依达拉奉对脂多糖激活的小胶质细胞向M2型极化的影响

目的:探究依达拉奉对脂多糖(LPS)激活的小胶质细胞(MG)向M2型极化的影响。方法:利用脂多糖(LPS)激活体外培养的BV2小胶质细胞,复制小胶质细胞激活模型,分为对照组(control)、模型组(LPS)和LPS+依达拉奉组(LPS+E,100μmol/L),通过Western Blot和荧光双标染色技术,检测M2型小胶质细胞标记物：几丁质酶样蛋白1/2 (YM1/2)、精氨酸酶-1 (Arg-1)、白介素10 (IL-10)和甘露糖受体(CD206)的表达变化。结果:Western Blot和免疫荧光双标染色均提示：LPS组中YM1/2、Arg-1、IL-10和CD206的表达升高,与control组相比差异具有显著性(P<0.05),依达拉奉干预后,M2型小胶质细胞标记物表达进一步增高,LPS+E组与LPS组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:依达拉奉可促进LPS激活的小胶质细胞向M2型极化,发挥抗炎作用。     

依达拉奉对脑缺血大鼠大脑皮质Notch-1表达的影响

目的:探讨依达拉奉对脑缺血大鼠大脑皮质Notch-1表达的影响。方法:应用微创开颅法复制大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO组)和依达拉奉组(E组)。应用TTC染色测定大鼠MCAO后梗死体积,免疫组化单标、荧光双标、Realtime PCR和Western Blot技术检测大鼠MCAO后不同时间点大脑皮质Notch-1的表达变化。结果:(1)TTC染色显示依达拉奉治疗组大鼠脑缺血梗死区域明显缩小,梗死体积与MCAO组比较有显著差异(P0.05);(2)免疫组化单标染色显示Sham组大鼠大脑皮层未见Notch-1阳性细胞表达,MCAO组于1 d、3 d及7 d在缺血半暗区可见大量Notch-1阳性细胞,依达拉奉可减少大鼠大脑皮层Notch-1阳性细胞数(P0.05);(3)荧光双标染色显示缺血半暗区见大量呈激活状态的小胶质细胞和Notch-1阳性细胞,小胶质细胞有Notch-1表达,依达拉奉可降低Notch-1在小胶质细胞中的表达;(4)RT-PCR和Western Blot结果显示依达拉奉可明显降低MCAO大鼠Notch-1的mRNA和蛋白表达(P0.05)。结论:大鼠脑缺血后小胶质细胞大量激活并表达Notch-1信号;依达拉奉可能通过Notch-1信号通路抑制小胶质细胞的激活,对缺血后脑组织发挥保护作用。     

依达拉奉通过抑制JAK2/STAT3信号通路减少大鼠急性脊髓损伤后的细胞凋亡

目的 研究依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后JAK2/STAT3信号通路活化的影响,探讨依达拉奉保护神经的相关机制。方法 96只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）,脊髓损伤组（SCI组）,3mg/kg依达拉奉组（SCI+EDA组）和15mg/kg酪氨酸激酶抑制剂组（SCI+AG490组）,每组24只。分别在各组术后6,12,24和72h取材,利用TUNEL法检测细胞凋亡水平;Western blot法检测p-JAK2、p-STAT3蛋白表达变化;免疫组化法检测各组脊髓组织Caspase-3阳性细胞表达。结果 与Sham组相比,损伤脊髓的各组中脊髓组织中凋亡细胞数量明显增加,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平明显增高,Caspase-3阳性细胞表达水平明显增加。与SCI组对比,SCI+EDA组与SCI+AG490组脊髓组织中凋亡细胞数量明显减少,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平明显降低,Caspase-3阳性细胞表达水平明显下降（P<0.05）。SCI+EDA组与SCI+AG490组相比较无统计学差异。结论 依达拉奉能够抑制JAK2/STAT3信号通路的激活,降...     

天麻素对缺血缺氧脑损伤新生大鼠小胶质细胞Sirt3表达的影响

目的:研究天麻素对缺血缺氧脑损伤(HIBD)新生大鼠脑内激活的小胶质细胞Sirt3表达的影响。方法:选取39只3 d龄SD幼年大鼠随机分为对照组(control)、缺血缺氧脑损伤组(HIBD)、天麻素组(HIBD+gastrodin)。采用左侧颈总动脉结扎结合缺氧法建立新生大鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)模型,使用免疫荧光染色观察HIBD模型后新生大鼠大脑胼胝体区小胶质细胞的分布情况;使用免疫荧光双标染色及Western Blot检测大鼠大脑左侧胼胝体区小胶质细胞Sirt3的表达变化。结果:免疫荧光染色结果显示HIBD后新生大鼠大脑左侧胼胝体区小胶质细胞出现明显激活,确定模型建立成功。免疫荧光双标染色及Western Blot结果均显示,与对照组相比,HIBD模型组Sirt3的表达水平明显升高(P <0. 05);与HIBD模型组相比,天麻素组Sirt3的表达进一步增强(P <0. 05)。结论:天麻素可能通过促进新生大鼠脑内小胶质细胞Sirt3的表达,发挥其神经保护作用。     

小胶质细胞及其相关炎性信号通路

小胶质细胞作为中枢系统重要的免疫效应细胞,在中枢神经系统损伤及疾病处理中发挥着不可忽视的作用。本文从小胶质细胞的生物学特性及其相关的炎性信号通路（Notch信号通路、Toll样信号通路、AMPK信号通路、NF-κB信号通路）两大方面探讨,以期为临床抗炎药物的开发提供新思路。     

Caspase信号调控小胶质细胞的激活和神经毒性

激活的小胶质细胞能释放有神经毒性的促炎因子,小胶质细胞的激活以及炎症介导的神经毒性在多种神经退行性疾病中扮演重要角色。最近,欧洲科学家发现凋亡执行者caspase-8和caspase-3/7的依次激活能通过PKC-δ依赖的信号通路     

活化小胶质细胞致星形胶质细胞激活

目的探讨活化小胶质细胞培养液对星形胶质细胞的影响。方法 LPS激活原代培养小胶质细胞,采用活化的小胶质细胞条件培养液刺激星形胶质细胞,观察星形胶质细胞GFAP及IL-1β和TNFα的表达。结果 LPS刺激后,小胶质细胞OX42表达量上升,IL-1β和TNFα的表达量增高;小胶质细胞条件培养液可致星形胶质细胞激活,GFAP表达量上升,IL-1β和TNFα的表达量增加。结论活化小胶质细胞的条件培养液可致星形胶质细胞激活,激活的小胶质细胞和星形胶质细胞表达前炎症介质IL-1β和TNFα。     

依达拉奉对永久性脑缺血大鼠脑内Nestin表达的影响

目的观察Nestin在永久性脑缺血大鼠脑内的变化及依达拉奉干预的影响。方法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)SD大鼠模型,应用抗Nestin和抗Nestin/GFAP抗体进行免疫组化单标和免疫荧光双标染色。结果缺血后脑组织有大量Nestin阳性表达,阳性细胞主要分布于缺血侧侧脑室的室管膜下区(SVZ)、梗死灶周围大脑皮质和纹状体。细胞呈星状多突起,形似星形胶质细胞,且脑缺血后的大部分Nestin阳性细胞与星形胶质细胞标记物GFAP有共表达。缺血侧SVZ的Nestin阳性细胞数和免疫阳性表达强度于脑缺血后3 d达到高峰;梗死灶周围大脑皮质和纹状体区阳性细胞数和阳性表达强度分别于缺血后3 d和1周达到高峰;部分细胞聚集于梗死灶边缘,形成一个明显的梗死灶边缘带。经依达拉奉干预后,Nestin阳性细胞计数和表达强度与盐水组比较均升高(P<0.05),尤其在缺血治疗后3 d和1周(P<0.01)。结论脑缺血后,SVZ以及梗塞灶周围大脑皮质和纹状体区域大鼠Nestin阳性细胞数量增多、表达增强;经依达拉奉干预治疗后,Nestin阳性细胞的表达进一步增强,提示依达拉奉治疗可能促进脑缺血后神经干细胞的增生和分化,促进损伤组织的修复,发挥神经保护作用。     

依达拉奉对治疗急性脑梗塞的疗效分析

目的评价新型羟自由基消除剂一依达拉奉对急性脑梗塞的治疗效果。方法对60例急性脑梗塞患者随机分为治疗组30例和对照组30例,治疗组给予依达拉奉注射液30mg(3支),加入适量生理盐水中稀释后静脉滴注,30分钟内滴完,每日2次,共14天,同时给予莱奥80mg加入生理盐水250ml中静脉滴注每日一次;对照组除不用依达拉奉外,余同治疗组。采用格拉斯神经功能缺损评分量表及日常生活能力量表评分,比较两组14天后的治疗效果及常规检查。结果治疗组显效率(70%)明显高于对照组(33%),差异有显著性(P<0.01);神经缺损评分有显著差异(P<0.01);生活能力评分有显著差异(P<0.01)。而治疗组无明显不良反应。结论依达拉奉对急性脑梗塞的治疗是安全有效的。     

依达拉奉对惊厥持续状态幼年大鼠海马中caspase-3和caspase-12表达的影响

目的:探讨依达拉奉(edaravone,ED)对幼年大鼠惊厥持续状态(status convulsion,SC)后海马中caspase-3和caspase-12表达的影响。方法:将195只SD幼年雄性大鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、SC组和ED组;各组又均按时点分为4 h、12 h、24 h、48 h和72 h 5个亚组,每组13只。采用氯化锂-匹鲁卡品化学点燃法制备幼年大鼠SC模型。应用免疫组织化学法检测大鼠海马中caspase-3和caspase-12蛋白表达情况,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测caspase-3和caspase-12 mRNA的表达。结果:(1)免疫组织化学法检测SC 24~72 h组幼年大鼠海马中caspase-3表达增强,与NS组比较差异有统计学意义(P0.05);与SC组比较,ED 48~72 h组的caspase-3表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);RT-PCR法检测结果显示caspase-3 mRNA的表达趋势与蛋白基本相似。(2)免疫组织化学法检测SC组幼年大鼠海马中12~72 h组caspase-12表达增强,与NS组比较差异有统计学意义(P0.01);与SC组比较,ED 24~72组caspase-12表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);RT-PCR法检测结果显示caspase-12 mRNA的表达趋势与蛋白基本相似。(3)经比较,ED组Ⅴ级惊厥率较SC组低,差异有统计学意义(P0.05);且ED组惊厥潜伏期也较SC组明显延长,差异有统计学意义(P0.05)。结论:依达拉奉可抑制匹鲁卡品所致SC大鼠海马caspase-12和caspase-3的表达,提示依达拉奉对SC引起的脑损伤可能有保护作用。     

依达拉奉通过调控p38MAPK通路抑制阿霉素的心肌毒性

目的探讨新型抗氧化剂依达拉奉（edaravone,EDA）能否通过调控p38丝裂原激活蛋白激酶（mitogen．acti—ratedproteinkinase,MAPK）通路保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素（doxombicin,DOX）引起的损伤。方法应用5~mol／LDOX处理H9c2心肌24h以建立心肌毒性损伤模型。CCK一8比色法检测细胞存活率;双氯荧光素（DCFH—DA）染色荧光显微镜照像测定细胞内活性氧（reactiveoxygenspecies,ROX）水平;罗丹明123（rhl23）染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位（mitochondrialmembranepotential,MMP）;Westernblot法测定p38MAPK蛋白表达水平。结果在15～60min的时间范围内,5p．mol／LDOX呈时间依赖性地上调磷酸化（phosphorylated,P）p38MAPK表达。在DOX处理心肌细胞前,应用40~mol／LEDA预处理60min不仅能抑制DOX对p-p38MAPK表达的上调作用,也能抑制DOX引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高、胞内ROS生成减少及MMP丢失减少。另方面,应用了31~mol／LSB203580（p38MAPK抑制剂）预处理60min也产生类似于上述的EDA对抗DOX心肌毒性的作用。结论EDA可通过抑制p38MAPK通路保护H9c2心肌细胞对抗DOX引起的损伤。     

依达拉奉对次声性脑损害的保护

为了观察16Hz、130dB次声对SD大鼠记忆功能的影响及依达拉奉对其脑损害的防治作用。依达拉奉干预组在次声作用前3d开始连续给药(3mg/kg)直至次声作用7d后停止。次声作用7d后,测Y型电迷宫评定大鼠记忆功能,用单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)免疫标记法检测海马内ssDNA阳性细胞(凋亡细胞)数,并通过透射电镜观察脑超微结构。结果发现次声作用后大鼠学习记忆功能下降、海马ssDNA阳性细胞数明显增多(与正常对照组相比,P<0.05);电镜下可见神经细胞出现较严重缺血、缺氧性改变,并可见不同时期凋亡细胞。依达拉奉干预组大鼠学习记忆成绩与空白对照组相比无差异;海马ssD-NA阳性细胞数较次声对照组明显减少,但仍较正常对照组多,差异均有统计学意义;电镜下细胞变性改变程度较轻。由此得到结论16Hz、130dB次声可引发大鼠的脑损伤、细胞凋亡、记忆功能受损,依达拉奉可明显减轻次声引发的这些损害。     

依达拉奉通过抑制细胞外信号调节激酶1/2信号通路减轻大鼠弥漫性脑创伤后神经细胞凋亡

目的:探讨依达拉奉对脑创伤后神经细胞凋亡的影响及其机制.方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、创伤组、依达拉奉组,Marmarou's法建立弥漫性脑创伤模型.H-E染色观察皮质区神经细胞组织形态变化;免疫组织化学法和免疫印迹法检测磷酸化ERK1/2及Bax的表达;原位缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞的凋亡,并对大鼠综合运动功能进行评定.结果:与对照组比较,创伤组中皮质区部分神经细胞出现变性坏死和凋亡的改变,磷酸化 ERK1/2(1、 6、 24、 48h)和Bax(6、 24、 48、 72h)表达水平增高;神经细胞凋亡数目(6、 24、 48、 72h)增多;大鼠综合运动能力评分下降.与创伤组比较,依达拉奉组中脑组织形态结构损伤程度、磷酸化ERK1/2和Bax表达、神经细胞凋亡数目显著下降;大鼠的运动功能评分升高.结论:依达拉奉通过抑制ERK1/2信号途径活化,进而抑制促凋亡蛋白Bax表达,减少神经细胞凋亡,发挥对弥漫性脑创伤的保护作用.     

Fractalkine对脂多糖激活的小胶质细胞炎症相关因子表达的影响

目的:探讨趋化因子Fractalkine对脂多糖(LPS)诱导的小鼠小胶质细胞(N9)激活时所分泌的TNF-α、IL-1β和一氧化氮(NO)表达的影响.方法:用Fractalkine处理经LPS激活的小鼠小胶质细胞24 h,以ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α和IL-1β的浓度,以NO试剂盒检测培养上清中NO的浓度.结果:LPS能够激活小胶质细胞,使IL-1 β、TNF-α和NO的表达量与对照组相比明显升高;Fractalkine能够降低LPS激活的小胶质细胞IL-1β、TNF-α和NO的表达.结论:Fractalkine可能通过抑制炎症相关因子的产生而在中枢神经系统中发挥神经保护作用.     

葛根素对脂多糖诱导N9小胶质细胞激活的抑制作用

目的:探索葛根素对脂多糖(LPS)诱导N9小胶质细胞激活的抑制作用,为其在神经退行性疾病的防治方面提供依据。方法:用MTT法检测脂多糖和葛根素对小胶质细胞的细胞毒性作用;用流式细胞术(FCM)检测葛根素对LPS诱导N9细胞内活性氧(ROS)产生的抑制作用;分别用Griess法和FCM检测细胞培养液和细胞内一氧化氮(NO)含量;用HE染色法观察LPS激活N9细胞,及葛根素恢复细胞静息状态下细胞的形态;以FCM检测细胞凋亡和细胞周期。结果:葛根素(100~200μmol/L)能使LPS激活的N9细胞,从阿米巴样的活化形状明显恢复至静息态的圆形;LPS激活的N9细胞能产生大量的NO到培养液中,葛根素(50~200μmol/L)能使NO的产生减少,其中,高浓度组(200μmol/L)与LPS模型组相比,NO从23.45±0.19μmol/L降至12.43±0.11μmol/L(P0.01)。胞内ROS检测表明:葛根素(200μmol/L)同样明显降低ROS的产生。葛根素对激活的N9细胞胞内ROS的产生具有抑制作用,高浓度组(200μmol/L)能使其恢复至对照组水平;此外,葛根素能显著抑制LPS诱导的细胞凋亡,并恢复LPS对N9细胞G0/G1期的阻滞作用。结论:葛根素具有抑制小胶质细胞激活的作用。     

氯喹通过抑制NF-κB和MAPK信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应

目的:探究氯喹(CQ)对脂多糖(LPS)刺激的BV2小胶质细胞活化的抑制作用及可能机制。方法:将小鼠BV2小胶质细胞分为对照组、LPS组和LPS+CQ组。LPS+CQ组预先给予CQ(10μmol/L)处理30 min再给予LPS刺激,在LPS组和LPS+CQ组中给予LPS(500μg/L)刺激后,各组细胞分别培养30 min、6 h和24 h。倒置显微镜下观察BV2细胞的形态学改变;RT-qPCR和ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA和蛋白表达水平来评估BV2细胞的活化情况;用免疫荧光染色检测NF-κB蛋白核转移情况;用Western blot检测核因子κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白的表达情况及c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38蛋白的磷酸化水平。结果:LPS刺激后,BV2细胞形态由圆形或椭圆形向多极或纺锤样转变,而预先给予CQ能抑制BV2细胞的形态转变。LPS刺激后,BV2细胞中TNF-α和IL-6的mRNA水平和培养上清液中的蛋白水平明显增加,但预先给予CQ则明显抑制TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白表达,可见CQ能减轻LPS诱导...     

尼古丁抑制脂多糖诱导的小鼠脑小胶质细胞的激活

目的探讨尼古丁(NIC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠脑小胶质细胞激活的影响。方法将32只小鼠随机分为正常对照(CON)组、NIC组、LPS组、NIC+LPS组,每组各8只。NIC+LPS组首先腹腔注射尼古丁建立慢性暴露尼古丁的动物模型,后腹腔注射脂多糖诱导小鼠脑小胶质细胞激活;LPS组同时间只腹腔注射等量脂多糖;NIC组仅腹腔注射尼古丁;CON组腹腔注射等量生理盐水。免疫组织化学方法检测大脑皮质、海马、黑质CD11b阳性小胶质细胞表达情况。结果CD11b阳性小胶质细胞表达NIC组与CON组无差异,LPS组和NIC+LPS组均高于CON组(P<0.01),并且NIC+LPS组明显低于LPS组(P<0.01)。结论慢性NIC处理可以抑制LPS诱导的小鼠脑小胶质细胞激活,提示尼古丁可能对LPS引起的炎症反应具有保护作用。     

预防性应用依达拉奉对烟雾吸入性损伤大鼠的肺保护作用

目的探讨依达拉奉(edaravone)在烟雾吸入性损伤中对肺的保护作用。方法将32只雄性Sprague-Dawle大鼠采用随机数字表法随机分为4组,每组8只。分别为正常对照组(A组),致伤空白组(B组),致伤依达拉奉预防组(C组),致伤依达拉奉治疗组(D组)。除A组外,其余各组大鼠制作重度烟雾吸入性损伤模型。C组致伤前10min给予腹腔注射依达拉奉9mg/kg,D组致伤后30min给予腹腔注射依达拉奉9mg/kg,B组致伤后30min给予等量0.9%氯化钠溶液,A组无处理。伤后6h留取各组大鼠股动脉血液样本5mL,离心取血清检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)含量;留取肺组织制备肺组织匀浆后测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、肺髓过氧化物酶(MPO)活性。取部分右肺组织经4%甲醛溶液固定后做病理苏木精-伊红(HE)染色切片光镜观察。结果与B组相比,D组TNF-α[(311.8±7.90)pg/mL vs (399.3±8.03)pg/mL]、IL-6[(229.3±7.01)pg/mL vs (367.2±22.67)pg/mL]、MDA[(4.27±0.06)nmol/mg vs (6.30±0.09)nmol/mg]、MPO[(46.22±0.44)U/g vs (72.68±1.14)U/g]显著降低,差异有高度统计学意义(P﹤0.01),SOD[(148.53±2.18)U/mg vs (100.05±1.03)U/mg]及IL-10[(264.7±5.37)pg/mL vs (232.3±7.62)pg/mL]增高,差异有统计学意义(P﹤0.05);C组较B组上述变化更明显,差异有高度统计学意义(P﹤0.01)。光镜下C组和D组较B组肺组织炎细胞浸润减少,肺水肿减轻。结论依达拉奉可能通过抑制自由基的产生及减少部分炎性介质的生成对烟雾吸入性肺损伤起到保护作用,且提前用药效果较好。