补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型初级视皮质BDNF损害的影响

目的:观察补肾活血中药对大鼠慢性高眼压(elevated intraocular pressure,EIOP)模型初级视皮质(primary visual cortex,PVC)脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的干预作用,并对其作用机理进行初步探讨。方法:采用烙闭上巩膜静脉法,烙闭大鼠3支上巩膜静脉,制作大鼠慢性EIOP模型,随机分为3组:模型组,给药组,空白组。连续灌胃8wk,并于8wk末处死大鼠,观察其对EIOP大鼠眼压、PVC的BDNF表达及神经元细胞超微结构的影响。结果:本实验采用的烙闭上巩膜静脉的造模方法使大鼠眼压明显升高(P<0.01),与造模前比较差异有显著统计学意义(P<0.01);PVC病理切片半定量分析表明,模型组BDNF总面积82438±2597.39(S/μm2)、平均光密度1155.9±123.14、积分光密度12915±673.28,与空白组(总面积132370±7588.47S/μm2,平均光密度5365±379.65,积分光密度35102±2648.5)比较均有显著统计学意义(均为P<0.05),模型组BDNF总面积与给药组(108980±9126.77S/μm2)比较有统计学意义(P<0.05),给药组平均光密度(3220.4±413.67)与模型组比较有统计学意义(P<0.05),给药组积分光密度(23821±3431.68)与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾活血中药通过增强BDNF的表达、改善神经元细胞超微结构而促进EIOP大鼠初级视皮质损伤的修复。     

补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型外侧膝状体病理改变的影响

目的观察补肾活血中药对大鼠慢性高眼压(elevated intraocular pressure,EIOP)模型外侧膝状体损伤的干预作用,探讨其作用机理。方法采用烙闭上巩膜静脉法建立大鼠慢性EIOP模型,随机分为3组:空白组、模型组、给药组,观察补肾活血中药对EIOP大鼠眼压、外侧膝状体(lateral geniculate nucleus,LGN)病理形态学变化的影响。结果本实验采用的烙闭上巩膜静脉的造模方法使大鼠眼压明显升高,与造模前比较差异有显著统计学意义(P<0.01),在造模后8周(实验结束)眼压仍为造模前的2.5～3.0倍;LGN病理切片半定量分析表明:模型组神经元细胞密度(51.14±10.52)μm-2、神经元剖面积密度(6.57±1.59)μm-2、有髓纤维密度(0.3556±0.1019)μm-2、Nissl小体积分光密度31826±3796,与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.01或0.05)。模型组Nissl小体积分光密度低于给药组(33906±3213),给药组神经元细胞密度(54.27±12.70)μm-2与空白组(60.95±13.35)μm-2比较差异有显著统计学意义(P<0.01),给药组有髓纤维密度(0.5611±0.1385)μm-2与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾活血中药有助于EIOP大鼠LGN损伤的修复。     

补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型视神经病理改变的影响

目的 观察补肾活血中药对大鼠慢性高眼压(elevated intraocular pressure,EIOP)模型视神经损伤的干预作用,探讨其作用机理.方法 30只(30眼)SD大鼠采用烙闭上巩膜静脉法建立大鼠慢性EIOP模型,随机分为三组:对照组、模型组、给药组,每组各10只,观察补肾活血中药对EIOP大鼠眼压(intraocular pressure,IOP)、视神经病理形态学变化以及超微结构的影响.结果 本实验采用的烙闭上巩膜静脉法使大鼠IOP明显升高(均为P＜0.01),在造模后8周(实验结束)lOP仍为造模前的2～3倍;视神经病理切片半定量分析表明:视神经纤维髓鞘总面积、平均光密度值及积分光密度值分别为:模型组(98 048.810±8139.059) μm2、(517.840±118.862)、(18 031.320±1895.210),对照组各指标分别为(144 975.320±10 341.487) μm2、(768.700±167.331)、(29 283.350±2331.446),两组间比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05);给药组各指标分别为(109 420.500±55 263.250) μm2、(710.080±150.956)、(24 225.730±5455.363),与模型组各指标比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);模型组大鼠视神经超微结构损害明显,给药组损害有所改善.结论 补肾活血中药有助于EIOP大鼠视神经损伤的修复.     

补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型初级视皮质尼氏小体损害的影响

目的：观察补肾活血中药对大鼠慢性高眼压(elevated intraocular pressure,EIOP)模型初级视皮质尼氏小体损害的干预作用,并对其作用机理进行初步探讨。

方法：采用烙闭上巩膜静脉法,烙闭大鼠3支上巩膜静脉,制作大鼠慢性EIOP模型,随机分为3组：空白组,模型组,给药组。连续灌胃8wk,并于8wk末处死大鼠,观察其对EIOP大鼠眼压(intraocular pressure,IOP),初级视皮质(primary visual cortex,PVC)尼氏小体含量、神经元细胞超微结构影响。

结果： 本实验采用的烙闭上巩膜静脉的造模方法使大鼠眼压明显升高(P<0.01),与造模前比较差异有显著统计学意义(P<0.01); PVC病理切片半定量分析表明：模型组尼氏小体总面积34941±8482.1·S/μm²、平均光密度152.8±27.97、积分光密度11993±3084.8,与空白组(总面积55742±6348.1·S/μm²、平均光密度304.04±100.1、 积分光密度18219±3548.9)比较均有显著统计学意义(均为P<0.05),模型组Nissl小体总面积、平均光密度、积分光密度与给药组(总面积46406±5989.3·S/μm²,平均光密度251.05±77.41,积分光密度16899±4040.6)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。

结论：补肾活血中药通过增强尼氏小体的表达、改善神经元细胞超微结构而促进EIOP大鼠初级视皮质损伤的修复。     

补肾活血中药对慢性高眼压模型大鼠视功能损害的干预作用

目的:探讨补肾活血中药对大鼠慢性高眼压(elevated in-traocular pressure,EIOP)模型视功能损害的干预作用和机制。方法:采用烙闭上巩膜静脉法,制作大鼠EIOP模型,随机分为5组:模型对照组,补肾活血高、中、低剂量组,空白对照组。连续灌胃8wk末处死大鼠,观察其对EIOP大鼠眼压(intraocular pressure,IOP),多焦视网膜电图(multifocal electroretinogram,mfERG)和视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)病理形态学变化的影响。结果:造模后大鼠IOP明显升高,在造模后8wkIOP为造模前的3倍,补肾活血有轻度的降眼压的作用;对大鼠mfERG一阶函数核(first order kernel,FOK)的总波及1,2,3,4环P1波反应密度、总波P1波峰潜时、2环及3环N1波反应密度,3环、4环N1波峰潜时有恢复。结论:补肾活血中药可改善大鼠慢性EIOP模型的视功能,有助于mfERG反应密度和波峰潜时的恢复。     

补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型视网膜神经节细胞PI3K/Akt信号转导通路p-Akt表达的影响

目的　观察补肾活血中药对大鼠慢性高眼压（ｅｌｅｖａｔｅｄｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒｐｒｅｓｓｕｒｅ,ＥＩＯＰ）模型视网膜神经节细胞（ｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｌｓ,ＲＧＣ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号转导通路ｐ-Ａｋｔ表达的影响。方法　３０只ＳＤ大鼠随机分成３组:对照组、模型组和给药组,模型组和给药组建立ＥＩＯＰ模型。给药组造模后每天予复方丹参片和杞菊地黄丸的混悬液灌胃,每天１次,连续８周,对照组、模型组每天予生理盐水灌胃。记录造模前、造模后即刻、造模后８周的眼压;光镜下观察各组视网膜厚度和ＲＧＣ数量,电镜下观察视网膜超微结构,免疫组织化学法检测视网膜内ｐ-Ａｋｔ的表达。结果　造模后８周眼压与造模后即刻相比,给药组有降低趋势,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。造模后８周,给药组与模型组ＲＧＣ数量均低于对照组,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;对照组视网膜厚度与给药组相比,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）,而对照组与模型组相比,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）;给药组ＲＧＣ数量及视网膜厚度均高于模型组,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。电镜下ＲＧＣ超微结构显示,模型组损伤明显,给药组较模型组有所改善。视网膜ｐ-Ａｋｔ表达免疫组织化学结果分析显示,给药组ｐ-Ａｋｔ阳性染色总面积、平均光密度、积分光密度值与模型组相比,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）,给药组黑度（１３９．９７±１１．７９）虽高于模型组（１３７．９５±６．１３）,但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　补肾活血中药用于ＳＤ大鼠慢性ＥＩＯＰ模型,能降低眼压,提高ＲＧＣ数量及改善超微结构,增加视网膜厚度,上调ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号转导通路中ｐ-Ａｋｔ的表达。     

补精益视片对大鼠慢性高眼压模型视网膜p-Akt表达的影响

目的　观察补精益视片对大鼠慢性高眼压（ｅｌｅｖａｔｅｄｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒｐｒｅｓｓｕｒｅ,ＥＩＯＰ）模型ｐ-Ａｋｔ表达的干预作用,探讨其作用机理。方法　将３０只ＳＤ大鼠随机分为３组:对照组、模型组、给药组,模型组和给药组采用烙闭上巩膜静脉法建立ＳＤ大鼠慢性ＥＩＯＰ模型,给药组每天予１．８ｇ·ｋｇ－１体质量补精益视片混悬液灌胃,对照组、模型组每天予３ｍＬ生理盐水灌胃,连续给药８周,并于８周末处死大鼠,观察各组大鼠眼压、视网膜ｐ-Ａｋｔ表达的情况。结果　模型组、给药组大鼠造模后即刻直至造模后８周与造模前眼压相比均升高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）;造模后８周眼压与造模后即刻相比,给药组有降低趋势,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）,模型组无降低趋势,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。造模后８周视网膜ｐ-Ａｋｔ表达免疫组织化学分析示:给药组总面积、平均光密度和积分光密度分别为（７４６３１．８１±１２８４１．３０）μｍ２,９３９．２６±１７５．１７和３７８１４．９６±５８２２．７１,与模型组的（３７９４７．２６±８０５０．５１）μｍ２、４８１．４５±１６１．０２和１８９０７．６４±４３６７．２９相比,差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）;给药组平均黑度为１３８．５５±８．５８,虽高于模型组的１３６．５２±３．８１,但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　补精益视片通过降低眼压、上调视网膜ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号转导通路中ｐ-Ａｋｔ的表达而保护慢性ＥＩＯＰ模型ＳＤ大鼠的视功能。     

活血化瘀汤对急性高眼压大鼠视网膜内质网应激的影响

目的 研究急性高眼压大鼠视网膜的内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress,ERS)以及活血化瘀汤对ERS的影响.方法 88只Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、高眼压组(40只)、治疗组(40只).除正常对照组外所有大鼠均随机取一眼制作急性高眼压模型,治疗组在造模后给予活血化瘀汤(4 mL·d-1)灌胃,高眼压组和治疗组分别在造模后12 h、ld、3d、7d、14 d均等处死大鼠.HE染色观察各组视网膜组织结构变化,免疫组织化学染色观察视网膜GRP78、Thy-1表达变化,RT-PCR检测视网膜GRP78、Thy-1 mRNA变化.结果 光镜下见高眼压组视网膜早期水肿,后期萎缩;治疗组与高眼压组在各时间点的变化趋势相同,但程度均轻于高眼压组.免疫组织化学和RT-PCR结果显示高眼压组造模后12h,GRP78蛋白和mRNA的表达量迅速上调(0.291±0.012、1.534±0.143),与正常对照组(0.195±0.003、1.011±0.011)比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);造模后1d,表达量达到高峰(0.498±0.049、2.047±0.177);造模后3d迅速降低,但仍高于正常对照组,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).治疗组GRP78蛋白和mRNA表达量在造模后12 h(0.274±0.023、1.398±0.031)较正常对照组显著增多,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),较高眼压组低,但差异均无统计学意义(均为P＞0.05);造模后1d达高峰(0.432 ±0.042、1.641 ±0.164),但增加量均少于同时间点高眼压组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);造模后3d表达量降低(0.212±0.022、1.174±0.126),与正常对照组比较,差异均无统计学意义(均为P＞0.05),但低于同时间点高眼压组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).造模后7d、14 d三组间GRP78蛋白和mRNA的表达量差异均无统计学意义(均为P＞0.05).造模后14 d,高眼压组和治疗组Thy-1蛋白和mRNA的表达量均降低,但治疗组Thy-1 mRNA表达量(0.754±0.053)明显高于高眼压组(0.627±0.069),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ERS参与了急性高眼压视网膜损伤过程,中药活血化瘀汤对该损伤有保护作用,可能与其抑制ERS有关.     

慢性高眼压模型鼠视网膜神经节细胞及视神经中9位丝氨酸磷酸化糖原合酶激酶3β的表达变化

目的 观察慢性高眼压模型鼠视网膜神经节细胞(retina ganglion cells,RGCs)和视神经中9位丝氨酸磷酸化糖原合酶激酶3β[p-GSK3β(ser9)]的表达变化,探讨GSK3β是否在慢性高眼压RGCs及视神经退行性病变中发挥作用.方法 取健康SD大鼠30只,随机分为3组:模型对照组、慢性高眼压模型2周组、慢性高眼压模型4周组,每组10只.取大鼠右眼,采用巩膜上静脉结扎并烧灼法建立大鼠慢性高眼压模型.分别于造模后2周和4周取5只大鼠眼球行冰冻切片,尼氏染色观察RGCs数目,免疫荧光染色观察RGCs和视神经中p-GSK3β(ser9)的变化;各组取另外5只大鼠眼视网膜,Western blot检测p-GSK3β(ser9)及总-GSK3β的表达.结果 造模前3组大鼠右眼眼压差异无统计学意义(P=0.89);造模后3组间眼压差异有统计学意义(P＜0.01),慢性高眼压模型2周组和4周组眼压与模型对照组比较明显升高,分别升高了59.13％和26.93％,差异均有统计学意义(均为P＜O.01).视网膜尼氏染色RGCs计数发现模型对照组RGCs数为(149±12)个,慢性高眼压模型2周组和4周组RGCs数较模型对照组明显减少,分别为(120±10)个和(86±7)个,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);且4周组比2周组进一步减少(P＜0.01).慢性高眼压模型2周组和4周组视网膜中p-GSK3β(ser9)阳性着色,同模型对照组相比,其RGCs层及视神经中p-GSK3β(ser9)染色荧光减弱;4周组较模型对照组减弱更明显.与模型对照组相比,慢性高眼压模型2周组和4周组视网膜中总-GSK3β的表达差异无统计学意义(F=0.24,P=0.79);而3组间p-GSK3β(ser9)表达差异有统计学意义(P＜0.01),与模型对照组相比,慢性高眼压模型2周组和4周组视网膜中p-GSK3β(ser9)分别减少了19.89％和36.46％(均为P ＜0.05).慢性高眼压模型4周组比2周组视网膜中p-GSK3β(ser9)表达持续减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 慢性高眼压模型鼠RGCs数目减少,RGCs和视神经中p-GSK3β(ser9)表达减少,推测p-GSK3β(ser9)表达变化可能参与了慢性高眼压模型鼠RGCs及视神经退行性病变.     

补肾活血中药血清对加压纯化培养视网膜神经节细胞PI3K/AKT信号转导通路的影响

目的 研究补肾活血中药血清对加压纯化培养视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡模型PI3K/Akt信号转导通路主要成员PDK及Akt表达的影响,探索补肾活血法保护RGCs的机制.方法 制备补肾活血中药含药血清,体外纯化SD大鼠RGCs,采取开放式压力控制培养系统建立体外加压培养RGCs凋亡模型,以50g·L-1、100g· L-1、200g· L-1血清浓度梯度补肾活血中药血清分别处理.将RGCs分为5组,分别为正常培养组(N组)、对照组(C组)、50 g· L-1补肾活血中药血清组(50 g·L-1BSHX组)、100g· L-1补肾活血中药血清组(100 g·L-1BSHX组)、200g·L-1补肾活血中药血清组(200 g·L-1BSHX组),Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测补肾活血中药血清对RGCs PDK及AktmRNA表达水平的影响,Western blot检测各组PDK、Akt蛋白表达量.结果 Q-PCR检测各组mRNA结果:C组(0.04±0.01)与N组(1.00±0.04)相比,RGCs中PI3K、Akt的mRNA表达水平下降,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05),而50 g·L-1、100 g·L-1、200 g·L-BSHX组(0.18±0.01、0.21±0.02,0.22±0.01、0.36±0.01,0.84±0.10、1.07±0.17)与C组相比,PI3K、Akt mRNA含量逐渐升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).Western blot检测各组蛋白表达,C组与N组相比,细胞PI3K、Akt的蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P＜0.05),而50 g·L-1、100 g·L-1、200 g·L-BSHX组与C组相比,PI3K、Akt蛋白表达量逐渐升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 补肾活血中药血清抑制加压诱导的RGCs凋亡,其机制可能与激活PI3K/Akt信号转导通路有关.     

大鼠实验性慢性高眼压对视网膜神经节细胞的损伤

目的:制作高眼压大鼠模型,观察高眼压对视神经的损害。方法:成年Wistar雄性大鼠65只,烧灼右眼上方2支和外侧1支巩膜上静脉,建立慢性高眼压模型。左眼作为对照眼。对造模成功的,分别于造模后1d,1,2,3,4,6,8,10wk各摘除6只大鼠双眼。在取出眼球前24h,用Fluoro-gold进行视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)逆行性染色,做视网膜铺片计数RGC,观察不同时段高眼压对RGC的影响。结果:右眼巩膜上静脉烧灼后各时间点造模眼平均眼压分别为42.2±1.8mmHg,37.9±2.3mmHg,36.1±2.0mmHg,33.6±2.2mmHg,32.2±2.4mmHg,30.1±2.0mmHg,30.5±2.1mmHg和27.6±1.3mmHg。术后各时间点的成模率分别为80.0%,76.9%,74.5%,71.7%,63.8%,56.1%,42.9%,41.4%。成模率和成模眼的眼压随时间延长呈下降趋势。实验组和对照组的RGC密度在早期(巩膜上静脉烧灼术后3wk内)没有显著差别。造模后4wk高眼压组RGC密度明显低于对照组(P<0.05),随着时间的推移差别越来越显著。结论:巩膜上静脉烧灼法能诱导出持续的肯定的大鼠慢性高眼压模型,成模眼的眼压和随时间而下降。高眼压持续的时间越长,RGC的损失越多。     

银杏叶提取物对大鼠持续性高眼压下的视网膜神经节细胞活性的保护作用

目的:探讨银杏叶提取物(extractof Ginkgo bilobaleaves,EGb)对大鼠持续性高眼压损伤下的视网膜神经节细胞(retinalganglioncells,RGC)活性的保护作用。方法:健康SD大鼠20只,采用烧烙法,烙闭大鼠左眼2条浅层巩膜静脉,制作大鼠持续性高眼压模型,从中选出眼压稳定在实验要求(眼压>26mmHg)的大鼠12只随机分为A组(对照组)和B组(EGb治疗组)。治疗组予EGb每日150mg/kg灌胃治疗,对照组为空白对照,不做任何处理。1mo后处死大鼠摘取眼球,制作眼球标本,常规石蜡切片,AgNOR染色观察RGC细胞核内的银染颗粒。采用计算机图象分析系统对RGC细胞核内的银染颗粒进行定量分析。结果:A组大鼠模型眼RGC细胞核内银染颗粒为1.33±0.07个/细胞,B组为1.83±0.09个/细胞,B组模型眼较A组模型眼RGC细胞核内银染颗粒多,其差异有显著性意义(P<0.05)。两组模型眼较正常眼的RGC细胞核内银染颗粒明显减少,其差异有显著性意义(P<0.05)。结论:大鼠持续性高眼压可导致RGC细胞核内银染颗粒减少,而EGb对RGC活性有部分保护作用。     

补精益视片对大鼠慢性高眼压模型视网膜损害的影响

目的　观察补精益视片对大鼠慢性高眼压（ｅｌｅｖａｔｅｄｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒｐｒｅｓｓｕｒｅ,ＥＩＯＰ）模型视网膜损害的干预作用,探讨其作用机理。方法　将３０只ＳＤ大鼠随机分为３组:对照组、给药组、模型组,每组１０只。采用烙闭上巩膜静脉法对给药组、模型组ＳＤ大鼠建立慢性ＥＩＯＰ模型,观察补精益视片对慢性ＥＩＯＰ大鼠眼压和视网膜病理形态学变化的影响。结果　给药组、模型组大鼠在造模后即刻直至造模后８周与造模前相比眼压均升高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）,说明ＥＩＯＰ模型造模成功。造模后８周眼压与造模后即刻相比,给药组有降低趋势,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）,模型组差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。造模后８周,视网膜神经节细胞（ｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｌｓ,ＲＧＣｓ）数量给药组（１４．５７±１．９７）与模型组（１０．７６±２．１９）均明显低于对照组（１７．４７±１．９７）,差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）;视网膜厚度模型组为（１５０．８３±１７．９１）μｍ低于对照组的（２１９．７２±３２．２４）μｍ,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）,给药组为（２１５．５１±５１．２３）μｍ,与对照组相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）;给药组ＲＧＣｓ数量及视网膜厚度均优于模型组,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。ＲＧＣｓ超微结构显示给药组较模型组明显改善。结论　补精益视片能保护ＳＤ大鼠慢性ＥＩＯＰ模型视功能,表现为降低眼压、提高ＲＧＣｓ数量、增加视网膜厚度、改善ＲＧＣｓ超微结构。     

两种慢性高眼压大鼠模型视网膜结构和眼压变化的评估

目的 评估两种慢性高眼压大鼠模型的升眼压效果和视网膜结构的改变.方法 分别通过前房内注射微珠(微珠组)和结扎3支巩膜上静脉(结扎组)的方法制作两种慢性高眼压大鼠模型(每组6只).使用TonoPen眼压计测量大鼠眼压,模型制作当天及其后每周测量大鼠眼压,大鼠右眼为实验眼,左眼为对照眼(假手术眼).采用荧光金上丘逆标的方法标记视网膜神经节细胞并计数;使用免疫荧光标记的方法观察大鼠视网膜结构的改变.结果 造模后1-8周微球组和结扎组大鼠眼压均升高;其中结扎组眼压为(27.20±1.83) mmHg(1 kPa=7.5 mmHg),其对照眼眼压为(19.80±1.35) mmHg(P=0.001,n=6);微珠组眼压为(27.40±1.88) mmHg,其对照眼眼压为(19.40±1.00) mmHg(P=0.000,n=6).造模后8周,巩膜上静脉结扎组视网膜神经节细胞丢失37.9％、39.6％和33.5％(均为P=O.000,n=6),前房内注射微珠组丢失37.3％、39.4％和32.3％(均为P=0.000,n=6),两组视网膜神经节细胞的丢失数量比较差异均无统计学意义(P =0.855、0.949、0.634,n=6).高眼压模型8周后,相较于对照组,微珠组和结扎组视网膜神经节细胞核数量均有明显减少,组织厚度变薄,但两组间差异无统计学意义[对照组厚度(7.32±0.39) μm,结扎组厚度(4.97±0.33)μm,微珠组厚度(5.00 ±0.31) μm].前房内注射微珠组在部分组织切片可发现微珠污染.结论 巩膜上静脉结扎和前房内注射微珠均可以使大鼠眼压稳定增高.巩膜上静脉结扎具有实施方便和价格低的优势,并且没有微珠污染的缺点.     

制作慢性高眼压动物模型的一种新方法--水下电凝巩膜表面静脉法

目的研究慢性高眼压动物模型的制作方法.方法选择20只健康Wistar大鼠,雌雄不限,随机分为高眼压组(10只)和sham对照(假手术)组(10只).高眼压组采用电凝鼠巩膜表面至少三组静脉及角膜缘周围血管,减少房水静脉回流升高眼压,而sham对照组只剪开球结膜,未进行巩膜表面静脉以及角膜缘周围血管电凝.分别于术后1,2,3,4及8wk测大鼠双眼压,结果进行统计学分析.结果高眼压组右眼术后眼压明显升高.术后1wk眼压(30.35±4.98)mmHg(1kPa=7.5mmHg),术后1～8wk间眼压基本稳定.术后各时间点高眼压组右眼眼压与术前、左眼及sham对照组右、左眼间比较,差异有统计学意义(P＜0.001).结论采用电凝鼠巩膜表面至少三组静脉及角膜缘周围血管,减少房水静脉回流能成功复制慢性高眼压动物模型.     

巩膜上静脉烙闭法建立大鼠高眼压模型对视网膜微观结构的影响

目的　观察巩膜上静脉烙闭法建立的大鼠高眼压模型对视网膜微观结构的影响，为青光眼视神经损伤及保护机制提供研究基础。方法　选取不同体质量SD大鼠40只，分为A组（150~200 g）、B组（>200~250 g）、C组（>250~300 g）、D组（>300~350 g），每组各10只，分别测量3 d白天及夜间基线眼压。随机选取SD大鼠（雌雄随机，250~300 g）40只，术前测量3 d基线眼压，以右眼为实验眼，烙闭实验眼3~4支巩膜上静脉，以左眼为对照眼，于术后即刻、1~7 d、14 d、21 d、28 d分别测量实验眼和对照眼眼压。于术前及术后28 d分别用光学相干断层扫描(optical coherence tomography，OCT)仪测量视网膜厚度。于术后28 d处死大鼠，行石蜡包埋、苏木精伊红（hematoxylin eosin，HE）染色，计数视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）并测量视网膜厚度。结果　不同体质量大鼠昼夜眼压比较差异均有统计学意义（均为P<0.001）。A组大鼠眼压较其他3组眼压低（均为P<0.05）。巩膜上静脉烙闭术后即刻实验眼眼压达到峰值，较对照眼高122%（P<0.001），之后缓慢下降，到术后14 d、21 d实验眼眼压较对照眼分别升高约41%、20%（均为P<0.001），到术后28 d实验眼与对照眼眼压差异无统计学意义（P>0.05）。OCT提示内层视网膜变薄（均为P<0.001）。HE染色切片结果提示RGCs数量减少，内、中、外层视网膜均变薄（均为P<0.05），且以内层变化最明显（P<0.001）。结论　大鼠基线眼压昼夜存在差异，白天眼压较夜间眼压低，低体质量（150~200 g）大鼠眼压偏低。烙闭大鼠巩膜上静脉能维持3周的眼压升高，且能使视网膜变薄、RGCs数量减少，故巩膜上静脉烙闭法是建立大鼠高眼压模型的有效方法。