造血生长因子联合应用对骨髓粒—单系造血祖细胞体匀增殖的影响

目的：研究不同造血生长子联合应用对骨髓粒－单系造血祖细胞体外增殖的调节作用。方法：应用甲基纤维素体外半固体培养法，检测各种生长因子联合应用组，ＣＦＵ－ＧＭ集落的生物情况。结果：造血生长因子的联合应用不仅可增加ＣＦＵ－ＧＭ集落数，促进ＣＦＵ－ＧＭ集落的体外形成，而且，也能明显地增加ＣＦＵ－ＧＭ集落的体积，在型ＣＦＵ－ＧＭ集落数的比例在各联合应用组增加显著，其中以ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－     

乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周白细胞的影响

目的探讨乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周血WBC的影响。方法用不同剂量的乌贼墨灌胃正常小鼠、环磷酰胺(Cy)和辐射骨髓损伤模型小鼠,采用造血祖细胞体外培养方法和实验血液学技术,检测小鼠骨髓造血干细胞生成数(CFU-S)、粒-单系祖细胞集落生成数(CFU-GM)和外周血WBC数量。结果乌贼墨能够显著提高正常小鼠CFU-S,CFU-GM和外周血WBC数量,有效拮抗模型小鼠体内CFU-S,CFU-GM及外周WBC的降低,并显著促进模型小鼠上述各指标的恢复。结论乌贼墨具有显著的促进小鼠骨髓粒系造血作用。其作用机制可能通过调节机体的免疫机能,诱导机体产生粒/单核细胞集落刺激因子和多种细胞因子,促进造血细胞的增殖,并诱导造血细胞向粒单系细胞分化。     

造血生长因子联合应用对骨髓粒-单系造血祖细胞体外增殖的影响

目的：研究不同造血生长因子联合应用对骨髓粒－单系造血祖细胞体外增殖的调节作用。方法：应用甲基纤维素体外半固体培养法，检测各种生长因子联合应用组，ＣＦＵ－ＧＭ集落的生长情况。结果：造血生长因子的联合应用不仅可增加ＣＦＵ－ＧＭ集落数，促进ＣＦＵ－ＧＭ集落的体外形成，而且，也能明显地增加ＣＦＵ－ＧＭ集落的体积，大型ＣＦＵ－ＧＭ集落数的比例在各联合应用组增加显著，其中以ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ联合应用组作用最强。同时，结果还显示，造血生长因子的联合应用可加速ＣＦＵ－ＧＭ集落的形成。结论：造血生长因子的联合应用能够协同地促进骨髓粒－单系造血祖细胞的体外增殖，从而为联合应用造血生长因子来扩增少量骨髓，外周血或脐血中造血干／祖细胞进行移植治疗白血病或实体瘤提供了实验依据。     

藻蓝蛋白对小鼠粒单系祖细胞生成的影响

藻蓝蛋白是从钝旋藻中分离，纯化所得。采用造血祖细胞体外培养技术，研究了Ｃ－ＰＣ对小鼠粒单系祖细胞生成的影响。实验结果表明，Ｃ－ＰＣ能够提高粒单系祖细胞生成，亦能明显提高正常小鼠血清的集落刺激活性。Ｃ－ＰＣ体内或体外刺激制备的小鼠脾细胞条件培养液能明显增加ＣＦＵ－ＧＭ的集落数。在有集落刺激因子存在时，体外加入Ｃ－ＰＣ培养粒单系祖细胞，Ｃ－ＰＣ能明显提高ＣＦＵ－ＧＭ的集落生成率。     

巴西蘑菇多糖对造血干、祖细胞生成的影响

目的:探讨国产巴西蘑菇多糖对造血干、祖细胞生成的影响及其作用机制。方法:应用造血细胞培养技术、流式细胞仪(FACS)、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)观察药物对小鼠骨髓细胞及人脐血单个核细胞的影响。结果:经过巴西蘑菇多糖处理的动物,造血干细胞(CFU-S)、粒-单祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E)和纤维母细胞(CFU-F)各组数值明显上升,与对照组比较,P均<0.01;FACS检测显示,实验组CD33+细胞明显上升,在诱导的d 7达高峰;经RT-PCR检测结果表明,巴西蘑菇多糖诱导人脐血单个核细胞48 h后,粒单细胞克隆刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达量是对照组的2.72倍。结论:巴西蘑菇多糖可促进造血干、祖细胞生成并可促进人脐血单个核细胞GM-CSF基因表达。     

重组白介素1α对粒单系祖细胞的辐射防护作用(英文)

高剂量(0.5或1.62 mg·kg~(-1))重组人白介素1α(IL-1α)在照射前给药时能抗辐射对C_3H小鼠骨髓粒单系祖细胞的损伤,照射前4h给药时GM-CFC的数目是照射前20h给药的1.70倍.实验进一步观察了IL-1α对血清粒单系集落刺激因子(GM-CSF)的产生以及GM-CFC在细胞周期中分布的变化,结果表明,IL-1α给药3.5 h后,使血清GM-CSF的产生达到最高水平,12 h后,恢复至给药前水平;相反,给药4h后对GM-CFC的细胞周期分布无影响,而20 h后,能诱导GM-CFC进入细胞周期的S期,提示IL-1α在照射前不同时间给药对GM-CFC的辐射防护作用的差异可能与GM-CFS产生及细胞周期的重分布有关。     

沙纳唑合并γ射线对在体小鼠骨髓粒系造血祖细胞的影响

目的 :研究沙纳唑直接给药以及合并γ射线照射处理对在体小鼠骨髓粒系造血祖细胞 (CFU -GM )集落形成的影响。方法 :通过对小鼠骨髓CFU -GM培养的检测 ,观察从小鼠尾静脉注射不同剂量沙纳唑对小鼠造血系统的影响 ;并于不同放射剂量照射前30min从小鼠尾静脉注射不同剂量沙纳唑 ,观察沙纳唑合并γ射线照射处理对小鼠造血系统的影响。结果 :静脉注射沙纳唑对在体小鼠骨髓CFU -GM集落形成抑制作用较小 ;沙纳唑合并γ射线照射处理后对小鼠骨髓CFU -GM的抑制作用与单一放射照射处理结果相似。结论 :沙纳唑直接给药对在体小鼠骨髓CFU -GM无明显细胞毒性作用 ,合并放射照射处理对放射照射所致小鼠骨髓CFU -GM的抑制没有明显协同作用。     

枸杞多糖对小鼠海马神经元细胞系缺糖缺氧损伤保护作用及机制研究

目的探讨枸杞多糖(LBP)对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞缺糖缺氧损伤保护作用的机制。方法采用含1 mmol/L连二亚硫酸钠的无糖DMEM培养基建立HT22细胞缺糖缺氧损伤模型,设对照组、模型组和LBP高、中、低剂量(100、50、25 mg/L)组,以CCK8法检测细胞活性,流式细胞术检测检测细胞凋亡情况;Western blotting检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TNF-α、NF-κB、I-κBα、Caspase-9基因转录活性。结果与对照组比较,模型组HT22细胞存活率显著降低、凋亡率显著增加(P<0.05);TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性显著上调,I-κBα基因转录活性显著下调(P<0.05);Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,LBP各剂量组细胞存活率显著上升、凋亡率显著下降(P<0.05);TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性显著下调,I-κBα基因转录活性显著上调(P<0.05);Bax蛋白表达水平显著降低,Bcl-2的蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。结论 LBP可能是通过下调TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性以及Bax蛋白表达,增强I-κBα基因转录活性及Bcl-2的蛋白表达,抑制缺糖缺氧损伤诱导神经细胞凋亡的发生。     

不同产地枸杞药材中多糖的含量测定

目的建立枸杞多糖的含量测定方法,并测定不同产地枸杞药材中多糖的含量。方法采用水提醇沉法制备枸杞多糖,将枸杞多糖脱蛋白后制得精制枸杞多糖,以精制枸杞多糖测得枸杞多糖对葡萄糖的换算因子后,用苯酚-硫酸法测定不同产地枸杞药材中多糖的含量。结果平均回收率为98.8%,测得不同产地枸杞药材中多糖含量分别为4.03%、7.55%、2.92%、4.99%、3.54%和4.67%。结论该法操作简单,结果较接近真实值;不同产地枸杞中多糖含量的差异较大,该结果为枸杞多糖质量控制和药效评价的进一步研究奠定了基础。     

枸杞多糖对小鼠T、杀伤T和NK细胞的免疫药理作用及对抗环磷酰胺的免疫抑制作用(英文)

枸杞多糖(LBP)5～10 mg/kg,ip,可以提高小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖功能,增强CTL的杀伤功能,特异杀伤率由33％提高到67％.LBP 5mg/kg.ip,可以增强NK细胞的杀伤功能,杀伤率由12.4％提高到18％. LBP 5～10 mg/kg可以对抗环磷酰胺(Cy)对小鼠T、CTL和NK细胞的免疫抑制作用;其中T淋巴细胞的相对增殖指数(RPI)由33％提高到105％,Cy对CTL的抑制率由单用的51％降低到与LBP合用的19％和36％,NK细胞的杀伤率亦由Cy单用的9.5％提到15％和16％.以上结果说明LBP增强了正常小鼠和Cy处理鼠的T细胞介导的免疫反应与NK细胞的活性.     

枸杞多糖诱导T细胞增殖和对肝癌细胞的抑制作用

目的观察枸杞多糖对效应细胞的增殖和杀瘤活性的作用。方法通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞并培养其为树突状细胞,用冻融法制备肝癌细胞的全抗原并致敏树突状细胞 通过混合淋巴细胞实验,获取树突状细胞激活的特异性效应T细胞。用MTT法测定效应T细胞对肝癌细胞的杀伤率。观察枸杞多糖在树突状细胞的成熟及T细胞的激活、增殖和杀瘤过程中的作用。结果枸杞多糖单独对T细胞无明显的增殖能力,但能促进树突状细胞的成熟并且能增强效应T细胞的增殖能力和杀瘤活性。结论枸杞多糖能促进树突状细胞成熟和增强效应T细胞的增殖和杀伤肿瘤的活性。     

枸杞子多糖及合并应用厌氧短棒杆菌菌苗对小鼠腹腔巨噬细胞抑制肿瘤增殖活性的影响(英文)

本研究观察了中药枸杞子(Lyciumbarbarum L.)提取物枸杞多糖(LBP)对小鼠腹腔巨噬细胞抑制肿瘤增殖活性的影响。结果表明,给正常小鼠ip LBP 40 mg/kg×7d能增强经Con A处理的巨噬细胞抑制肿瘤靶细胞增殖的活性;LBP 5.10.20,40mg/kg×7 d并与小剂量(250μg/只)厌氧短棒杆菌菌苗(Corynebacterium parvum,CP)合并应用,具有明显的协同效应。在LBP浓度为20 mg/kg时,效应最为显著,对靶细胞P815及P388增殖的抑制率分别为85.5％和63.6％;CP对照组则为28.1％及24.0％。表明合并应用LBP及CP可减少二者的用量,增强效应,减低CP的毒副作用。据本室先前的研究发现,LBP为主要作用于T细胞的免疫增强剂,能增强CTL,NK细胞的功能;CP则为巨噬细胞刺激剂。本研究结果提示,合并应用作用于免疫应答不同环节的免疫增强剂可获得协同效应,这将为临床肿瘤的免疫疗法中免疫增强剂的联合应用提供参考。此外,本实验还发现,来自经肿瘤细胞免疫小鼠的腹腔巨噬细胞,表现出较强的特异性抑制肿瘤增殖活性,LBP则能进一步加强其作用。以上结果提示,LBP无论对巨噬细胞在非特异性抗肿瘤或特异性抗肿瘤过程中,均具有激活作用。     

地黄寡糖对SAMP8小鼠造血祖细胞增殖的作用

采用造血祖细胞体外克隆培养等实验血液学技术, 研究了地黄寡糖对快速老化模型P系小鼠(SAMP8)骨髓造血祖细胞增殖作用的影响. 结果表明地黄寡糖可促进SAMP8小鼠骨髓粒系巨噬系祖细胞, 早期和晚期红系祖细胞的增殖, 其脾细胞条件液也可使造血祖细胞克隆集落数明显增加, 地黄寡糖还可使其基质细胞层上粒系巨噬系祖细胞集落的产率明显增多. 提示地黄寡糖可能通过多种途径激活机体组织, 特别是造血微环境中的某些细胞, 促进其分泌多种造血生长因子而增强造血祖细胞的增殖.     

青蒿琥酯对小鼠骨髓造血干/祖细胞分化的抑制与毒性作用

目的:观察青蒿琥酯(artesunate,AS)对小鼠骨髓造血干/祖细胞分化的影响。方法:取小鼠骨髓干细胞进行体外液体或半固体定向培养并加入不同浓度的AS,光镜下计数半固体培养的红系集落形成单位(CFU-E)与红系爆式集落形成单位(BFU-E)数量,流式细胞术检测液体定向培养的细胞凋亡和线粒体膜电位变化,同时进行DNAladder凝胶电泳实验。结果:AS可显著抑制CFU-E与BFU-E集落的生成(P<0.05)并具有一定的量效关系;DNAladder凝胶电泳结果显示0.01～1.30mmol/L的AS可明显诱导细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞晚期凋亡/死亡率具有统计学意义(P<0.05);线粒体膜电位的下降程度也与AS浓度正相关(r=0.546,P=0.018)。结论:AS对小鼠骨髓造血干/祖细胞的增殖和分化具有明显抑制作用,小剂量AS可诱导小鼠骨髓造血干/祖细胞发生凋亡,大剂量可直接引起细胞坏死。     

枸杞多糖对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响

目的研究枸杞多糖(LBP)对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响.方法制备高脂高糖+小剂量链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠模型.将大鼠分为正常对照组,单纯糖尿病组,小剂量枸杞多糖干预组(250 mg·kg-1·d-1),大剂量枸杞多糖干预组(1 000 mg·kg1·d-1).观察糖尿病大鼠成型各阶段肾脏的氧化应激状态,枸杞多糖干预后的糖尿病大鼠肾脏氧化应激状态,肾功能改变及抗氧化指标的相关性因素分析.结果糖尿病大鼠在高脂高糖喂养阶段已出现肾脏SOD降低,成型12周时SOD降低,MDA升高,SOD/MDA降低更明显,与正常对照组比较差异有显著性.小剂量枸杞多糖干预使糖尿病大鼠肾脏SOD升高,MDA降低,SOD/MDA升高,并能使肾功能明显好转.肾脏抗氧化能力与血糖、三酰甘油、胆固醇、低密度脂蛋白、尿素氮、肌苷、尿微量白蛋白、肾肥大指数呈显著负相关.结论氧化应激参与糖尿病肾病的发生发展,枸杞多糖能够改善糖尿病大鼠肾脏的氧化应激状态,延缓糖尿病肾病发生.     

脂多糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度脂多糖(LPS)对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,采用免疫细胞化学法鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度LPS干预组,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察其增殖情况。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态呈长梭形,呈集落样生长,免疫细胞化学鉴定,CD44阳性,CD34、CD45阴性。MTT检测结果显示,与对照组(0.190±0.037)相比,0.01、0.1及1μg/mlLPS干预组吸光度(A)值均增高,其中0.01μg/mlLPS干预组(0.253±0.030)增高明显,差异有统计学意义(P<0.05)。而10、100μg/mlLPS干预组A值则较对照组下降,其中10μg/mlLPS干预组(0.159±0.042)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度LPS可以提高BMSCs的增殖能力,但随着LPS浓度的增大,BMSCs增殖能力反而下降。     

4-Hydroxynonenal inhibits cell proliferation and alters differentiation pathways in human fetal liver hematopoietic stem cells

During fetal development, the liver serves as the primary hematopoietic organ in which hematopoietic stem cells (HSC) comprise a large proportion of hepatic cell populations. Because HSC are capable of initiating long-term hematopoiesis, injury to these cells may have ramifications with regard to the etiology of blood-borne diseases. In the current study, we examined the effects of 4-hydroxynonenal (4-HNE), a mutagenic alpha,beta-unsaturated aldehyde that can be produced in utero, on HSC proliferation, differentiation, viability and apoptosis. Exposure of HSC to acute single doses of 4-HNE as low as 1 nM inhibited HSC proliferation. Because 4-HNE rapidly disappears from culture media, a multiple dosing regime was also employed to approximate short-term steady state 4-HNE concentrations relevant to physiological oxidative stress. 4-Hydroxynonenal steady state concentrations as low as 1 microM altered HSC differentiation pathways, but did not affect apoptosis or cause cell death. In contrast, exposure to steady state 5 microM 4-HNE elicited a loss in viability, and increased the rate of apoptosis in total HSC populations. Collectively, our data indicate that cellular levels of 4-HNE associated with a low level of oxidative stress cause a loss of proliferation and viability and alter differentiation pathways in human fetal HSC.