单宁酶的性质与应用研究进展

单宁酶,又称单宁酯酰水解酶(Tannase,EC 3.1.1.20),可水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键,生成没食子酸和葡萄糖,单宁酶在自然界中分布广泛,主要用于食品工业、精细化工等领域.并综述了单宁酶研究与应用的最新进展.     

黑曲霉B0201生料发酵产单宁酶的提取及酶学性质研究

对黑曲霉B0201利用五倍子为诱导物生料发酵产胞外单宁酶的提取及酶学性质进行了研究。结果表明:硫酸铵两步沉淀的饱和度为40%和90%;该酶的最适温度为40℃,最适pH为5·0,低于60℃时的热稳定性高,60℃以上迅速失活。Zn2+、Mg2+、吐温80、EDTA等对酶活力无明显影响,Fe3+、Cu2+、Fe2+、Ba2+、Mn2+、Ca2+、Al3+等对酶有抑制作用。以没食子酸丙酯（PG）为底物,单宁酶的米氏常数Km为0·514mmol/L,Vmax为71·8μmol/L·min。      

产单宁酶海洋短梗霉的分离筛选及酶学性质的研究

单宁酶能水解单宁物质中的酯键,在食品和饲料工业中有重要应用价值。 该研究从海洋微生物中获得了几株高产单宁酶 菌株,其中菌株95水解圈与菌落（直径）大小的比值最大,对其进行生理生化鉴定,并扩增内转录间隔区（ITS）序列作进化树分析, 鉴定菌株95号为Aureobasidium subglaciale,其在发酵培养基中发酵72 h达到最大酶活力323.2 U/mL。 考察了温度和pH对酶促反应 影响,同时考察了粗酶的热稳定性和pH稳定性。 结果表明,菌株95号所产单宁酶最适反应温度为50 ℃,该酶在30 ℃、40 ℃、50 ℃水浴 保温4 h,相对酶活80%以上,具有较好的热稳定性;最适反应和最稳定pH均为6.0,在pH 3.0～7.0之间均有较高的酶活,表示其具有 较广的pH值稳定性。     

微生物几丁质酶的研究进展及应用现状

几丁质酶（chitinase）是一类可催化几丁质水解为N-乙酰氨基葡萄糖寡聚体或单体的糖苷水解酶,广泛存在于微生物（真菌、细菌、放线菌与病毒）及动植物中,因其特殊的生理功能而被广泛应用于生物防治、医学应用、废弃物处理及环境保护等领域。文章综述了微生物几丁质酶的来源与分类、发酵条件、酶学性质及应用领域,以期为几丁质酶的进一步开发应用提供理论指导。     

单宁酶的研究与应用

运用基因工程手段,构建高效表达单宁酶的黑曲霉重组菌株,并对重组酶活性及酶学性质进行研究,以期提高单宁酶的表达,更好地实现单宁酶在茶饮料、饲料等行业的重要作用。以内源高表达的glaA基因位点为整合靶位点,集成glaA多拷贝强启动子PglaA6R和信号肽SglaA,构建单宁酶基因AnTan黑曲霉重组表达载体pSZHG6R-AnTan,采用农杆菌介导法转化黑曲霉,获得单宁酶黑曲霉纯合重组菌株A1。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测结果表明,目的蛋白大小约为76 kDa;以10%糊精为碳源摇瓶发酵至11 d时,酶活最高达到134.36 U·mL⁻¹,约为宿主菌株的192倍。酶学性质研究表明,最适温度为50 ℃,高温时热稳定性较差;最适pH为7.0。K⁺和Ca²⁺对重组酶没有影响;Mg²⁺对重组酶有微弱的促进作用;Zn²⁺对重组酶有明显的促进作用;Cu²⁺和Fe²⁺对重组酶有微弱的抑制作用;Mn²⁺和EDTA对重组酶有明显的抑制作用。研究结果为进一步优化单宁酶的分泌表达提供了有价值的参考。     

单宁酶制备研究进展

单宁酶主要由曲霉属等微生物发酵制备。它能够水解单宁中的酯键和缩酚羧键,生成重要的工业原料没食子酸等化合物。单宁酶已广泛应用于食品饮料、化妆品工业和饲料工业等领域。文章着重综述国内外在单宁酶菌种选育、培养基发酵体系、发酵生产、提取与分离纯化、固定化技术等制备方法方面研究的新进展,分析单宁酶制备研究的发展趋势。     

茶树单宁酶的原核表达及酶学性质表征

基于大肠杆菌的密码子偏好性,对茶树单宁酶基因CsTanA碱基进行优化,基因优化后GC含量为51.9%,密码子适应指数为0.8,优化前后基因序列的一致性为77.8%,以pET-30a为表达载体对优化基因进行重组表达及酶学性质分析。A600 nm约0.6的重组菌株以1 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷在30 ℃诱导12 h,破碎上清液重组单宁酶rCsTanA比活力为0.35 U/mg,镍柱纯化后的rCsTanA比活力为1.53 U/mg,纯化倍数约为4.4。纯化重组单宁酶rCsTanA分子质量为39 kDa,其最适温度和最适pH值分别为40 ℃和7.0。不同金属离子浓度对酶活力的影响存在差异,在低浓度（1 mmol/L）条件下,K＋增强了rCsTanA 37.28%的酶活力,而Ag＋、Cu2＋和Fe3＋使该酶活力均丧失80%以上;而在高浓度（5 mmol/L）条件下,Cu2＋表现出完全抑制rCsTanA活性的特性。表面活性剂（十二烷基硫酸钠、吐温80和十六烷基三甲基溴化铵）和极性溶剂（甲醇、乙醇、丙三醇、异丙醇及丙酮）对rCsTanA活性具有较强抑制作用。本研究不仅实现了茶树单宁酶的表达和酶学性表征,同时也丰富了单宁酶资源,为植物单宁酶的进一步应用研究提供了必要的理论支撑。     

微生物谷氨酰胺酶的研究进展

谷氨酰胺酶广泛分布于细菌,酵母和真菌等微生物中,不少微生物谷氨酰胺酶的蛋白质结构已被研究或确定。文章通过介绍微生物谷氨酰胺酶在国内外的研究与开发现状,综述了谷氨酰胺酶的微生物来源、蛋白结构、酶学性质、生产以及应用,特别是在食品工业和医学上的应用,并对其研究前景进行了展望。     

植物单宁研究进展综述

单宁是一类自然界中广泛存在的多元酚化合物,具有结构多样性和生物活性,在制革、医药卫生、化妆品、食品工业、农业等方面具有重要的应用价值,作为天然产物,具有不可估量的开发利用价值,对其研究非常重要。本文就长期以来单宁提取方法和应用方面的研究做了较为全面细致的综述,希望为单宁研究者提供一些有价值的参考。     

微生物来源的透明质酸酶

对微生物来源的透明质酸酶的结构、降解机制、分子生物学与应用等研究现状进行综述。     

微生物中苹果酸脱氢酶研究现状及展望

苹果酸脱氢酶（MDH）EC 1.1.1.37是一类广泛存在于自然界生物体内的氧化还原酶,主要参与三羧酸循环（TCA）、乙醛酸循环、苹果酸-天冬氨酸循环等代谢途径。该酶可催化草酰乙酸和苹果酸之间的可逆转化,是细胞中心代谢通路中的关键酶之一。MDH广泛应用于心肌梗塞、急性实质性肝损伤、肝癌、肺癌的早期诊断,是常用的临床诊断用酶,并在生物制药、化工检测等领域也具有广泛市场需求。该文综述了微生物中MDH的蛋白结构、催化机制以及活性调节,并对其酶学性质、医疗诊断及免疫领域的应用、工业领域的应用以及生产方面,阐述了苹果酸脱氢酶的研究进展,以期为苹果酸脱氢酶的进一步开发和利用提供参考。     

微生物热稳定几丁质酶的研究进展

热稳定几丁质酶具有热稳定性和酸碱适应性,能在高温条件下保持良好活性。目前,寻找具有工业化潜在应用价值的新酶源越来越受到关注。本文简述了热稳定几丁质酶的微生物来源,热稳定性机制,及其工业应用和发展前景。      

白酒酿造过程中的微生物研究进展

在传统白酒酿造过程中,微生物对白酒品质、风味的影响至关重要。白酒的品质与酒中微生物的研究程度有着极为密切的关系,风味微生物更是影响白酒品质的关键因素。该文综述了白酒发酵过程中的微生物研究现状,主要概述了白酒发酵期间的细菌、酵母菌、霉菌的类别、作用机理及其变化过程,并揭示了现代分子生物技术下的白酒微生物菌群多样性,以期深入研究微生物与白酒风味形成之间的关系且为解析白酒发酵的本质奠定基础。     

我国黄酒酿造微生物的研究进展

对黄酒的浸米浆水、酒药、酒母、酒曲、酒醪中微生物资源和其他米酒微生物资源的研究进展进行综述,并总结了黄酒微生物育种技术的发展成果。基于我国黄酒微生物的研究现状,利用现代生物技术提升黄酒微生物的研究水平,全面、深入和系统地研究黄酒微生物资源、多样性、系统发育、生态分布、酿造功能、菌种选育及其环境微生物对黄酒生产的影响等诸多课题,对于我国黄酒产业健康发展具有重要理论意义和应用价值。      

单宁酶对酯型儿茶素作用研究

通过对单宁酶分解酯型儿茶素的研究，找出在恒定的pH与温度条件下，底物浓度与分解时间及单宁酶的添加量的变化关系，并指出用单宁酶解决茶汤浑浊过程中需注意的问题。     

白酒中产风味微生物研究进展

白酒中的风味物质主要来自原料、酒曲及微生物发酵过程,而微生物发酵是白酒风味的主要来源。解析微生物与风味物质之间的作用关系,有利于阐明潜在风味功能菌群和控制白酒产品品质。该文对近年来三大基本香型白酒产风味功能微生物有关研究成果进行了总结归纳,包括微生物多样性与风味形成之间相关性研究以及风味微生物对白酒产品质量的影响,为白酒功能微生物的研究和白酒品质的升级提供理论参考。     

中国酒曲微生物研究进展

综述了中国酒曲微生物在分离与鉴定、组成、性能和育种方面的研究进展,并简单介绍了中国酒曲微生物在酿酒工业、乳酸和单细胞蛋白生产、功能保健食品与食品添加剂、酶制剂等领域的应用,最后展望了中国酒曲微生物研究的广阔前景。     

交联酶聚集体法制备单宁酶及固定化酶性质研究

交联酶聚集体法(cross-linked enzyme aggregates,CLEAs)是一种新型的无载体酶固定化方法。使用该法固定化黑曲霉产单宁酶,制备无载体固定化单宁酶(Cross-linkedenzyme aggregates-tannase,CLEAs-TA),并对其制备条件、结构特征、酶学性质进行分析。结果表明,最优制备条件为单宁酶游离粗酶液在冰水浴中经80%的硫酸铵沉淀30min后,以1.5%戊二醛水溶液进行酶聚集体交联反应,可获得较高活性、较高稳定性的交联酶聚集体,酶活回收率达47.33%,对酯键水解作用的最适温度、最适pH值分别为50℃、4.5,与游离酶相比,表现更高的pH及温度稳定性,重复使用6次后,活力剩余32.86%,其良好的操作稳定性有利于没食子酸丙酯高效转化为没食子酸及广泛应用于水解茶饮料中单宁的反应。