富血小板血浆对痤疮动物模型治疗作用的实验研究

目的建立兔耳痤疮动物模型,观察富血小板血浆(PRP)对兔耳痤疮动物模型的治疗效果。方法用油酸和痤疮丙酸杆菌菌液建立新西兰大白兔兔耳痤疮动物模型;将造模成功的新西兰大白兔分为分为PRP治疗组、生理盐水组和异维A酸乳膏阳性对照组(7只/组),于各组兔耳痤疮皮损处外涂PRP、生理盐水和异维A酸乳膏,1次/d,连续治疗14 d,取兔耳痤疮处皮肤组织活检,镜下观察病理改变。结果外用油酸涂抹和痤疮丙酸杆菌菌液注射14 d后,兔耳皮肤外观和组织学观察呈痤疮样改变,与人类痤疮相似;3组动物治疗14 d,根据疗效组织病理学判定标准对结果判定:PRP组3例痊愈,4例明显好转;异维A酸乳膏组5例痊愈,2例明显好转;生理盐水组1例明显好转、5例好转、1例无效(P0.01)。结论 PRP对兔耳痤疮动物模型具有良好的治疗作用,与异维A酸乳膏有着相近的治疗效果。     

青蒿琥酯对痤疮丙酸杆菌的体外抑菌作用及机制研究

目的探究青蒿琥酯对痤疮丙酸杆菌的体外抑菌作用及相关机制。方法采用微量肉汤稀释法检测痤疮丙酸杆菌标准株和临床株,观测青蒿琥酯联合盐酸多西环素的最小抑菌浓度(MIC),并观察2种药物对痤疮丙酸杆菌生长的动态影响。采用扫描电镜观察青蒿琥酯作用后痤疮丙酸杆菌的形态学变化。结果青蒿琥酯MIC为0.750~3.000 mg/mL,盐酸多西环素MIC为0.040~0.160μg/mL,两药联合使用呈相加或协同抑菌作用。两药在单药和联合使用时的MIC差异有统计学意义(P<0.05)。细菌生长动态观察结果显示两药联合使用可降低药物浓度,且抑菌作用起效快、持续时间长。扫描电镜观察结果显示青蒿琥酯作用后菌体变短,表面有皱瘪、凹陷、弯折等改变。结论青蒿琥酯对痤疮丙酸杆菌有一定抑菌作用,与盐酸多西环素联合使用抑菌效果优于单独使用,且对痤疮丙酸杆菌形态有影响。     

富血小板血浆对兔烫伤创面愈合的实验研究

目的：应用富血小板血浆（PRP）治疗兔烫伤创面的动物模型,研究兔自体PRP治疗烫伤创面的效果。方法：参照Sonnleither法制作PRP,全过程遵循无菌操作要求。大白兔随机分为实验组和控制组,每组12只,并造两侧为深Ⅱ度创面的烫伤模型。实验组使用PRP,控制组使用磺胺嘧啶银（SD-Ag）。利用SPSS17.0统计软件检测,以x-±s表达实验数据,P〈0.05为差异有统计学意义。结果：创面面积随时间延长而逐渐缩小,以实验组创面愈合尤为显著。7d实验组肉芽组织灶更显著;10d实验组较控制组毛细血管量及成纤维细胞更丰富,创缘上皮增殖更显著。14d实验组显示毛细血管数少而大部分成纤维细胞转化为纤维细胞,大量新生表皮细胞覆盖伤口。两组愈合面积均数之差均有统计学意义（P〈0.05）。结论：富血小板血浆可以促进大白兔烫伤创面愈合,愈合创面质软,无瘢痕形成。     

过期单采血小板来源富血小板血浆的制备及体外功能研究

目的探讨过期单采血小板(SDP)制备富血小板血浆(PRP)的方法及在体外对内皮细胞迁移和成血管能力的影响。方法采用过期SDP使用离心浓缩法制备PRP,并采用凝血酶法激活PRP,应用ELISA试剂盒测定血小板衍生生长因子-AB(PDGF-AB)、血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)水平,通过划痕试验和成血管试验评估其对内皮细胞的迁移和成血管能力的影响。结果过期SDP来源的PRP和SDP中血小板浓度分别为(1 723±352)×10~9/L和(398±52)×10~9/L,前者更高,差异有统计学意义(P0.05);ELISA检测PDGF-AB、VEGF和TGF-β_1水平,在过期SDP来源的PRP中分别为(43.23±15.13)ng/mL、(327.61±72.55)pg/mL、(77.13±17.27)ng/mL;在SDP中分别为(7.16±2.49)ng/mL、(136.91±25.97)pg/mL、(18.90±4.59)ng/mL,差异均有统计学意义(P0.05);划痕试验中,与SDP比较,过期SDP来源的PRP对内皮细胞的迁移能力有明显影响(P0.05);成血管试验中,过期SDP来源的PRP促成血管能力优于SDP。结论过期SDP能制备具有高浓度生长因子的PRP,并在体外对内皮细胞的迁移和成血管能力有明显的促进作用。     

中药双黄连对泛耐药鲍曼不动杆菌的体外抑菌实验研究

目的 研究双黄连粉针剂在体外对泛耐药鲍曼不动杆菌的抑菌作用。方法 采用肉汤稀释法,在体外进行双黄连粉针剂、双黄连粉针剂联合头孢哌酮/舒巴坦对泛耐药鲍曼不动杆菌的抑菌试验。结果 双黄连对泛耐药鲍曼不动杆菌的MIC为20 mg/mL,双黄连和头孢哌酮/舒巴坦联合作用于泛耐药鲍曼不动杆菌与单用双黄连或头孢哌酮/舒巴坦比较,单独用药的浓度大大降低。结论 双黄连对泛耐药鲍曼不动杆菌有抑制作用,中药联合抗生素应用可降低抗生素使用量,以达到减少和延缓细菌耐药的目的。     

富血小板血浆优化培养间充质干细胞的实验研究

目的探讨以人富血小板血浆(PRP)取代动物血清培养可供临床应用的间充质干细胞(MSC)的新方法。方法骨髓标本取自行全髋关节置换术的造血功能正常患者的近端股骨。有核细胞2×10~5/cm~2接种于25 cm~2培养瓶中培养 MSC,比较含12.5% 胎牛血清(FCS)和12.5% 马血清的完全 Dexter 培养液,含10.0% FCS 的α-MEM 培养液和含5% PRP 的α-MEM 培养液三种培养体系的扩增效果。有核细胞1×10~6与采自健康供者髂骨的相同数量的骨髓细胞分别接种于25 cm~2培养瓶,14 d 后计数成纤维细胞集落(CFU-F)。结果从近端股骨中分离和扩增的细胞呈典型的成纤维样细胞形态,表型鉴定 CD34、CD45阴性,SH2(CD105)、SH3(CD73)、Thy-1(CD90)阳性,体外诱导可向成骨细胞分化。其中含5% PRP 的培养体系较其他两种传统培养方法具有显著增强的 MSC 扩增效果且不改变细胞表型及分化功能;来源于近端股骨的骨髓细胞 CFU-F 较常规髂骨穿刺物显著增高(分别为89±17和16±5,P<0.01)。结论建立以 PRP 取代 FCS 的培养体系,并采用取自外科手术中近端股骨的骨髓标本可在体外高效扩增可备临床细胞治疗应用的 MSC。     

血小板减少性紫癜激活的富血小板血浆凝固时间实验观察

目的研究激活的富血小板血浆凝固时间（APRPCT）测定对血小板减少性紫癜出血的预示作用及意义,探讨该实验方法与临床实验室常用的血小板计数、血浆凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、血浆凝血酶时间、血浆纤维蛋白原测定间的相关性。方法制备激活富血小板血浆凝固时间激活试剂,检测健康对照组及血小板减少性紫癜组APRPCT,观察两组间差异。结果硅微粒激活的富血小板血浆凝固时间,健康对照组、血小板减少性紫癜组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论激活的富血小板血浆凝固时间可用于血小板减少性紫癜的出血预示。     

富血小板血浆对周围神经损伤修复的研究现状

正周围神经损伤是临床常见病,可以造成患者严重残疾,影响到患者的生活质量。目前神经自体移植是周围神经损伤修复的最佳方法,然而也有其受限之处,需要在不同的位置进行两次手术,除了供区神经的功能丧失,也会产生更严重的并发症~([1,2])。周围神经损伤能否顺利再生修复仍是临床上的一大难题。Platelet-rich plasma(PRP)有较强的局部止     

自体富血小板血浆替代动物血清体外诱导培养人骨髓基质干细胞的实验

目的:用一种新的人骨髓基质干细胞培养方法,以满足细胞培养过程应中对各类细胞因子的需求,同时尽量减少细胞培养过程中动物源性抗原物质的引入,达到组织工程骨临床应用中细胞的数量与生物学特性要求。方法:实验于2004-03/2005-03在南方医科大学组织工程实验室完成。①自体富血小板血浆的获取:将抽取的自体200mL,加抗凝剂混匀,两次离心。第1次在20℃,3000r/min离心10min。取上清及分界面下3mm部分置另一离心管中,第2次在20℃,以3600r/min离心15min。弃上层3/4余部分在旋涡振荡器上轻震荡使混匀,即为富血小板血浆。,剩将富血小板血浆与催化剂溶液(100g/L氯化钙、400IU/mL凝血酶)含以体积比9∶1混合,混匀后以0.22μm滤膜过滤即为富血小板血浆复合因子萃取液。②人骨髓基质干细胞的获取和培养:10名成年健康志愿者(排除其他系统疾病),男7名,女3名;15～35岁,平均年龄27.3岁。抽取骨髓5mL。将获得的有核细胞以2×10接种于10cm培养瓶(100mL/L72富血小板血浆配比低糖DMEM)培养。传代细胞用含100mL/L富血小板血浆,50mg/L抗坏血酸,1×10-8mol/L地塞米松,1×10-3mol/Lβ-甘油磷酸钠诱导培养,快速扩增后,采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察各细胞形态及细胞增值情况,碱性磷酸酶染色与钙结节染色等方法对细胞进行生物学特性检测。结果:①人骨髓基质干细胞形态学观察结果:人骨髓基质干细胞接种后2～4h开始贴壁,24h后细胞完全贴壁,呈多角型、梭型。6～8d后,细胞可长满瓶底并呈现单层细胞融合。传代培养后细胞生长迅速,传代诱导后,接种细胞一两天可长满瓶底。细胞为长梭型或不规则多边形,并有伪足伸出,胞核位于细胞一端。细胞生长至第8代生长明显变缓,10代以后细胞内开始出现颗粒样沉积物,并有细胞脱落飘浮于液体中。扫描电镜观察,黏附细胞为梭型或多角型表现,并有多个突起呈不规则形状。②钙结节茜素红染色结果:第3代细胞培养融合后,继续培养至形成密集的细胞团簇,中心出现细胞基质的沉积,茜素红染色可以清晰的显示钙结节。③碱性磷酸酶染色:细胞诱导培养第3代后可见胞质内有大量灰黑色颗粒或块状沉淀,呈现碱性磷酸酶染色阳性。结论:①以自体富血小板血浆替代动物血清体外诱导培养人骨髓基质干细胞,碱性磷酸酶染色与钙结节染色结果显示细胞具有良好的成骨细胞生物学特性。②其所培养的细胞数量及生物学特性能快速达到临床应用的需求,是一种良好的培养方法。     

自体富血小板血浆替代动物血清体外诱导培养人骨髓基质干细胞的实验

目的：应用一种新的人骨髓基质干细胞培养方法，以满足细胞培养过程中对各类细胞因子的需求，同时尽量减少细胞培养过程中动物源性抗原物质的引入，达到组织工程骨临床应用中细胞的数量与生物学特性要求。方法：实验于2004-03／2005-03在南方医科大学组织工程实验室完成。①自体富血小板血浆的获取：将抽取的自体200mL，加抗凝剂混匀，两次离心。第1次在20℃，3000r／min离心10min，取上清及分界面下3mm部分置另一离心管中，第2次在20℃，以3600r／min离心15min。弃12层3／4，剩余部分在旋涡振荡器上轻震荡使混匀，即为富血小板血浆。将富血小板血浆与催化剂溶液（含100g/L氯化钙、400IU／mL凝血酶）以体积比9：1混合，混匀后以0．22μm滤膜过滤即为富血小板血浆复合因子苹取液。②人骨髓基质干细胞的获取和培养：10名成年健康志愿者（排除其他系统疾病），男7名，女3名；15～35岁，平均年龄27．3岁。抽取骨髓5mL。将获得的有核细胞以2&;#215;10^7接种于10cm。培养瓶（100mL／L富血小板血浆配比低糖DMEM）培养。传代细胞用含100mL／L富血小板血浆，50mg／L抗坏血酸，l&;#215;10^-8ol／L地塞米松，1&;#215;10^-3mol／L β-甘油磷酸钠诱导培养，快速扩增后，采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察各细胞形态及细胞增值情况，碱性磷酸酶染色与钙结节染色等方法对细胞进行生物学特性检测。结果：①人骨髓基质干细胞形态学观察结果：人骨髓基质干细胞接种后2-4h开始贴壁，24h后细胞完全贴壁，呈多角型、梭型。6～8d后，细胞可长满瓶底并呈现单层细胞融合．传代培养后细胞生长迅速，传代诱导后，接种细胞一两天可长满瓶底。细胞为长梭型或不规则多边形，并有伪足伸出，胞核位于细胞一端。细胞生长至第8代生长明显变缓，10代以后细胞内开始出现颗粒样沉积物，并有细胞脱落飘浮于液体中。扫描电镜观察．黏附细胞为梭型或多角型表现，并有多个突起呈不规则形状。②钙结节茜素红染色结果：第3代细胞培养融合后，继续培养至形成密集的细胞团簇，中心出现细胞基质的沉积，茜素红染色可以清晰的显示钙结节．③碱性磷酸酶染色：细胞诱导培养第3代后可见胞质内有大量灰黑色颗粒或块状沉淀，呈现碱性磷酸酶染色阳性。结论：①以自体富血小板血浆替代动物血清体外诱导培养人骨髓基质干细胞，碱性磷酸酶染色与钙结节染色结果显示细胞具有良好的成骨细胞生物学特性。②其所培养的细胞数量及生物学特性能快速达到临床应用的需求．是一种良好的培养方法。     

公丁香等17种中草药对肠道杆菌的体外抑菌实验

探讨公丁香等17种中草药对肠道杆菌的抑菌效果.方法:采用平板稀释法,分别测定17种中草药的水提取物对9种肠道杆菌的最低抑菌浓度(MIC).结果:公丁香、虎杖、使君子和秦皮对9种肠道杆菌均有不同程度的抑菌作用,其中公丁香对志贺氏痢疾杆菌及福氏痢疾杆菌的MIC仅为6.25g/L,对其他7种肠道杆菌的MIC值均为12.5g/L;黄芩等11种中草药对部分肠道杆菌有一定抑菌作用;未发现金银花和地丁的体外抑菌作用.结论:公丁香、虎杖、使君子和秦皮对9种肠道杆菌均有一定程度的抑菌作用,以公丁香的抑菌效果最好.     

血小板聚集率与富血小板血浆血小板浓度关系的研究

目的:探讨富血小板血浆(PRP)中血小板浓度对血小板聚集率的影响,初步确定诱聚剂二磷酸腺苷(ADP:5.0和15μmol/L)和花生四烯酸(AA:500.0μg/ml)对血小板浓度的允许范围。方法:选取健康查体人群枸橼酸钠抗凝外周血标本72例,每12例标本混合为1组,分6组。将各组标本混合后,分别制备不同水平的血小板浓度,利用海伦娜血小板聚集分析仪分别检测AA和ADP诱导下的6组不同血小板浓度水平的血小板聚集率。结果:当诱聚剂浓度升高,不同浓度的血小板聚集率会随之增高。随着血小板浓度升高,AA和ADP(15μmol/L)诱导的血小板聚集率均呈现先快速上升而后平缓的趋势,其中当Plt浓度低于200×10~9/L时,AA诱导的血小板聚集率随着血小板浓度的降低出现陡降,而ADP诱导的血小板聚集率随着血小板浓度的升高稍平缓些。当Plt200×10~9/L,AA 500μg/ml和ADP 15μmol/L诱导时,不同浓度Plt的血小板聚集率变化平缓、波动较少,较稳定。结论:进行血小板聚集率检测时,AA和ADP诱聚剂对应的适宜Plt浓度应大于200×10~9/L。     

鱼腥草提取物体外抑菌实验研究

目的:探讨鱼腥草不同提取物对3种常见微生物的体外抑菌效果。方法:采用液体培养基试管递倍稀释法,测定提取物对3种常见细菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果:鱼腥草总提取物(挥发油和水提物混合)对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及肺炎链球菌的最低抑菌浓度分别为1/16、l/8、1/16,而鱼腥草挥发油饱和水溶液对3种微生物的最低抑菌浓度分别为1/2、1/2、1/4。结论:鱼腥草总提取物在抑制多种微生物的繁殖生长方面优于鱼腥草挥发油饱和溶液。     

克痢痧胶囊体外抑菌实验研究

<正>克痢痧组方源于浙南民间,应用已具一千多年的历史,克痢痧是由苍术、白芷、猪牙皂、石菖蒲、丁香、荜茇等十二种名贵中药材经现代方法研制而成,制成胶囊可克服口感不良     

富血小板血浆制备方法稳定性的研究

<正>富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)含有超过生理浓度数倍的血小板,作为一种自体血来源的产品,因获取过程创伤较小、制备简便及具有生物学治疗潜能等方面的优点,被广泛用于组织再生、创面修复、感染治疗和功能重建等领域~([1,2])。但目前实验及临床大都使用自体血液提取生长因子,这无     

利用自体富血小板血浆构建凝胶生物细胞支架的实验研究

目的分析富血小板血浆（PRP）凝胶作为组织工程细胞支架的可行性。方法抽取兔静脉血Eendersberg法制备PRP,测定PRP中血小板浓度,将PRP经激活剂激活后制备PRP凝胶生物细胞支架（PRG）,并进行扫描电镜观察。将兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）与PRG共培养,消化后将BMSCs接种再培养,观察BMSCs活性。结果通过Lendersberg两步离心法顺利制得PRP,血小板浓度与全血相比增加了3．74倍,PRP经过激活后5—10min形成胶冻状PRG,扫描电镜结果显示其具有复杂的立体网状结构,孔隙直径约50—100微米。兔BMSCs在PRG中培养3天后扫描电镜观察结果显示在PRG三维结构中,兔BMSCs在纤维素支架上附着良好,培养1周后将兔BMSCs消化分离后再接种培养,兔BMSCs生长良好。结论自体富血小板血浆凝胶生物细胞支架来源于自体,无免疫源性,本身含丰富的细胞生长因子,同时具有完整的三维结构和良好的组织相容性,是一种优良的组织工程细胞支架,具有良好的应用前景。     

富血小板血浆对体外培养骨骼肌干细胞增殖及成骨活性的作用

背景:已有研究发现富血小板血浆可以影响骨髓间充质干细胞和脂肪干细胞的生长和分化.目的:观察富血小板血浆对体外培养的骨骼肌干细胞增殖与诱导成骨的影响,探讨富血小板血浆影响骨骼肌干细胞的机制.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于 2008-06/10在上海交通大学附属第六人民医院中心实验室完成.材料:普通级新西兰大白兔9只,体质量2.5～3 kg.年龄1岁左右,雌雄不限.方法:取兔右后肢比目龟肌体外培养新西兰大白兔骨骼肌干细胞.取兔耳中央动脉血,经离心处理后制备富血小板血浆.将细胞分为实验组与对照组,实验组以含12.5%自体富血小板血浆的条件培养液干预,对照组不进行富血小板血浆干预.主要观察指标:①细胞形态学观察.②以四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性.③以碱性磷酸酶钙钴法染色、碱性磷酸酶活性测定、茜索红染色和骨钙素免疫荧光染色检测细胞成骨活件.结果:四甲基偶氮唑盐法显示富血小板血浆诱导实验组较对照组增殖明显(P<0.01);碱性磷酸酶活性较对照组增高明显(P<0.01).富血小板血浆诱导实验组碱性磷酸酶染色阳性,骨钙素免疫荧光染色阳性,茜素红染色可见钙结节形成.结论:富血小板血浆对体外培养的骨骼肌干细胞增殖与成骨分化活性具有显著的促进作用.