银屑病患者皮损间充质干细胞的培养鉴定及其表达HES1和CXCL6的研究

目的培养鉴定银屑病患者皮损处真皮间充质干细胞(DMSC), 并研究DMSC的发状分裂相关增强子1(HES1)和趋化因子配体6(CXCL6)表达情况。方法分离培养15例银屑病患者皮损及18例健康人(健康对照组)皮肤的DMSC, 利用流式细胞仪进行表型鉴定, 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹(Western blot)检测HES1和CXCL6的mRNA及蛋白表达水平, 两组间比较采用t检验。结果银屑病组DMSC形态与健康对照组无差异, 但HES1和CXCL6基因的mRNA水平分别是对照组的3.56和3.44倍, 且差异有统计学意义(P < 0.05)。在蛋白水平, 银屑病组DMSC中HES1和CXCL6的表达明显高于对照组(P < 0.05)。结论银屑病患者皮肤DMSC HES1及CXCL6表达升高可能参与银屑病的发病。     

β趋化因子CCL20及其受体CCR6mRNA在寻常性银屑病患者皮损中的表达

目的探讨β趋化性细胞因子家族中CC趋化因子配体20(CCL20)及其受体CC趋化因子受体6(CCR6)mRNA在寻常性银屑病患者皮损中的表达情况.方法应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测35例寻常性银屑病患者皮损和18例正常人皮肤中CCL20和CCR6mRNA的表达.结果与正常人皮肤相比,寻常性银屑病患者皮损中CCL20与CCR6mRNA的表达水平均明显增高(P＜0.001).结论寻常性银屑病患者皮损中CCL20和CCR6 mRNA表达水平的上调可能与银屑病的发病有关.     

银屑病患者皮损间充质干细胞环状RNA表达异常研究

目的 探讨环状RNA（circRNA）在银屑病发病中的作用。方法 分离、培养15例银屑病患者皮损及15例健康对照皮肤间充质干细胞（MSC）,用流式细胞仪及多向分化法进行鉴定。用RNA测序法检测circRNA表达,并进行详细的生物信息学分析。挑选7个差异表达的circRNA构建circRNA-microRNA相互作用网络,从中挑选3个与其相关的microRNA进行qRT-PCR验证。银屑病患者组和对照组qRT-PCR验证结果采用两独立样本t检验。结果 RNA测序结果显示,共检测到6 323个circRNA,其中3 227个为本实验首次发现。与对照组相比,患者组中有129个circRNA呈差异表达,其中123个表达上调,6个表达下调。挑选7个差异circRNA进行circRNA-microRNA相互作用预测,显示与这7个circRNA关系密切的银屑病相关microRNA,包括miR-17-5p、miR-30e-5p、miR-142-3p/5p、miR-369-3p、miR-184、miR-4490、miR-654-3p、miR-423-5p等。qRT-PCR也证实,这7个差异circRNA在患者组也表达上调。与对照组相比,挑选的3个microRNA在银屑病皮损中低表达（t值分别为3.993、3.217、2.918,均P < 0.05）。结论 银屑病皮损MSC circRNA表达异常,并可能参与了银屑病发病。     

银屑病患者皮损间充质干细胞生物学特性研究

目的:比较银屑病患者皮损与健康人皮肤间充质干细胞(MSCs)生物学特性的差异。方法:分离和培养银屑病组(15例)与健康对照组(15例)皮肤MSCs,比较二者生长速度、基因表达差异及细胞因子分泌水平。结果:与健康对照组相比,银屑病组皮损MSCs的生长速度明显缓慢(P0.05)。2组基因测序结果示共鉴定出1 539个差异表达的mRNA,其中130个在银屑病组皮损MSCs中表达上调,1 409个表达下调,且JAK-STAT信号通路上有17个基因在银屑病组皮损MSCs中表达下调。2组细胞因子分泌水平比较,在增殖相关的细胞因子中,银屑病组表皮生长因子(EGF)和干细胞因子(SCF)表达均明显高于健康对照组(P0.05),而碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达明显减少(P0.05);在炎症相关细胞因子中,银屑病组白细胞介素(IL)-11浓度显著高于健康对照组(P0.05),而IL-3、IL-6、IL-8和肝细胞生长因子(HGF)浓度均明显低于健康对照组(P0.05)。结论:银屑病患者皮损MSCs生物学特性有异常,可能是导致患者皮损局部微环境异常的原因及银屑病的发病机制之一。     

银屑病患者皮损间充质干细胞对T细胞增殖的抑制能力减弱北大核心CSCD

目的探讨银屑病患者皮损间充质干细胞（MSC）对T淋巴细胞增殖的抑制能力。方法寻常性银屑病患者15例,进行期7例,静止期8例。健康对照组15例,取自我院泌尿外科和整形外科手术切除的正常皮肤。分离、培养患者皮损与健康人皮肤MSC,流式细胞仪及多向分化法进行细胞鉴定;将第3代皮肤MSC与健康人外周血T细胞共培养,用细胞计数法及MTI＂法观察其对T细胞增殖的影响;ELISA法检测皮肤MSC培养上清液中白介素6（IL-6）、白介素11（IL-11）、肝细胞生长因子（HGF）和转化生长因子B1（TGF—p1）的浓度。患者组和对照组T淋巴细胞增殖比较采用单因素方差分析及SNK检验,细胞因子水平比较采用两独立样本均数比较的t检验。结果倒置显微镜下,银屑病组与健康对照组皮肤MSC的细胞形态和多向分化能力相似,细胞表面均表达CD29、CD44、CD73、CD90、CDl05,而CD34、CD45及HLA—DR表达阴性。健康人外周血T细胞与银屑病患者及健康对照皮肤MSC共培养,T淋巴细胞计数健康对照组为（1．044-0．29）×105／ml,银屑病患者组为（1．674-0．34）X105／ml,两组比较,P〈0．01;M1Tr检测细胞增殖结果（A值）分别为0．275±0．007和0．317±0．021,两组比较,P〈0．01。培养上清液中,患者组MSC分泌IL-11水平（181．37±31．74ng／L高于健康对照组（130．07±29．20ng／L）,两组比较,t=5．32,P〈0．01;患者组MSC分泌IL-6（61．67±17．53ng／L）和HGF（319．24±41．03ng／L）水平低于健康对照组（分别为76．74±18．96ng／L和352．35±51．47ng／L）,两组比较,t值分别为2．61和2．25,均P〈0．05）;TGF—β1两组差异无统计学意义。结论银屑病患者皮损MSC对T细胞增殖的抑制能力减弱,可能是银屑病的发病机制之-。     

银屑病患者骨髓间充质干细胞表面标志表达情况研究

目的研究银屑病患者骨髓间充质干细胞的体外分离培养及表面标志的表达情况,为银屑病患者间充质干细胞特性研究提供了基础。方法采用密度梯度离心法分离患者与对照组骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓间充质干细胞,用流式细胞术鉴定细胞表面标志CD44、CD29、CD34、CD45、HLA-DR。结果经流式细胞仪测定的第三代培养的BMSCs表面标志CD44、CD29阳性表达,CD34、CD45、HLA-DR阴性表达。分析CD44、CD29,发现银屑病组明显低于对照组。结论密度梯度离心法结合贴壁法可获得较纯的BMSCs。银屑病患者表面标志CD44、CD29与正常人比较低表达。     

CCL27和CCR10在寻常性银屑病皮损的表达及与PASI的相关性

目的 探讨皮肤特异性趋化因子CCL27及其受体CCR10在寻常性银屑病皮损中的表达和表达强度与疾病活动性的相关性.方法 SP免疫组化染色检测20例寻常性银屑病皮损区皮损和10例正常人皮肤中CCL27、CCR10的表达,以PASI评分评价银屑病患者疾病活动性.结果 ①CCL27在20例寻常性银屑病皮损和10例正常人皮肤中表达的阳性率分别为95%和20%,两者差异有统计学意义(X²=17.86,P<0.01);CCR10在20例寻常性银屑病皮损和10例正常人皮肤表达的阳性率分别为85%和10%,两者的差异有统计学意义(X²=15.63,P<0.01).②CCL27和CCR10在皮损中的表达水平与PASI评分均呈明显正相关,r值分别为0.82和0.83,P值均<0.01.结论 CCL27和CCR10的过度表达与银屑病患者的疾病活动性相关.     

寻常性银屑病患者外周血CCR6、CCL20及IL-17mRNA的表达

目的:研究CC趋化因子受体(CCR)6、CC趋化因子配体(CCL)20及白介素(IL)-17在寻常性银屑病发病机制中的作用。方法:采用反转录-聚合酶链式反应(RT.PCR)法检测30例寻常性银屑病患者(患者组)和30例健康人(正常对照组)外周血CCR6、CCL20及IL-17 mRNA的表达水平。结果:①患者组外周血CCR6、CCL20及IL-17 mRNA表达水平显著高于正常对照组(P0.001),并且CCL20与IL-17的表达水平存在显著正相关(r=0.516,P=0.004);②患者组外周血CCR6、CCL20及IL-17mRNA水平与银屑病皮损面积及严重程度指数(PASI)评分均呈正相关(r值分别为0.514、0.363及0.533,P均0.05)。结论:CCR6、CCL20与IL-17可能与寻常性银屑病的发病密切相关。     

银屑病患者骨髓间充质干细胞体外自发向血管内皮细胞分化1例

目的:揭示1例银屑病患者骨髓间充质干细胞体外自发向血管内皮细胞分化.方法:采用密度梯度离心法分离骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓间充质干细胞,经全量换液和2次半量换液后(即培养9 d)流式细胞术鉴定正常对照细胞免疫表型,再培养2 d,采用流式细胞术和Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色法,分别对患者的细胞和正常对照细胞进行内皮细胞鉴定.结果:患者细胞在培养11 d后大部分分化为血管内皮细胞,而正常对照则仍为较纯的间充质干细胞.结论:该患者骨髓间充质干细胞体外培养自发向血管内皮细胞分化.这一现象表明银屑病患者骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化过程中可能存在异常,其间充质干细胞有易于向血管内皮细胞分化的倾向.     

银屑病患者真皮间充质干细胞对HaCaT细胞的作用

目的 研究分析不同浓度银屑病患者真皮间充质干细胞（Dennis mesenchymal stem cells,DMSCs）对人永生化角质形成细胞（HaCaT）的作用.方法 取银屑病患者和正常人的真皮,获得纯度高的DMSCs,将HaCaT在Transwell小室下室接种,同时按照第5代DMSCs与HaCaT细胞之间的比例（1：1、5：1、10：1）将DMSCs分3组接种在Transwell上室,并设正常对照组和自然增殖组,采用实时细胞分析系统（RTCA）对HaCaT细胞进行增殖检测,培养74 h后用细胞计数法检测HaCaT细胞的数量.结果 共培养组较自然增殖组HaCaT细胞计数减少,与健康对照组相比,银屑病患者组HaCaT细胞计数减少不明显,以银屑病患者DMSC与HaCaT细胞按照1：1共培养组为著.结论 ①DMSCs对HaCaT细胞增殖有抑制作用.②与正常对照组、自然增殖组和其他比例组相比银屑病患者DMSCs与HaCaT 1：1共培养组对HaCaT细胞增殖抑制作用减弱更显著.     

间充质干细胞在银屑病中的应用

【摘要】 间充质干细胞是干细胞家族的重要成员,具有自我更新、多向分化潜能和免疫调节作用及低免疫原性等特点。有文献报告间充质干细胞用于治疗银屑病获得不同程度的疗效,且有较长的疾病缓解期。本文综述间充质干细胞在银屑病中的应用及相关研究进展。     

FoxM1在寻常性银屑病患者皮损中的表达

目的研究寻常性银屑病患者皮损中Fox M1(forkhead box M1)表达情况。方法寻常性银屑病及正常对照标本各30例,采用En Vision二步法进行免疫组化染色。结果 Fox M1在正常皮肤组织中表达减低,在寻常性银屑病皮损染色强度显著增高(Z=-4.965,P=0.000,P0.05)。结论 Fox M1可能与银屑病皮损角质形成细胞过度增生相关。     

间充质干细胞及其外泌体与Th17/Treg对银屑病发病机制的研究进展

【摘要】 Th17/Treg细胞失衡是银屑病发病机制中被普遍认可的免疫发病机制之一。间充质干细胞（MSC）可抑制Th17细胞的增殖分化,诱导Treg细胞增殖。MSC分泌的外泌体是 MSC进行细胞间信息交流与物质转运的重要载体。研究发现,MSC源性外泌体有与MSC类似的免疫调节作用,可抑制Th17细胞增殖,诱导Treg细胞分化。近年来许多研究表明,银屑病患者骨髓及皮损处皮肤MSC的异常与银屑病的发生有关,但其机制尚不清楚。本文阐述正常MSC及其外泌体对维持Th17/Treg平衡的作用,为研究银屑病患者骨髓及皮损处皮肤MSC异常是如何参与到银屑病的发病提供思路。     

银屑病患者骨髓造血干细胞差异表达基因的筛选与鉴定

目的 探讨骨髓造血干细胞在银屑病发病中的作用。方法 分选纯化人骨髓造血干细胞,构建寻常性银屑病患者与正常人对照者骨髓造血干细胞差异表达的基因文库,对经菌液PCR及斑点杂交筛选出的阳性克隆进行基因测序、基因鉴定及功能分析,并检测银屑病患者及健康对照者骨髓造血干细胞中干扰素γ及TMSB10胸腺素的mRNA水平。结果 正向库中鉴定出干扰素γ,酪氨酸磷酸酶,SUMO1激活酶等9个基因。反向库中鉴定出TMSB10胸腺素等8个基因。银屑病患者骨髓造血干细胞的干扰素γ mRNA水平为正常对照组的47.5倍,而正常人对照者TMSB10胸腺素mRNA水平是患者表达量的22.6倍。结论 银屑病患者造血干细胞中干扰素γ、胸腺素等17个基因表达的异常可能与银屑病的发病有关。     

人真皮间充质干细胞对白癜风患者皮损周围CD8+ T淋巴细胞表达和分泌白介素13的影响

【摘要】 目的 探讨人真皮间充质干细胞（DMSC）对白癜风患者皮损周围CD8+ T淋巴细胞分泌表达白介素（IL）13的影响。 方法 细胞增殖检测法（MTS）检测重组IL-13（rIL-13）对黑素细胞增殖的影响。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法分别检测6例进展期寻常型白癜风患者皮损周围及外周血中CD8+ T淋巴细胞中IL-13基因和蛋白表达。实时荧光定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）技术和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测DMSC与白癜风患者皮损周围CD8+ T淋巴细胞共培养前后细胞IL-13 mRNA水平和上清蛋白水平。 结果 不同浓度（10、50、100、250、500 μg/L）的rIL-13作用黑素细胞24、48、72、96 h后黑素细胞的增殖与对照组比较均未见明显变化（均P > 0.05）。白癜风患者皮损周围及外周血中CD8+ T淋巴细胞均可表达IL-13,但皮损周围CD8+ T淋巴细胞表达IL-13更显著。将皮损周围CD8+ T淋巴细胞和DMSC共培养,CD8+ T淋巴细胞IL-13 mRNA（0.100 0 ± 0.002 4）和蛋白［（1 509.62 ± 48.44） ng/L］的表达水平均显著低于单独培养的CD8+ T淋巴细胞［mRNA：0.383 2 ± 0.018 7,蛋白：（5 507.98 ± 34.11） ng/L,均P < 0.05］。 结论 白癜风患者皮损周围CD8+ T淋巴细胞高表达IL-13,DMSC能够有效地抑制其表达IL-13,或许可作为白癜风的治疗靶点之一。     

Biological characteristics and gene expression pattern of bone marrow mesenchymal stem cells in patients with psoriasis

Mesenchymal stem cells (MSCs) have immunoregulatory and proangiogenic effects and are suggested to be involved in the pathological processes of immune‐related diseases, including psoriasis. Biological characteristics of bone marrow MSCs (BMSCs) from patients with autoimmune diseases, such as systemic lupus erythematosus or rheumatoid arthritis, but not psoriasis, have been characterized. We compared the gene expression profile and biological characteristics of BMSCs from patients with psoriasis and healthy controls. Although the phenotype, differentiation potential and ability to support CD34⁺ cell proliferation were similar to those of normal BMSCs, psoriatic BMSCs showed aberrant proliferative activity, increased apoptosis rate and a characteristic gene expression profile. These aberrations may develop after the abnormal immune response in psoriasis and result in BMSC dysfunction. The functionally deficient BMSCs may then fail to suppress overactive immune cells, thereby contributing to the pathogenesis of psoriasis.     

系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞衰老的研究进展

系统性红斑狼疮（SLE）是一种累及多器官、多系统的临床表现多样的慢性自身免疫性疾病。骨髓间充质干细胞（BMSC）是一类中胚层来源的非造血干细胞,是造血微环境的重要成分。多项研究表明,SLE是一种干细胞疾病,不仅造血干细胞存在异常,间充质细胞（MSC）也存在异常,具体表现为：生物学特征改变、细胞骨架及超微结构异常、端粒缩短、端粒酶及SA-β-Gal活性增强、分化能力减弱、免疫调节功能异常等衰老特征;其衰老机制可能与MSC内p53/p21cip1、p16INK4a/Rb、p27kip1/pTEN表达上调、ROS水平升高、内质网应激、表观遗传学改变等有关。     

In situ expression of messenger RNA of interleukin-1 and interleukin-6 in psoriasis: interleukin-6 involved in formation of psoriatic lesions

Summary Psoriasis is a disease of abnormal proliferation and differentiation of epidermal cells. Several cytokines released by keratinocytes are implicated as factors responsible for this pathological condition of the epidermis. In order to elucidate the role of these cytokines in psoriasis, messenger RNA (mRNA) expression of interleukin-1 (IL-1) and IL-6 in psoriatic epidermis was investigated using biotin-labelled complementary DNA (cDNA) of the cytokines. Messenger RNA of IL-1 was weakly detected in some normal healthy epidermis specimens and more strongly in all the perilesional uninvolved psoriatic epidermis specimens. It was also expressed in the transitional zone between uninvolved and fully developed psoriatic skin, but was not expressed in lesional skin. In contrast, IL-6 mRNA was rarely expressed in normal healthy epidermis, but was expressed in perilesional uninvolved psoriatic epidermis, in the transitional zone and in the fully developed lesional epidermis, with the maximum intensity in the transitional zone. Expression of mRNA of IL-6 receptor showed a similar tendency to that of IL-6. It was expressed in psoriatic epidermis, most strongly in the transitional zone, but not in normal healthy epidermis. IL-6 was demonstrated immunohistochemically in psoriatic epidermis, but IL-6 receptor was demonstrated only in the transitional zone. Thus IL-6 and its receptor expression correlated well with the formation of psoriatic lesions where IL-1 may initiate their expression. IL-6 may play an important role in the pathogenesis of psoriasis.     

RNA‐seq analysis of Lgr6+ stem cells and identification of an Lgr6 isoform

We studied Lgr6⁺ stem cells in experimental UV carcinogenesis in hairless mice. For further characterization through RNA‐seq, these stem cells were isolated by FACS from transgenic hairless mice bearing an EGFP‐Ires‐CreERT2 reporter cassette inserted into exon 1 of the Lgr6 gene (purity confirmed by human ERT2 expression). Between Lgr6/EGFP⁺ and Lgr6/EGFP^? basal cells (Tg/wt), 682 RNAs were differentially expressed, indicating stemness and expression of cancer‐related pathways in Lgr6/EGFP⁺ cells. We discovered that suspected “Lgr6 null” mice (Tg/Tg) expressed RNA of an Lgr6 isoform (delta‐Lgr6, lacking 74 N‐terminal aa) which could be functional and explain the lack of a phenotype.