乳腺癌中miR-141表达与临床病理特征、Keap1/Nrf2通路及预后的关系

目的 研究乳腺癌中miR-141表达与临床病理特征、KELCH样ECH关联蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)通路及预后的关系.方法 选择2014年3月至2015年3月期间在本院接受手术治疗的乳腺癌患者作为研究对象,检测乳腺癌组织和癌旁组织中miR-141、Keap1、Nrf2的表达水平,随访乳腺癌患...     

上皮性卵巢癌患者血和组织miR-200b表达水平及其与肿瘤侵袭程度的相关性分析

目的分析上皮性卵巢癌患者血浆和卵巢组织中微小RNA-200b(miR-200b)的表达水平及其与肿瘤侵袭程度的相关性。方法回顾性选取解放军第九七医院44例经手术病理确诊的上皮性卵巢癌患者为上皮性卵巢癌组,另同期选取32例因子宫腺肌病、子宫肌瘤和其它非卵巢病变行手术切除者为对照组。通过实时荧光定量PCR法对两组患者血浆和卵巢组织中miR-200b mRNA的表达水平进行检测;将人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞分为空白对照组(未转染任何质粒)、阴性对照组(转染非特异序列siRNA)及实验组(转染miR-200b抑制物)。采用transwell细胞侵袭实验以观察肿瘤细胞的侵袭能力,并采用Western blot法测定基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平,并用实时荧光定量PCR法对MMP-9 mRNA相对表达量进行检测。结果上皮性卵巢癌组血浆中miR-200b mRNA的表达水平较对照组明显升高,且卵巢组织中miR-200b mRNA的表达水平较对照组亦明显升高(P 0. 01)。miR-200b抑制物经人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞转染后,实验组miR-200b mRNA表达水平较空白对照组、阴性对照组明显下降(P 0. 01)。Transwell细胞侵袭实验结果发现,miR-200b抑制物经人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞转染后,实验组transwell小室下层细胞数量较空白对照组、阴性对照组明显减少(P 0. 01)。相比空白对照组、阴性对照组,干扰miR-200b基因表达后实验组SK-OV-3细胞中MMP-9蛋白和mRNA的表达水平均显著下降(P 0. 01)。结论 MiR-200b高表达于上皮性卵巢癌患者血浆和卵巢组织中,其可能通过调节MMP-9蛋白和mRNA的表达水平以诱导上皮性卵巢癌细胞的迁移和侵袭。     

血必净注射液对硫化氢急性中毒大鼠肺组织氧化应激的影响

目的 观察硫化氢(H2S)急性中毒大鼠肺组织血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)和核转录因子红系相关因子-2(Nrf2)的动态变化,以及血必净注射液的干预机制.方法 将96只清洁级SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、血必净对照组、H2S中毒模型组和血必净干预组.用酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HO-1、NQO-1活性和mRNA表达;RT-PCR法和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测Nrf2 mRNA和蛋白的表达;观察肺组织病理学改变.结果 正常对照组和血必净对照组HO-1、NQO-1活性及HO-1、NQO-1、Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白表达差异无统计学意义(均P＞0.05).与正常对照组比较,H2S中毒模型组HO-1、NQO-1活性及HO-1、NQO-1、Nrf2 mRNA[吸光度(A)值]和Nrf2蛋白表达(密度值)均明显升高,于2h达峰值[HO-1活性(μg/L):0.338±0.018比0.184±0.014,NQO-1活性(mU/L):155.69±7.07比81.59±7.15,HO-1 mRNA:0.518±0.012比0.169±0.013,NQO-1 mRNA:0.645±0.018比0.438±0.011,Nrf2 mRNA:0.254±0.009比0.131±0.008,Nrf2蛋白:0.187±0.011比0.054±0.006,均P＜0.01];与H2S中毒模型组同期比较,血必净干预组HO-1、NQO-1活性及HO-1、NQO-1、Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白表达均明显升高,于12h达峰值(HO-1活性:0.412±0.017比0.256±0.014,NQO-1活性:194.25±5.90比127.50±4.13,HO-1 mRNA:0.827±0.012比0.385±0.015,NQO-1 mRNA:0.790±0.010比0.563±0.016,Nrf2 mRNA:0.360±0.014比0.212±0.014,Nrf2蛋白:0.677±0.018比0.084±0.008,均P＜0.01).血必净干预组肺损伤程度较H2S中毒模型组明显减轻.结论 HO-1、NQO-1和Nrf2参与了H2S中毒早期急性肺损伤(ALI)的病理生理过程,血必净注射液可上调Nrf2的表达,提高HO-1、NQO-1的活性,发挥抗氧化作用,纠正氧化还原失衡,减轻H2S中毒所致的ALI.     

沉默缺氧诱导因子-1α对卵巢癌化疗敏感性的影响

目的观察沉默缺氧诱导因子HIF-1α对卵巢癌细胞化疗敏感性的相关影响并探讨其机理。方法构建HIF-1α基因短发夹RNA真核表达质粒,并转染卵巢癌细胞SKOV3（人卵巢浆液性囊腺癌细胞株）。实验可分为空白组,非特异对照组（转染pNonspecific-siRNA,即SKOV3NS）,目的siRNA组（转染pHIF-siRNA,即SKOV3siRNA）3组,用RT-PCR及Western Blot法分别检测各组HIF-1α基因的mRNA和蛋白的表达水平。细胞经过20μmol/L顺铂作用后,用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术（FCS）检测细胞凋亡率。结果 SKOV3siRNA转染组HIF-1α基因在mRNA水平和蛋白水平表达均明显降低,SKOV3siRNA组肿瘤细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均明显增高（P〈0.05）。结论 RNA干扰技术沉默HIF-1α能够有效地抑制卵巢癌SKOV3细胞HIF-1α基因表达,增强其对化疗药物顺铂的敏感性。     

黄芪提取物对病毒性心肌炎大鼠心肌组织Nrf2、HO-1表达水平的影响

目的探究黄芪提取物对病毒性心肌炎大鼠心肌组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)表达水平的影响。方法利用柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导病毒性心肌炎大鼠模型,40只心肌炎大鼠随机分为模型组、黄芪提取物低、中、高剂量组[10 mg/(kg·d)、20 mg/(kg·d)、40 mg/(kg·d)],另设对照组,每组10只。黄芪提取物处理组灌胃各剂量的黄芪提取物,1次/d,连续灌胃15 d;对照组和模型组以等量生理盐水替代。观察大鼠大体情况,采用HE染色检测大鼠心肌组织病理变化及其病理评分,检测心肌细胞中氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽(GSH)的水平,实时荧光定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)和Western Blot检测心肌细胞中Nrf2、HO-1的表达。结果模型组病理评分显著高于对照组(P 0. 05),模型组SOD、GSH水平以及Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白的表达显著低于对照组,MDA水平显著高于对照组(P 0. 05);黄芪提取物可有效改善病毒性心肌炎大鼠少食、毛色灰暗、反应迟缓、活动度减少、腹泻等病症,减轻心肌组织损伤,降低心肌组织中MDA水平,提高SOD、GSH水平、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白的表达,且高剂量组效果显著。结论黄芪提取物可呈剂量依赖性明显上调病毒性心肌炎大鼠心肌组织中Nrf2、HO-1的表达,减轻大鼠心肌氧化应激损伤。     

miR-145通过调控MMP-2、MMP-9的表达对卵巢癌细胞调亡、增殖、迁移的影响

目的研究微小RNA-145(miR-145)通过调控基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达对卵巢癌细胞调亡、增殖、迁移的影响。方法将卵巢癌细胞株随机分为3组,其中对照组为单纯卵巢癌细胞株,不做其他处理,进行正常培养;miR-145组为含miR-145质粒的慢病毒转染的卵巢癌细胞株;NC组为含NC质粒的慢病毒转染的卵巢癌细胞株。检测3组卵巢癌细胞的凋亡、增殖、迁移情况。检测3组MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达水平。结果与对照组、NC组比较,miR-145组卵巢癌细胞凋亡率明显升高,卵巢癌细胞增殖数、迁移数明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组与NC组卵巢癌细胞凋亡率、增殖数、迁移数差异无统计学意义(P>0.05)。miR-145组MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达水平均低于NC组、对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组与NC组MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-145可抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移,促进调亡,其作用机制可能与miR-145能降低MMP-2、MMP-9的表达有关。     

乌司他丁对硫化氢急性中毒大鼠肺组织氧化应激损伤的干预作用及机制研究

目的 观察硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)急性中毒大鼠肺组织血红素氧合酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)、醌氧化还原酶-1(NAD(P)H:quinine oxidoreductase 1,NQO-1)和核转录因子红系相关因子-2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)的动态变化及乌司他丁(ulinastatin,UTI对其的影响.方法 将清洁级SD大鼠96只随机(随机数字法)分为健康对照组(NS组,n=8),UTI对照组(UTI组,n=8),H2S染毒模型组(H2S组,n=40,采用在染毒柜内暴露吸入体积分数200×10-6的H2S1h,构建H2S急性染毒模型)和UTI干预组(H2S+UTI组,n=40,建立模型后立即腹腔注射UTI 10万U/kg).后两组大鼠于染毒后2、6、12、24、48 h时点麻醉后活杀,留取肺标本.观察大鼠行为学变化,ELISA法测定肺组织中HO-1和NQO-1活力的动态变化;RT-PCR法检测肺组织HO-1、NQO-1和Nrf2 mRNA表达,Western blot法检测Nrf2蛋白表达.观察肺组织病理学改变并行肺损伤评分.结果 与NS组比较,H2S组在染毒后2、6、12h时点HO-1活力和mRNA表达均明显升高(P＜0.01),其中2h呈高峰;与同时间点H2S组比较,H2S+ UTI组染毒后6、12、24、48 h时点HO-1活力和mRNA表达显著升高(P＜0.01).与 、NS组比较,H2S组在染毒后2、6、12、24 h时点NQO-1活力和mRNA表达均明显升高(P＜0.01)其中2h呈高峰;与同时间点H2S组比较,H2S+UTI组染毒后6、12、24、48 h时点NQO-1活力和mRNA表达显著升高(P＜0.01).与NS组比较,H2S组在染毒后2、6、12 h时点Nrf2mRNA和蛋白表达均明显升高(P＜0.01或P＜0.05),其中2h呈高峰;与同时间点H2S组比较,H2S+UTI组染毒后6、12、24、48 h时点Nrf2 mRNA和蛋白表达显著升高(P＜0.01).光镜下,H2S组在染毒后24 h大鼠肺组织损害明显;H2S+UTI组大鼠肺损伤较H2S组有所减轻.在染毒后12、24、48 h时点H2S+UTI组的肺损伤评分明显低于H2S组(P＜0.01).结论 HO-1、NQO-1和Nrf2参与了H2S中毒急性肺损伤的病理生理学过程;UTI干预治疗能显著提高HO-1、NQO-1及Nrf2的活力及表达,减轻H2S中毒急性肺损伤.     

醒脑静注射液对脑出血大鼠神经功能以及 脑血肿周围组织中内源性抗氧化系统Nrf2通路的影响

目的分析醒脑静注射液对脑出血(ICH)大鼠神经功能以及脑血肿周围组织中内源性抗氧化系统Nrf2通路的影响。方法选取SPF级Wistar雄性大鼠75只,分为假手术组、模型组、醒脑静低、中、高剂量组,每组15只。除假手术组外,其他大鼠制备ICH模型,术后醒脑静低、中、高剂量组大鼠静脉注入醒脑静溶液,假手术组和模型组大鼠静脉注入生理盐水。观察各组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、脑组织病理形态、脑组织内氧化应激指标含量、核因子相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶1(NQO1)及血红素加氧酶-1(HO-1) mRNA相对表达量及HO-1、Nrf2及Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠脑组织Nrf2、NQO1及HO-1 mRNA相对表达量上升;和模型组相比,醒脑静中、高剂量组大鼠脑组织Nrf2、NQO1及HO-1 mRNA相对表达量上升,差异均有统计学意义(P 0. 05),醒脑静低剂量组大鼠脑组织Nrf2、NQO1及HO-1 mRNA相对表达量略微上升,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论醒脑静注射液可改善ICH大鼠神经功能,调节Nrf2-ARE通路及下游基因表达来降低机体氧化应激反应。     

缺氧诱导因子-1α与X染色体连锁凋亡抑制蛋白在人卵巢癌中的表达及意义

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在人卵巢癌中的表达及意义。方法 用免疫组织化学技术法检测人正常卵巢组织标本10例、良性卵巢肿瘤标本10例、交界性卵巢肿瘤标本10例及恶性卵巢癌组织标本30例中HIF-1α和XIAP的表达情况;培养人卵巢癌细胞系SKOV3,向细胞培养瓶中加入HIF-1α激动剂和抑制剂,提取细胞总RNA,用RT-PCR技术观察XIAP和HIF-1α基因表达变化。结果 XIAP、HIF-1α在恶性上皮性卵巢癌组及交界性肿瘤组表达率均明显高于良性卵巢肿瘤组(P<0.05)。恶性上皮性卵巢癌组织中HIF-1α与XIAP在临床分期晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)组的阳性表达率明显高于临床分期早期(Ⅰ期和Ⅱ期)组(P<0.05),与患者年龄、病理分型和淋巴结转移无关(P>0.05)。在恶性上皮性卵巢癌中HIF-1α与XIAP呈正相关(P<0.05)。随缺氧时间延长,SKOV3细胞系中HIF-1αmRNA表达量渐增;低氧24 h时HIF-1αmRNA表达量达高峰,36 h时HIF-1αmRNA表达量有所回落;添加HIF-1α抑...     

卵巢上皮癌组织Id-1和HO-1表达及临床意义

目的探讨分化抑制因子-1（Id-1）和血红素加氧酶-1（HO-1）在卵巢上皮癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫组化S-P法,检测50例卵巢上皮癌、45例良性卵巢肿瘤及15例正常卵巢组织中Id-1和HO-1的表达。结果卵巢癌组织中Id-1和HO-1的阳性表达率明显增高,与良性卵巢瘤组织比较,差异有显著性（χ2=17.083、6.838,P〈0.05）;与卵巢正常组织比较,差异有显著性（χ2=31.097、27.444,P〈0.05）。Id-1、HO-1在卵巢上皮癌组织中的表达与术前CA125水平、病理分级和淋巴结转移密切相关（χ2=4.678-7.739,P〈0.05）。卵巢上皮癌组织中Id-1和HO-1的表达呈正相关（r=0.390,P〈0.05）。结论 Id-1和HO-1的高表达在卵巢上皮癌的发生、发展中起重要作用。     

miR-221-3p调控血管生成抑制蛋白-1对黑色素瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的 观察miR-221-3p、血管生成抑制蛋白-1(VASH-1)在黑色素瘤组织及黑色素瘤细胞系A375中的表达，探讨miR-221-3p、VASH-1在黑色素瘤细胞侵袭、迁移中的作用。方法 2019年1月—2021年9月新疆医科大学第一附属医院行手术治疗黑色素瘤患者21例，取手术切除的癌组织及癌旁组织。取对数生长期人黑色素瘤A375细胞及正常人表皮黑色素MC细胞。采用实时荧光定量PCR法检测癌组织、癌旁组织及A375、MC细胞miR-221-3p、VASH-1 mRNA相对表达量。取对数生长期A375细胞分为阴性对照组(转染siRNA-NC)、转染组(转染miR-221-3p siRNA),采用CCK-8法检测转染后培养12、24、48、72 h时细胞增殖率；采用Transwell小室实验检测转染24 h时迁移细胞数和侵袭细胞数；采用流式细胞术检测转染48 h时细胞周期；采用Western blot法检测转染48 h时VASH-1、GRB2、ERK1+2、VEGF-D、VEGF-α蛋白相对表达量。采用荧光素酶报告基因实验验证miR-221-3p与VASH-1的靶向关系。结果 (1)...     

下调miR-19b靶向TP53INP1对骨肉瘤细胞侵袭迁移和凋亡的影响

目的研究miR-19b靶向调控TP53INP1对骨肉瘤细胞侵袭迁移和凋亡的影响。方法将骨肉瘤MG63细胞分为:对照组、抑制物阴性对照组(转染抑制物阴性对照)、miR-19b抑制物组(转染miR-19b抑制物)、siRNA阴性对照+miR-19b抑制物组(转染siRNA阴性对照和miR-19b抑制物)、TP53INP1 siRNA+miR-19b抑制物组(转染TP53INP1 siRNA和miR-19b抑制物)、模拟物阴性对照组(转染模拟物阴性对照)、miR-19b模拟物组(转染miR-19b模拟物)。以qRT-PCR测定转染效果,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移,流式细胞术测定细胞凋亡。靶基因预测软件预测TP53INP1为miR-19b的靶基因,双荧光素酶报告载体鉴定靶向关系。以Western blot测定上调或下调miR-19b对TP53INP1表达的影响。以miR-19b抑制物和TP53INP1 siRNA共转染至MG63细胞中,以流式细胞术和Transwell小室测定细胞凋亡和侵袭迁移变化。结果 miR-19b抑制物MG63细胞中miR-19b表达水平下降,侵袭和迁移能力下降,细胞凋亡率升高,与对照组、抑制物阴性对照组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。miR-19b与TP53INP1mRNA的3,UTR有结合位点,荧光素酶报告载体鉴定TP53INP1为miR-19b的靶基因。与抑制物阴性对照组比较,miR-19b抑制物组上调细胞中TP53INP1蛋白表达水平,与模拟物阴性对照组比较,miR-19b模拟物组下调细胞中蛋白表达水平。与siRNA阴性对照+miR-19b抑制物组比较,TP53INP1 siRNA+miR-19b抑制物组能够上调MG63细胞的侵袭和迁移能力并减少细胞凋亡(P 0. 05)。结论下调miR-19b通过靶向调控TP53INP1可抑制骨肉瘤细胞侵袭迁移并诱导细胞凋亡。     

microRNA-206对低氧诱导心肌细胞凋亡的作用及其可能机制

目的探讨microRNA-206(miR-206)在低氧诱导的原代心肌细胞凋亡中的作用及可能的作用机制。方法将心肌细胞分成六组,正常组、低氧组、miR-206模拟物组、miR-206模拟物-NC组、miR-206抑制剂组和miR-206抑制剂-NC组,其中正常组心肌细胞未转染,正常培养,低氧组心肌细胞未转染,经过低氧处理,miR-206模拟物组、miR-206模拟物-NC组心肌细胞经低氧处理后分别转染miR-206模拟物及其阴性对照序列,miR-206抑制剂组和miR-206抑制剂-NC组心肌细胞在低氧处理后分别转染miR-206抑制剂及其阴性对照序列。设置不同低氧处理时间(0 h、12 h、24 h和48 h)处理心肌细胞,同时正常组细胞正常培养,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖情况,qRT-PCR检测miR-206表达情况,采用流式细胞术、免疫组化检测和Western blot法检测细胞凋亡情况。MTT检测六组心肌细胞增殖变化情况,流式细胞术检测细胞凋亡改变情况,qRT-PCR检测表皮生长因子受体(EGFR)-低氧诱导因子1α(HIF-1α)信号通路mRNA表达情况,Western Blot检测EGFR-HIF-1α信号通路蛋白表达情况。结果 MTT结果显示心肌细胞随低氧处理时间增加增殖呈下降趋势,低氧处理24 h和48 h细胞增殖显著低于正常组(P 0. 05);免疫组化检测结果可知,低氧诱导48 h后,心肌细胞内凋亡蛋白cleaved-caspas3显著增加;流式细胞仪检测结果可知低氧诱导24 h、48 h后细胞凋亡呈时间依赖性增加; Western blot鉴定并证实细胞凋亡相关蛋白表达增加及抗凋亡蛋白表达的下降;心肌细胞随低氧处理时间增加miR-206表达呈上升趋势,处理24 h和48 h的miR-206表达量显著高于正常组(P 0. 05)。miR-206模拟物转染组细胞增殖显著增加,凋亡明显下降,miR-206抑制剂组增殖显著下降,凋亡显著增加(P 0. 05)。qRT-PCR法检测发现干扰后各组EGFR、HIF-1α和胰岛素样生长因子1(IGF-1)的mRNA水平无变化,但Western blot结果显示miR-206模拟物组较其阴性对照组EGFR和HIF-1α蛋白表达水平降低,而miR-206抑制剂组较其阴性对照组EGFR和HIF-1α蛋白表达水平升高。结论 MiR-206在缺氧的心肌细胞中会异常增高,高表达的miR-206可通过负调控EGFR-IGF-1-HIF-1α信号通路影响心肌细胞的增殖和凋亡。     

环氧合酶-2在卵巢癌组织中的表达

目的:探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在卵巢癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化和RT-PCR技术检测正常卵巢和卵巢癌组织中COX-2的表达情况。结果:检测的38例卵巢癌组织COX-2蛋白表达阳性23例,阳性表达率61%,33例表达COX-2mRNA,阳性表达率为87%;20例正常卵巢组织COX-2蛋白与COX-2mRNA均呈阴性表达。结论:COX-2在卵巢癌组织高表达,并在其发生发展中起重要作用。     

miR-451在白血病细胞株K562/A02多药耐药中的作用及相关机制

目的：检测miR-451、ABCB1、ABCC2在白血病药物敏感细胞株K562及其耐药株K562/A02中的差异表达，探讨miR-451与ABCB1、ABCC2表达的调控关系及miR-451参与白血病耐药的相关机制。方法：CCK-8法检测K562/A02及K562细胞的耐药性，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证miR-451在K562及K562/A02细胞中的差异表达，将miR-451模拟物(mimic)及其阴性对照(miR-NC)、miR-451抑制剂(inhibitor)及其阴性对照(miR-inNC)分别转染K562及K562/A02细胞，应用q RT-PCR、Western blot检测ABCB1、ABCC2在K562、K562/A02细胞及转染后各组细胞中的mRNA、蛋白表达水平。结果：K562/A02细胞对阿霉素的耐药是其亲本细胞系K562的177倍。与K562细胞相比，K562/A02细胞中miR-451明显高表达(P<0.001),ABCB1、ABCC2在K562/A02中的mRNA及蛋白表达水平均显著高于K562细胞(P<0.001)。K562/A0...     

槲皮素与FSCN1基因siRNA联合对卵巢癌生长抑制及免疫功能的影响研究

目的探讨槲皮素与FSCN1基因siRNA对卵巢癌细胞活力、凋亡及免疫功能的影响及机制。方法人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、NC组(转染阴性对照siRNA)、槲皮素组(50μmol/L的槲皮素处理细胞后瞬时转染阴性对照siRNA)、si-FSCN1组(细胞转染靶向抑制FSCN1的siRNA)和槲皮素+si-FSCN1组(50μmol/L的槲皮素处理细胞后瞬时转染靶向抑制FSCN1的siRNA),siRNA转染参照Lipofectamine TM 2000说明。各组细胞处理48 h,Western blotting检测FSCN1、β-catenin、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bax和血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 SKOV3细胞转染si-FSCN1后FSCN1蛋白表达明显降低,与空白对照组比较差异显著(P0.05)。槲皮素组和si-FSCN1组细胞活力及β-catenin、cyclin D1和VEGF的蛋白表达均显著低于NC组,高于槲皮素+si-FSCN1组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于NC组,低于槲皮素+si-FSCN1组(P0.05)。结论槲皮素或FSCN1基因siRNA均能抑制卵巢癌细胞活力,诱导细胞凋亡,抑制免疫抑制因子VEGF表达,联合使用效果更强,机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

MACC1和HGF在卵巢上皮性癌的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨结肠癌转移相关因子1(MACC1)和肝细胞生长因子(HGF)的表达与卵巢恶性上皮性肿瘤临床、病理特征的关系。方法免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测47例上皮性卵巢癌、25例良性卵巢上皮性肿瘤、20例正常卵巢上皮性组织中MACC1、HGF蛋白及二者mRNA的表达。结果 (1)卵巢上皮性癌组织中MACC1和HGF蛋白的阳性表达率及相对表达量均显著高于良性上皮性肿瘤和正常卵巢组织(P均<0.05),而在卵巢良性肿瘤组织与正常卵巢组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);(2)卵巢上皮性癌组织中MACC1及HGF蛋白的表达与患者年龄、组织学类型无关(P均>0.05),与临床分期、组织学分级及淋巴结转移有关(P均<0.05);(3)MACC1 mRNA、HGF mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达量显著高于良性卵巢上皮性肿瘤和正常卵巢组织(F=295.032,P=0.00;F=177.252,P=0.00),且卵巢上皮性癌组织中MACC1 mRNA、HGF mRNA的表达水平呈正相关关系(r=0.810,P<0.01)。结论 MACC1可能在卵巢癌的恶性进展中发挥重要作用,有望成为上皮性卵巢癌诊断和治疗的靶点,与HGF联合检测对判断卵巢上皮性肿瘤预后有重要意义。     

siRNA介导低表达VEGF、SDF-1对 血管内皮细胞增殖和凋亡的影响研究

目的 研究小干扰RNA(siRNA)介导低表达基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)对血管内皮细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用体外实验培养人血管内皮细胞,细胞分别经siRNA介导下调表达SDF-1、VEGF处理,随机分为空白对照组(未进行任何转染)、阴性对照组(转染非特异性对照)、转染SDF-1-siRNA组、转染VEGF165-siRNA组。各组分别经相应处理。通过免疫印迹法测定细胞SDF-1和VEGF165蛋白的表达水平,用MTT实验测定人血管内皮细胞增殖情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 空白对照组与阴性对照组SDF-1和VEGF165蛋白表达水平的比较,无显著差异(P 0. 05);相比空白对照组和阴性对照组,转染SDF-1-siRNA组细胞中SDF-1蛋白的表达水平显著下调(P 0. 01),VEGF165蛋白表达并无显著差异(P 0. 05);相比空白对照组和阴性对照组,转染VEGF165-siRNA组SDF-1和VEGF165蛋白表达水平均显著下调(P 0. 01);转染VEGF165-siRNA组SDF-1蛋白表达水平显著高于转染SDF-1-siRNA组,VEGF165蛋白表达水平显著低于SDF-1-siRNA组(P 0. 01)。空白对照组与阴性对照组细胞细胞凋亡率的比较,并无显著差异(P 0. 05);转染SDF-1-siRNA组、转染VEGF165-siRNA组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著高于空白对照组和阴性对照组(P 0. 01),转染VEGF165-siRNA组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著高于转染SDF-1-siRNA组(P 0. 01)。结论 SDF-1和VEGF165基因均可增强人血管内皮细胞增殖能力,阻滞细胞凋亡,从而参与糖尿病血管病变的病理过程,同时该病理过程中VEGF165具有调节SDF-1表达水平的作用。     

miR-124 靶向调控CMTM6 增强CIK 对胶质瘤细胞杀伤效应机制研究

目的 研究细胞因子诱导杀伤（cytokine induced killer ,CIK）细胞对胶质瘤细胞杀伤效应的影响以及微小核糖核酸（miRNA,miR）-124 在此过程中的调节作用及可能机制。方法 收集2017 年3 月～ 2019 年10 月鄂州市中心医院神经外科收治的30 例脑胶质瘤患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR 法检测脑胶质瘤及癌旁组织中miR-124,含MARVEL 跨膜结构域的趋化素样因子家族基因6 (chemokine-like factor-like MARVEL transmembrane domaincontainingfamily member 6,CMTM6) mRNA 表达量及相关性。诱导培养CIK 细胞后,分别与胶质瘤细胞C6 和U87共培养,另转染miR-124 mimic,inhibitor 及阴性对照序列,通过CCK-8 实验检测CIK 细胞及转染对胶质瘤细胞的杀伤效应;双荧光素酶报告实验分析miR-124 与CMTM6 基因的靶向关系,qRT-PCR 和Western blot 检测胶质瘤细胞中miR-124,CMTM6 mRNA 及蛋白表达。结果 与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中miR-124 表达(0.325±0.031 vs1.004±0.086) 显著降低,CMTM6 mRNA 表达(3.167±0.324 vs 0.981±0.089) 显著升高,差异有统计学意义（t=39.051,26.337,均P ＜ 0.001）,二者呈负相关（r2=0.262）。与转染阴性对照比较,miR-124 mimic 转染及其与CIK 细胞共培养对C6(72.84%±3.81% vs 99.67%±3.45%,51.46%±3.18% vs 74.59%±3.47%),U87 细胞(71.93%±3.94% vs98.26%±3.59%,52.67%±3.24% vs 76.28%±3.64%) 增殖均有显著抑制作用,差异有统计学意义（q=16.340,15.486,14.087, 13.886,均P ＜ 0.001）。双荧光素酶报告实验显示,miR-124 和CMTM6 具有明显的靶向关系。Western blot 结果显示,与转染阴性对照+CIK 组比较miR-124 mimic 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6蛋白表达(0.435±0.042vs 0.897±0.061,0.354±0.029 vs 0.725±0.068) 显著降低,转染miR-124 inhibitor 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6 蛋白表达(1.142±0.121 vs 0.897±0.061,1.326±0.125 vs 0.725±0.068) 显著增加,差异均有统计学意义（q=13.817,10.839, 7.327,17.558,均P ＜ 0.001）。结论 CIK 细胞可有效杀伤胶质瘤细胞,miR-124 可通过靶向抑制CMTM6 增强CIK 细胞对胶质瘤细胞的杀伤效应。     

鼠尾草酚对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的作用及机制分析

目的 探讨鼠尾草酚在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)中的作用及其分子机制.方法 将40只周龄10～ 12周的雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、鼠尾草酚组、ALI组和治疗组(ALI+鼠尾草酚),每组10只.鼠尾草酚组和治疗组于LPS注射前1周给予鼠尾草酚20 mg/(kg·d)灌胃,持续7d.ALI组和治疗组通过单次腹腔注射LPS (10 mg/kg)的方式构建小鼠ALI模型,对照组和鼠尾草酚组则注射等剂量生理盐水.注射LPS 12 h后,取小鼠主动脉血和肺组织,检测各组小鼠的动脉血氧分压[pa(O2)]、动脉血二氧化碳分压[pa(CO2)]、血清乳酸脱氢酶(LDH),记录肺湿干质量比值,HE染色观察各组小鼠肺组织损伤状况.采用免疫印迹法检测各组小鼠肺组织中铁死亡标志蛋白前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)蛋白和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白的表达水平.检测小鼠肺组织中核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,ALI组小鼠肺组织出现明显肺水肿、炎症细胞和红细胞浸润等损伤特征,肺湿干质量比值、气道压、pa(CO2)升高,pa(O2)降低,肺组织中PTSG2蛋白表达升高、GPX4蛋白降低,Nrf2、HO-1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);与ALI组相比,治疗组小鼠肺组织损伤减轻,肺湿干质量比值降低,pa(O2)升高,pa(CO2)降低,肺组织中PTSG2蛋白表达降低、GPX4蛋白升高,Nrf2、HO-1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 鼠尾草酚具有减轻小鼠ALI的作用,其可能通过调控Nrf2/HO-1抑制铁死亡而发挥肺保护作用.