肺癌支气管活检组织及痰液中p53基因突变的检测及临床应用

采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法，从分子水平探讨了ｐ５３基因突变与肺癌发生之间的关系。对４３例肺癌支气管活检组织及１０例痰液标本进行了ｐ５３基因第５～８外显子突变的检测，发现４３例中有１７例发生了ｐ５３突变，突变率为３９．５％（１７／４３），其中鳞癌为３０．８％（４／１３），腺癌为３５．３％（６／１７），小细胞癌为５８．３％（７／１２），大细胞癌为０％（０／１）。本文对同一患者的痰液标本检测结果与组织标本中ｐ５３基因突变检出率一致，均为３０．０％（３／１０）。采用χ２检验表明，ｐ５３突变在性别构成、临床分期、组织类型及淋巴结转移等方面两组均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。但吸烟组ｐ５３突变率（５３．８％）明显高于非吸烟组（１７．６％）；低中分化组ｐ５３突变率（５１．７％）明显高于高分化组（１４．３％），提示ｐ５３基因突变与吸烟及细胞的分化程度存在相关性（Ｐ＜０．０５）。     

痰液K-ras p53检测辅助诊断肺癌

（目的〕了解分子生物学检测方法是否对肺癌的诊断具有辅助价值。（方法）痰液处理方法为痰液0．5毫升加入痰处理液制备细胞沉淀液，酚氯仿提取DNA；SSCP－PCR银染和RFLP－PCR方法对痰液中P53、K－ras突变情况进行检测。（结果）在确诊的76例肺癌病人中，p53突变率为40．8％，K－ras突变率为25．0％，突变与肺癌类型、分期未见明显相关，其中有29例病人痰液普通脱落细胞学检测明性．痰液p53或K－ras突变阳性，最后经纤支镜刷检，活检部分经过手术征实为肺癌，有12例经手术证实为Ⅰ～Ⅱ期的相对早期的肺癌。(结论)痰液SSCP－PCR、RELP-PCR方法检测癌基因突变具有简便、实用、准确、可行的特点。对部分疑为肺癌而痰液脱落细胞学检测阴性的病人具有一定的辅助诊断价值。     

可疑肺癌病人纤支镜检查标本的p53基因突变检测

探讨行支镜检查标本的Ｐ５３基因突变检测用于肺癌早期诊断的可行性。方法：采用聚合酶链反应－单链构象记性分析银染技术,对３５例怀疑为肺癌病人的８５份纤支镜检查标本行Ｐ５３基因５－８号外显子突变检测。结果发现１０例病人有Ｐ５３基因突变（２８．６％）,其中以６号外显子突变率最高（１７．１％）。     

肺癌患者癌组织和痰液细胞中p53和K-ras基因突变的研究

目的 检测肺癌组织和肺癌患者痰液脱落细胞中ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ基因突变情况,比较联合检测ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ和单一检测ｐ５３或Ｋ－ｒａｓ基因在肺癌诊断中的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法检测了５９例肺癌组织、癌旁肺组织、１４全肺部良性病变肺组织及患者痰液脱落细胞中ｐ５３基因第５～８外显子、Ｋ－ｒａｓ基因第１外显子突变。结果 肺癌组织中ｐ５３基因突变率为３７．３％（２２／５９）,痰液脱落细胞为３     

肺癌患者组织和痰液中p53基因、K-ras基因突变

 目的　探讨p53、K-ras基因在肺癌患者癌组织及相应痰液中改变情况及其联合检测在肺癌早期诊断中的价值。方法　对59例肺癌组织和14例肺部良性组织及相应痰液,应用PCR-SSCP-银染法检测了p53基因第5～8外显子突变情况;应用PCR-RFLP法对K-ras基因突变进行了检测。结果　p53基因在肺癌组织中突变率为37.3%,K-ras基因在肺腺癌突变率为48.0%,其它类型肺癌突变率仅为8.8%。相应痰液中两基因突变率分别为33.8%和44.0%,与组织中的突变率无明显差异,P<0.01。良性组织及相应痰液中两基因均无突变。吸烟患者的突变率(48.7%,68.5%)明显高于非吸烟患者的突变率(15.0%,11.1%),P<0.01;两基因的联合检测在肺癌的早期诊断中的价值(54.2%)明显优于单基因的检测,P<0.05。结论　痰液和组织中的基因突变率基本相似,即痰液中脱落细胞的分子遗传学改变能反映肺组织情况。因此以痰液为目标多基因的联合检测可能有助于肺癌的诊断。     

肺癌组织和支气管切缘p53基因突变研究

目的 检测肺癌组织和支气管切缘Ｐ５３基因突变,以预测肺癌手术切除的效果和局部复发。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法,检测５０例肺癌和７例肺部良性疾病手术切除标本的支气管切缘（切缘病理无癌残留）、地组织和正常肺组织听Ｐ５３基因突变,并随访了解术后切缘癌复发与癌复发转移情况。结果 １４例（２８％）肺癌支气管切缘和２８例（５６％）肺癌组织存在Ｐ５３基因突变,正常肺组织和良性病变肺组织未发现Ｐ５３基因突变。肺     

肺癌患者吸烟量与痰液细胞p53和Ki—ras基因突变的关系

目的　了解痰液细胞癌基因突变是否与肺癌患者的吸烟量有相关性。方法　将痰液 0 .5毫升加入痰处理液制备细胞沉淀液 ,酚氯仿提取DNA ;应用SSCP PCR银染和RFLP PCR方法对痰液中p5 3、K ras突变情况进行检测。统计肺癌患者的香烟消耗量 ,分析p5 3、K ras突变与吸烟量的关系。结果　在确诊的 110例肺癌中 ,存在p5 3或K ras基因突变者有 76例 ,突变率达 69.1% ,其中 16例为p5 3和K ras基因均有突变。全组中有 71例重度吸烟者吸烟指数 (≥ 40 0支·年 ) ,71例中 5 5例有p5 3或K ras基因突变 ,突变率达 77.5 % ,显著高于非吸烟组 (P <0 .0 0 1) ;p5 3和K ras突变患者的平均吸烟指数分别达到 861和 63 0支·年 ;而未突变的平均吸烟指数为 2 84和 5 5 4支·年 ,二者之间有显著性差异 ( χ2 =3 6.5 6,P =0 .0 0 2 ,双尾检验 )。结论　痰液细胞癌基因突变检测具有简便、实用、可行的特点 ,吸烟的肺癌患者中癌基因突变率显著高于非吸烟的肺癌患者 ,提示吸烟尤其是重度吸烟可能是支气管癌基因突变的主要原因之一 ,值得临床进一步开展深入的研究。     

吸烟与肺癌p53基因突变相关性研究进展

从吸烟与肺癌的关系、肺癌p53基因突变、吸烟与肺癌p53基因突变的相关性研究等方面进行阐述，对吸烟患肺癌P53基因突变的频率和类型、吸烟与肺癌P53基因突变存在的量效关系、密切相关、相关、不确定和无关等内容进行了综述，以期对我国开展这些工作有所启示。     

PCR-TGGE法检测p53基因突变诊断肺癌淋巴结微转移

背景与目的：转移是影响肺癌患者预后的重要因素之一,但在淋巴结内存在少量癌细胞时常规的检测方法难以发现。本研究的目的是探讨检测肺癌相关淋巴结内微转移存在的敏感方法。方法：利用温度梯度凝胶电泳(temperature gradient gel electrophoresis,TFGGE)方法,对39例原发性肺癌患者的肿瘤组织及其相关的110枚淋巴结,进行p53基因(外显子5,6,7,8)的突变检测,并对部分淋巴结采用无间隔连续切片,证实微转移存在。结果：在39例肺癌患者中,23例原发肿瘤检测出p53基因突变,在相应的67枚淋巴结中,40枚淋巴结显示p53基因突变,且与原发灶变化一致;而在常规病理组织学检查时,仅26枚淋巴结存在肿瘤转移。原发肿瘤无p53基因突变者的43枚淋巴结和10枚非瘤患者淋巴结,均无p53基因突变。对常规病理组织学检查阴性,PCR-TGGE检测有p53基因突变的14枚淋巴结,进行无间隔连续切片,在4枚淋巴结中证实有微转移存在。结论：p53基因突变的检测发现了肺癌淋巴结中微转移的存在,可以作为常规病理组织学检查的补充。     

喉癌p53基因点突变的研究

目的 :研究喉癌p53基因第 6、7外显子的点突变情况。方法 :采用聚合酶链反应 -限制性片断长度分析 (PCR RFLP)法。结果 :喉癌p53基因第 6外显子第 2 0 5密码子突变率为 13.5% ,突变情况与喉癌组织分化类型和程度无关 ;第 7外显子 2 4 8位点突变率为 0。结论 :p53基因 2 0 5位点是喉癌的突变热点 ,而其 2 4 8位点则不是喉癌的突变热点。     

检测肺癌患者血清p53抗体的临床意义

目的:探讨检测肺癌患者血清p53抗体的临床意义。方法:采用酶联免疫吸附法检测120例肺癌患者血清p53抗体,并以30例肺部良性疾病患者和120例正常健康人作对照。结果:肺癌患者血清p53抗体水平明显高于肺部良性疾病患者和正常人(P<0.05),而正常人与肺部良性疾病患者间无显著性差异(P>0.05)。120例肺癌中26例p53抗体阳性,阳性率为21.7%,而30例肺部良性疾病患者和120例正常人无1例阳性。肺癌者血清p53抗体与肺癌细胞分化程度和临床分期有密切关系(P<0.01)。结论:检测血清p53抗体水平有助于肺部良恶性疾病的诊断及鉴别诊断。     

肺癌患者GSTM1基因型与p53基因突变的相关关系研究

目的:探索肺癌患者Ⅱ相代谢酶主要亚型GSTM1的基因型与p53基因突变的关系.方法:应用双重PCR和PCR-SSCP(单链构像多态性分析)技术,检测了63例肺癌患者和47例健康对照中GSTM1基因缺失及肺癌组织p53基因突变的情况,并分析其相关关系.结果:肺癌组GSTM1基因缺失率为71.4%(45/63),对照组为51.1%(24/47),差异有显著统计学意义,OR为2.40(95%CI为1.09-5.29).p53基因突变率在63例肺癌组织中为49.2%(31/63),在15例对照组织中仅为6.6%(1/18).58.1%肺癌病例同时存在p53基因突变和缺失GSTM1基因(P＜0.05).结论:GSTM1基因缺失与p53基因突变相关,GSTM1基因缺失可能增加p53基因突变的几率,从而导致肺癌患病危险性的增加.     

p53基因突变与乳腺癌关系的研究

[目的]研究p53基因突变与乳腺癌的关系,［方法]采用PCR－SSCP法检测了60例乳腺癌组织中p53基因的5、6、7三个外显子。［结果］对例有异常电泳带,Ⅱ-Ⅳ期乳腺癌中存在着高频率的p53基因突变,Ⅱ期15／25例（60.0％）,Ⅲ期14／18例（77.8％）,Ⅳ期4／4例（100％）。腋窝淋巴结转移阳性者的突变率（30／36,83.3％）明显高于腋淋巴结转移阴性者（3／14,21.4％）。〔结论〕p53基因异常可能发生在乳腺癌早期,并持续存在于乳腺癌突变的全过程,在乳腺癌的发生和演进过程中起着重要作用。腋窝淋巴结转移阴性的病人中也有p53基因的突变,提示应密切关注此类病人的预后。     

非小细胞肺癌FHIT基因蛋白表达缺失及与突变型p53表达相关性

[目的]了解非小细胞肺癌组织(NSCLC)中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因蛋白(Fhit)表达缺失及其与突变型p53基因蛋白(p53)表达的相关性.[方法]应用免疫组织化学方法了解NSCLC组织中Fhit及p53的表达.[结果]62.2%(56/90)的NSCLC组织显示Fhit表达缺失,同时48.9%(44/90)有突变型p53表达;两者的异常表达在非鳞组中明显相关(P＜0.001),而在鳞癌组中无相关性(P=0.079);另外,两者的异常表达在非吸烟组中明显相关(P=0.006),而在吸烟组中无相关性(P=0.113).[结论]Fhit表达缺失和突变型p53表达是NSCLC中常见事件;而且两者在non-SqCC和非吸烟的肺癌者中有明显的相关性.     

非小细胞肺癌中p53蛋白表达及其临床意义

目的：为探讨非小细胞肺癌中p53蛋白表达与肺癌组织学类型、分化程度和淋巴结转移的关系。方法：应用免疫级化技术（ABC法），以p53单克隆抗体检测53例非小细胞肺癌组织中p53基因的表达，组织经微波抗原修复后进行免疫染色。结果采用X2检验。结果：p53蛋白在53例非小细胞肺癌中表达阳性率为64．2％，p53蛋白表达与非小细胞肺癌的组织学类型无关（P＞0.05）；与肺鳞癌分化程度有关（P＜0.01）；肺腺癌中与淋巴结转移有关（p＜0.05）。结论：p53基因的表达异常与不同类型的肺癌发生发展相关，提示P53基因在肺癌的形成、分化和转移过程中起不同的调节作用，p53蛋白过度表达则预后差，检测p53蛋白对判断非小细胞肺癌预后具有应用价值。     

p53和MMP-2在肺癌组织中的表达及意义

[目的]探讨p53及MMP-2蛋白在人肺癌组织中的表达情况。[方法]采用量子点免疫荧光组织化学（QDs—IHC）技术分析和研究人肺癌组织芯片中p53及MMP-2蛋白的表达情况,并检测p53及MMP-2蛋白在肺癌组织中的共表达。[结果]QDs-IHC检测分析显示,p53及MMP-2蛋白在肺癌组的表达均高于对照组,差异显著（P〈0．05）。p53及MMP-2蛋白表达之间呈显著正相关（r=0．533,P〈0．01）。[结论]新型半导体免疫荧光标记试剂-量子点结合组织芯片技术（QDs-IHC）可以检测到p53及MMP．2蛋白在肺癌组织中的表达,p53及MMP-2在肺癌组织中的共表达对肺癌的恶性进展起促进作用。     

Maspin在非小细胞肺癌中的表达及与p53的相关性

目的探讨maspin在非小细胞肺癌中的表达及其与p53的关系。方法对99例非小细胞肺癌组织maspin及p53蛋白的表达情况通过免疫组化法进行检测,分析其临床病理意义及相关性。结果 maspin蛋白表达与肿瘤病理类型、肿瘤分化程度、淋巴结状态及临床分期相关（P〈0.05）。而p53蛋白的表达则与临床分期、淋巴结状态相关（P〈0.05）。maspin与p53蛋白的表达呈负相关（γ=-0.180）,但无统计学意义（P=0.075）。结论 Maspin及p53蛋白的表达在非小细胞肺癌的发生、发展过程中起重要作用,但本研究未发现两者具有统计学意义的相关性。     

肺癌术后支气管切缘p53基因突变的临床研究

预测肺癌手术切除的效果和局部复发情况。方法滞酶链一单链构象多态吕手术切除标本的无癌支气管切缘和病灶癌组织ｐ５３基因突变的情况。结果１０例支气管切缘有Ｐ５３基因突变,阳性率２５．０％（１０／４０）。２１例病灶癌组织有Ｐ５３基因突变,阳性率５２．５％（２１／４０）。术后全部病例随访３－１４个月。在１０例支气管切缘Ｐ５３阳性者中,有４例发生支气管残端癌复发（复发率４０．０％）,而在３０例阴性者中,无１例