鸡胰岛素样生长因子2基因(IGF2)外显子区功能性SNP预测与分析

旨在采用生物信息学方法筛选鸡IGF2基因中具有潜在生物学功能的非同义单核苷酸多态性（non-synonymous single nucleotide polymorphisms,nsSNPs）位点,为开展标记辅助选择改良鸡重要经济性状提供理论参考。本研究从dbSNP数据库中检索出鸡IGF2基因的12个nsSNPs位点,利用生物信息学软件SIFT、Polyphen-2、PhD-SNP和SNAP预测其中可能的功能性SNP;使用I-Mutant3.0和Mupro方法对突变位点的氨基酸稳定性进行分析;对鸡IGF2基因编码的氨基酸序列进行多序列比对和进化位点保守性预测,并结合MutPred2预测突变可能造成的功能后果;最后使用Sopma预测IGF2野生型和突变型的蛋白质二级结构,运用I-TASSER构建它们的蛋白质三级结构。结果发现,rs740391349（E29G）、rs735633122（T30P）、rs739078786（L31P）、rs736255842（E35G）及rs736800980（V37G）这5个nsSNPs可能影响鸡IGF2的蛋白功能,且所有位点突变都会使IGF2蛋白稳定性降低。多序列比对及保守性分析显示,rs740391349（E29G）、rs735633122（T30P）和rs736255842（E35G）为高度保守并暴露的功能性残基,MutPred2与二级结构分析结果表明,rs735633122（T30P）和rs736255842（E35G）这两个位点上的突变都导致了α螺旋百分比下降。三级结构分析表明,rs735633122（T30P）和rs736255842（E35G）这2个nsSNPs均会导致IGF2的蛋白空间结构发生变化。综上所述,T30P和E35G位点突变严重影响鸡IGF2蛋白质的结构,可能是影响鸡生长和体组成性状的重要功能性SNPs。     

KISS1基因SNP对柯乐猪繁殖性状的影响

研究旨在了解KISS1基因对猪繁殖力的影响,以78头初产柯乐猪为材料,采用聚合酶链式反应（PCR）产物直接测序与人工较对相结合鉴定KISS1基因单核苷酸多态性（SNP）位点,分析SNP位点对柯乐猪繁殖指标的影响。结果显示在KISS1基因第1外显子处发现g.64835073 A>G同义突变,在第1内含子处发现g.64835529 G>A突变,2个SNP位点均产生3种基因型,均为中度多态位点,且均符合Hardy-Weinberg平衡;g.64835073 A>G位点对5个繁殖指标的影响未能达到显著水平（P>0.05）;其中g.64835529 G>A位点对总产仔数、初生个体重、断奶个体重的影响达显著水平,揭示g.64835529 G>A位点可能作为猪产仔数的一个分子标记。     

不同鸡种TLR1和TLR2基因SNP检测分析

本研究利用DNA直接测序技术对9个地方鸡种(北京油鸡、白耳鸡、溧阳鸡、河南斗鸡、泰和乌骨鸡、大骨鸡、狼山鸡、仙居鸡、茶花鸡)和1个引进品种(白来航蛋鸡)鸡Toll样受体1(chTLR1-1、chTLR1-2)、Toll样受体2(chTLR2-1、chTLR2-2)基因的全部外显子、部分内含子及5′调控区的序列进行单核苷酸多态性(SNPs)检测。结果共发现了27个SNP位点,96%的SNPs位于编码区,其中33%的SNPs为错义突变。chTLR2-1基因在所有品种中均未发现SNP位点,chTLR1-1、chTLR1-2和chTLR2-2基因在9个地方品种中突变位点较为丰富,且不同品种间SNP数量差别较大,但在白来航蛋鸡中均未发现SNPs位点。本试验为进一步开展地方鸡种chTLR1和chTLR2基因多态性与抗病研究提供了理论依据。     

鸡Camk2d基因外显子15的SNP发现、检测及与经济性状的关联分析

克隆了鸡Camk2d基因的部分片段并发现Camk2d基因第15外显子51bp处有一C→T碱基转换的沉默突变,该突变位点具有VspI酶切多态,通过PCR-RFLP技术对我国乌骨鸡、鹿苑鸡、固始鸡、白耳鸡、仙居鸡、斗鸡和大骨鸡等7个不同地方品种鸡进行了基因型检测。结果表明:在7个品种中存在3种基因型(CC、CT、TT),χ2检验显示在各品种间基因型存在不同差异。同时在藏鸡,隐性白羽鸡,杂交鸡(藏♂×隐♀)和75%血液藏鸡[藏♂×(藏♂×隐♀)♀]群体中进行了基因-性状关联分析,结果表明,该SNP位点与腹脂存在极显著相关(P<0.01),与肌肉pH值显著相关(P<0.05)。     

京海黄鸡斑联蛋白基因外显子9 SNP位点及其与屠宰性能的相关性研究

以京海黄鸡为试验材料,采用PCR-SSCP技术检测斑联蛋白(zyxin)基因外显子9的SNP,探讨zyxin基因该位点多态性与京海黄鸡屠宰性状之间的关系。结果发现该位点存在1个SNP突变位点,表现为3种基因型:AA、AB和BB。统计分析表明,公鸡的胸肌重AA基因型显著高于AB基因型(P＜0.05),活体重和屠体重AA基因型显著高于BB基因型(P＜0.05);母鸡的活体重、头重、爪重和屠体重AA基因型显著高于BB基因型(P＜0.05),全净膛重AA基因型显著高于AB基因型(P＜0.05)。     

GNRHR、IGF-1基因对文昌鸡繁殖性状的遗传效应分析

以控制文昌鸡繁殖性状的促性腺激素释放激素受体基因（GNRHR）和胰岛素样生长因子-1基因（IGF-1）为候选基因，采用PCR—RFLP技术检测GNRHR基因和IGF-1基因在文昌鸡中的单核苷酸多态性（SNP），同时对这2个基因与文昌鸡繁殖性状的相关性进行了研究。结果表明，GNRHR基因内含子1的537bp位置有C→T碱基的变异，在文昌鸡中检测到AA、Aa、aa3种基因型，A等位基因的频率为0．69，a等位基因的频率为0．31；在IGF-1基因5′非翻译区（5′UTR）发现C→T碱基的变异，改变了限制性内切酶PstⅠ识别位点，经PCR-RFLP分析，在文昌鸡中检测到BB、Bb、bb3种基因型，B等位基因的频率为0．53，b等位基因的频率为0．47。对其基因型与所检测个体相应的繁殖性状采用GLM分析进行遗传效应研究，结果表明，GNRHR基因对300日龄产蛋数、400日龄产蛋数有显著影响（显性作用），IGF-1基因对300日龄产蛋数有显著影响（加性作用）。因此，推测GNRHR基因和IGF-1基因可能是影响鸡繁殖性状的主效基因或与主效基因紧密连锁的标记基因，并且能够在分子标记辅助选择中用于对鸡繁殖性状的遗传改良和固定。     

鸡SCD和Sirt1基因的SNP搜寻及其遗传多样性分析

硬脂酰辅酶A去饱和酶（Stearoyl—CoA desaturase,SCD）和Sirt1基因是位于鸡6号染色体的两个与脂肪代谢相关的功能基因。本研究以泰和丝毛乌骨鸡、杏花鸡、隐性白洛克鸡为研究材料,利用DNA池比较测序技术对鸡SCD和Sirt1基因的整个编码区进行SNPs搜寻,共检测出鸡SCD基因SNPs 13个,其中5个编码区SNPs（cSNPs）,2个为错义突变,10个为新发现的SNPs;检测出鸡Sirt1基因SNPs35个,其中10个cSNPs,2个为错义突变,18个为新发现的SNPs,另外有3处插入／缺失多态。对SCDC．492G〉A和Sirt1 c．1753G〉A位点在隐性白洛克鸡、杏花鸡、泰和丝毛乌骨鸡、白耳黄鸡、康乐鸡、南城黑鸡等271个个体中进行了PCR—SSCP检测,发现它们具有丰富的多态性,为这个染色体区域进一步的关联性分析提供了新的标记。     

鸡MAOA基因外显子6的SNP分析

研究采用PCR-SSCP方法分析了吐鲁番斗鸡和新罗曼鸡单胺氧化酶A基因外显子6部分序列的多态性。结果表明：吐鲁番斗鸡单胺氧化酶A基因外显子6存在1个单核苷酸多态性（SNP）位点T-102C,产生AA、AB两种基因型;新罗曼鸡未检测到多态,只表现AA一种基因型。χ^2适合性检验结果表明：2个鸡种均处于Hardy—weinberg平衡状态（P〉0．05）,说明吐鲁番斗鸡单胺氧化酶A基因外显子6位点基因型频率的分布与新罗曼鸡差异极显著（P〈0．01）。     

京海黄鸡IGFBP-3基因外显子1和内含子1部分序列多态性及其与生长繁殖性状的相关性

以京海黄鸡母鸡为材料,采用PCR-SSCP技术对JGFBP-3基因外显子1及内含子1部分序列多态位点进行研究,并计算基因型频率、基因频率、卡方值和部分遗传多态性指标.结果表明,在外显子1上没有检测到多态位点,在内含子1上检测到1个多态位点,该位点为中度多态,在160 bp处发生T到G的突变,导致BB、AB型的56日龄体重显著大于AA型(P<0.05),AA型的11月产蛋数显著大于BB、AB型(P<0.05).由此初步推断,内含子1对产蛋及生长发育很可能有一定的促进作用,A为产蛋的优势基因,B为体重的优势基因.     

鸡CSRP3基因编码区SNPs及其与肌纤维性状的相关分析

CSRP3基因是肌细胞分化所必需的正向调节因子,在肌肉生长发育过程中发挥重要作用。研究以220只63日龄(上市日龄)"花山麻鸡"为研究素材,应用PCR扩增与测序首次扫描了鸡CSRP3基因编码区SNPs,并将其与腓肠肌外侧头肌纤维平均面积、直径和密度等肌纤维性状进行关联分析。结果显示:在鸡CSRP3基因编码区共发现G180A、C240T、G246A、C252T、C546T、A633G 6个SNPs,均为同义突变;相关分析表明,A633G位点的多态性与花山麻鸡腓肠肌外侧头肌纤维平均面积存在极显著的基因型效应(P<0.01),与肌纤维平均直径、肌纤维平均密度存在显著的基因型效应(P<0.05)。结果表明,CSRP3基因可作为影响鸡骨骼肌生长发育的候选基因,可选择CSRP3基因编码区的633位点作为鸡骨骼肌肌纤维性状的分子标记辅助选择的候选标记。     

鸡apoB基因T123G多态位点与生长和体组成性状的相关性研究

载脂蛋白B（apoliprotein B，apoB）在能量的转运和代谢过程中具有重要作用，是研究生长和体组成性状的重要候选基因。以东北农业大学高、低腹脂双向选择品系第8世代仔鸡为试验材料，对鸡apoB基因进行SNP检测，探讨npoB基因与生长和体组成性状（尤其是体脂）的关系。本研究通过测序的方法在apoB基因26外显子上发现SNP（T→G），相关性研究结果表明该突变位点对1周龄体重、3周龄体重、7周龄腹脂重和腹脂率有显著影响（P〈0．05）。对于1周龄体重，基因型为GT的个体显著高于GG个体；而3周龄体重，基因型为TT和GT的个体显著高于GG个体；对于腹脂重和腹脂率，TT基因型个体显著高于GT和GG基因型个体（P〈0．05）。群体遗传学分析表明该位点的基因型在两系间差异显著（P〈0．05）。因此初步推断apoB基因可能是控制生长发育、腹脂沉积的主基因或与主基因紧密连锁。     

高黎贡山猪DECR基因外显子1的克隆及SNP检测

根据已报道猪线粒体2,4-双烯脂酰辅酶A还原酶(mitochondrial 2,4-dienoyl-CoA reductase,DECR)基因全序列(GenBank登录号:NC_010446),用Oligo软件设计扩增DECR外显子1引物,通过对高黎贡山猪、明光小耳猪、大河猪、滇南小耳猪、迪庆藏猪、长白猪、大约克夏和杜洛克猪的外显子1片段的克隆,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,符合理论值后测序。序列分析结果显示,在外显子1筛选到一个SNP(C237T),高黎贡山猪为T,其他猪为C。通过271头猪检测,该突变基因频率为79%,其他群体尚未检测到,可能为高黎贡山猪高含量的多不饱和脂肪酸的分子标记。该试验结果为验证高黎贡山猪含较高高多不饱和脂肪酸由遗传因素决定奠定了基础。     

鸡KRT14基因编码区SNPs及其与蛋壳品质性状的相关分析

角蛋白14 (Keratin 14,KTR14)属于富含半胱氨基酸残基的Ⅰ型(酸性)角蛋白,具有参与细胞生长,促进细胞分化的作用.为分析KRT14基因对鸡蛋壳品质性状的影响,本研究以43周龄的江汉鸡为实验对象,利用PCR技术结合直接测序法,分析鸡KRT14基因编码区SNPs,并将其与蛋重、蛋壳厚度、蛋壳强度性状进行关联...     

黔东南小香鸡IGF1基因SNP的鉴定及对体重、体尺性状的影响

为了探究胰岛素样生长因子1(insulin like growth factor 1, IGF1)基因对家禽生长性状的影响,试验利用PCR扩增结合直接测序的方法,对黔东南小香鸡单核苷酸多态性(SNP)进行筛选,并对SNP位点所对应的基因型遗传学进行分析,同时运用SSPS 18.0软件中一般线性模型对基因型与体重、体尺指标进行关联性分析。结果表明：在试验群体中发现IGF1基因第3外显子62 bp处存在1个SNP位点,该位点属于同义突变,并未引起编码氨基酸改变,GA基因型为优势基因型,G等位基因为优势等位基因,该基因座满足Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);该SNP位点与黔东南小香鸡体重、体尺性状不存在显著性关联。说明IGF1基因第3外显子62 bp处发生G>A突变,虽然其不影响黔东南小香鸡的生长性状,但可以考虑作为黔东南小香鸡分子遗传标记辅助选育参考位点之一。     

鸡lmbr1基因外显子16的SNP检测和单倍型分析

外显子16是鸡lmbr1基因最大的外显子,本研究进行了该外显子在丝羽乌骨鸡和白洛克肉鸡间的SNP检测和单倍型分析。研究表明,鸡lmbr1外显子16的PCR-SSCP基因型在两个品种间的分布存在明显差异,测序从24个个体中检测到4个变异位点,其中T32C变异在两个品种间存在明显差异,丝羽乌骨鸡均含有32T(纯合的TT或杂合的TC),白洛克肉鸡在T32C位点都为纯合的CC;单倍型分析从24个个体中检测到5种单倍型,丝羽乌骨鸡和白洛克肉鸡的单倍型存在明显的差异,hap1和hap2是丝羽乌骨鸡的特异性单倍型,hap5是白洛克肉鸡的特异性单倍型,hap3和hap4主要存在于白洛克肉鸡中,在丝羽乌骨鸡中的比例极少。     

京海黄鸡LYZ基因外显子的遗传多态性及其与体重的关联分析

试验旨在研究鸡溶菌酶基因(LYZ)对鸡体重的影响。以200只京海黄鸡为研究群体,采用PCR-SSCP和DNA测序的方法检测LYZ基因单核苷酸多态性,并将所发现的SNPs与体重进行关联分析。结果发现,共3个突变位点,且均为沉默突变,未引起氨基酸序列的改变;经χ2适合性检验,除1411位点外,其他2个突变位点均显著偏离Hardy-Weinberg平衡;111位点AA基因型个体12和16周龄体重显著高于GG基因型个体(P0.05),1411位点AA和GA基因型个体各周龄体重均高于GG基因型个体,且4周龄体重差异达到了显著水平(P0.05),1426位点各基因型对体重没有显著影响(P0.05)。单倍型分析结果显示,除4周龄外,ANC个体各周龄体重均较大,GAC个体4周龄体重较大,这与上述各位点基因型对体重影响的分析结果相一致,暗示在选种、育种过程中,可将鸡LYZ基因作为京海黄鸡体重候选基因应用于遗传标记辅助选择。     

鸡Nramp1基因第9外显子的单核苷酸序列多态性分析

以文昌鸡、安卡鸡及藏鸡为试验动物,利用PCR-SSCP方法检测Nramp1基因部分区域的单核苷酸多态性(SNP)。结果发现,该区域存在2个突变,分别为C315G、C357T;共出现4种基因型,分别为GG、GT、TT及AA型,在文昌鸡和藏鸡群体内,T为优势等位基因,而安卡鸡中G为优势等位基因。3个群体该座位均处于哈代-温伯格平衡(PO.05),且3个群体间基因型分布无显著差异(P0.05)。     

鸡GDF-5基因外显子1多态性与鸡骨骼发育性状的相关研究

根据GenBank发表的鸡GDF-5基因的mRNA序列设计引物，以白耳鸡和东北农业大学选育的肉鸡高、低腹脂系第8世代鸡群为试验材料，通过测序和PCR-SSCP的方法进行SNP检测和基因型分析，探讨GDF5基因多态性与鸡生长和骨骼发育性状之间的关系。结果发现在GDF-5基因外显子1的84bp处存在1个C／T的突变位点，对该突变位点在研究群体中进行基因型分析，结果产生3种基因型，AA型个体的基因序列和GenBank（Accession No：AF123389）中的一致为C，而BB型个体的基因序列在84bp处突变为T。基因型与鸡体组成性状的统计分析结果表明，AA基因型个体的跖骨围显著高于AB基因型个体（P〈0．05）；AA基因型和AB基因型个体的跖爪重和跖爪率显著高于BB基因型个体（P〈0．05）；AB基因型个体的股骨长和股骨重显著高于BB基因型个体（P＜0．05）；表明该基因对鸡的骨骼性状有较大的影响或与控制骨骼发育性状的主效基因相连锁。     

部分小型猪与大型猪IGF-1基因的SNP分析

利用PCR-SSCP技术对版纳微型猪、西藏小型猪、军牧猪和大白猪4个品种的IGF-1基因进行了多态性分析.结果表明,在外显子3上存在1个SNP(G201A),在外显子4上存在2个SNPs(A440G和T455C).各SNP位点基因及基因型频率统计结果显示,在G201A位点,A为大型猪的优势等位基因;在A440G和T455C位点,AT为大型猪的优势等位基因,小型猪的上述2个位点均没有共同的总体特征;2个等位基因型分布差异极为显著(P＜0.01),西藏小型猪的多态信息含量最低,而军牧猪的杂合程度最高.     

京海黄鸡IGFBP-3基因外显子1和内含子1部分序列多态性及其与生长繁殖性状的相关性

以京海黄鸡母鸡为材料,采用PCR-SSCP技术对IGFBP-3基因外显子1及内含子1部分序列多态位点进行研究,并计算基因型频率、基因频率、卡方值和部分遗传多态性指标。结果表明,在外显子1上没有检测到多态位点,在内含子1上检测到1个多态位点,该位点为中度多态,在160 bp处发生T到G的突变,导致BB、AB型的56日龄体重显著大于AA型(P＜0.05),AA型的11月产蛋数显著大于BB、AB型(P＜0.05)。由此初步推断,内含子1对产蛋及生长发育很可能有一定的促进作用,A为产蛋的优势基因,B为体重的优势基因。