喉癌患者多药耐药基因,多药耐药相关蛋白基因的表达及临床意义

应用逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,检测了３５例喉癌患者ＭＤＲ－１ｍＲＮＡ、ＭＲＰｍＲＮＡ基因的表达,同时,应用免疫组化ＳＡＢＣ法检测了６１例患者ＭＤＲ－１基因产物Ｐ－ｇｐ。喉癌组织中ＭＤＲ－１ｍＲＮＡ及Ｐ－ｇｐ的阳性表达率分别为３７．１％（１３／３５）和３４．４％（２１／６１）;３５例ＲＴ－ＰＣＲ检测标本中,两项指标间有一定的相关性（Ｐ〈０．０１）。晚期患者（Ｔ３－４,１８／１０）,     

喉癌患者多药耐药基因、多药耐药相关蛋白基因的表达及临床意义

应用逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,检测了３５ 例喉癌患者ＭＤＲ－１ ｍ ＲＮＡ、ＭＲＰｍ ＲＮＡ 基因的表达,同时,应用免疫组化ＳＡＢＣ法检测了６１ 例患者ＭＤＲ－１ 基因产物Ｐ－ｇｐ。喉癌组织中ＭＤＲ－１ ｍ ＲＮＡ 及Ｐ－ｇｐ 的阳性表达率分别为３７．１％ （１３／３５）和３４．４％ （２１／６１）;３５ 例ＲＴ－ＰＣＲ 检测标本中,两项指标间有一定的相关性（Ｐ＜ ０．０１）。晚期患者（Ｔ３－ ４,１８／４０）Ｐ－ｇｐ 阳性表达率明显高于早期患者（Ｔ１－ ２,３／２１,Ｐ＜ ０．０５）。喉癌组织中ＭＲＰｍ ＲＮＡ阳性表达率为４５．７％ （１６／３５）,其阳性表达强度在晚期肿瘤中（１４／２３）明显增高（Ｐ＜ ０．０５）,且与肿瘤颈淋巴结转移（Ｎ０,８／２７;Ｎ１－ ２,８／８）呈明显相关性（Ｐ＜ ０．０１）     

黑色素瘤抗原-1基因在肝细胞癌中的表达

目的 检测黑色素瘤抗原－１（ＭＡＧＥ－１）ｍＲＮＡ在肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达,为用ＭＡＧＥ－１基因编码蛋白作为疫苗对ＨＣＣ患者进行免疫治疗提供依据。方法 用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法对４５例ＨＣＣ患者组织和相应癌旁肝组织以及１６例肝硬化组织和１２例正常肝组织的ＭＡＧＥ－１ｍＲＮＡ表达情况进行了研究,对６例ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物的目的基因片段进行ＤＮＡ序列测定,并以测序证实为ＭＡＧＥ－     

膜型基质金属蛋白酶—1在人胃癌中的表达

研究膜型基质金属蛋白酶－１（ｍｅｍｂｒａｎｅｔｙｐｅ－１ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＭＴ１－ＭＭＰ）基因，ｍＲＮＡ在人胃癌组织中的表达及其与胃癌浸润转移和临床分期的关系。方法应用ＲＴ－ＰＣＲ半定量的方法检测ＭＴ－１ＭＭＰ基因ｍＲＮＡ在３０例胃癌组织、正常粘膜和转移淋巴结中的表达。     

肝细胞癌癌组织α—1,3岩藻糖基转移酶各亚型mRNA的半定量 …

目的 探讨肝癌组织α－１，３岩藻糖基转移酶（α－１，３－ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＦｕｃＴ）的各亚型Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ的ｍＲＮＡ表达及其与肝癌转移的关系。方法 应用异硫氰酸胍一步法获得无ＤＮＡ污染的ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增后对各亚型ＦｕｃＴ ＰＣＲ产物测序鉴定并扫描定量。结果 肝癌组织未发现ＦｕｃＴ－Ⅲ、ⅤｍＲＮＡ的表达，ＦｕｃＴ－Ⅶ在癌和癌周组织的表达都很低，且两者无显著性差异。肝     

RT-PCR法测定胎鼠大脑皮质内皮素-1 Mrna

目的 建立一种检测先天性人巨细胞病毒感染胎鼠大脑皮质内皮素－１（ＥＴ－１）ｍＲＮＡ的方法。方法 采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法并对实验条件进行优化。建立稳定的检测体系后,对胎鼠大脑皮质ＥＴ－１ ｍＲＮＡ进行检测,并以ＲＴ－ＰＣＲ后产物的ＯＤ值来反映起初ＥＴ－１ ｍＲＮＡ的模板相对含量。结果 在一定ＴａｐＤＮＡ酶、镁离子浓度、引物浓度等条件下,ＥＴ－１ ｍＲＮＡ经ＲＴ－ＰＣＲ扩增后产     

肝硬变患者TGF—β1基因在外周血中表达及与PⅢP血清水平？…

目的：为验证肝纤维化动物模型和慢性肝病患者肝组织中,转化生长因子（ＴＧＦ－β１）的ｍＲＮＡ表达增强。作者分析肝硬变患者外周血ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ和血清中有活性的ＴＧＦ－β１蛋白及其结果与Ⅲ型前胶原Ｎ端肽血清水平间的关系。方法：肝硬变患者５０自愿者８人,取其外周血,分离单核细胞（ＰＢＭＣ）,提取ＲＮＡ,用巢式ＲＴＰＣＲ扩增ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ并测定血清中ＴＧＦ－β１和ＰⅢＰ的水平。结果：分析表明患者     

PCR辅助转录滴定系统定量检测AFP mRNA方法的建立

目的：建立ＰＣＲ辅助转录滴定系统（ＰＡＴＴＹ）定量检测ＡＦＰ ｍＲＮＡ的方法。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ定点替代突变及体外转录技术合成单碱基突变ＡＦＰ ｍＲＮＡ内竞争模板,以竞争性ＲＴ－ＰＣＲ定量检测各肝癌细胞株ＡＦＰ ｍＲＮＡ,结果：成功制备引入ＨｉｎｄⅢ酶切位上为的单碱基突变ＡＦＰ ｍＲＮＡ内竞争模板,建立ＰＡＴＴＹ定量检测ＡＦＰ ｍＲＮＡ的方法;检测１μｇＨｅｐＧ２和Ｈｕｈ７两株肝癌细胞总ＲＮＡ     

TGF—β1mRNA在主动型Heymann肾炎中的表达

探讨ＴＧＦ－β１ＲＮＡ在不同病变阶段的主动型Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎肾组织内的表达情况。方法：建立ＡＨＮ模型,用ＲＴ－ＰＣＲ法ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ在病变第４、６、８、１２周Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎大鼠肾组织内的表达。结果：自ＡＨＮ诱发后第４周开始,ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ即有表达,至第８周达最高峰,第１２周时表达有所下调。     

白细胞中血管紧张素原mRNA的定量分析

目的：检测白细胞中血管紧张素原（ＡＧＴ）ｍＲＮＡ的量。方法：提取总ＲＮＡ,进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交;应用ＲＴ－ＰＣＲ技术联合印迹杂交和同位素掺入法对微量ｍＲＮＡ检测。结果：Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交显示肝细胞血管紧张素原ｍＲＮＡ有明显的杂交带,而白细胞无杂交信号。将ＲＴ－ＰＣＲ技术同印迹杂交或同位素掺入法联合应用能提高血管紧张素原微量ｍＲＮＡ检测灵敏度。结论：白细胞的ＡＧＴｍＲＮＡ量低于肝细胞;ＲＴ－ＰＣＲ联合印迹杂交或同位素掺入法是微量ｍＲＮＡ定量分析的有效方法。     

RT—PCR分析探测人胚胎卵巢中的褪黑素受体

目的：研究入胚胎卵巢中是否存在褪黑素受体。方法：取人胚胎卵巢,用逆转录一多聚酶链反应方法鉴别褪黑素受体。结果：人胚胎卵巢总RNA以MT1及MT2两种受体引物进行的RT-PCR产物电泳呈现阳性条带,测序显示扩增产物与人类脑组织褪黑素受体cDNA相吻合,结论：人胚胎卵巢组织中存在有MT1、MT2两种褪黑素受体。证明卵巢是褪黑素作用的靶器官,褪黑素可能直接作用于卵巢,参与胚胎卵巢的发育或调节胚胎卵巢的功能。     

用原位杂交及免疫组化方法显示人胚胎甲状腺褪黑素受体

目的：在前期工作的基础上进一步观察人胚胎甲状腺组织中腿黑素（Ｍel)受体的存在及其分布。方法：取人胚胎（胎龄６个月）甲状腺,石蜡包埋,切片,以免疫组化ＡＢＣ法及原位杂交方法进行染色。结果：免疫组化方法显示,人胚胎甲状腺细胞的细胞膜、细胞质和细胞核中Ｍel受体mt1和ＭＴ２亚型均呈棕褐色阳性染色;原位杂交方法显示mt１和ＭＴ２分布于甲状腺细胞的细胞质及细胞核内,呈蓝紫色阳性染色。结论：人胚胎甲状腺组织中存在褪黑素受体mt1和ＭＴ２亚型,分布于甲状腺细胞的细胞膜、细胞质、细胞核内。     

RT-PCR分析探测人胚胎卵巢中的褪黑素受体

目的 :研究人胚胎卵巢中是否存在褪黑素受体。方法 :取人胚胎卵巢 ,用逆转录 -多聚酶链反应方法鉴别褪黑素受体。结果 :人胚胎卵巢总RNA以MT1及MT2两种受体引物进行的RT PCR产物电泳呈现阳性条带 ,测序显示扩增产物与人类脑组织褪黑素受体cDNA相吻合。结论 :人胚胎卵巢组织中存     

褪黑素受体在人胎脑中的分布

目的 探讨两种褪黑素受体MTl、MT2在人胚胎脑组织中是否存在及存在的部位。方法 收集胎龄为4—6个月的水囊引产胚胎16例，运用免疫组织化学和原位杂交方法，切片观察褪黑素受体MTl和MT2在不同脑区的分布。结果 褪黑素受体MTl在下丘脑、小脑皮层中存在；褪黑素受体MT2在下丘脑、枕叶和延髓中存在。结论 人胚胎脑组织细胞中存在MTl、MT2两种褪黑素受体，表明脑组织是褪黑素作用的靶器官。     

人胚胎肾上腺皮质褪黑素受体亚型蛋白的分布

目的：研究褪黑素（Mel)受体亚型在人胚胎肾上腺皮质的分布。方法：应用免疫组化染色检测Ｍel受体亚型的人胚胎肾上腺皮质的分布。结果：在人胚胎肾上腺皮质的球状速、束状带和网状带均存在Ｍel受体mt1(Mella)和ＭＴ２（Ｍellb)亚型蛋白的表达,且主要分布于细胞质。结论：人胚胎肾上腺皮质存在Ｍel受体mt1和ＭＴ２亚型。     

雌性性早熟大鼠下丘脑､垂体褪黑素受体表达的变化

目的:通过研究雌性性早熟大鼠血浆褪黑素(melatonin,MT)水平,下丘脑?垂体MT受体MT1?MT2表达,探讨MT及MT受体在性发育启动和性早熟中的作用?方法:正常26日龄雌性SD大鼠40只,随机分为性早熟组?性早熟干预组?生理盐水对照组,后者又分为青春前期组和青春期组?使用N-甲基-DL-天冬氨酸(NMA)建立雌性性早熟大鼠模型,促性腺激素释放激素(GnRH)类似物(曲谱瑞林)干预性早熟,通过酶联免疫法检测各组大鼠夜间血浆MT促黄体生成素(LH)水平,实时定量PCR法检测下丘脑?垂体GnRH?MT1?MT2 mRNA表达?结果:各组大鼠夜间血浆MT水平无明显差异,性早熟组下丘脑及垂体MT1 mRNA表达水平均低于青春前期组,差异具有统计学意义,与正常发育的青春期组比较无明显差异?与性早熟组相比,性早熟干预组下丘脑?垂体MT1 mRNA表达均升高,差异有统计学意义?下丘脑?垂体MT2表达各组间无差异?结论:雌性性早熟大鼠下丘脑?垂体MT1表达减少,GnRH类似物可上调MT1的表达?MT受体在青春期发育中可能起抑制性作用,通过下丘脑?垂体的MT受体表达的减少,减弱对中枢的抑制作用,参与正常青春发育或性早熟过程?     

下丘脑褪黑素受体亚型基因及蛋白表达的研究

目的：应用PT－PCR技术和免疫组织化学染色显示人胚胎下捕脑褪黑素受体及其亚型的分布。方法：取人胚胎下丘脑组织，抽提总RNA并应用RT－PCR方法检测其mRNA，扩增所得阳性产物用自动测序仪测序；石蜡包埋下丘脑组织，应用鼠抗人mt1和MT2受体单克隆抗体分别检测褪黑素mt1和MT2受体亚型mRNA及其蛋白的表达。结果和结论：人胚胎下丘脑组织中存在mt1和MT2受体亚型mRNA的表达及其蛋白的翻译，提示在该组织中有mt1和MT2两种受体亚型的表达。     

视交叉上核中褪黑素受体mRNA的昼夜节律性表达

目的：探讨视交叉上核（SCN）中不同亚型褪黑素受体mRNA的表达节律。方法；采用竞争性RTPCR法定理检测不同时点SCN中褪黑素受体基因的mRNA表达。结果：两种褪黑素受体亚型mRNA的表达都具有昼夜节律性，但节街参数不同。结论：光照影响MT1的mRNA表达；两种褪黑素亚型受体可能具有不同的生物学功能。     

NMDA受体亚单位NR1在离体人神经干细胞中的表达

目的研究离体培养的人海马神经干细胞（NSCs）中NMDA受体亚单位NR1的表达。方法分离培养胎龄8-12周人胚脑海马神经干细胞,对NSCs进行Nestin和分化鉴定。用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹和RT—PCR等方法检测原代、传代1次、传代2次的人胚胎海马NSCs中NR1蛋白和mRNA的表达。结果在孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs中,NMDA受体亚单位NRI免疫细胞化学反应呈阳性,该受体亚单位的蛋白和mRNA均被检测钊。结论体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR1。