梁金菇多糖促脐血单个核细胞增值活化的分子机制研究

目的:研究梁金菇多糖(liangjin mushroom polysaccha-ride,LJPS)对人脐血单个核细胞(cord blood mononuclear cells,CBMC)增殖活化的机制,为我国开发LJPS的药用价值提供理论依据。方法:采用流式细胞仪检测法方法观察了LJPS对CBMC作用后对CD33+细胞(髓系干细胞)的增殖作用,并采用半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从mRNA水平对其增值活化的机理进行了探讨。结果:LJPS本身不能促进粒-单系祖细胞(CFU-GM)的生成,最佳浓度的LJPS刺激的CBMC上清液对CD33+细胞具有增殖作用,增殖高峰为第7天,其CD33+细胞数为培养前的6.9倍。LJPS可诱导CBMC表达粒-单细胞集落刺激因子(GM-CSF)mRNA,从第6小时即开始表达,表达高峰为第24小时,其mRNA的量为对照组的23.9倍。结论:LJPS具有促造血的功能,其本身虽无GM-CSF活性,但其可通过刺激CBMC增殖活化,诱导细胞表达GM-CSFmRNA,间接促进CFU-GM的形成和髓系干细胞(CD33+细胞)的增殖从而调节造血功能。     

梁金菇多糖对人脐血单个核细胞增殖活性的增强效应及作用机制的实验研究

[目的]研究梁金菇多糖(LJPS)对人脐血单个核细胞(CBMC)增殖活性和白介素-2受体(IL-2R)生成的影响,为栽培的梁金菇药用价值的开发提供实验依据。[方法]采用四甲基氮唑盐(MTT)比色法检测LJPS体外对CBMC增殖活性的影响,采用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)桥联酶标法检测LJPS对CBMC表面IL-2R生成的影响。[结果]1)LJPS能够在体外单独或与人重组白介素-2(rIL-2)协同刺激CBMC的增殖(分别为P<0.05和P<0.005),LJPS的最佳浓度为1mg/L。并且LJPS在rIL-2诱导的脐血-淋巴因子激活的杀伤细胞(CB-LAK)早期加入始能明显增强CB-LAK细胞的增殖活性(P<0.01)。2)LJPS单独或与rIL-2协同均能促进CBMC细胞表面IL-2R的表达(分别为P<0.002,P<0.001)。[结论]LJPS对静止的CBMC有活化效应,而且能使rIL-2诱导的CB-LAK有更强的增殖活性,其作用机制与LJPS能够促进CBMC表达IL-2R有关。     

梁金菇多糖对人脐血单个核细胞生成白介素-2的影响

[目的]研究梁金菇多糖(LJPS)对脐血单个核细胞(CBMC)分泌白细胞介素-2(IL-2)和IL-2mRNA表达的影响,探讨梁金菇多糖的增强免疫和抗肿瘤活性,为中国栽培的梁金菇药用价值的开发提供实验依据。[方法]采用放射性免疫法检测LJPS对CBMC分泌IL-2的影响,并应用RT-PCR法检测LJPS对CBMCIL-2mRNA表达的影响。[结果]LJPS单独或与植物血凝素(PHA)联合应用均能够促进CBMC分泌内源性IL-2(P<0.05和P<0.01),分泌高峰为48h左右,并且两者均能促进CBMCIL-2mRNA的表达,表达高峰为24h左右。[结论]梁金菇多糖能够促进CBMC内源性IL-2的分泌及IL-2mRNA的表达。     

黄芪多糖对有核细胞分泌造血细胞因子的影响

目的 研究注射用黄芪多糖对分离的人外周血单个核细胞(PBMC)分泌造血细胞因子的影响，以支持黄芪多糖的造血活性。方法 取正常人浓缩白细胞，分离出人PBMC单细胞悬液，进行细胞培养，采用酶联免疫吸附方法(EUSA)，测定上清液中的粒细胞集落刺激因子(G—CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(CM—CSF)等造血细胞因子。结果 注射用黄芪多糖能刺激人PBMC产生大量的G—CSF和CM—CSF，表现出明显的量效关系和时效关系。结论 注射用黄芪多糖在体外能刺激人PBMC产生G—CSF和CM—CSF造血细胞因子，且呈明显的量效关系和时效关系，提示其有升高白细胞的作用，展示其临床应用前景。     

黄鼬干粉胶囊对再生障碍性贫血模型小鼠造血功能的影响

目的:观察黄鼬干粉胶囊对再生障碍性贫血(AA)模型小鼠造血功能的影响及作用机制。方法:采用X射线+环磷酰胺+氯霉素复合方法复制小鼠AA模型,观察黄鼬干粉胶囊对小鼠外周血象、骨髓有核细胞数(BMNC)、骨髓粒细胞-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)、血清中可溶性细胞间黏附因子1(s ICAM-1)和骨髓组织病理学的影响。结果:黄鼬干粉胶囊能明显增加模型小鼠外周血中HGB、RBC、WBC和PLT数量,能增加骨髓BMNC数量,还能升高骨髓CFU-GM和降低血清s ICAM-1。与模型对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。骨髓组织病理学结果表明,黄鼬干粉能明显改善模型小鼠骨髓增生低下和造血灶减少,促进骨髓造血。结论:黄鼬干粉胶囊能改善AA模型小鼠造血功能,其作用机制可能与调节骨髓CFU-GM和血清s ICAM-1的平衡有关。     

当归多糖对脐血单个核细胞的体外扩增研究

目的：探讨当归中的有效成分当归多糖(APS)与造血生长因子(Hemopoietic grow factor)(HGF)联合诱导脐血单个核细胞(MNC)的体外扩增效应。方法：采用造血祖细胞体外悬浮培养及半固体培养，不同浓度的APS联合HGF对脐血单个核细胞进行扩增，并用流式细胞仪检测扩增前后CD34^ 细胞数、集落形成单位数及单个核细胞总数。结果：与对照组比较．APS联合HGF可促进脐血中单个核细胞扩增倍数及集落形成单位增加。结论：APS可促进脐血单个核细胞体外扩增。     

红毛五加多糖诱导脐血基质细胞产生粒系祖细胞刺激因子的研究

目的:了解红毛五加多糖促进造血细胞生成的作用机理。方法:选用脐带血单个核细胞,加入适量红毛五加多糖,观察长期液体培养系统中粒、单系祖细胞集落刺激因子(GM-CSF)的活性。结果:依量效曲线浓度为据,向培养体系中加入加脐血基质细胞上清液,对照组粒单祖细胞(GM-CFU,2×10~5/ml)为58.00±2.65,5%红毛五加多糖—脐血基质细胞上清液(hmwjdt-pscs),GM-CFU 为91.67±4.04,10%hmwjdt-pscs,GM-CFU 为111.00±11.79;两实验组与对照组比较呈现显著性差异(P<0.001)。为了鉴别红毛五加多糖直接刺激粒系祖细胞形成作用的影响,本研究还设了与作用基质细胞相同浓度的红毛五加多糖(10μg/ml),加于粒系祖细胞培养体系中以资对照。结果表明:红毛五加多糖没有直接刺激粒系祖细胞形成的作用。结论:红毛五加对粒系造血祖细胞促进形成作用,是通过刺激基质细胞分泌 GM-CSF 实现的。     

SBLKFY对大鼠急性再生障碍性贫血模型的作用

目的:研究SBLKFY对大鼠急性再生障碍性贫血模型的影响。方法:通过注射5-FU加灌胃白消安建立大鼠性再生障碍性贫血模型,对血象、骨髓有核细胞数(BMNC)、骨髓粒-单系祖细胞(CFU-GM)、红系造血祖细胞(CFU-E、BFU-E)形成及胸骨病理等相关指标进行了观察。结果:SBLKFY能明显对抗5-FU加白消安致大鼠血细胞的下降,能刺激骨髓集落细胞的生长,骨髓造血组织明显增加。结论:该药对大鼠急性再生障碍性贫血有明显的治疗作用。     

升白合剂对环磷酰胺小鼠粒系祖细胞的影响

目的:观察升白合剂对于环磷酰胺小鼠骨髓粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的影响。方法:环磷酰胺造模前3d分别连续给予利血生及高、中、低剂量升白合剂进行干预,并于给药7d后分别制备各组小鼠骨髓单个核细胞悬液,培养7d后计数小鼠CFU-GM值。结果:各升白合剂干预组CFU-GM值明显高于模型组,其中高剂量组CFU-GM值明显高于利血生组,有统计学意义。结论:升白合剂有较好的提升环磷酰胺小鼠粒系祖细胞(CFU-GM))的作用。     

梁金菇多糖对脐血单个核细胞增殖活化的研究

姬松茸Agaricus blazei系菌类植物的地上菌丝体,属于担子菌纲,原产于巴西,又名梁金菇。日本的姬松茸多糖具有抗肿瘤、抗突变、促进免疫、促进造血,保护肝脏[1]等功能。为了进一步探讨移植国内后的梁金菇多糖对造血功能的影响,本实验采用从脐带采集的脐血,其中含有丰富的干细胞和祖细胞,研究了梁金菇多糖对脐血单个核细胞的增殖活化作用。1材料1·1药物制备梁金菇(LJPS)由福州华胜食品有限公司提供,经中国科学院植物研究所梁峥研....     

败酱草对内毒素刺激下巨噬细胞分泌细胞因子影响的作用机制

探讨败酱草对内毒素刺激下巨噬细胞分泌细胞因子影响的作用机制,细胞表明：败酱草能明显抑制脂多糖（ＬＰＳ）刺激枯否氏细胞（ＫＣ）分泌粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）,还能明显增加ＫＣ分泌前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的含量。     

RP-HPLC监测重组人粒细胞集落刺激因子复性动态过程

 目的:建立监测重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)复性动态过程的方法?方法:反相高效液相色谱法?采用VydacC₄(150mm×4.6mm)柱,流动相为三氟醋酸-乙腈混合物梯度洗脱?结果:发现完全复性有生物学活性的rhG-CSF在25.4min左右出峰,而完全变性无生物学活性的rhG-CSF在26.4min左右出峰,两峰出峰时间相差1min左右?随着复性时间的增加,两者的峰面积之比在变化?Tris复性体系与PB复性体系相比,复性收率差不多,都可在12h内达到的70%以上复性正确率?结论:此方法适用于基因工程产品纯化过程中复性产率的控制?     

清解灵诱生的内源性集落刺激因子对增强宿主防御功能的作用

目的 :为探讨清解灵 (QJL)诱生的内源性集落刺激因子 (G -CSF)对增强宿主防御功能的作用。方法 :给正常小鼠注射清解灵 ,获取血清 ,用ELISA、骨髓细胞增殖及集落生成试验证明该血清含有G -CSF活性后 ,将该血清被动转输给 8只正常BALB/C小鼠 (实验组 ) ,48h后用大肠杆菌攻击该鼠 ,次日杀鼠 ,测脾悬液中大肠菌数。对照组 (8只 )以正常小鼠血清取代实验组用的血清 ,而后同法处理。结果 :经清解灵注射的小鼠血清与抗G -CSF单克隆抗体呈阳性反应 ,该血清可促进同系鼠的骨髓细胞增殖 ,并使之在固体培养基中形成以中性粒细胞为主的细胞集落。说明该血清确实含有G -CSF。被动转输此血清的实验组小鼠 ,在受大肠杆菌攻击之后其脾悬液中的大肠杆菌数量比对照组显著减少 (P <0 0 1 )。结论 :清解灵可增强宿主的抗感染能力 ,其部分机理可能与诱导机体产生内源性G -CSF有关。     

益血生胶囊联合重组人粒细胞集落刺激因子治疗妇科肿瘤化疗后骨髓抑制32例

目的:观察益血生胶囊联合重组人粒细胞集落刺激因子(rh G-CSF)治疗妇科肿瘤化疗后骨髓抑制的临床疗效。方法:选取本科室收治的妇科恶性肿瘤化疗后白细胞下降患者64例,随机分为对照组和观察组各32例。对照组采用口服益血生胶囊进行治疗,观察组在对照组基础上加用重组人集落刺激因子进行治疗。比较两组患者治疗前后不同阶段的骨髓抑制恢复程度及临床疗效。结果:观察组与对照组相比各疗程骨髓抑制各分度患者数量明显降低(P0.05);观察组患者痊愈例数明显高于对照组(P0.05),不良反应发生率显著低于对照组(P0.05),血液中白细胞数量较对照组明显升高(P0.05)。结论:益血生联合重组人粒细胞集落刺激因子能有效缓解妇科肿瘤患者化疗后骨髓抑制。     

黄芪对辐射小鼠造血功能的影响

结果表明黄芪能促进造血干细胞的增殖和向红系与粒系细胞分化,但对外周血血小板却无明显影响。     

更年春方对骨代谢相关基因表达的影响

目的:观察更年春方对去卵巢(OVX)大鼠骨髓微环境中骨保护素(OPG)、破骨细胞分化因子(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)mRNA表达的影响,探讨更年春抗绝经后骨质疏松骨丢失的可能分子机制。方法:取健康10月龄雌性SD大鼠42只,随机平均分为假手术组(S),生理盐水组(N)、尼尔雌醇组(E)、更年春高剂量组(H)、更年春中剂量组(M)和更年春低剂量组(L)。假手术组仅切除卵巢周围少许脂肪,其余5组均切除卵巢。灌药3d后取腰椎冲洗骨髓提取总RNA,实时定量PCR法检测上述因子mRNA的表达情况。结果:更年春高剂量组可上调OVX大鼠骨组织中OPG的mRNA的表达,下调M-CSF的mRNA的表达,使RANKL/OPG值下降。结论:更年春方抗绝经后骨质疏松骨丢失的分子机制可能与其调控OPG和M-CSF的表达,影响RANKL/OPG值有关。     

阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者巨噬细胞集落刺激因子及氧化低密度脂蛋白的影响

目的观察阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者巨噬细胞集落刺激因子及氧化低密度脂蛋白的影响。方法采用酶联免疫法检测试验组和对照组的血清MCSF、OX—LDL水平。结果2组治疗后各指标较治疗前有显著性差异（P〈0．05），而试验组血清MCSF、OXLDL下降幅度明显大于对照组（P〈0.05）。试验组治疗前M—CSF与OXLDL成正相关（r=0．49，P〈0．05），治疗后M—CSF下降幅度与OXLDL下降幅度亦呈正相关（r=0．61，P〈0．05）。结论阿托伐他汀可明显降低不稳定型心绞痛患者血清MCSF、OX—LDL水平，抑制了炎症过程．稳定了斑块。     

阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者巨噬细胞集落刺激因子及氧化低密度脂蛋白的影响

目的观察阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者巨噬细胞集落刺激因子及氧化低密度脂蛋白的影响。方法采用酶联免疫法检测试验组和对照组的血清M-CSF、ox-LDL水平。结果2组治疗后各指标较治疗前有显著性差异(P<0.05),而试验组血清M-CSF、ox-LDL下降幅度明显大于对照组(P<0.05)。试验组治疗前M-CSF与ox-LDL成正相关(r=0.49,P<0.05),治疗后M-CSF下降幅度与ox-LDL下降幅度亦呈正相关(r=0.61,P<0.05)。结论阿托伐他汀可明显降低不稳定型心绞痛患者血清M-CSF、ox-LDL水平,抑制了炎症过程,稳定了斑块。     

人参总皂甙诱导人内皮细胞和单核细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人内皮细胞和单核细胞表达粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的影响,及其与人粒单系血细胞发生调控的关系。方法：采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。检测内皮细胞和单核细胞中GM—CSF的表达。结果：经TSPG诱导制备的内皮细胞和单核细胞条件培养液中富含GM—CSF样活性,能显著促进人粒单系造血祖细胞的增殖分化;TSPG能显著促进内皮细胞与单核细胞的GM-CSF蛋白和mRNA表达。结论：TSPG可能通过直接和间接途径促进造血诱导微环境中的内皮细胞和单核细胞合成和分泌GM—CSF,进而促进血细胞生成。     

人参茎叶皂苷对体外条件下小鼠骨髓间充质干细胞和粒-巨噬系祖细胞增殖的影响

目的:探讨人参茎叶皂苷(GSL)在体外培养条件下对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)和粒-巨噬系祖细胞(CFU-GM)生长的影响。方法:在小鼠骨髓细胞液体培养体系和半固体培养体系中加入不同浓度的GSL,应用体外集落形成法检测GSL对小鼠MSC和CFU-GM增殖的影响。结果:在培养体系中GSL浓度为25μg/ml时,MSC和CFU-GM集落产率与对照组无明显差异(P>0.05);50～200μg/ml的范围内,MSC和CFU-GM集落产率显著高于对照组(P<0.05),其中浓度为100μg/ml时效应最明显;但在400μg/ml时,MSC和CFU-GM集落产率却低于对照组(P<0.05)。结论:GSL在一定浓度范围内对体外培养条件下的小鼠骨髓MSC具有生长促进作用,而在高浓度时表现出生长抑制作用。