早孕小鼠子宫内膜中凋亡蛋白抑制因子Survivin表达及对胚胎着床的作用

背景:有研究表明Survivin作为一种凋亡蛋白抑制蛋白,在胚胎植入过程中可能起到抑制子宫内膜凋亡及诱导子宫内膜蜕膜化和促使滋养层细胞入侵的作用,但是目前关于Survivin在胚胎着床方面的报道较少.目的:观察凋亡蛋白抑制因子Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的表达及对胚胎着床的作用.设计、时间及地点:随机分组设计,实验于2008-03/06在重庆医科大学医学检验中心完成.材料:6～8周龄清洁级NIH小鼠76只,体质量20～25 g;兔抗人Survivin多克隆抗体为美国Santa cruz公司产品.方法:①根据阴道涂片结果鉴别雌鼠的动情周期,动情后期雌鼠设为未孕组,记为妊娠第0天.雌雄鼠按2:1比例自然合笼,次晨7时检查雌鼠阴栓阳性者即为妊娠,定为妊娠第1天,依次计算妊娠天数.②取妊娠4d的小鼠20只随机抽签法分为2组,每组10只.对照组:双侧子宫角均注射5 μL正常兔血清IgG;实验组:左侧子宫角注射Survivin 1:80比例抗体5 μL,右侧子宫角正常兔血清IgG 5 μL对照.妊娠第8天剖腹取出子宫,大体观察并统计胚胎着床数.主要观察指标:①免疫组织化学检测Survivin在未孕及妊娠第2,3,4,5,6,7天各组小鼠子宫内膜的表达.②子宫角注入Survivin抗体,统计胚胎着床数.结果:①免疫组织化学检测妊娠组Survivin蛋白的表达明显高于未孕组(P＜0 05),且随着妊娠天数的增加,子宫内膜Survivin蛋白的表达逐渐增加,到孕第6天达到高峰,随后下降,但孕第7天仍明显高于未孕组(P＜0.05).②实验组左右侧子宫胚胎着床数分别为1.400 0±0.5164和6.400 0±1.075 0:对照组左右侧子宫胚胎着床数为6.500 0±1.0801和6.200 0±0.918 9;实验组注射抗体的左侧胚胎着床数较右侧明显下降(P＜0.05);对照组左右侧子宫胚胎着床数差异无显著性意义(P＞0.05).结论:Survivin在早孕小鼠子宫内膜持续表达,并参与胚胎的着床调控过程.     

PTEN蛋白在子宫内膜腺癌中的表达及其临床意义

目的通过分析PTEN在正常子宫内膜、子宫内膜增生过长、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌中的表达及其在子宫内膜腺癌不同临床病理分期、分级中的表达,探讨PTEN在从正常子宫内膜向子宫内膜腺癌转变过程中的作用及与子宫内膜腺癌手术病理分期、组织学分级的关系。方法采用免疫组化S-P法对正常子宫内膜组织20例、子宫内膜增生过长组织20例、不典型增生子宫内膜组织20例、子宫内膜腺癌组织40例,进行PTEN的检测并分析。结果 1.在正常子宫内膜组和子宫内膜增生过长组中PTEN蛋白表达率均明显高于不典型增生子宫内膜组和子宫内膜腺癌组中PTEN蛋白表达(P<0.05),正常子宫内膜组和子宫内膜增生过长组之间表达率无差异,不典型增生子宫内膜组和子宫内膜腺癌组之间表达率无差异(P>0.05)。2.PTEN蛋白在子宫内膜腺癌不同组织学分级组(高分化G1、中分化G2,低分化G3)、不同手术病理分期组表达率无明显统计学意义(P>0.05)。结论 PTEN蛋白的表达降低在正常子宫内膜向内膜腺癌的转变中起重要作用;其低表达与子宫内膜腺癌的病理分期、组织学分级无明显相关性。     

PTEN 在子宫内膜增生过长和子宫内膜腺癌中的表达和临床意义

目的检测抑癌基因PTEN在子宫内膜腺癌中的表达,探讨其临床意义及在子宫内膜腺癌发生发展中的作用。方法应用免疫组化法检测10例增生期子宫内膜、10例单纯型增生过长、10例复杂型增生过长,10例非典型增生过长和46例子宫内膜腺癌组织中PTEN蛋白表达。结果PTEN在子宫内膜癌和不典型增生过长中的表达与单纯型 复杂型增生过长和增生期子宫内膜比较差异有显著性。46例子宫内膜样腺癌中PTEN的阴性率是52·2%,PTEN阴性表达与子宫内膜腺癌的细胞分化程度、肌层浸润有关,有统计学意义(P<0·05)。结论PTEN表达缺失在子宫内膜癌发生、发展中起一定的作用,和子宫内膜腺癌的生物学行为有关,测定PTEN的表达对评估子宫内膜癌预后有重要意义,可作为子宫内膜腺癌预后的生物学检测指标。     

凋亡相关蛋白Caspase8在子宫内膜异位症改变中的意义

目的研究在位及异位子宫内膜的Caspase8表达,探讨Caspase8在子宫内膜异位症(EMs)发生、发展中的作用。方法应用免疫组化法检测EMs组及非EMs组在位子宫及异位子宫内膜Caspase8表达,比较两组结果。结果两组标本均有Caspase8表达,EMs组在位与异位内膜的表达值均低于对照,其中异位内膜的表达值最低,差异有统计学意义(P<0.01);Caspase8在对照组子宫内膜和EMs在位内膜的分泌期表达值高于增生期,其差异有统计学意义(P<0.01);异位内膜的表达值,增生期与分泌期相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Caspase8在EMs在位及异位内膜低水平表达,介导细胞凋亡失调可能是影响EMs形成和发展的重要因素之一。     

子宫内膜异位症中基质金属蛋白酶-14基因的表达

目的：探讨基质金属蛋白酶-14（MMP-14）基因在子宫内膜异位症发生中的作用。方法：采用免疫组织化学SP法研究25例子宫内膜异住症和22例正常子宫内膜组织中MMP-14基因的蛋白表达情况；采用RT-PCR方法研究33例子宫内膜异住症的异位子宫内膜组织和30例正常子宫内膜组织中MMP-14基因的mRNA表达情况。结果：子宫内膜异住症组织中MMP-14基因的蛋白表达水平和mRNA表达水平均明显高于正常子宫内膜组织（P〈0．05）。结论：MMP-14基因在子宫内膜异住症的发病过程中可能起重要的作用。     

不同类型子宫内膜组织中bax的表达及意义

目的：探讨bax在不同类型子宫内膜腺上皮细胞中表达的意义。方法：采用免疫组化检测不同类型子宫内膜组织中bax的表达。结果：从单纯性增生、复杂性增生到不典型增生。bax的表达评分有逐渐增多趋势，不典型性增生与前二者相比均有显著性差异（分别P〈0．01，P〈0．05）。在内膜样腺癌中，随着癌组织分化程度的降低，bax蛋白的表达逐渐降低；随着癌组织浸润深度的增加，bax蛋白表达逐渐增加，各组间比较有显著性差异（均P〈0．01）。结论：bax参与了癌前病变的发生。在内膜样腺癌中，bax表达与癌细胞的分化程度、肌层浸润深度有关。推测bax表达水平在一定程度上反映了肿瘤的生物学行为，可作为预测预后的指标。     

生存蛋白和血管内皮生长因子在子宫内膜异位症组织中的表达

目的探讨生存蛋白在子宫内膜异位症组织中的表达及其与血管内皮生长因子（VEGF）的关系。方法采用免疫组织化学法检测生存蛋白和VEGF在51例异位子宫内膜组织及22例正常子宫内膜组织中的表达。结果生存蛋白在异位子宫内膜组织和正常子宫内膜组织中的表达率分别为52.94%、9.09%,差异有统计学意义（χ^2=12.34,P〈0.01）。VEGF在异位子宫内膜组织和正常子宫内膜组织中的表达率分别为68.63%、18.18%,差异有统计学意义（χ^2=14.48,P〈0.01）;生存蛋白和VEGF在异位子宫内膜组织中的表达呈正相关（r=0.8755）。结论生存蛋白和VEGF在子宫内膜异位症组织中异常表达对子宫内膜异位症的发生起着重要作用。     

SCF/C-Kit在子宫腺肌瘤和子宫内膜异位症患者在位和异位内膜中的表达和意义

目的探讨子宫腺肌瘤和子宫内膜异位症(内异症)患者在位、异位内膜中干细胞因子(SCF)及其C-Kit的表达,从而了解SCF及其受体C-Kit分别在子宫腺肌瘤和内异症发病中的作用。方法采用免疫组化法,检测各组在位内膜及异位内膜组织SCF、C-Kit的表达。结果本研究各组均表达SCF和C-Kit,SCF的表达在研究组中较对照组明显增强,差异均有统计学意义(子宫腺肌瘤组P<0.01;内异症组P<0.05),在腺肌病患者中在位内膜分泌期的表达明显增高,分泌期>增生期(P<0.01),在位内膜>异位内膜(P<0.05);在巧克力囊肿患者中,在位内膜分泌期的表达较在位内膜增生期和异位内膜及对照组各期均增高,差异有统计学意义(P<0.05),而较子宫腺肌瘤低,但差异无统计学意义(P>0.05);C-Kit在腺肌病患者中的表达较巧克力囊肿组和对照组增高,差异有统计学意义(P<0.05),在位内膜分泌期的表达较在位内膜增生期和异位内膜及对照组各期均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SCF、C-Kit可能是子宫内膜腺肌瘤和子宫内膜异位症的重要发病原因之一。     

E-cadherin在早期粘附内膜组织中的表达及意义

目的：通过建立人腹膜与子宫内膜共培养模型,研究早期粘附部位子宫内膜E-cadherin的表达。方法：采用免疫组织化学法检测在位子宫内膜及子宫内膜与腹膜共同培养后粘附内膜的E-cadherin的表达。结果：（1）E-cadherin在粘附内膜的表达显著降低,与在位内膜相比差异有统计学意义（P〈0.01）。（2）子宫内膜异位症患者的在位内膜E-cadherin表达低于正常人,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：E-cadherin在子宫内膜异位症患者的在位内膜及粘附内膜的表达异常可能与子宫内膜异位症的发病有关。     

Survivin蛋白在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的通过分析Survivin蛋白在正常子宫内膜、子宫内膜增生症（包括单纯性增生和复杂性增生子宫内膜组织）、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌中的表达及其在子宫内膜腺癌不同临床病理分期、分级中的表达,探讨Survivin在从正常子宫内膜向子宫内膜样腺癌转变过程中作用及与子宫内膜癌临床病理分期、组织学分级的关系。方法采用免疫组化S-P法对正常子宫内膜组织20例、子宫内膜增生症组织20例、不典型增生子宫内膜组织20例、子宫内膜腺癌组织40例,进行Survivin蛋白的检测并分析。结果1．Survivin蛋白的表达率：在正常子宫内膜组和子宫内膜增生症组中Survivin蛋白表达均明显低于于不典型增生子宫内膜组和子宫内膜癌组中Survivin蛋白表达（P〈0．05）,正常子宫内膜组和子宫内膜增生症组之间表达无差异性。2．Survivin蛋白在子宫内膜癌不同组织学分级组（高分化G1、中分化G2,低分化G3）、不同手术病理分期组表达无明显统计学意义（P〉0．05）。结论Survivin蛋白的表达降低在正常子宫内膜向内膜样腺癌的转变中起重要作用;其低表达与子宫内膜样腺癌的病理分期、组织学分级无明显相关性。     

彩超对宫内早孕和异位妊娠子宫内膜改变的观察及其临床意义

目的彩超对宫内早孕子宫内膜改变和子宫动脉血流测值与异位妊娠进行比较。方法回顾分析46例宫内早孕和24例异位妊娠超声诊断。结果宫内早孕和异位妊娠子宫内膜改变区别较大。结论通过观察子宫内膜改变有助于诊断宫内早孕或异位妊娠。     

幽门螺杆菌毒力蛋白CagA诱导AGS细胞IL-8mRNA表达的研究

目的 研究AGS细胞的白细胞介素8(IL-8)mRNA表达与野生型幽门螺杆菌(H.pylori)和cagA基因突变株感染的关系.方法 采用RT-PCR法检测野生株西方型(WSS-type)H.pylori 26695和东方型(ESS-type)H.pylori HPK5、cagA基因突变株(cagA disrupted mutant strain)26695CA 和HPK5CA,按照细菌与细胞比例( multiplicity of infection,MOI) 150感染AGS 细胞的 IL-8 mRNA 动态(time-course)含量.同步感染试验排除菌株动力(motility)可能影响感染早期IL-8表达水平.结果 H.pylori诱导AGS细胞IL-8 mRNA表达.野生株西方型26695感染AGS细胞3小时后,IL-8 mRNA呈现时间依赖性(time-dependent)升高,持续升高至48小时;野生株东方型HPK5时间依赖性(time-dependent)表现为感染3小时后升高,随后降低,12小时再次出现峰值,随后又降低;突变株26695CA感染3小时后升高,持续至48小时,峰值表现在6小时和12小时;而突变株HPK5CA 感染3小时后未升高,6小时迅速达峰值,随后降低,48小时又出现峰值.结论 虽然cagA基因是诱导细胞表达IL-8 mRNA的重要因子,但并非是唯一因素,其他信号通路也参与IL-8 mRNA表达.     

体外循环中T淋巴细胞IL-4 IFN-γmRNA的表达变化及意义

目的研究体外循环（CPB）中T淋巴细胞IL-4、IFN—γmRNA的表达变化及意义。方法随机抽取年龄6-12岁先心病惠儿30例，分别于术前24h、CPB开始20min、CPB结束前、术后6h、术后24h抽取静脉血，分离T淋巴细胞．提取RNA，RT—PCR测定IL-4、IFN-γmRNA表达。结果CPB开始20min，T淋巴细胞IL-4mRNA表达明显升高，在CPB结束前达到峰值，术后24h逐渐恢复至术前水平；IFN-γmRNA表达在CPB开始20min下调，CPB结束前达到谷底，术后24h逐渐恢复至术前水平。结论CPB引起T淋巴细胞IL-4．mRNA表达上调、IFN-γmRNA下调，说明CPB可导致Th1／Th2失衡，在CPB创伤、炎性反应中可能起重要作用。     

不同IL-8亚型的原核表达

目的 构建一种精确表达小分子蛋白的技术平台,原核表达IL-8的3种不同亚型,使产物仅为研究对象本身,以避免大分子载体片段对下游研究的干扰.方法 采用PCR方法扩增仅仅编码IL-8(1-77aa)、IL-8(6-77aa)和IL-8(9-77aa)成熟肽片段的基因,分别TA克隆到载体PET SUMO.测序验证后的重组质粒...     

正常妊娠妇女及习惯性流产患者IL-2、IL-10 mRNA的表达差异

目的检测正常妊娠妇女、习惯性流产患者外周血单个核细胞(PBMC)内T辅助细胞亚型(Th1)细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、T辅助细胞2亚型(Th2)细胞因子白细胞介素10(IL-10)mRNA表达水平的差异.方法用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测10例正常非孕妇女、10例正常妊娠妇女、10例习惯性流产患者PBMC内IL-2、IL-10 mRNA的表达水平.结果同正常非孕对照相比,正常妊娠妇女IL-10 mRNA明显升高,习惯性流产患者IL-10 mRNA降低,IL-2 mRNA明显升高;同正常妊娠妇女相比,习惯性流产患者IL-2 mRNA及IL-10 mRNA均明显降低.结论正常妊娠分泌IL-10升高,当孕妇分泌IL-10降低而分泌IL-2升高时,可能会导致习惯性流产的发生.     

正常妊娠妇女及习惯性流产患者IL—2、IL—10mRNA的表达差异

目的 检测正常妊娠妇女、习惯性流产患者外周血单个核细胞（PBMC）内T辅助细胞亚型（Th1)细胞因子白细胞介素-2（IL-2）、T辅助细胞2亚型（Th2)细胞因子白细胞介素10（IL-10）mRNA表达水平的差异。方法 用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的方法检测10例正常非孕妇女,10例正常妊娠妇女,10例习惯性流产患者PBMC内IL-2、IL10mRNA的表达水平。结果 同正常非孕对照相比,正常妊娠妇女IL-10mRNA明显升高,习惯性流产患者IL-10mRNA降低,IL-2mRNA明显升高;同正常妊娠妇女相比,习惯性流产患者IL-2mRNA及IL-10mRNA均明显降低。结论 正常妊娠分泌IL-10升高,当孕妇分泌IL-10降低而分泌IL-2升高时,可能会导致习惯性流产的发生。     

烧伤脓毒症早期膈肌内泛素基因和蛋白的表达变化及意义

目的 :探讨烧伤脓毒症时大鼠膈肌内蛋白降解信号分子——泛素的基因和蛋白表达变化及意义。方法 :大鼠背部 30 %总体表面积 度烫伤后 ,立即腹腔注射内毒素 (6 mg/ kg)制成烧伤脓毒症动物模型 ,随机分为脓毒症 2 h和 6 h组 ,另设对照组 ,每组 9只。通过 Northern杂交检测大鼠膈肌内泛素 m RNA表达的变化 ;免疫组织化学法测定膈肌内泛素蛋白水平的表达。结果 :烧伤脓毒症大鼠伤后 2和 6 h膈肌内泛素 m RNA2 .4 kb条带和 1.2 kb条带的表达较对照组均显著增强 ,且呈持续升高现象 ,其中 2 .4 kb条带的表达增强更明显 ,差异有显著性 (P均 <0 .0 1)。烧伤脓毒症大鼠伤后 2和 6 h膈肌内泛素蛋白的表达较对照组也显著增强 ,以伤后 6 h增强更明显。结论 :烧伤脓毒症早期膈肌内泛素基因和蛋白表达即显著增强 ,且呈持续升高现象 ,提示膈肌内泛素系统活性上调 ,蛋白降解增强 ,这对进一步从肌组织蛋白代谢角度研究烧伤脓毒症时膈肌功能变化及其对呼吸功能的影响机制有重要意义。     

哮喘患者诱导痰中嗜酸细胞IL-4和IL-5mRNA表达

目的 :探讨IL - 4、IL - 5在哮喘诱导中痰嗜酸细胞 (EOS)炎症的作用。方法 :斑点分子杂交检测哮喘患者诱导痰中嗜酸细胞IL - 4、IL - 5mRNA表达。结果 :哮喘患者痰液中EOS细胞浸润密度增加 ,IL - 4、IL - 5mRNA表达比正常人明显升高 (p<0 .0 1) ,而正常对照组无明显变化 (p >0 .0 5 )。结论 :IL - 4、IL - 5mRNA表达增加可能在导致哮喘EOS气道炎症的过程中起信号途径作用。