miR-490-3p通过靶向调控TGFBR1抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭

目的:以非小细胞肺癌A549细胞为模型,探讨miR-490-3p在肺癌发生发展过程中的作用及其调控机制。方法:通过miRBase数据库获得miR-490-3p序列,设计miR-490-3pmimics并转染A549细胞,CCK8、细胞划痕及Transwell实验分别检测miR-490-3p过表达对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用miRwalk在线工具预测miR-490-3p可能的调控基因,通过实时荧光定量PCR及Western印迹对候选调控基因进行筛选,最后通过双萤光素酶报告基因实验验证miR-490-3p与调控基因之间的靶向关系。结果:过表达miR-490-3p可显著抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力;在预测的miR-490-3p候选靶基因中,选择与细胞增殖、迁移等表型相关的RASAL2、TGFBR1、PAPPA、HMGA2、TGFA靶基因进行实时荧光定量PCR及Western印迹筛选,结果仅TGFBR1基因在mRNA和蛋白水平的表达与miR-490-3p水平呈负相关,且双萤光素酶报告实验证实miR-490-3p可直接与TGFBR1的3'-UTR结合并抑制其表达。结论:miR-490-3p通过靶向调控TGFBR1的表达抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和侵袭。     

MiR-186-5p通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化

先前研究表明,miR-186-5p在人类许多恶性肿瘤中扮演抑癌基因的作用,但其在肺腺癌上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用并不明确。本研究旨在证明,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化。我们首先分析了miR-186-5p在人肺癌细胞中的表达。荧光定量PCR（QRT-PCR）结果显示,与人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺腺癌细胞SPC-A1、A549中的miR-186-5p表达量明显降低。为研究miR-186-5p在肺腺癌细胞中的功能,利用GV369-miR-186-5p表达载体,实现了在A549细胞中的过表达。基因转染结合Transwell侵袭结果显示,与对照质粒转染的A549细胞相比,过表达miR-186-5p的A549细胞的体外侵袭能力明显下降。Western印迹检测细胞中EMT相关标志物揭示,GV369-miR-186-5p转染的A549细胞中的上皮-钙黏着蛋白（E-cadherin）表达明显上调,而神经-钙黏着蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（vimentin）表达明显下调。同时,GV369-miR-186-5p转染引起其靶基因--垂体肿瘤转化基因1（pituitary tumor-transforming gene 1,PTTG1）编码蛋白在A549细胞中明显降低。重要的是,过表达miR-186-5p与敲减PTTG1均可导致上皮-钙黏着蛋白表达上调,而神经-钙黏着蛋白和波形蛋白下调|而miR-186-5p和PTTG1表达载体共转染后,3种EMT相关标志物在A549的表达与对照细胞的表达无明显差异,提示过表达PTTG1可抵消miR-186-5p对EMT相关标志物表达的影响。综上所述,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制EMT的发生,进而抑制肺腺癌细胞的侵袭转移。     

miR-338-3p靶向调控RNF121促进人肺癌A549的增殖及侵袭能力

近期研究表明,miR-338-3p对肺癌的增殖和侵袭具有重要作用,但其通过靶向调控环指蛋白121(ring finger protein 121,RNF121)在肺癌增殖和侵袭中的研究尚不清楚.为探究其机制,体外培养正常肺细胞系MRC-5和非小细胞肺癌系A549,采用qRT-PCR和Western印迹检测发现,A549...     

miR-190-5p靶向抑制PHLPP1的表达促进肺腺癌A549细胞增殖和转移

miR-190-5p是小分子非编码RNA,参与调控肺腺癌细胞的增殖和转移。对miR-190-5p调控肺腺癌细胞的增殖和转移的机制深入研究会帮助了解到肺腺癌的发生机制和探究潜在的药物干预靶点。本文研究了miR-190-5p对肺腺癌A549细胞的增殖和转移的影响,解释了miR-190-5p促进肺腺癌生长的机制;通过感染miR-190-5p的慢病毒表达系统,克隆了稳定过表达miR-190-5p的肺腺癌A549细胞系;通过生物信息学方法和荧光素酶报告实验确认了miR-190-5p的靶基因。结果发现,稳定过度表达的miR-190-5p能促进A549细胞的增殖和转移;确定了miR-190-5p的靶点是PH域富含亮氨酸重复的蛋白磷酸酶1(Leucine-rich repeat-rich protein phosphatase 1 in the PH domain,PHLPP1),miR-190-5p降低PHLPP1蛋白水平;稳定表达的miR-190-5p增加了A549细胞中E盒结合锌指蛋白1(E box-binding zinc finger protein1,TCF8/ZEB1)、锌指转录因子(Z...     

miR-143-3p通过靶向TAK1抑制肺癌增殖和侵袭

目的:分析miR-143-3p在肺癌细胞中的表达情况以及对肺癌进展的作用。方法:通过starBase数据库和肺癌病例组织检测分析miR-143-3p在肺癌组织和正常对照组织中的表达差异;分析miR-143-3p在肺癌细胞HCC27、H1975、A549和肺上皮细胞BEAS-2B中的mRNA水平差异;采用CCK-8法检测miR-143-3p对肺癌细胞增殖活性的影响;采用Transwell实验检测miR-143-3p对肺癌细胞迁移和侵袭的影响;通过qRT-PCR检测miR-143-3p对整合素α6(ITGA6)、锚蛋白重复及PH结构域3(ASAP3)、黑色素瘤相关抗原A9(MAGE-A9)和转化生长因子β激活激酶1(TAK1)表达的影响;通过Western印迹检测miR-143-3p对TAK1蛋白表达的影响。结果:starBase分析和肺癌病例组织检测结果显示miR-143-3p在肺癌组织中低表达,同样地,miR-143-3p在肺癌细胞中的表达也显著低于正常肺上皮细胞;过表达miR-143-3p抑制了肺癌细胞的增殖活性、迁移和侵袭能力;过表达miR-143-3p显著抑制TAK1的表达。结论:miR-143-3p在肺癌中通过靶向TAK1抑制肺癌的增殖和侵袭,miR-143-3p在肺癌进展中详细的分子作用机制和信号通路仍须进一步探讨。     

miRNA-338-3p通过靶向抑制MC1R基因表达抑制羊驼黑色素细胞黑色素的生成

黑色素皮质素1受体MC1R）是在黑色素细胞内表达的G蛋白耦合受体（G protein coupled receptor, GPCR）家族成员,参与黑色素细胞中黑色素的生成。微RNAs（miRNAs）是一类非编码RNA,通过与靶基因3′-UTR结合抑制基因表达。已有研究证明,miR-338-3p 在多种人类肿瘤细胞中（过）表达,可通过下调靶基因表达抑制肿瘤细胞的侵袭迁移能力。然而,有关miR-338-3p对羊驼皮肤黑色素细胞的黑色素合成影响却罕见报道。本研究证明,miRNA-338-3p通过靶向抑制MC1R基因表达,抑制羊驼黑色素细胞黑色素的生成。采用生物信息学预测MC1R基因是miRNA-338-3p的靶基因,其基因表达抑制羊驼黑色素细胞黑色素合成。随后构建miR-338-3p真核表达载体。其基因转染结合qPT-PCR和Western印迹结果揭示,与对照细胞比较,过表达miRNA-338-3p的羊驼黑色素细胞的MC1R基因,及其下游与黑色素生成相关的小眼相关性转录因子（MITF)、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1（TYRP1）、酪氨酸酶相关蛋白2（TYRP2）编码基因mRNA及蛋白质表达水平明显下调。酶联免疫吸附分析显示,过表达miRNA-338-3p的羊驼皮肤黑色素细胞的黑色素产量,较对照细胞显著下降（P＜0.01）。综上结果,miR-338-3p可通过抑制靶基因MC1R表达,下调其下游基因MITF、TYR、TYRP1和TYRP2基因的表达,从而抑制羊驼皮肤黑色素细胞黑色素的合成。miRNA-338-3p在羊驼生长发育过程中,是否参与调控体内皮肤黑色素细胞的黑色素生成尚待进一步研究。     

MiR-338-3p inhibits TNF-α-induced lipogenesis in human sebocytes

Objective

To suppress TNF-α-induced lipogenesis in sebocytes (associated with acne development) with microRNA-338-3p (miR-338-3p) and to explore the underlying mechanisms.

Results

TNF-α increased lipid droplet formation in sebocytes which were used as in vitro model of inflammation-induced acne. Flow cytometry and TLC assays validated that miR-338-3p could suppress TNF-α-induced lipid droplet formation, down-regulate the expression of PREX2a, and inactivate AKT signaling in sebocytes. In addition, suppression of AKT activity by the PI3 K and AKT inhibitors diminished TNF-α-induced lipogenesis. PREX2a siRNA mimics the effects of miR-338-3p on AKT phosphorylation and lipogenesis. PREX2a overexpression consistently restored lipogenesis and AKT phosphorylation attenuated by miR-338-3p.

Conclusions

MiR-338-3p suppresses the TNF-α-induced lipogenesis in sebocytes by targeting PREX2a and down-regulating PI3K/AKT signaling.

     

MiR-525-5p通过靶向结合围脂滴蛋白3调控胶质瘤细胞的迁移、侵袭与增殖

颅内恶性肿瘤中最常见的是胶质瘤。虽然目前的治疗手段是手术、放疗和化疗,但胶质瘤患者的预后并不乐观。因此,找到有效的处理办法就变得十分关键。文献显示,在肿瘤发生和发展过程中,微RNA(microRNA,miRNA)发挥了重要作用。基于此,本研究旨在探究miR-525-5p在调控胶质瘤细胞的迁移、侵袭与增殖的分子机制。利用TCGA数据库识别出在正常组织与胶质瘤组织中差异表达的围脂滴蛋白3(PLIN3),并利用CGGA与GEPIA数据库查询到高表达的PLIN3与胶质瘤患者预后不良相关,且Western印迹结果揭示了PLIN3在胶质瘤细胞中高度表达(P<0.05)。细胞划痕(wound healing)实验和Transwell侵袭实验结果显示,敲除和过表达PLIN3分别抑制或者促进胶质瘤细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。使用在线数据库反向选择能与PLIN3靶向相结合的miR-525-5p。双荧光素酶结果证实,PLIN3能与miR-525-5p靶向结合。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain ...     

MiR-16-5p靶向TXNIP调控脂多糖诱导的心肌细胞的氧化应激和凋亡

心肌细胞损伤与多种心血管疾病的发生发展有关,而氧化应激和细胞凋亡是造成心肌损伤的重要原因。硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)可调控细胞氧化还原状态,并诱导氧化应激的产生,最终可诱导炎症或细胞凋亡。miR-16-5p能抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的炎症反应和A549细胞损伤。但TXNIP是否受miR-16-5p的调控还鲜有报道。本实验旨在研究miR-16-5p与TXNIP的关系,以及miR-16-5p是否通过结合TXNIP影响心肌细胞氧化应激和凋亡。通过TargetScan数据库预测到TXNIP与miR-16-5p存在结合位点。双荧光素酶报告结果验证miR-16-5p靶向调控TXNIP。转染miR-16-5p过表达载体和TXNIP抑制表达载体后,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示,细胞凋亡率(10.44±1.13 vs 29.65±2.87,P0.01)、(13.54±1.33 vs 29.14±2.76,P0.01)均降低。采用丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒分别检测丙二醛含量和SOD、GSH-Px活力。结果显示,miR-16-5p组丙二醛含量降低(13.58±1.55 vs 42.18±4.69,P0.01),SOD活力(79.68±7.65 vs 34.87±3.49,P0.01)、GSH-Px活力(687.99±35.42 vs 376.48±29.87,P0.01)升高;si-TXNIP组丙二醛含量(18.69±1.84 vs 45.21±4.33,P0.01)降低,SOD活力(71.65±7.32 vs 31.69±4.05,P0.01)、GSH-Px活力(654.12±34.57 vs 367.43±33.54,P0.01)升高。以上结果表明,过表达miR-16-5p或可抑制TXNIP表达,均可抑制脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激反应。综上所述,miR-16-5p可通过抑制TXNIP表达抑制脂多糖诱导的心肌细胞损伤。     

MiR-206与ANXA2的3′UTR靶向结合抑制乳腺癌侵袭

膜联蛋白A2（annexin A2,ANXA2）可促进人结直肠癌的侵袭和迁移。然而,ANXA2在乳腺癌中的作用以及调节机制尚缺乏系统的研究。本研究旨在探讨微小RNA-206（microRNA-206,miR-206）如何调节ANXA2基因的表达,进而影响乳腺癌的侵袭。通过基因预测软件TargetScan (TargetScan V5.2)找到与ANXA2的3′UTR区互补结合的miR-206。运用实时定量 PCR（qRT-PCR）检测不同乳腺癌细胞系中miR-206的表达水平,发现低侵袭性乳腺癌MCF-7细胞株miR-206 表达量明显高于高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-231、MDA-435和T47D。运用转染技术将 miR-206 质粒及miR-206 抑制剂转入乳腺癌细胞系MDA-231后,qRT-PCR检测转染后各组细胞中miR-206的表达情况,结果显示转染成功。用Western印迹法检测各组细胞中ANXA2的表达情况,结果显示,miR-206负向调控ANXA2蛋白的表达。 qRT-PCR显示,过表达乳腺癌细胞内miR-206 后,ANXA2 mRNA基本没有变化。结果显示,miR-206是在翻译水平上影响ANXA2蛋白的表达。荧光素酶实验显示：miR-206能特异性地与ANXA2 mRNA的3′UTR结合,抑制其荧光素酶活性。Transwell侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力。结果显示,过表达miR-206后,乳腺癌细胞体外侵袭能力明显减弱。综上所述,miR-206 通过靶向结合癌基因ANXA2 mRNA的3′UTR区,抑制ANXA2蛋白翻译,从而抑制了乳腺癌细胞的侵袭。因此,miR-206有望成为抑制乳腺癌侵袭与治疗乳腺癌的新靶点和生物学标记物。     

MiR-150-5p通过靶向调控Rab1A抑制乳腺癌细胞MDA-231的上皮-间质转化

先前的研究表明,miR-150-5p发挥抑癌基因的作用,调控肿瘤细胞的侵袭与转移。然而,关于其在乳腺癌细胞侵袭与转移中的机制尚不明确。本实验旨在研究miR-150-5p负向调控Rab1A在乳腺癌细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用。双荧光素酶的结果显示,miR-150-5p可负向调控Rab1A。荧光定量PCR (qRT-PCR) 结果显示,miR-150-5p在乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231（MDA-231）中的表达水平明显低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A; 在MDA-231中过表达miR-150-5p后,qRT-PCR结果显示,Rab1A mRNA的表达水平明显降低。Western印迹结果显示,过表达miR-150-5p后,miR-150-5p组细胞中的Rab1A、波形蛋白(vimentin)及N-钙黏着蛋白(N-cadherin)的表达水平相对于对照组（NC）细胞明显降低,而E-钙黏着蛋白(E-cadherin)的表达水平明显增加。Transwell侵袭和划痕实验显示,与miR-150-5p+Con组细胞相比,miR-150-5p+Rab1A组细胞的侵袭和迁移能力明显增加。qRT-PCR结果显示,miR-150-5p+Rab1A组细胞的Rab1A mRNA表达水平明显增加。Western印迹结果显示,miR-150-5p+Rab1A组细胞中的波形蛋白、N-钙黏着蛋白表达水平明显增加, 而E-钙黏着蛋白表达明显降低,过表达Rab1A后显著逆转了miR-150-5p对EMT的影响。综上所述,miR-150-5p可以通过负向调控Rab1A抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。     

MiRNA-509-5p靶向MDM2抑制胃癌细胞的侵袭和迁移

目的明确miRNA-509-5p对胃癌细胞侵袭和迁移的作用并阐明相关的机制。方法实时定量PCR检测miRNA-509-5p在胃癌细胞株及胃癌组织中的表达。对HGC-27细胞株转染miRNA-509-5p模拟物或抑制物后,分别采用CCK-8和Transwell法检测细胞的增殖和迁移。软件预测miRNA-509-5p的靶基因,荧光素酶报告基因验证靶基因。靶基因过表达验证细胞增殖和迁移。结果 miRNA-509-5p在肿瘤组织及细胞株中的表达显著降低。转染miRNA-509-5p模拟物能够显著抑制细胞的增殖、迁移及侵袭。相反,转染miRNA-509-5p抑制物能够显著增加细胞的增殖、迁移及侵袭。此外,miRNA-509-5p能够通过靶向3'-UTR负调控鼠双微体-2(MDM2)。miRNA-509-5p能够显著抑制由MDM2过表达导致的肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭。结论 miRNA-509-5p是通过抑制MDM2表达的新型肿瘤抑制子,能够抑制胃癌的增殖、迁移及侵袭。     

基于生物信息学分析研究miR-182-5p通过靶向调控EP300促进乳腺癌细胞的侵袭和转移

近期研究表明,miR-182-5p对多种癌症的侵袭和转移具有重要作用,但其在乳腺癌侵袭转移中的研究相对较少。本研究通过网上在线microRNA分析工具下载乳腺癌组织及正常乳腺组织表达比较的数据集,分析发现在GSE4589、GSE38167、GSE61438等3个数据库中,在乳腺癌组织中存在26个相同的microRNA,其中8个上调,而我们实验验证发现hsa-miR-182在8例病理组织中的表达上调差异最显著(P=0.001),选定目的基因hsa-miR-182;qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达,结果显示,与MCF-10A相比,miR-182-5p在MDA-MB-231、T47D、MDA-MB-453、MCF-7中表达上调(P<0.05);转染miR-182-5p干扰质粒,qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达情况。结果显示,miR-182-5p表达显著降低(P=0.003),提示转染成功;Transwell侵袭结果显示,MDAMB-231细胞敲低miR-182-5p,与对照组相比,体外侵袭能力明显降低(P=0.002);Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒时,MDA-MB-231中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达情况,结果显示,与对照组相比,敲低miR-182-5p使细胞中上皮-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达上调,神经-钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达下调。为研究探讨miR-182-5p的靶蛋白,采用在线预测软件预测可能与miR-182-5p结合的靶蛋白,cytoscape构建蛋白质互作网络图并筛选出hub基因;双荧光素酶结果证实,miR-182-5p可与EP300靶向结合(P=0.001);采用qRT-PCR、Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒后EP300在mRNA及蛋白质水平的表达,结果显示,与对照组相比,在敲低miR-182-5p组中EP300在mRNA及蛋白质的表达上调(P=0.001)。综上所述,miR-182-5p可靶向调节EP300,促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。     

miR-433-3p通过靶向下调GALNT1调控肺癌细胞的生物学行为

为了探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制,该研究在体外培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B以及肺癌细胞系H1299、Calu-3和Calu-6.采用定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测上述细胞的miR-433-3p和N-乙酰氨基半乳糖转移酶1(GALNT...     

miR-369-3p靶向FGF9信号通路调控肝癌细胞增殖与侵袭

目的:阐明脂代谢相关mi R-369-3p在肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)病理组织中的表达特征及其与临床预后的相关性,解析mi R-369-3p在HCC细胞中的作用性质及相应分子机理。方法:实时定量PCR法检测mi R-369-3p在HCC病理组织和细胞中的表达变化,并通过Spearman's法分析mi R-369-3p表达水平与临床病理资料相关性;CCK-8检测、Transwell穿透小室实验和裸鼠荷瘤实验检测敲低内源性mi R-369-3p表达后对HCC细胞增殖和侵袭性的影响作用;利用生物信息学分析、瞬时转染、定点突变和荧光素酶报告基因活性检测分析mi R-369-3p对纤维母细胞生长因子9(fibroblast growth factor 9,FGF9)的转录后调控作用。结果:mi R-369-3p在HCC病理组织(n=68)和细胞中异常低表达,且此低表达趋势与HCC患者预后呈显著负相关关系(x~2=6.907,P=0.0086);敲低内源性mi R-369-3p可显著促进HCC细胞的增殖、侵袭性;参与调控这一抑瘤效应的关键分子机制可能是miR-369-3p与FGF9的3'-UTR区直接结合,在转录后水平抑制FGF9 m RNA的稳定性,进而抑制后者表达水平。结论:miR-369-3p可通过靶向FGF9信号在转录后调控水平负性调控肝癌细胞增殖和侵袭过程,在肝癌发生和进展过程中发挥关键抑癌作用。     

LncRNA SPINT1-AS1通过靶向miR-433-3p调控非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

该研究主要探讨lncRNA SPINT1-AS1对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞H1299增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。选取新疆医科大学附属肿瘤医院2017年3月至2019年3月的30例NSCLC组织及匹配的癌旁组织;体外培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞系H1299、Calu-3、Calu-6,将H1299细胞分为NC组、si-NC组、si-SPINT1-AS1组、miR-NC组、miR-433-3p组、si-SPINT1-AS1+anti-miR-NC组、si-SPINT1-AS1+anti-miR-433-3p组。RT-qPCR检测NSCLC组织和细胞中lncRNA SPINT1-AS1和miR-433-3p的表达水平;MTT检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞的迁移和侵袭;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA SPINT1-AS1和miR-433-3p的靶向关系。结果表明与癌旁组织和人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,NSCLC组织和细胞系中lncRNA SPINT1-AS...     

miR-363-3p靶向 TWIST1调控上皮间质转化抑制非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭

目的探讨miR-363-3p靶向TWIST1调控非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭的分子机制。 方法将体外培养的A549细胞分为空白对照组（细胞未做任何处理）;模拟物对照组（转染miR-363-3p模拟物阴性对照）;模拟物组（转染miR-363-3p模拟物）;后期实验另设：模拟物+ pcDNA组（转染miR-363-3p模拟物和pcDNA3.1空载体质粒）;模拟物+ TWIST1组（转染miR-363-3p模拟物和pcDNA3.1-TWIST1过表达质粒）。采用RT-PCR检测细胞中miR-363-3p的表达,Western blot检测细胞中TWIST1蛋白和上皮间质转化（EMT）相关蛋白Vimentin、E-cadherin的表达,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验检测miR-363-3p和TWIST1的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与空白对照组和模拟物对照组比较,模拟物组A549细胞中miR-363-3p表达水平（1.00±0.08、0.97±0.05比3.82±0.45）升高,TWIST1 mRNA （1.00±0.06、0.98±0.06比0.39±0.02）和蛋白的表达水平（0.81±0.05、0.78±0.06比0.42±0.02）降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与空白对照组和模拟物对照组比较,模拟物组A549细胞Vimentin蛋白表达水平（0.58±0.04、0.55±0.05比0.36±0.03）降低,E-cadherin蛋白的表达水平（0.22±0.02、0.25±0.03比0.47±0.03）增高,迁移细胞数（85.75±5.45、83.52±6.85比53.05±4.50）和侵袭细胞数（128.26±6.15、125.95±8.05比71.64±5.75）降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与模拟物对照组比较,模拟物组细胞中Vimentin蛋白的表达水平（0.55±0.05比0.36±0.03）降低,而E-cadherin蛋白表达水平（0.25±0.03比0.47±0.03）升高,迁移细胞数（83.52±6.85比53.05±4.50）和侵袭细胞数（125.95±8.05比71.64±5.75）均减少（P均< 0.05）。TWIST1是miR-363-3p潜在的靶基因。与模拟物+ pcDNA3.1组比较,模拟物+ TWIST1组A549细胞中Vimentin蛋白的表达水平（0.32±0.02比0.42±0.03）升高,而E-cadherin蛋白表达水平（0.56±0.04比0.38±0.03）降低,A549细胞的迁移数（49.45±4.22比67.52±5.05）和侵袭数（72.45±5.73比108.35±6.56）增加（P均< 0.05）。 结论miR-363-3p可通过靶向TWIST1调控EMT抑制A549细胞迁移和侵袭。     

MiR-324-5p可能通过靶向淀粉样前体蛋白抑制棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡

miRNAs是一种非编码的小RNA,通过靶向mRNA的3′UTR调控基因的转录后翻译。为明确miR-324-5p对棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡的作用和机制,体外培养3T3-L1脂肪细胞,利用棕榈酸诱导细胞凋亡的同时过表达或抑制miR-324-5p,通过Annexin-V/FITC染色、RT-qPCR等方法检测miR-324-5p对3T3-L1脂肪细胞凋亡的作用。通过在线软件预测miR-324-5p的靶基因并进行验证。结果显示,过表达miR-324-5p能够显著抑制凋亡相关基因BCL-2相关X蛋白(BCL2-associated X protein, Bax)和胱天蛋白酶3(caspase3)的表达水平(P0.05);而抑制miR-324-5p后能够显著促进这些基因的表达(P0.05);靶基因预测及验证结果表明,miR-324-5p能够显著降低淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)的表达水平(P0.05)。本研究认为,miR-324-5p可能通过靶定APP抑制棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡。     

MiR-186-5p对绵羊黑色素细胞黑色素生成的调控

黑色素合成是极其复杂的过程,其中涉及多种基因和miRNAs的参与。miR-186-5p在绵羊不同毛色皮肤中差异表达,说明其可能与毛色形成有关,生物信息学预测和绵羊不同毛色皮肤中miR-186-5p和Mitf的差异表达间接说明二者可能存在靶向关系,双荧光报告直接证实了二者的靶向关系。为了证实miR-186-5p在黑色素形成中的作用,本研究构建miR-186-5p真核表达载体,并转染绵羊黑素细胞。结果显示,miR-186-5p通过与Mitf mRNAs的3′UTR结合抑制Mitf的表达和翻译。MITF是Tyr基因家族的调节因子。实时荧光聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)和Western免疫印迹结果表明,过表达miR-186-5p引起的MITF下调抑制了TYR、TYRP1和TYRP2的表达。其中,mRNA表达水平分别下降34%、66%和52%;蛋白质表达水平分别下降32%、6%和46%。分光光度检测结果显示,黑色素含量下降59%倍。上述结果表明,miR-186-5p通过抑制靶基因Mitf的表达,抑制了绵羊黑素细胞内黑色素的生成。