蜂毒肽与钙调蛋白

蜂毒肽是蜂毒中的主要成分,包括２６个氨基酸残基。由于它有分子量小,结构已知,与钙调蛋白高度亲和等优点,被认为是研究钙调蛋白的模型肽,对蜂毒肽－钙调蛋白复合物构象研究起步较早,但直到最近才有了较全面的结果。蜂毒肽对揭示钙调蛋白－靶酶作用的“翻转模式”机制,阐明其作用过程的构象变化都有重要作用。     

钙调蛋白的药用研究

目的研究钙调蛋白的最新进展及在药学方面的应用。方法查阅国内外文献资料进行整理和归纳。结果钙调蛋白在增强大脑记忆、抗精神病、抗肿瘤等方面有临床应用。结论钙调蛋白制剂作为生化调控类药物有非常广阔的研究前景。     

锌对大鼠成骨细胞内游离钙离子浓度和钙调蛋白活性的影响

实验旨在阐明锌对体外培养大鼠成骨细胞胞内游离钙离子浓度 ( [Ca2 +]i)及钙调蛋白 (CaM)活性的影响 .各研究因素分别作用于成骨细胞 3d或短时作用后 ,分别测定 [Ca2 +]i 和CaM活性 ;采用CaM PDE实验体系深入研究锌对CaM可能存在的潜在作用 .结果表明 :无论是长期或短时作用 ,锌对大鼠成骨细胞 [Ca2 +]i 及CaM活性均无影响 ;在CaM PDE实验体系中 ,低浓度锌可以激活CaM ,但高浓度抑制CaM ,这可能与锌竞争结合CaM上钙结合位点有关 .在本实验条件下 ,锌对Ca2 +/CaM信号途径无影响 ,但具有潜在激活或抑制CaM的生物学效应     

钙调蛋白抑制剂W-7对肝癌细胞增殖的影响

目的初步了解钙调蛋白抑制剂及与化疗药物联用时对肝癌细胞增殖的影响，方法用钙调蛋白抑制剂W-7[N-（6-氨基己烷基）-5-氯-1萘-磺胺]处理肝癌细胞（Alexander株），观察不同浓度W-7对肝癌细胞摄取［3H］-TdR的影响、对ADMIC50的影响、与化疗药物（ADM，5-FU，MMC，VCR）联用时对肝癌细胞（Alexander株,离体肝癌细胞）杀伤的影响。结果①W-7能显著抑制肝癌细胞增殖，抑制效应与W-7的剂量及作用时间相关。②W-7能显著降低ADM对Alexander细胞的IC50。W-77.5μmol·L-1时，ADM的IC50为0.5mg·L-1;W-715μmol·L-1时，ADM的IC500.3mg·L-1，而对照为3mg·L-1。③与化疗药联用时，能提高化疗药物对肝癌细胞株及离体肝癌细胞的杀伤，并且其杀伤效果与W-7的浓度相关。结论钙调蛋白抑制剂对肝癌细胞的增殖有较强的抑制作用，可作为在肝癌患者化疗时一种辅助用药，增强化疗药物疗效、减少化疗药物用量，从而降低其毒副作用。     

豚鼠钙调蛋白1基因的克隆及序列分析

目的克隆豚鼠钙调蛋白1(CaM1)基因,对所克隆基因进行生物信息学分析。方法从豚鼠心室肌组织提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增CaM1基因编码区447bp的cDNA片段,插入克隆载体构建重组质粒后基因测序及序列分析。结果克隆出的基因片段编码CaM1全部149个氨基酸,核苷酸序列与多种哺乳动物相应基因的同源性大于90%。获得了该序列的限制性内切酶酶切位点等信息。结论成功获得了豚鼠CaM1基因编码区序列,为进一步重组表达CaM及其功能研究奠定基础。     

氯丙烯对神经细胞内Ca~(2 ),游离钙调蛋白,环腺苷酸含量和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的影响

用培养的鸡胚脑神经细胞研究了１．０２和２．０４ｍｍｏｌ·Ｌ－１氯丙烯作用２４ｈ后细胞内Ｃａ２＋，游离钙调蛋白（ＣａＭ）和环腺苷酸（ｃＡＭＰ）含量及钙／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ｃａ２＋／ＣａＭ－ＰＫⅡ）活性的改变．结果显示，随着氯丙烯浓度的增加，细胞内Ｃａ２＋分别增加了４．２和６．２倍，ｃＡＭＰ含量增加了２２％和３９％，Ｃａ２＋／ＣａＭ－ＰＫⅡ活性增加了２．８和５．０倍（Ｐ＜０．０１）；而游离ＣａＭ含量则分别减少了５５％和６９％（Ｐ＜０．０１）．结果提示氯丙烯引起病理性神经轴浆内微管和神经微丝堆积与细胞内Ｃａ２＋增加有关．这可能由于细胞内Ｃａ２＋增加，激活ＣａＭ，继而激活Ｃａ２＋／ＣａＭ－ＰＫⅡ，催化微管相关蛋白２和ｔａｕ－蛋白磷酸化，抑制微管组装，使解聚的微管堆积在轴浆内．     

脑型一氧化氮合酶钙调蛋白结合区的克隆表达与活性鉴定

应用PCR法扩增了脑型一氧化氮合酶（nNOS)的钙调蛋白CaM结合区基因,将扩增出的0．6kBDNA片段经NdeI/EcoRI酶切,重组于表达载体pET/28a( )质粒中,用电穿孔法导入E.Coli,筛选获得基因工程菌。在IPTG诱导下,目的蛋白在工程菌的表达量为菌体蛋白的15％－20％,应用His、Tagsepharose金属螯合亲和层析和SDS－PAGE纯化,获得电泳纯的目的蛋白、相对分子质量为22000,以它为抗原,制备了免疫克隆抗血清,经纯化获得高度专一性的nNOS CaM结合区蛋白的抗体,实验证实所得抗体与nNOS抗原特异结合,与诱导型一氧化氮合酶（iNOS)无交叉反应。     

氯丙烯对神经细胞内 Ca2+, 游离钙调蛋白, 环腺苷酸含量和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的影响

用培养的鸡胚脑神经细胞研究了1.02和2.04 mmol·L^-1氯丙烯作用24 h后细胞内Ca²⁺, 游离钙调蛋白(CaM)和环腺苷酸(cAMP)含量及钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca²⁺/CaM-PK Ⅱ)活性的改变. 结果显示, 随着氯丙烯浓度的增加, 细胞内Ca²⁺分别增加了4.2和6.2倍, cAMP含量增加了22%和39%, Ca²⁺/CaM-PK Ⅱ活性增加了2.8和5.0倍(P<0.01); 而游离CaM含量则分别减少了55%和69%(P<0.01). 结果提示氯丙烯引起病理性神经轴浆内微管和神经微丝堆积与细胞内Ca²⁺增加有关. 这可能由于细胞内Ca²⁺增加, 激活CaM, 继而激活Ca²⁺/CaM-PK Ⅱ, 催化微管相关蛋白2和tau-蛋白磷酸化, 抑制微管组装, 使解聚的微管堆积在轴浆内.     

和厚朴酚对钙调素拮抗作用的研究

采用钙调素(CaM)依赖性环核苷酸磷酸二酯酶及丹磺酰标记CaM,研究和厚朴酚对CaM的作用.发现和厚朴酚能抑制CaM刺激环核苷酸磷酸二酯酶的活性,随着CaM浓度的增加,IC_(50)也相应增加。在Ca~(2+)存在下.和厚朴酚能降低丹磺酰标记的CaM的荧光强度,使其荧光发射光谱峰位红移。实验结果提示,和厚朴酚在Ca~(2+)存在下,能与CaM结合.从而拮抗其对靶酶——磷酸二酯酶的激活。另外,和厚朴酚对CaM依赖性磷酸二酯酶基础活性具有刺激作用。     

Peptides related to the calcium binding domains II and III of calmodulin

Three hexadecapeptides which correspond to the putative Ca²⁺ binding domains II and III of calmodulin were synthesized employing solid phase methodology. One of the peptides contained an internal cystine bridge which was formed while the corresponding linear peptide was still attached to the polymeric carrier. The interaction of the synthetic peptides with calcium ions was investigated using Tb³⁺mediated fluorescence. Binding was of the order Cal2 > Cal3 > Cal3C (Fig. 1) with binding constants K_Tb= 0.68 times 10^-5, 0.54 times 10^-5, and 0.21 times 10^-5 M^-1 respectively. Biological activity of the compounds was assessed by measuring their stimulatory effect on erythrocyte membrane (Ca²⁺⁺ Mg²⁺)-ATPase activity For 50% activity as compared with CaM, the concentration of peptides required was for Cal2, Cal3 and Cal3C, 50, 100 and 167 times higher than CaM, respectively. The results suggest that the three synthetic peptides possess certain calmodulin-like features.     

API_（0134）对钙调素及其依赖性环核苷酸磷酸二酯酶的作用

应用钙调素（ＣａＭ）靶酶环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ－Ｉ）活性测定方法观察穿心莲有效成分（ＡＰＩ０１３４）拮抗ＣａＭ的作用。当ＡＰＩ０１３４浓度大于７．８ｍｇ·Ｌ－１时能明显抑制ＣａＭ激活ＰＤＥ－Ｉ的活性，其半抑制浓度（ＩＣ５０）为２６·９ｍｇ·Ｌ－１，在浓度为７．８～１２５ｍｇ·Ｌ－１范围内，ＡＰＩ０１３４对ＰＤＥ－Ｉ的基础活性没有影响。     

Interaction of calmodulin with synthetic deletion peptides of melittin

The 26-residue peptide melittin present in bee venom has been shown to bind calmodulin tightly. In this study we synthesized the following series of deletion peptides of melittin by the solid-phase method: Mel12, Mel13, Mel 14, Mel 15, Mel15F. The results of this study show that the deletion peptides Mel 14 and Mel 15 have almost the same binding activity as the intact native peptide. Each deletion peptide forms a 1:1 complex with calmodulin according to electrophoresis analysis. When the tryptophanyl residue of Mel15 was replaced by the phenylalaninyl residue, the dissociation constant of the peptide—calmodulin complex increased. This shows the importance of the tryptophanyl residue for binding to calmodulin.     

Modified calmodulin calcium binding domain III.

The dodecapeptide Ac-Asp-Lys-Asp-Gly-Asn-Gly-Tyr-Ile-Ser-Ala-Ala-Gaba-OH is a modified calmodulin calcium binding domain III. The synthesis of the peptide by the solid phase method with a total protection scheme using PAM-resin is reported. The purified compound has been characterized by ¹H n.m.r. spectroscopy, both in the presence and in the absence of calcium ions, at various pHs. No strong specific interaction seems to occur between the peptide and Ca⁺⁺ ions in water solutions.     

对抗菌药物防突变浓度及突变选择窗两概念的探讨与思索

防突变浓度（MPC）及突变选择窗（MSW）是由ZhaoX等近几年提出的防耐药变异的新概念。结合文献,本文对MPC及MSW几个相关问题进行了探讨,并简单综述了抗菌药物防耐药变异应用策略。     

二甲双胍对大鼠垂体-性腺轴钙调蛋白mRNA表达的影响

目的研究二甲双胍(metformin,MF)对大鼠垂体—性腺轴钙调蛋白(calmodulin,CaM)mRNA表达的影响。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,系统观察MF对大鼠垂体—性腺轴钙调蛋白mRNA表达的影响。结果MF270mg·kg-1·d-1,ig,连续给药21d,可抑制大鼠睾丸细胞CaM mRNA的表达(P<0.01),而对垂体分泌细胞CaM mRNA的表达则无明显影响。结论二甲双胍可抑制大鼠睾丸细胞CaM mRNA的表达。     

赛庚啶对大鼠下丘脑-腺垂体-性腺轴和钙调蛋白基因表达的影响(英文)

目的　研究赛庚啶 (Cyp)对SD大鼠生殖系统内分泌功能的影响是否有性别差异。方法　 60只SD大鼠依性别各分为 3组 ,每组 1 0只 ;分别灌胃给予生理盐水 ( 5mL·kg-1·d-1) ,Cyp( 2 .4,4.8mg·kg-1·d-1) ,共 1 4d或 2 1d。放免法测定血清黄体生成素 (LH)、促卵泡激素 (FSH)、雌二醇 (E2 )、孕酮(P)、睾酮 (T)的含量。光电镜观察促性腺激素释放激素细胞、促性腺激素细胞、间质细胞、支持细胞、黄体细胞、颗粒细胞等显微、超微结构的变化。用实时荧光定量PCR技术进行逆转录聚合酶链反应 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物。结果　Cyp可升高雄性大鼠血清LH、T的含量 ,而对FSH含量无明显影响。Cyp可升高雌性大鼠血清LH的水平 ,降低其FSH ,P ,E2 的含量。电镜发现 ,Cyp促进雄性大鼠分泌功能 ,使雌性大鼠内分泌细胞发生退行性改变。结论Cyp对雌性大鼠下丘脑 腺垂体 卵巢轴内分泌功能有抑制作用 ,而对雄性大鼠下丘脑 腺垂体 睾丸轴内分泌功能有促进作用 ,且使终末靶腺的内分泌细胞超微结构出现相应的变化。Cyp促进雄性大鼠睾丸钙调蛋白mRNA的表达可能与Cyp促进下丘脑 垂体 睾丸轴的内分泌功能有关     

双苄基异喹啉类化合物Fs对钙调素拮抗作用的研究

采用钙调素（ＣａＭ）依赖性磷酸二酯酶及丹磺酰标记ＣａＭ，研究了双苄基异喹啉类化合物Ｆｓ对ＣａＭ的拮抗作用。实验结果表明，化合物Ｆｓ能抑制ＣａＭ刺激磷酸二酯酶活性，抑制作用可被过量ＣａＭ完全克服，化合物ＦＳ拮抗作用大于三氟啦嗪，为强的拮抗剂。化合物Ｆｓ在Ｃａ￣（２＋）存在下，可降低丹磺酰钙调素（ＤＮＳ－ＣａＭ）的荧光强度，滴加ＣａＭ，荧光强度逐渐回升，在ＥＧＴＡ条件下，化合物ＦＳ没有作用。实验结果显示：双苄基异喹啉化合物ＦＳ是钙调素拮抗剂，且作用强于三氟啦嗪。     

氟喹诺酮类药物对金黄色葡萄球菌及其耐药突变体的耐药性研究

目的:研究5种氟喹诺酮类药物(FQ)对金黄色葡萄球菌ATCC29213及其同源耐药突变体的最低抑菌浓度(MIC)、防细菌耐药突变体选择浓度(MPC)和突变选择窗(MSW),比较其防耐药变异能力,了解细菌对FQ耐药的发生发展过程。方法:肉汤法富集1010CFU.ml-1金黄色葡萄球菌ATCC29213,采用平板稀释法测定莫西沙星、加替沙星、司帕沙星、左氧氟沙星和环丙沙星对金黄色葡萄球菌ATCC29213及筛选的耐药突变体的MIC、暂定MPC(MPCpr)和MPC。结果:莫西沙星、加替沙星、司帕沙星、左氧氟沙星和环丙沙星对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MPC分别为0.2、0.3、0.3、1.4、3.2μg.ml-1。选择指数(MPC/MIC)分别为6.5、4.8、9.7、11.2、12.8。5种氟喹诺酮类药物筛选的第一步突变体对筛选药物的MIC较ATCC29213升高2~8倍。左氧氟沙星筛选的第二步突变体的MIC较第一步突变体又升高8~16倍。所有突变体的MSW边界都较其源菌株明显升高。结论:莫西沙星、加替沙星限制金黄色葡萄球菌耐药突变菌体选择的能力强于司帕沙星、左氧氟沙星和环丙沙星。金黄色葡萄球菌对FQ药物产生耐药是逐步发生的。第一步耐药突变体的产生,使筛选出下一步耐药突变体的几率明显增大,从而导致耐药菌的富集和扩散。