VEGF诱导对翼状胬肉成纤维细胞血管生成拟态影响的研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)诱导对人翼状胬肉成纤维细胞血管生成拟态(VM)的影响。方法收集在广州市增城区人民医院行翼状胬肉手术的6例新鲜的初发性人翼状胬肉标本(年龄41~58岁)。将人翼状胬肉新鲜组织剪碎后进行体外贴壁细胞常规培养,并采用波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学染色和广谱细胞角蛋白(CK)染色对人翼状胬肉成纤维细胞进行鉴定。分别设置对照组和不同浓度的VEGF(1 ng/ml、10 ng/ml及100 ng/ml)组,取生长良好的3~5代翼状胬肉成纤维细胞进行分组培养。采用细胞计数试剂盒-8法检测各组成纤维细胞的增殖能力。应用细胞三维培养技术和糖原染色法观察各组VM的进展情况,采用蛋白质印迹法检测各组细胞的基质金属蛋白酶(MMP)-2和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达。各组吸光度(OD值)、MMP-2及HIF-1α的描述均采用均数±标准差(x珋±s)表示,对照组与不同浓度VEGF组的比较采用单向方差分析,当差异有统计学意义时,进一步两两比较。双变量相关性分析采用Spearman's等级相关分析。结果人翼状胬肉成纤维细胞鉴定结果显示,细胞爬片经苏木精-伊红染色后,在显示镜下细胞呈长梭形、三角形、扇形或不规则状。细胞免疫化学染色结果显示,细胞的胞浆呈Vimentin阳性表达,广谱CK阴性表达。细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖结果显示,对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的OD值分别为0.57±0.023、0.59±0.012、0.77±0.024及1.014±0.035。对照组和1 ng/ml组比较差异无统计学意义(t=1.21,P>0.05);10 ng/ml组和100 ng/ml组的OD值均明显高于对照组和1 ng/ml组(t=14.78,12.34;P<0.05);100 ng/ml组的OD值最高,与对照组、1 ng/ml组及10 ng/ml组比较,差异有统计学意义(t=20.12,19.45,13.41;P<0.05)。细胞三维培养及糖染色显示,10 ng/ml组和100 ng/ml组均出现VM结构,而对照组和1 ng/ml组未发现VM结构。10 ng/ml组和100 ng/ml组VM结构的密度分别为4.40±1.14和12.40±2.07,差异有统计学意义(t=-7.899,P<0.05)。对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的MMP-2值分别为0.26±0.038、0.29±0.013、0.39±0.013及0.73±0.014;对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的HIF-1α值分别为0.087±0.0086、0.087±0.0031、0.15±0.0016及0.37±0.026。对照组和1 ng/ml组中MMP-2和HIF-1α灰度值的差异均无统计学意义(t=1.21,0.01;P>0.05);10 ng/ml组中MMP-2和HIF-1α灰度值均显著高于对照组和1 ng/ml组(t=7.92,6.85,17.64,17.82;P<0.05);100 ng/ml组的中MMP-2和HIF-1α灰度值均显著高于其他3组(t=28.48,26.45,18.72,25.31,24.78,15.45;P<0.05)。翼状胬肉成纤维细胞的血管生成拟态密度与MMP-2和HIF-1α表达呈显著正相关(r=0.509,0.503;P<0.05)。结论 VEGF能够增强人翼状胬肉成纤维细胞的增殖能力、促进VM出现及促使MMP-2和HIF-1α表达增高。提示VEGF因素可能是翼状胬肉出现VM的分子机制,并协同增强MMP-2和HIF-1α表达一起影响翼状胬肉的进展。     

血管生成拟态在翼状胬肉进展中的作用及可能机制

目的　研究血管生成拟态（VM）在翼状胬肉进展中的作用及其与基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的关系,探讨VM与翼状胬肉进展的相关性及可能机制。方法　筛选符合条件的翼状胬肉标本,进行胬肉分期（静止期/进展期）、分型（初发型/复发型）及临床特征指标采集。采用CD31/PAS双重染色检测不同类型翼状胬肉中VM的形成差异。以初发型进展期翼状胬肉为研究对象,HE染色观察病理特征,免疫组织化学染色及Western blot检测MMP-2、MMP-9及VEGF的表达,分析VM与初发型进展期翼状胬肉临床病理特征及MMP-2、MMP-9、VEGF的相关性。结果　静止期翼状胬肉VM阳性率为15.38%,进展期翼状胬肉VM阳性率为68.50%,组间差异具有统计学意义（P=0.000）;初发型翼状胬肉VM阳性率为40.80%,复发型翼状胬肉VM阳性率为81.48%,组间差异亦具有统计学意义（P=0.000）。VM与进展期及复发型翼状胬肉均呈正相关（均为P<0.05)。VM阳性的初发型进展期翼状胬肉组织,其血管分级、上皮细胞层数、杯状细胞数、成纤维细胞数、血管数、炎症细胞数、纤维化程度、MMP-2、MMP-9及VEGF的表达均明显高于VM阴性者,而变性程度低于VM阴性者,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。初发型进展期翼状胬肉VM与翼状胬肉血管分级、上皮细胞层数、杯状细胞数、成纤维细胞数、血管数、炎症细胞数、纤维化程度、MMP-2、MMP-9及VEGF的表达均呈正相关,与胬肉变性程度呈负相关（均为P<0.05)。结论　翼状胬肉组织中存在VM结构,可作为其血供途径之一,VM可促进翼状胬肉的进展,MMP-2、MMP-9及VEGF可能是翼状胬肉VM形成的分子机制。     

多西环素抑制视网膜母细胞瘤血管生成拟态的体外研究及组织学观察

研究多西环素对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞体外血管生成拟态 （VM）和细胞增生的抑制效应。方法建立人RB细胞株三维培养系统,缺氧诱导后观察RB细胞能否形成血管网状结构及其特点;用5～20 mg/L不同浓度多西环素处理RB细胞, 过碘酸雪夫氏(PAS)染色观察对RB细胞体外血管生成拟态的抑制效应;噻唑蓝(MTT)比色法检测多西环素对RB细胞增生活性的变化; 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测不同条件下基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的相对表达量; 收集12例RB石蜡包埋样本进行CD34/PAS免疫组织化学双重染色,观察RB中的血管生成拟态。结果 RB细胞在三维培养系统形成管网状的拟态血管; 5～20 mg/L多西环素能抑制RB细胞体外管状结构数量。MTT检测显示多西环素加药组3、5、7 d的吸光度A［旧称光密度（OD）］值与对照组比较差异均有统计学意义(t=15.320,P <0.01),且不同浓度的多西环素组之间细胞的增生抑制率差异亦有统计学意义(F=9.442,11.729,12.120;P <0.05),其浓度与细胞的增生呈负相关(r=-0.924, P <0.01), 氯化钴缺氧组MMP-2、MMP-9的mRNA表达量明显增强,各浓度多西环素加药组显著低于氯化钴缺氧组(t=16.469,P <0.01)。在12例RB组织标本中可见CD34阴性PAS阳性的瘤细胞围成管道样结构,部分管腔中可见红细胞。结论 多西环素能够抑制RB体外血管生成拟态形成和细胞的增生,其机制可能是通过抑制MMP-2、MMP-9 mRNA的表达而实现。     

血管生成拟态与翼状胬肉进行期及静止期的相关性研究

目的：研究血管生成拟态与翼状胬肉发生发展的相关性,初步探讨其临床意义。
　　方法：选取20例正常眼的结膜组织及翼状胬肉静止期和进行期各50例标本行苏木素－伊红（ HE）染色、过碘酸雪夫（ PAS）染色、免疫组化CD34、VEGF染色及免疫组化CD31染色联合PAS双重染色观察翼状胬肉新生血管和血管生成拟态情况。
　　结果：CD34和VEGF在翼状胬肉组织中的表达均高于正常结膜组织（两者P＜0．05）,并且两者在进行期翼状胬肉组织中的表达均高于静止期（两者P＜0．05）。 PAS染色血管拟态区网眼间隔染成紫红色,进行期和静止期出现血管生成拟态的例数分别是38例和11例,差异具有统计学意义（P＜0．05）,相关性分析显示血管生成拟态与进行期翼状胬肉呈显著密切正相关（ Spearman’s相关系数r＝0．540＞0．5,P＝0．000）。
　　结论：翼状胬肉除了新生小血管形成增多外,血管生成拟态也是其血供方式之一,并且血管生成拟态与翼状胬肉的进展具有密切关系。     

注射用盐酸多西环素对兔角膜新生血管的抑制作用

目的　研究基质金属蛋白酶抑制剂盐酸多西环素对兔角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV）生长的影响。方法　成年大耳白兔33只（66眼）,随机分为对照组、碱烧伤组和多西环素组。对照组3只（6眼）不做处理。剩余30只（60眼）利用1 mol·L^-1NaOH滤纸片建立双眼碱烧伤模型,右眼为多西环素组,左眼为碱烧伤组。碱烧伤组不给予药物治疗,多西环素组隔日结膜下注射0.1 mL注射用盐酸多西环素（10 g·L^-1）。观察兔CNV的生长情况,应用免疫组织化学化法检测角膜组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、组织型金属蛋白酶抑制剂-2（tissue inhibitors of metalloproteinase-2,TIMP-2）的表达情况。结果　造模后3 d,可见碱烧伤组和多西环素组CNV长入透明角膜。造模后4 d、7 d、14 d、21 d,多西环素组CNV的面积分别为（6.15±2.85）mm²、（14.39±4.04）mm²、（18.07±5.74）mm²、（19.44±6.95）mm²,碱烧伤组CNV的面积分别为（17.00±4.60）mm²、（37.93±6.91）mm²、（42.25±9.32）mm²、（38.81±4.87）mm²,各时间点多西环素组CNV的面积均明显小于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后1 d、4 d、7 d、14 d、21 d,多西环素组角膜上皮层VEGF灰度值分别为167.74±10.59、140.14±12.14、128.69±9.21、103.06±8.29、176.16±9.72,碱烧伤组角膜上皮层VEGF灰度值分别为129.79±10.97、100.51±21.73、81.38±9.98、62.54±10.30、148.81±8.65,造模后各个时间点多西环素组VEGF的表达均明显少于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后4 d、7 d、14 d,多西环素组角膜上皮层MMP-2灰度值分别为83.50±14.81、123.42±16.20、110.90±8.98,碱烧伤组角膜上皮层MMP-2灰度值分别为65.27±12.84、91.31±13.22、94.28±6.46,造模后4 d、7 d、14 d多西环素组角膜上皮层MMP-2表达均明显低于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后21 d,角膜上皮层TIMP-2的表达最强,但造模后多西环素组角膜上皮层TIMP-2表达和碱烧伤组表达强度相似,两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论　VEGF、MMP-2、TIMP-2在CNV发生发展中发挥着重要的调控作用,盐酸多西环素可通过抑制基质胶原纤维的降解来降低炎症反应,并通过抑制角膜碱烧伤后兔角膜组织中VEGF、MMP-2的表达,进而抑制CNV的发生发展。     

基质金属蛋白酶-9、血管内皮钙黏蛋白在翼状胬肉的表达及相关性

目的 研究翼状胬肉组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达,以探讨MMP-9和VE-cadherin表达与翼状胬肉之间的关系,为翼状胬肉的治疗提供理论依据.方法 应用免疫组织化学法检测14例(14只眼)翼状胬肉组织中MMP-9和VE-cadherin的表达,其中6例为复发性翼状胬肉患者,将其与10例正常结膜组织进行比较.结果 翼状胬肉组织中MMP-9和VE-cadherin的表达均高于正常结膜组织,在复发性翼状胬肉组织中的表达明显高于初发性翼状胬肉.另外翼状胬肉组织中MMP-9和VE-cadherin阳性表达间存在正相关(P＜0.05).结论 MMP-9和VE-cadherin的高表达在翼状胬肉的发生和发展中起着重要作用.     

汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞相关因子分泌的影响

目的 观察翼状胬肉组织块分泌的相关因子变化,了解汉防己甲素（tetrandrine,Tet）对翼状胬肉病变的作用.方法 收集初发翼状胬肉（实验组）和正常球结膜组织块（对照组）体外培养上清液,ELISA检测上清液中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的含量及10^-5 mol·L^-1 Tet作用48 h实验组中各因子含量的变化.结果 实验组上清液中VEGF含量较对照组高（P＜0.01）;加入Tet作用48 h后明显下降（P＜0.01）,与对照组上清液中VEGF含量无差异（P＞0.05）.2组上清液中IL-1β的含量相比差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 VEGF在翼状胬肉新生血管形成中发挥着重要作用.汉防己甲素对翼状胬肉组织中VEGF的分泌有明显抑制作用,有良好的应用前景,但IL-1β在翼状胬肉中的作用仍需进一步研究.     

汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞基质金属蛋白酶的影响

目的:观察汉防己甲素(Tet)对翼状胬肉成纤维细胞基质金属蛋白酶(MMP)分泌及表达的影响.方法:收集正常球结膜与初发翼状胬肉成纤维细胞培养的上清液,ELISA法检测两种细胞培养上清液中MMP-1,MMP-3,MMP-9的含量及10-5mol/L的Tet作用48h翼状胬肉成纤维细胞培养的上清液中含量的变化.荧光定量PCR检测10-5mol/L的Tet对翼状胬肉成纤维细胞MMP-3mRNA表达的影响.结果:培养的初发翼状胬肉成纤维细胞上清中MMP-1,MMP-3含量较正常成纤维细胞上清中含量高[MMP-1:26928±1135→3148±74(ng/L),MMP-3:52593±1031→12490±3126(ng/L),P＜O.01],加入10-5 mol/LTet作用48h后明显下降[MMP-1:26928±1135→15064±533(ng/L),MMP-3:52593±1031→29943±561(ng/L),P＜O.01].培养的正常结膜及初发翼状胬肉成纤维细胞上清中未检测到MMP-9.初发翼状胬肉成纤维细胞MMP-3 mRNA是正常结膜组织成纤维细胞的3倍,10-5mol/L的Tet作用24h后表达量下降了27.1%.结论:Tet对翼状胬肉成纤维细胞MMP-1,MMP-3的分泌有明显的抑制作用,并能抑制其细胞MMP-3 mRNA表达量.     

糖皮质激素对翼状胬肉中SDF-1表达的影响

目的：研究基质细胞衍生因子-1（stroma cell-derived factor-1, SDF-1）和血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor,VEGF）在翼状胬肉组织中的表达情况,探讨糖皮质激素应用对SDF-1表达的影响。 方法：选取翼状胬肉患者48例,其中随机选取24例患者在术前给予0.2g/L氟米龙眼药水点眼1wk。采用免疫组化SP法,检测翼状胬肉和正常球结膜组织中SDF-1、VEGF的表达。并使用IPP软件定量测定SDF-1、VEGF的光密度值。 结果：SDF-1和VEGF在正常结膜组织中仅见上皮基底层细胞有阳性表达或不表达,翼状胬肉中上皮全层细胞和血管内皮细胞均有阳性表达,其表达水平有显著性差异。SDF-1和VEGF在翼状胬肉中的表达呈显著相关性（ r=0.5235,P〈0.01）。糖皮质激素应用后,SDF-1和 VEGF的表达水平降低,差异有统计学意义。 结论：SDF-1、VEGF与翼状胬肉的发生发展存在着重要的联系,糖皮质激素可能通过减少SDF-1和VEGF的表达来抑制新生血管的形成。     

不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1和基质金属蛋白酶9表达的影响

目的　探讨不同浓度多西环素对碱烧伤大鼠角膜中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）和基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）表达的影响及其调节作用。方法　SD大鼠右眼制备成角膜碱烧伤模型，随机分为对照组、0.5 g·L^-1多西环素组和1.0 g·L^-1多西环素组，每组15只。3组分别于造模后每天给予20 μL眼液溶媒、0.5 g·L^-1多西环素、1.0 g·L^-1多西环素滴眼至观察期末。于碱烧伤后第3天、第7天、第14天对角膜混浊程度进行评分，并行RT-PCR和ELISA检测角膜组织中TGF-β1、MMP-9 mRNA和蛋白的表达情况。结果　与对照组相比，碱烧伤后第7天、第14天，0.5 g·L^-1多西环素组［（2.80±0.45）分、（2.20±0.45）分］和1.0 g·L^-1多西环素组［（2.00±0.00）分、（0.60±0.55）分］角膜混浊程度评分降低，且1.0 g·L^-1多西环素组更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天、第14 天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组TGF-β1 mRNA及蛋白表达量均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。碱烧伤后第3天、第7天，0.5 g·L^-1多西环素组、1.0 g·L^-1多西环素组MMP-9 mRNA及蛋白表达均较对照组低，且1.0 g·L^-1多西环素组表达更低，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　多西环素可下调碱烧伤大鼠角膜中TGF-β1和MMP-9的表达，促进角膜愈合，并呈一定程度的剂量依赖性。     

脉络膜黑色素瘤血管生成拟态的三维重建

目的血管生成拟态存在于原发性脉络膜黑色素瘤及其转移瘤中,经体内和体外实验均已证实这些血管生成拟态结构在肿瘤内部与其血循环系统相联系。本研究旨在进一步探求血管生成拟态的三维立体结构,以明确其与肿瘤血管的空间关系。方法原发性脉络膜黑色素瘤标本连续4μm厚切片共25张,层粘连蛋白荧光标记后以共聚焦显微镜观察,每张切片生成系列图像,连续25张切片的系列图像在三维拟真环境中配准叠加,从而获得立体结构重建。结果以层粘连蛋白为主要成分PAS染色阳性的血管生成拟态,二维平面中呈现为环形构成的血管生成拟态,在三维空间显示为薄片管形包绕黑色素瘤细胞聚集成的柱状条索,并形成多数分支和扭转。宿主血管在局部与这些层粘连蛋白阳性标记的柱状管相连。结论血管生成拟态可为造影或诊断提供新的给药途径。     

Investigation of vasculogenic mimicry in sebaceous carcinoma of the eyelid

Purpose: Vasculogenic mimicry (VM) is a newly proposed pattern of tumour angiogenesis that has been identified in some malignancies and is associated with poor prognosis. The purpose of this study was to investigate whether sebaceous carcinomas of the eyelid exhibit VM and to determine whether these fluid‐conducting patterns are associated with clinicopathologic features, the number of microvessels and the levels of endothelial growth factor (VEGF) and matrix metalloprotease‐2 (MMP‐2) in tumours. Methods: Forty paraffin‐embedded samples of sebaceous carcinoma of the eyelid were collected, along with complete clinical and pathologic data for all the cases. Tissue sections were stained for CD34, periodic acid and Schiff (PAS), VEGF and MMP‐2. VM was identified by the presence of PAS‐positive and CD34‐negative loops lined by tumour cells. The VM status of tumour samples was compared with the clinical and pathological data using statistical tests. The levels of VEGF, MMP‐2 and the number of microvessels were compared between patients with and without VM. Results: VM was detected in 14 of 40 (35%) tumour samples. The existence of VM in tumours was associated with tumour size (p = 0.007) and recurrence (p = 0.021). The number of microvessels was lower in tumours with VM (13.03 ± 4.02 versus 22.99 ± 7.72; p < 0.0001). The staining index of MMP‐2 was higher in tumours with VM (27.43, range: 0–5.3) compared to tumours without VM (16.77, range: 0–2.7; p = 0.004). However, there was no difference in the expression of VEGF between groups with and without VM (p = 0.244). Conclusions: Vasculogenic mimicry is present in sebaceous carcinoma of the eyelid making it an unfavourable prognosis sign. MMP‐2 is associated with VM formation in sebaceous carcinoma of the eyelid.     

翼状胬肉细胞之间的相互作用

目的探讨翼状胬肉中血管内皮细胞和成纤维细胞之间的相互作用。方法收集翼状胬肉标本,采用血管内皮细胞和成纤维细胞单独培养、条件培养和共同培养的方法构建培养体系,采用ELISA和RT—PCR法检测3种体系培养上清液和细胞中血管内皮细胞生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）蛋白及mRNA含量的变化。结果单独培养、条件培养和共同培养各组培养上清液中VEGF和bFGF的质量浓度增加,差异均有统计学意义（P〈0．05）;细胞单独培养、条件培养和共同培养三者相比,VEGF和bFGF的mRNA表达升高,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论内皮细胞和成纤维细胞有相互上调作用,2种细胞在翼状胬肉的发生发展过程中相互促进。     

Inhibitory effect of Meloxicam on the cultured fibroblasts from the excised pterygium

To investigate the association between cycloxygenase-2　(COX-2) expression and vascular endothelial growth factor (VEGF) intervention as well as the inhibitory effect of Meloxicam on the cultured human pterygium fibroblasts (HPF). · METHODS: Expression of COX-2 was measured by immun- ohistochemistry in the cultured HPF from twenty excised pterygium cases. Expression of COX-2 in HPF was measured by Western blot following the treatment of VEGF at different concentrations. In addition, the effect of Meloxicam on proliferation of HPF was studied by adding different concentrations into the cultured HPF plates by Mono-nuclear cell direct cytotoxicity (MTT) reduction assay. · RESULTS: COX-2 expression was present in the cultured HPF. The level of the expression increased following VEGF treatment. The proliferation of the cultured HPF decreased following the addition of different concentrations of Meloxicam (from 75μmol/L to 300μmol/L) and the magnitude of the inhibition was dose-time dependent. · CONCLUSION: COX-2 levels in the cultured HPF were positively associated with VEGF stimulation and Meloxicam was inhibitory to HPF proliferation.     

翼状胬肉成纤维细胞中COX-2的表达及其抑制剂的实验研究

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)与血管内皮生长因子(VEGF)在人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)中的关系,以及美洛昔康(Meloxicam)抗HPF增殖的作用和机制。方法:采用免疫组化方法测定翼状胬肉组织中COX-2的表达。体外培养HPF,采用Western法,MTT法,研究在不同浓度的VEGF刺激下,HPF中COX-2蛋白的表达,以及不同浓度的美洛昔康对HPF增殖的影响。结果:翼状胬肉组织中COX-2呈阳性表达。HPF中VEGF浓度的增高可致COX-2蛋白的表达呈增强趋势。当美洛昔康的浓度在75～300μmol/L之间变化时,能明显抑制HPF的增殖,且其抑制强度呈剂量、时间依赖性。结论:HPF中VEGF的浓度升高能增强COX-2蛋白的表达,美洛昔康能够通过拮抗COX-2达到抑制HPF增殖的作用。     

姜黄素对人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1血管生成拟态形态学和病理改变的影响

目的 研究不同浓度姜黄素对人脉络膜黑色素瘤细胞株(OCM-1)血管生成拟态形态学和病理学改变的影响.方法 三维培养OCM-1细胞株,观察梯度浓度为0μmol·L-1、10 μmol·L-1、20 μmol·L-1、30 μmol·L-1、40 μmol·L-1的姜黄素对OCM-1细胞株血管生成拟态形成的影响,分别进行形态学观察和病理学PAS染色.结果 形态学观察显示:姜黄素0 μmol·L-1组:OCM-1细胞有浸润,在鼠尾胶上叠加生长,随着时间的延长,部分细胞逐渐伸展、变形,呈长条状、梭状或弧状;培养l周后细胞与细胞之间相互连接,并可呈管状、腔样、树枝样、网状等管腔结构,即血管生成拟态;姜黄素10μmol·L-组:部分OCM-1细胞能够形成条梭状和长条形,血管生成拟态形成;姜黄素20 μmol·L-组:部分OCM-1细胞能呈长条形和梭形,但不能形成血管生成拟态;姜黄素30 μmol·L-组:大部分细胞呈圆形,少数细胞能形成长条形和梭形,但不能形成血管生成拟态;姜黄素40 μmol·L-1组细胞皱缩成圆形,不能形成血管生成拟态.病理学PAS染色显示:姜黄素0μmol·L-1组:大部分肿瘤细胞表达PAS阳性物质,相互连接形成环状、管腔样结构,即血管生成拟态;姜黄素10 μmol·L-1组:部分OCM-1细胞呈条梭状和长条形,PAS染色阳性,形成网格状血管生成拟态结构;姜黄素20 μmol·L-1组:部分OCM-1细胞呈长条形和梭形,PAS染色阳性,少部分呈网格状结构;姜黄素30 μmol·L-1:大部分细胞呈圆形,PAS染色阴性,少数细胞能形成长条形和梭形,PAS染色阳性,但不形成网格状结构;姜黄素40 μmol·L-1组:细胞皱缩成圆形,PAS染色阴性,不形成网格状结构.结论姜黄素在体外可以抑制OCM-1细胞株血管生成拟态的形成,存在形态学和病理学改变,呈浓度依赖性.姜黄素浓度达到30 μmol·L-1时,对OCM-1细胞株血管生成拟态的形成具有明显的抑制作用.     

核心蛋白多糖抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的实验研究

目的　观察核心蛋白多糖对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｔｅｒｙｇｉｕｍｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＨＰＦ）增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉切除术后复发的新方法。方法　采用组织块法体外培养ＨＰＦ,将处于对数生长期的细胞用于实验。将０．１ｍｇ?Ｌ－１、１．０ｍｇ?Ｌ－１、１０．０ｍｇ?Ｌ－１的Ｄｅｃｏｒｉｎ分别加入细胞培养基中培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ。ＭＴＴ比色法分别测定不同浓度的Ｄｅｃｏｒｉｎ作用于ＨＰＦ不同时间后的细胞生长抑制率,流式细胞仪测定细胞周期时相变化,免疫组织化学法染色ＰＣ-ＮＡ检测细胞生长活性。结果　ＭＴＴ结果显示不同浓度组Ｄｅｃｏｒｉｎ作用ＨＰＦ２４ｈ细胞生长抑制率分别为（７．８１±１２６）％、（１９５２±２．１４）％、（４２．６９±１．６２）％,作用４８ｈ分别为（１０．１９±２．７４）％、（２２．２８±０．９７）％、（４５．７３±０．８２）％,作用７２ｈ分别为（２０．４９±１．３９）％、（２９．５０±２．４７）％、（５９．４１±１．７１）％。随着药物浓度的逐渐增高和作用时间的延长,细胞生长抑制率逐渐增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。流式细胞仪检测各浓度Ｄｅｃｏｒｉｎ组ＨＰＦ中Ｇ０／Ｇ１期细胞比率均较空白对照组高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。当Ｄｅｃｏｒｉｎ浓度在０．１～１０．０ｍｇ?Ｌ－１范围内作用ＨＰＦ７２ｈ,均能够明显抑制细胞表达ＰＣＮＡ（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｄｅｃｏｒｉｎ可以抑制ＨＰＦ的增生,诱导其凋亡,且呈明显的剂量和时间依赖性,有望成为防治翼状胬肉的药物之一。