测。IgG结果:单行脾切除使移植心脏存活(±)天4.401.14(P,脾切除联用使移植心脏存活<0.05)CsA(±)天与组比较,4.750.95(IIP。脾切除联用显著延长移植心脏存活时间达(±)天,且显著降低受体血清>0.05)Lef8.202.17水平和移植物中沉积IgGIgG(P。加用不能显著增加脾切除联用的效果。<0.05)CsALef结论:脾切除可显著延长小鼠至大鼠移 植心脏存活时间。脾切除和具有协同免疫抑制作用,可降低移植后受体血清水平及移植物中沉积,延长异种移植物LefIgGIgG的存活时间。     

一个简便的猪-猴异种心脏移植模型的建立

目的 建立一个简便的研究延迟性排斥反应的猪-猴异种心脏移植模型。方法 通过流式细胞仪法监测猕猴体内天然抗体水平在出生后0．5～3月龄的变化，选择新生梅山猪和2．5月龄中国猕猴分别作为供、受体，建立非协调性猪—猴异种移植模型。观察移植心存活时间，排斥后取移植心进行电镜、病理及免疫组化检查。结果 IgM类天然抗体水平出生后缓慢上升，3月龄时达到31％左右，而IgG类天然抗体水平始终处于低水平。移植心脏平均存活时间36h，电镜、病理及免疫组化显示为延迟性排斥反应。结论 选择新生梅山猪和2．5月龄中国猕猴建立非协调性猪—猴异种移植模型，可方便克服急性排斥反应，从而有助于延迟性排斥反应的研究。     

小鼠→大鼠异位心脏移植模型的建立

目的：建立小鼠→大鼠异种心脏移植动物模型。方法：选择NIH小鼠和Wistar大鼠分别作为供体和受体。小鼠升主动脉与大鼠右颈总动脉端端吻合,小鼠肺动脉与大鼠右颈外静脉端端吻合以建立小鼠→大鼠颈部异位心脏移植模型。排斥后取移植心脏作病理学检查。结果：移植成功率87％(13/15)。移植心脏平均存活时间2.15±0.90天。病理检查发现排斥心脏中广泛血管内血栓形成,出血及炎症细胞浸润,部分心肌有局灶性梗塞和凝固性坏死。结论：本模型容易操作,易于观察,稳定可靠,是研究异种移植较理想的动物模型。     

血管内皮细胞与胰岛移植

胰岛移植后早期的缺血缺氧是导致大量胰岛死亡的主要原因,加快移植后早期的再血管化进程,尽早恢复胰岛血供,就能够改善胰岛移植的效率。血管内皮细胞是血管形成的核心,其增殖活性和数量决定再血管化的进程。局部高表达血管内皮细胞生长因子促进内皮细胞增殖,直接补充内皮细胞或内皮前体细胞,动员骨髓中的内皮前体细胞,都能加快胰岛移植后血管新生的进程,改善移植效果,对临床胰岛移植具有重要意义。     

血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠抗超急性排斥反应能力

目的:检测血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠抗超急性排斥反应能力。方法:采用Langendorff心脏灌注装置,用20%稀释人血清灌注转基因小鼠离体心脏,观察其抗超急排斥反应能力。免疫组化方法检测灌注后心脏组织人IgM沉积情况。结果:与普通鼠对比,转基因小鼠离体心脏在用20%稀释人血清灌注期间心脏存活时间明显延长,且60min灌注期间内做功仍维持在最大值20%以上,显示转基因小鼠具有一定抗超急排斥反应能力。免疫组化显示C3c(免疫组化一抗)在转基因组心肌组织间、血管管壁仅有少量沉积,普通小鼠组大量沉积,显示普通小鼠心脏遭受较为强烈的超急排斥反应损伤。结论:血管内皮细胞组织特异性表达人CD59转基因小鼠有一定的抗超急排斥反应能力。     

供体抗原特异性的CD4+CD25+Treg对心脏移植小鼠体内B细胞功能的影响

目的 观察供体抗原特异性的CD4+CD25+Treg对同种异系心脏移植小鼠受体B细胞功能的影响.方法 以Balb/c小鼠为供体、C57bl/6小鼠为受体建立小鼠心脏移植模型,于术前1 d、术后2周分别将供体抗原特异性的CD4+CD25+Treg (1×106)于尾静脉注入受体体内,术后1个月抽取小鼠外周血,分离B细胞,检测其在抗IgM抗体刺激下的增殖情况,检测小鼠外周血IgG、IgA水平,以判断应用CD4+CD25+Treg后小鼠体内B细胞功能状态.实验组:术前、术后2周使用CD4+CD25+Treg(n＝8);阳性对照组:术前、术后未使用CD4+CD25+Treg(n＝8);空白对照组:未移植小鼠(n＝8).结果 实验证实,实验组B细胞增殖水平最低,空白对照组其次,阳性对照组最高,3组差异均有统计学意义(P<0.05).外周血IgG、IgA水平检测证实,实验组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),二者明显低于阳性对照组(P<0.01).结论 经尾静脉注入CD4+CD25+Treg后心脏移植受体体内B细胞的功能可明显受到抑制,CD4+CD25+Treg可通过对B细胞的这一作用调节受体免疫状态,从而达到控制排斥反应,诱导免疫耐受的作用.     

供体凋亡细胞输注对大鼠胰岛移植物功能的影响

目的 研究供体凋亡细胞预输注对大鼠胰岛移植后胰岛移植物功能的影响.方法 应用STZ制备SD大鼠糖尿病模型,以直线加速器照射诱导供体Wistar大鼠脾细胞凋亡.经阴茎背静脉输注供体凋亡脾细胞,7d后于糖尿病SD大鼠双侧肾包囊进行同种异体胰岛移植,通过测定血糖变化、血清胰岛素水平以及胰岛移植物存活时间来观察胰岛移植物的功能状态.结果 预输注供体凋亡脾细胞能显著延长同种异体胰岛移植物存活时间(中位生存时间达31 d),并较长时间地维持受体鼠血清胰岛素处于较高水平.结论供体凋亡细胞预输注能够显著延长同种异体胰岛移植物的存活时间,能够较长时间维持胰岛移植物的正常功能状态.     

己酮可可碱对大鼠胰腺移植再灌注过程中血管内皮细胞的保护作用

目的观察己酮可可碱对胰腺移植物再灌注损伤是否具有保护作用. 方法分为假手术组、非治疗组和治疗组,术后1、3、6 h采血测定内皮素(ET)、一氧化氮(NO).术后6 h测血清淀粉酶(Ams). 结果术后6 h,治疗组ET水平显著低于非治疗组(P＜0.01);非治疗组术后NO浓度在3 h、6 h显著低于治疗组(P＜0.01). 结论己酮可可碱对胰腺移植再灌注损伤有保护作用.     

碘对血管内皮细胞表达VEGF影响的研究

目的 研究碘对血管内皮细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 在含有不同浓度碘离子(I-)环境中培养血管内皮细胞,使用Western-blot和RT-PCR法检测VEGF的表达情况.结果 不同浓度的I-作用于血管内皮细胞后,VEGF表达未出现上调(P>0.05).结论 碘不促进血管内皮细胞合成VEGF,碘促进血管内皮细胞增殖与VEGF上调无关.     

胸腺内注射异基因骨髓细胞对大鼠异位心脏移植影响的研究

本文采用同种大鼠颈部异位心脏移植模型研究受体胸腺内注射异基因骨髓细胞对移植心脏存活时间的影响及免疫学功能变化。实验分 4组。对照组 (Control组 )、环磷酰胺组 (CP组 )、单纯胸腺内注射异基因骨髓细胞组 (IT组 )、胸腺内注射异基因骨髓细胞辅以短期环磷酰胺组(IT +CP组 )。结果显示 :移植心脏存活时间最长的是IT +CP组为 68 3± 13 4d ,CP组移植心脏存活时间为 18 3± 2 4d ,两组间移植心脏存活时间差异显著 (P <0 0 1) ,而二者分别与Control组比较差异显著 (P <0 0 1,P <0 0 5) ,Control组、IT组移植心脏存活时间较短 ,分别为 8 5±1 4d、 7 8± 1 2d ,受体接受实验处理因素 1个月后免疫功能测定表明 :各组大鼠脾细胞的淋巴细胞转化试验无明显差异 (P >0 0 5)。IT +CP组大鼠脾细胞对供体脾细胞的单向混合淋巴细胞培养有明显抑制作用 (P <0 0 1) ,对供体靶细胞的细胞介导的细胞毒试验呈明显抑制作用 (P<0 0 1) ,说明受体对供体产生特异性免疫无反应性 ,即免疫耐受。     

输注自体骨髓间充质干细胞延长犬活体肝移植存活的实验研究

目的 探讨输注自体骨髓间充质干细胞延长犬活体肝移植存活的机制.方法 14只受体犬建立活体肝移植模型后,随机分为对照组和处理组,对照组仅做活体肝移植,处理组在活体肝移植的基础上,术中输注自体骨髓间充质干细胞,术后观察两组犬的生存时间、肝功能(AST、ALT)、组织病理变化及移植细胞的分化状况.结果 ①处理组比对照组的中位生存时间明显延长(P<0.01).②肝功能变化:术后两组AST、ALT总体相比较,处理组AST、ALT水平降低,有显著性差异(P<0.01).⑨组织病理变化:术后两组均出现不同程度的免疫排斥反应,且排斥程度相似.④移植细胞分化情况:输注的骨髓间充质干细胞向有功能的肝样细胞分化.结论 输注自体骨髓间充质干细胞可以延长活体肝移植受体犬的存活时间;经门静脉输注的自体骨髓间充质干细胞可向肝样细胞分化.     

细胞膜微粒对血管内皮细胞功能的影响

目的 探讨细胞膜微粒(Mp)在激素相关性股骨头缺血坏死(ANFH)发生机制中所起的作用.方法 选择体外培养的第3代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为研究对象.从健康人、股骨头坏死患者和使用大剂量激素治疗的非股骨头坏死患者血液中分离出的细胞膜微粒作为刺激因子.将不同来源的细胞膜微粒与HUVEC共同培养一段时间后观察细胞形态学变化,并用流式细胞仪检测细胞培养基中膜微粒种类和数量的改变,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮细胞凋亡基因的表达.结果 倒置相差显微镜观察细胞:发现各组内皮细胞的形状、密度、生长速度和细胞核的形态差异无统计学意义.流式细胞仪分析显示,CD62E+/CD31+代表细胞活跃程度.共培养48 h后,激素治疗的实验组CD62E+/CD31+明显低于对照组(P=0.035),其他各实验组和对照组差异无统计学意义(P＞0.05).RT-PCR分析显示,fas/β-肌动蛋白代表凋亡基因的表达.激素性ANFH的实验组fas/β-肌动蛋白明显高于对照组(0.776±0.230＞0.669±0.148,P=0.006).激素治疗的实验组高于对照组(0.914±0.226＞0.832±0.200,P=0.005).其余各实验组和对照组之间差异无统计学意义(如:酒精性ANFH 0.810±0.252＞0.781±0.194,P＞0.05).结论 使用激素患者的细胞膜微粒在体外有促进血管内皮细胞凋亡的作用.激素性股骨头坏死患者的细胞膜微粒在体外能够增加血管内皮细胞凋亡基因的表达,但是对内皮细胞释放膜微粒无明显影响.健康人和酒精性股骨头坏死患者的细胞膜微粒在体外对血管内皮细胞的凋亡无明显影响.     

Experimental study of the effect of adipose stromal vascular fraction cells on the survival rate of fat transplantation

<正>Objective To investigate the effect of Botulinum toxin type A(Botox)injection into the masseter muscle on mandibular development in rats.Methods 1228-day-old Wistar rats were divided into two groups as Botox group(n=6)and control group(n=6)     

Orthotopic heart transplantation with prolonged donor ischemic time: report of 3 cases and literature review

Heart transplantation has become an effective therapy for patients with end stage heart failure. The preservation of the donor heart is an important factor that affects the results of the operation. We performed 3 cases of orthotopic heart transplantation and obtained some experience in the preservation of the donor heart. Methods： Three male patients with end stage heart failure received the operation in our department successfully. Doppler echocardiography showed left ventrieular end diameter （LVED） of the patients were 91, 87, and 83 mm, and ejection fraction （EF） were 24%, 20%, 12.9%, respectively. Once the declaration of brain death had been made, the median stemotomy was performed with a sternal saw. Haparin at a dose of 300 U/kg of body weight was administered. After at least 2-min heparin circulation, the procurement proceeded. The superior vena cava and the inferior vena cava were nearly completely divided. When the heart was empty, the ascending aorta was cross-clamped and the St. Thomas solution was infused by gravity. The heart was excised by transection of the inferior vena cava, the superior vena cava and all pulmonary veins. After donor heart was removed, it was infused with University of Wisconsin （UW） solution by gravity at a temperature of 4-6℃, then placed in UW solution for storage during transportation. The temperature of solution was maintained at about 4-6℃. The ischemic times of donor heart were 9, 8 and 6 h, respectively. The bicaval anastomotic heart transplantation was adopted. The left atrial anastomoses were constructed using 3.0 polypropylene. The inferior vene cava anastomosis was constructed, the donor and native aorta were cut to an appropriate length. Then the aorta and main pulmonary artery anastomosis were performed respectively. The superior vene cava anastomosis was usually constructed during the rewarming phase. The intraoperative course with a cardiopulmonary bypass of the 3 patients was 96, 44 and 49 min, respectively. Standard triple immunosuppression therapy was commenced in the immediate post-operative period. Results： The operation procedure was smooth and no perioperative death occurred. The follow-up was carried out carefully. The patient＇s condition was fine in 25, 30 and 32 months after operation. The blood pressure was 130/90, 140/95 and 120/80 mmHg, respectively, and LVED was 51, 49 and 53 mm; EF was 50%, 54% and 60%, respectively. Cardiothoracic ratio was 0.63, 0.55, and 0.64, respectively. Conclusion： Preservation time of donor heart with St. Thomas solution infusion and UW solution storage at 0-4℃ may exceed 6 h, and receive comparable middle-term outcomes.