TRAIL与环磷酰胺诱导LN215细胞凋亡的作用

目的探讨人恶性胶质瘤细胞株LN215细胞对TRAIL的敏感性及TRAIL与环磷酰胺诱导LN215细胞凋亡的作用。方法培养LN215细胞,在倒置显微镜下观察细胞的形态及生长特性,应用酸性磷酸酶法检测LN215细胞对TRAIL单独及联合环磷酰胺作用诱导凋亡的程度。结果 LN215细胞在TRAIL低浓度时无明显的凋亡发生,甚至出现轻微的增殖现象;TRAIL浓度达到1 ng/ml时,细胞开始出现凋亡;随TRAIL浓度升高,凋亡水平逐渐升高,在300 ng/ml时,凋亡率可达到12%。TRAIL与环磷酰胺联合作用组(0.11±0.01)与对照组(0.29±0.02)相比具有显著性差异(P﹤0.01)。结论 LN215是TRAIL耐药细胞株,与环磷酰胺联合后可发挥协同作用,引起细胞发生明显的凋亡反应。     

甲氨蝶呤联合环磷酰胺对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞p53表达的研究

目的 通过对类风湿关节炎(RA)动物模型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的实验研究,从滑膜细胞p53表达的角度,探讨甲氨蝶呤(MTX)联合环磷酰胺(CTX)治疗RA协同作用和机制.方法 建立Ⅱ型胶原诱导的雌性Wistar大鼠CIA模型,将造模成功的75只大鼠随机分成5组:CIA模型对照组、小剂量MTX治疗组(每周0.9 mg/kg)、大剂量MTX治疗组(每周2.7 mg/kg),小剂量CTX治疗组(每3周24 mg/kg)及小剂量MTX联合小剂量CTX组(MTX每周0.9 mg/kg+CTX每3周24 mg/kg).选8只大鼠为健康对照组,共6组.治疗24周后处死全部动物并取材,经固定、脱钙、包埋,通过免疫组织化学法检测滑膜细胞突变型p53的表达.结果 突变型p53在CIA组表达上调(P<0.05),联合治疗组下调突变型p53优于小剂量MTX、小剂量CTX组(P<0.05),与大剂量MTX组相当(P<0.05).结论 联合治疗组在下调突变型p53表达的作用均优于小剂量MTX、小剂量CTX单用药治疗组,提示MTX和CTX联合治疗为协同作用.     

氯化甲基汞抗裸鼠皮下U251胶质瘤细胞的体内实验研究

目的 在建立裸鼠皮下U251胶质瘤模型基础上,通过体内实验及相关形态学研究,分析氯化甲基汞(MMC)的抗脑胶质瘤作用.方法 制备裸鼠皮下U251胶质瘤模型,随机分为对照组和实验组,实验组裸鼠注射U251脑胶质瘤细胞1 w后,每天灌胃给予10 mg/kg体重MMC,连续5 d,对照组给予相同体积的生理盐水.全部裸鼠于肿瘤接种后14 d处死.结果 大体病理显示实验组肿瘤体积明显小于对照组,病理组织学观察发现实验组U251胶质瘤细胞生长密度较对照组低,并可见细胞体积变小、核固缩等凋亡的形态学改变.透射电镜显示实验组肿瘤细胞发生核固缩、染色质周边化、核断裂、胞浆空泡变性等改变,实验组瘤体汞含量明显高于对照组.结论 MMC对裸鼠U251胶质瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,其机制可能是通过诱导胶质瘤细胞凋亡实现的,相关分子机制有待进一步深入研究.     

重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素对1型糖尿病大鼠肾脏TGF-β1和VEGF表达的影响

目的 尾静脉注射重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素(rAAV-AS),研究rAAV-AS在1型糖尿病大鼠肾脏中表达以及其对转化生长因子(TGF-β)1和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 清洁级SD雄性大鼠随机分为正常组(NC组,n=1 0),其余大鼠使用链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg腹腔注射诱导糖尿病模型,分为糖尿病组(DM组,n=10),重组腺相关病毒空载体组(rAAV-0组,n=10),重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素组(AS组,n=10,2×1012 VG/kg)；尾静脉注射给药,8 w末,检测各组大鼠尿微量白蛋白变化,免疫印迹法检测肾组织中AS的表达以及TGF-β1和VEGF的表达.结果 DN组基本不表达AS,给予rAAV-AS治疗后,大鼠肾组织中AS表达明显增多(P＜0.05)；DN组的MAU、Glu、HbA1c明显增高,给予rAAV-AS治疗后,MAU明显降低(P＜0.05)；光镜:与NC组大鼠相比,DN组病变较明显:肾小球细胞数显著增多,毛细血管袢塌陷,管腔闭塞,肾小球明显体积增大,肾小球基底膜增厚、淋巴细胞数量增多,肾小管肿胀、变性、空泡形成,肾间质可见大量淋巴细胞和单核巨噬细胞浸润.rAAV-0组较DN组未见改善,AS组上述病变较DN组有改善,可见肾小球细胞数教多,毛细血管腔轻度狭窄,肾小管-间质见少量淋巴细胞浸润.免疫组化结果:DN组的TGF-β1和VEGF表达明显增多,rAAV-AS治疗后,TGF-β1和VEGF表达减少(P＜0.05).结论 重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素能在一定时间内在肾组织中表达；重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素对大鼠糖尿病肾病具有保护作用,且这种保护作用可能通过降低TGF-β1和VEGF的表达.     

鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗治疗荷SHG-44人脑胶质瘤大鼠的实验研究

目的探索鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗（pVVP3）对SHG-44人脑胶质瘤生长的抑制作用。方法构建荷SHG-44人脑胶质瘤Wistar大鼠的肿瘤模型，随机分组给予不同的处理给药，观察治疗期间及治疗后的肿瘤生长情况，通过病理组织学、超微结构分析，检测pWP3在Wistar大鼠体内的抗肿瘤作用。结果pWP3治疗组肿瘤生长速度明显受到抑制，其抑瘤率达90．58％。病理组织学及超微结构观察在pWP3治疗组可见典型的凋亡特征。说明pVVP3对SHG-44人脑胶质瘤生长有抑制作用，可诱导肿瘤细胞凋亡。     

胶质瘤基因治疗的研究进展

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,因其浸润性生长且容易复发,手术、放疗、化疗等治疗措施疗效不十分理想。基因治疗的深入研究,为脑胶质瘤提供了一种新的治疗方法和策略。现将胶     

环磷酰胺联合激素治疗狼疮性肾炎17例疗效观察

狼疮性肾炎（LN）是系统性红斑狼疮（SLE）的主要并发症，治疗LN是改善SLE预后的重要措施。我院于2002年1月至2008年1月应用CXT联合激素治疗LN17例，收到了较好的效果，现报告如下。     

甲氨喋呤联合环磷酰胺治疗狼疮性肾炎80例临床观察

目的进一步提高狼疮性肾炎的治疗水平。方法将80例狼疮性肾炎患者随机分为观察组与对照组各40例。观察组口服甲氨喋呤（MTX）、静滴环磷酰胺（CTX）共6个月;对照组仅用CTX,剂量、用法及疗程同观察组。比较两组治疗前后SLEDAI评分、24h尿蛋白定量及不良反应。结果两组治疗后SLEDAI评分均降低,但观察组降低程度明显好于对照组;24h尿蛋白转阴率明显高于对照组;两组均无明显不良反应发生。结论MTX联合CTX治狼疮性肾炎效果确切,尤适用于顽固性尿蛋白阳性者。     

声动力化学疗法对大鼠脑胶质瘤凋亡及相关基因表达的影响

目的 以大鼠颅内C6胶质瘤为实验模型,观察SDT组、单纯照射组、血卟啉单甲醚(HMME)组、对照组脑胶质瘤组织学变化、原位凋亡检测、Cyt-C和Caspase-3蛋白表达水平.结果 SDT组随着时间的延长,肿瘤组织坏死逐渐增加,24 h达到高峰;单纯照射组可见肿瘤组织坏死较SDT组明显少;对照组及HMME组标本各时间段胶质瘤细胞均未见坏死组织.原位凋亡检查见HMME组和对照组凋亡细胞极少,各时间点凋亡率无明显差别.处理后24 h,单纯照射组凋亡率明显高于HMME组和对照组(P＜0.01);处理后3、7 d,凋亡率与HMME组和对照组无明显差别.SDT组处理后24 h,凋亡率明显高于其他3组(P＜0.01).处理后3、7 d,凋亡率与其他3组无明显差别.HMME组和对照组各时间点Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率无明显差别.单纯照射组Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率高于HMME组和对照组(P＜0.01);处理3、7 d后Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率与HMME组和对照组无明显差别.SDT组处理后24 h,Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率明显高于其他3组(P＜0.01).处理后3、7 d,Cyt-C和Caspase-3蛋白表达表达率与其他3组无明显差别.结论 SDT对大鼠脑胶质瘤有明显的抑制效应,早期可能通过损伤线粒体后,释放Cyto-C,激活Caspase-3而直接启动胶质瘤细胞本身凋亡程序.     

整合素αvβ3拮抗剂治疗大鼠脑胶质瘤的实验观察

目的观察整合素αvβ3拮抗剂IS201治疗大鼠脑胶质瘤的效果,并探讨其机制。方法建立SD大鼠C6脑胶质瘤模型,将荷瘤鼠随机分为对照组和实验组。实验组给予整合素αvβ3拮抗剂IS201,对照组给予PBS液,两组均行腹腔注射。观察治疗后大鼠的生存期,测量大鼠肿瘤体积,用免疫组化法检测肿瘤中微血管密度（MVD）和整合素αvβ3、增殖细胞核抗原（PCNA）的表达水平。结果实验组大鼠生存期显著长于对照组,C6脑胶质瘤体积明显小于对照组（P〈0．01）;实验组大鼠C6脑胶质瘤中MVD低于对照组,整合素αvβ3、PCNA的表达水平亦低于对照组（P〈0．01）。结论整合素αvβ3拮抗剂IS201能够降低大鼠C6脑胶质瘤的血管生成和肿瘤细胞增殖,对C6胶质瘤的生长有明显的抑制作用。     

地塞米松对胶质瘤C6细胞增殖、凋亡的影响

目的 观察地塞米松(Dex)对胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响.方法 将C6细胞分为A、B、C、D组,每组1.25×106个细胞,A组不加Dex,B、C、D组分别与终浓度为10-5、10-4、10-3 mol/L的Dex共培养;用血计数板计算C6细胞数,用流式细胞仪检测C6细胞周期及凋亡率.结果 培养24 h时,A、B、C、D组C6细胞数依次为4.37×106、4.29×106、3.57×106、3.44 ×106个/瓶,B、C、D组与A组比较,P均＜0.05;C6细胞凋亡率依次为0.37％、0.52％、1.39％、8.24％,D组与A、B、C组比较,P均＜0.05.G0/G1期C6细胞所占比例分别为82.42％、93.21％、93.71％、77.52％,S期分别为13.22％、5.38％、4.06％、14.74％,G2/M期分别为4.36％、1.41％、2.23％、7.74％;B、C组与A组G0/G1、S期细胞比例比较,P均＜0.05;D组与A、B、C组G2/M期细胞比例比较,P均＜0.05.结论 Dex可通过阻滞C6细胞周期进程抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

抗脑抗体对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的观察抗脑抗体对脑胶质瘤细胞C6的增殖、凋亡和侵袭力的影响。方法将C6细胞分为实验组和对照组,实验组加入不同浓度的抗脑抗体,对照组不加抗脑抗体;分别采用MTT法、流式细胞术及Boyden小室测算C6增殖抑制率、细胞凋亡率及穿膜细胞数。结果实验组加抗脑抗体5、10、20、30、400μml处理后,C6增殖抑制率分别为16．3％±4．4％、18．7％±3．2％、22．6％±3．0％、27．7％±1．4％、39．9％±3．3％,对照组为0;实验组加抗脑抗体5、40μg/ml处理后,C6细胞凋亡率分别为17．257％±5．964％、28．677％±6．748％,对照组为6．043％±0．421％;实验组加抗脑抗体5、20、30μg/ml处理后,C6穿膜细胞数分别为（3266．67±251．66）、（7133．33±305．51）、（15000．00±2000．00）个,对照组为（1533．33±152．75）个。实验组各浓度间相比,P均〈0．05;与对照组相比,P均〈0．05。结论抗脑抗体可抑制脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭,并诱导其凋亡。     

Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡中的作用及机制探讨

目的 观察Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖和凋亡中的作用,并探讨其机制.方法 将U87细胞随机分为A、B、C组,分别加入Notch信号激活剂rhNF-κB、抑制剂DAPT及PBS共培养48 h.用MTT法检测细胞吸光度值(A值)观察细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR、Western blot法分别检测U87细胞中的Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白.结果 培养24、48、72、96 h,A组细胞A值分别为0.185±0.007、0.398±0.012、0.735±0.015、1.083±0.031,B组分别为0.102±0.003、0.130±0.004、0.161±0.006、0.194±0.003,C组分别为0.167±0.005、0.265±0.008、0.496±0.011、0.737±0.016,A、B组与C组比较,P均＜0.05.A、B、C组细胞凋亡率分为0.96％±0.17％、26.51％±3.74％、8.76％±1.40％,A、B组与C组比较,P均＜0.05.与C组比较,A组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著增加(P均＜0.05),B组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著降低(P均＜0.05).结论 Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡中发挥了重要的调控作用,其机制可能与调节靶基因Hes1、抗凋亡蛋白Bcl-2表达有关.     

氯化镧诱导脑胶质瘤SHG44细胞凋亡作用的机制

目的探讨氯化镧对人脑胶质瘤细胞株SHG44细胞诱导凋亡及其作用机制。方法体外培养人胶质瘤细胞,流式细胞仪、电镜检查细胞周期和超微结构的改变,原位杂交技术及免疫组化染色技术检测bcl-2、bax基因、蛋白表达情况。结果氯化镧能促进入脑胶质瘤SHG44细胞发生凋亡,明显增加G1期DNA含量,减少S期DNA含量。使bax基因、蛋白表达显著增强,bcl-2、bax基因蛋白表达显著减弱（P〈0．05）。结论氯化镧可抑制人脑胶质瘤SHG44细胞的生长,并促进其凋亡。     

人参皂甙单体Rh2对人脑胶质瘤细胞U251增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的观察人参皂甙单体Rh2（GS-Rh2）对人脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法用GS-Rh2处理人脑胶质瘤U251细胞,采用MTT法检测U251细胞增殖抑制率,流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI双染法观察U251细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测U251细胞端粒酶活性,RT-PCR法检测U251细胞人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA的表达。结果 5、10、20、40、80μg/ml GS-Rh2组U251细胞增殖抑制率分别为20.42%、32.19%、45.09%、57.37%、73.82%。根据细胞增殖抑制曲线计算出IC30、IC50、IC70值分别为9.7、25.2、68.4μg/ml。FITC和PI荧光双参数点图显示实验组细胞分布区域与对照组相比出现明显改变,随着药物浓度的增加,早期凋亡、晚期凋亡或坏死的区域细胞数量逐渐增多。9.7、25.2、68.4μg/ml GS-Rh2处理12、24、48、72 h后U251细胞端粒酶活性随GS-Rh2浓度增加和作用时间的延长而降低。浓度为25.2μg/ml GS-Rh2作用24、48、72 h的U251细胞hTERTmRNA与β-actin灰度值比为0.964 9±0.004 2、0.401 8±0.001 4、0.297 8±0.001 8,对照组为0.976 4±0.005 1。作用48、72 h U251细胞hTERT mRNA与β-actin灰度值比与对照组相比P均〈0.05;作用48、72 h者相比P〈0.05。结论 GS-Rh2能够诱导人脑胶质瘤U25l细胞凋亡,抑制U25l细胞增殖。其机制与其抑制hTERT基因表达,降低端粒酶活性有关。     

不同移植方法对脑胶质瘤大鼠骨髓间充质干细胞迁移能力的影响

目的观察移植方法对脑质瘤大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）迁移能力的影响。方法立体定向法建立大鼠C6脑胶质瘤模型。A组大鼠用小剂量缓激肽后经荷瘤侧颈内动脉灌注BMSCs组,B组经荷瘤侧颈内动脉灌注尾静脉灌注组,每组6只。免疫组化染色显示MSCs,观察其在正常脑组织和胶质瘤组织中的数量和分布规律。结果三组均可见BMSCs在胶质瘤组织中广泛分布,A组明显多于B、C组（P〈0.01）。BMSCs主要分布于肿瘤内部,在肿瘤与正常脑组织的交界处亦有分布。结论小剂量缓激肽有助于BMSCs进入胶质瘤组织。     

人组织激肽释放酶基因治疗对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗和肾脏并发症的影响

目的 探讨人组织激肽释放酶(HK)基因对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗和慢性肾脏并发症的治疗作用及其机制.方法 在雄性Wistar大鼠以高脂高糖饲料加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病动物模型.以重组腺相关病毒为载体介导HK基因(HK组)或对照基因LacZ(LacZ组)在糖尿病大鼠体内表达,观察实验动物血压、血糖、血胰岛素、尿微量白蛋白、尿渗透压的变化.计算稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、内生肌酐清除率(Ccr)和尿白蛋白排泄率(UAER).Western印迹法检测肝脏、骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶(P13K)的110亚基(pll0)和蛋白激酶B(Akt/PKB)第308位苏氨酸(pThr 308)的磷酸化水平.肾脏切片作形态学分析.结果 HK组第2周开始出现血压下降,并一直持续到实验结束(12周时),而LacZ组血压无明显下降.HK组和LacZ组大鼠空腹血糖无明显变化[(13.09±3.01 vs 13058±2.88)mmol/L],但两组空腹血胰岛素水平[(8.19±2.45 vs 13.85±3.76)mIU/L,P<0.01]和HOMA-IR(4.76±0.33 vs 8.36±0.48,P<0.01)差异有统计学意义.HK组大鼠肌肉和肝脏pll0和pThr308的表达明显增加.HK组UAER[(7.90±2.76 vs 19.07±9.17)mg/24h,P<0.01]和Ccr(0.16±0.12 vs 0.43±0.25,P<0.01)明显低于LacZ组,而尿渗透压明显高于LacZ组[(1150.3±301.9 vs 737.8±184.5)mmol/L,P<0.05].肾脏病理学结果显示LacZ组肾小球和肾小管损害明显,而HK组明显减轻.结论 重组腺相关病毒介导HK基因表达可能通过增加PI3K/Akt磷酸化明显改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗,同时明显减轻糖尿病肾脏损害.     

丙戊酸对胶质瘤细胞化疗敏感性的影响

目的探讨丙戊酸（VPA）体外对胶质瘤细胞株化疗敏感性的影响,进一步提高胶质瘤的化疗效果。方法采用MTT法检测顺铂（DDP）和替莫唑胺（TMZ）单独应用及分别与1.0mmol/LVPA联合应用后胶质瘤细胞的细胞增殖率,计算半数抑制浓度（IC50）及增敏倍数（ER）。结果与单纯DDP处理者比较,VPA联合DDP处理后胶质瘤细胞株SF295、SKMG-1、UW28、SF767IC50显著降低（P〈0.05）;与单纯TMZ处理者比较,VPA联合TMZ处理后胶质瘤细胞株U87、UWR7、UW28、SF767IC50显著降低（P〈0.05）。结论 VPA能够增强部分胶质瘤细胞株对化疗药物的敏感性。     

外源性IL-18基因转染联合顺铂对胶质瘤C6细胞凋亡的诱导作用

目的研究外源性IL-18基因联合顺铂对胶质瘤C6细胞的凋亡诱导作用,为胶质瘤治疗提供新的途径。方法将IL-18基因及pLXSN病毒载体导入胶质瘤C6细胞,建立C6/IL-18及C6/pLXSN细胞;C6/IL-18、C6/pLX-SN及胶质瘤C6细胞均以RPMI1640培养基培养,经0.3、3、30、60、120μg/ml顺铂作用48h后,用酶标仪在490nm波长处测吸光度值,计算细胞抑制率;以顺铂的10倍血浆峰浓度作用（3μg/ml）细胞24h后,采用吖啶橙/溴乙啶（A//EB）双荧光染色法检测细胞凋亡率。结果 C6/IL-18细胞、C6/pLXSN细胞及亲代C6细胞经120、60、30、3、0.3μg/ml顺铂作用后的抑制率依次降低,C6/IL-18细胞抑制率明显高于C6/pLXSN和C6细胞（P均〈0.05）。以30μg/ml顺铂作用后C6/IL-18细胞的凋亡率明显高于C6/pLXSN和C6细胞（P均〈0.05）。结论外源性IL-18基因联合顺铂可明显增加对胶质瘤C6细胞的抑制作用,其相关机制有待进一步探讨。     

Induction of hepatocellular carcinoma by in vivo gene targeting

The distinct phenotypic and prognostic subclasses of human hepatocellular carcinoma (HCC) are difficult to reproduce in animal experiments. Here we have used in vivo gene targeting to insert an enhancer-promoter element at an imprinted chromosome 12 locus in mice, thereby converting ～1 in 20,000 normal hepatocytes into a focus of HCC with a single genetic modification. A 300-kb chromosomal domain containing multiple mRNAs, snoRNAs, and microRNAs was activated surrounding the integration site. An identical domain was activated at the syntenic locus in a specific molecular subclass of spontaneous human HCCs with a similar histological phenotype, which was associated with partial loss of DNA methylation. These findings demonstrate the accuracy of in vivo gene targeting in modeling human cancer and suggest future applications in studying various tumors in diverse animal species. In addition, similar insertion events produced by randomly integrating vectors could be a concern for liver-directed human gene therapy.