siRNA沉默Ppif基因表达对大鼠肾细胞增殖和凋亡的影响

目的：应用小干扰RNA（smallinterferingRNA,siRNA）抑制大鼠基因Ppif的表达,探讨其对大鼠肾细胞（NRK）增殖和凋亡的影响。方法：体外化学合成针对Ppif基因的siRNA序列,在脂质体介导下转染NRK细胞,RT—PCR检测PpifmRNA表达水平,Westernblot检测Ppif蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡状况,MTT法检测细胞增殖活性。结果：PpifsiRNA转染NRK细胞24h后,所设计的3对针对不同靶点的siRNA与对照组相比,起始于405、556位点的sIRNA在基因水平对Ppif无明显抑制效应（P〉0．05）;起始于198位点的siRNA在基因和蛋白水平均有明显的抑制效应,基因水平下降75．25％（P〈0．05）;蛋白水平下降72．13％（P〈0．05）。MTT结果显示NRK细胞增殖能力显著增加,转染24h后,siRNA1～siRNA4细胞抑制率分别为（68．6±3．6）％、（5．3±4．3）％、（7．6±6．3）％和（4．1±4．5）％,凋亡率明显下降。结论：体外化学合成的PpifsiRNA（起始于198位点）可以有效地抑制NRK细胞Ppif的表达,从而抑制细胞凋亡,促进细胞增殖。     

靶向survivin基因不同位点的siRNA对PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察靶向survivin基因不同位点的小干扰RNA(siRNA)对人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞survivin mRNA表达的抑制作用以及对细胞增殖和凋亡的影响. 方法 根据survivin mRNA的结构特点,选取2个不同的作用位点,设计和构建负载survivin shRNA片段的2种重组质粒载体.以脂质体法转染PC-3细胞株,荧光显微镜下观察转染效率.实验分为survivin 1组、survivin 2组、阴性对照组和空白对照组.转染后24、48和72 h,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中survivin mRNA的表达,MTT法检测siRNA对PC-3细胞增殖的影响,流式细胞术检测凋亡率. 结果 与对照组相比,survivin 1组、survivin 2组对survivin mRNA的表达均能产生抑制效应,48 h抑制率最高,survivin 1抑制率高,达52%.实验组均能抑制PC-3细胞的增殖,survivin 1抑制细胞增殖的能力强.转染48 h后,细胞凋亡最明显,survivin 1组凋亡率高,达13.6%±1.8%. 结论 在RNAi研究中,根据特定靶基因mRNA的结构特点来进行siRNA的设计和筛选,在前列腺癌的基因治疗中具有一定的实际应用价值.     

siRNA沉默VEGF基因对肾癌细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨siRNA干扰血管内皮生长因子（VEGF）基因对人肾细胞癌细胞株（ACHN）细胞增殖与凋亡的影响.方法：化学合成针对VEGF的小干扰RNA,通过脂质体转染至ACHN中,利用Western印迹法检测细胞内VEGF的表达,采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线,用MTT比色分析法检测细胞增殖抑制率（IR）,用TUNEL方法检测细胞凋亡率（AR）.结果：生长曲线提示,与空白对照组及阴性对照组相比,siRNA1组、siRNA2组ACHN细胞的生长明显减慢 在24 h、48 h、72 h,siRNA1的增殖抑制率为10.6%、18.0%、27.1%,siRNA2增殖抑制率为18.9%、32.7%、40.3%,均高于空白对照组及阴性对照组（P〈0.05） siRNA1组的细胞凋亡率为10.7%、15.2%、20.3%,siRNA2组的细胞凋亡率为17.3%、26.2%、37.4%,均高于空白对照组及阴性对照组（P〈0.05） siRNA1组、siRNA2组VEGF蛋白表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组,其中siRNA2对ACHN细胞的IR、AR和VEGF蛋白表达的抑制作用均显著高于siRNA1组（P〈0.05）.结论：VEGF在肾癌的发生发展中起着重要作用,化学合成的VEGF-siRNA能特异性抑制肾细胞癌ACHN细胞株中VEGF的表达,抑制细胞生长增殖,促进细胞凋亡.对于VEGF基因高表达的肾细胞癌患者,针对VEGF的RNAi技术有望成为肾细胞癌新的基因治疗手段.     

siRNA沉默survivin基因对肺癌细胞凋亡的影响

目的观察siRNA（Small interference RNA,siRNA）介导survivin基因对肺癌细胞凋亡作用。方法设计、合成针对survivin的siRNA并构建相应载体,转染对数生长期肺癌细胞A549,对比阴性对照组和空白对照组;半定量RT-PCR检测survivin mRNA的表达,MTT法检测细胞生长,流式细胞仪检测肺癌细胞的凋亡。结果转染siRNA组survivin mRNA表达明显低于阴性对照组和空白对照组（P〈0.05）。MTT法检测各组细胞生长曲线阴性对照组与空白对照组相比,转染后24,48,96小时及1周时细胞生长未受影响,siRNA组在转染后24,48小时细胞生长未受明显影响,而96小时及一周时明显抑制。转染siRNA组的细胞的凋亡率与阴性对照组与空白对照组相比显著增加（14.94%±1.60%vs 3.23%±0.46%,4.22%±0.34%,P〈0.05）。结论本实验提示siRNA沉默survivin基因能促进肺癌细胞的凋亡,survivin siRNA基因治疗有可能成为肺癌治疗的新靶点。     

PLK1基因siRNA的构建及对甲状腺未分化癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 构建保罗样激酶-1(PLK1)基因小干扰RNA(siRNA),并观察其对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计合成5个PLK1 siRNA(S1、S2、S3、S4、S5),转染人甲状腺癌ARO细胞后,采用实时定量RT-PCR方法筛选下调PLK1 mRNA效果最好的siRNA;然后以该siRNA转染ARO细胞后,分别以实时定量RT-PCR和Western blot检测各组细胞PLK1基因表达情况;以MTT法检测对各组细胞增殖的影响;分别以caspase-3活性和TUNEL方法明确甲状腺癌细胞凋亡情况.结果 5个siRNA均明显下调PLK1 mRNA水平,以S4效果最好,抑制率达91.5%.MTr结果显示,S4 siRNA转染对甲状腺癌细胞增殖均有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05).与对照组比较,S4 siRNA转染组癌细胞caspase-3活性明显升高,且呈浓度和时间依赖性(r=0.919;r=0.957);TUNEL结果显示,S4 siRNA转染组出现明显的凋亡现象,且呈浓度依赖性(r=0.932).结论 PLK1基因在甲状腺未分化癌细胞增殖中具有重要的调控作用.PLK1 siRNA转染可明显抑制癌细胞增殖,诱导凋亡是其重要机制之一.     

慢病毒介导的NOB1基因沉默对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默人NOB1基因对人结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的影响。方法设计靶向NOB1基因的小干扰RNA（siRNA）,构建NOB1基因特异性的RNA干扰慢病毒载体,感染RKO细胞,并设置阴性对照组。实时定量PCR和Westemblot分别检测两组细胞NOB1mRNA及蛋白的表达情况;CellomicsArrayScanVTIHCS高内涵分析仪检测感染细胞的增殖和克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化：裸鼠成瘤实验检测0NOB1-siRNA对肿瘤的抑制作用。结果NOB1-shRNA慢病毒感染RKO细胞3d后．与阴性对照组比较．NOB1mRNA和蛋白的表达明显降低,克隆形成数减少,而细胞凋亡数增加（均P〈0．05）。裸鼠成瘤实验结果显示,NOB1．shRNA感染组裸鼠移植瘤体积为（405±102）mm3,小于阴性对照组的（870±165）mm3（P〈0．05）。结论通过RNA干扰方式沉默NOB1基因的表达．有望作为抑制结肠癌发展的有效手段。     

miR-1246在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-1246（miR-1246）在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨其在肝癌发生发展中的作用和意义。方法应用实时定量PCR（qRT-PCR）方法检测miR-1246在肝癌以及癌旁组织的表达;对人肝癌细胞株（BEL7402、SMMC7721）转染miR-1246 抑制剂后,采用MTT法观察肝癌细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果 miR-1246 在肝癌组织中表达显著高于癌旁组织[（65.39±8.77）vs（10.23±2.58）,P=0.002]。MTT和凋亡实验结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-1246抑制剂后,BEL7402细胞增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）;SMMC7721细胞也出现增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）。结论 miR-1246 在肝癌组织中高表达,并且与肝癌细胞的增殖及凋亡有关,其表达的上调可能与肝癌的发生发展有关。     

靶向沉默DDX46基因对食管鳞癌TE-1细胞增殖及凋亡的影响CSCD

目的通过sh RNA干扰技术,探讨靶向沉默RNA解旋酶DDX46基因对食管鳞癌TE-1细胞增殖及凋亡的影响。方法以人永生化食管鳞状上皮细胞Het-1A为对照,实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测DDX46基因m RNA在TE-1细胞中的相对表达;DDX46基因RNAi靶点序列慢病毒感染的TE-1细胞为实验组,阴性对照序列慢病毒感染的TE-1细胞为对照组,进行细胞计数、克隆形成和细胞凋亡实验;Stress and Apoptosis Signaling Antibody Array Kit检测DDX46基因靶向沉默前后信号通路关键分子的变化。结果与对照组相比,靶向沉默DDX46基因后细胞计数显示TE-1细胞生长被显著抑制(P<0.01),克隆形成实验显示细胞克隆形成能力被显著抑制(P<0.001),Annexin V-APC单染法流式细胞仪凋亡检测显示细胞凋亡显著增加(P<0.001)。Path Scan?Antibody Array检测发现Akt(Ser473,phosphorylation)和IκBα(total,N/A)表达水平显著下降(P<0.01),Caspase-3(Asp175,cleaved)表达水平升高(P<0.05)。结论 DDX46基因在食管鳞癌TE-1细胞中高表达;RNAi靶向沉默DDX46基因可抑制TE-1细胞增殖、诱导细胞凋亡;DDX46基因沉默可能是通过下调Akt/NF-κB信号转导通路,进而发挥抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用。     

RNA干扰PLK1基因表达对肝癌细胞增殖的影响

目的探讨靶向PLK1基因在肝癌基因治疗中的可行性。方法采用PLK1小干扰核糖核酸分子(siRNA)转染人肝癌HepG2细胞,分别以荧光实时定量PCR和Western blot检测PLK1基因和蛋白的表达水平,观察PLK1 siRNA转染对肝癌细胞体外增殖的影响。并于转染不同时间后收集细胞,分别采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL方法检测肝癌细胞的凋亡情况。结果 PLK1基因明显抑制癌细胞体外生长(P0.05)。肝癌HepG2细胞经siRNA转染处理后,PLK1 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P0.05)。DNA电泳出现明显的梯度图谱;转染组癌细胞凋亡指数明显增加。结论 PLK1 siRNA转染可明显抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。本结果为肝癌以PLK1基因治疗提供了一条新的思路。     

ShRNA靶向沉默FGFR3基因对人肝癌细胞Huh7增殖和迁移的影响

目的:研究成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)对肝癌细胞株Huh7增殖和迁移能力的影响。方法:以靶向沉默FGFR3的shRNA慢病毒表达载体、delta8.9和VSVG三质粒共转染293T细胞来包装慢病毒颗粒。选择Huh7细胞转导慢病毒载体。通过细胞增殖实验(CCK-8法)和transwell实验,分别评估沉默FGFR3对Huh7肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。裸鼠分别皮下注射pSilencer-FGFR3-shRNA1#组和pSilencer-NC组Huh7细胞后,监测肿瘤生长。Western印迹法检测下游信号蛋白p-AKT和p-ERK。结果:与NC组比较,RNAi组的细胞增殖能力显著下降(P     

靶向bcl-2基因StealthTM RNA干扰诱导肝癌细胞凋亡的作用

目的 应用RNA干扰技术,构建靶向bcl-2基因StealthTM RNA,转染入人肝癌细胞株,探讨RNA干扰诱导人肝癌细胞凋亡的机制.方法 确定并合成3对人肝癌bcl-2基因干扰序列;脂质体法转染入肝癌细胞株内;荧光显微镜下观察转染细胞并计算转染率;倒置显微镜下观察转染前后细胞形态学的改变;SP免疫细胞化学技术检测StealthTM RNA处理前后细胞bcl-2蛋白表达变化;流式细胞术检测StealthTM RNA干扰对癌细胞凋亡和周期的影响.结果 各组转染成功,荧光镜下显清晰的绿色荧光;各转染组转染率与时间有关,各组48 h的转染率最高(P＜0.01);转染组间StealthTM RNA Ⅰ组的转染效率最高(P＜0.01);倒置显微镜下观察见转染后见部分细胞边缘圆,折光度降低,细胞增殖减慢且易脱落;未转染组细胞呈上皮性贴壁生长,生长旺盛.免疫细胞化学显示,StealthTM RNA干扰后各转染组发现细胞的bcl-2表达减弱,与未转染组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞术结果示,各转染组细胞凋亡率明显升高,并出现凋亡峰,StealthTM RNA Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的凋亡率分别为(27.87±4.51)%、(24.50±0.89)%和(26.03±0.57)%,与未转染组细胞凋亡率(3.20±1.71)%,差异有统计学意义(P＜0.01).各转染组细胞发生显著的细胞周期阻滞,表现为S期细胞明显减少,G0/G1细胞明显增多.结论 靶向bcl-2基因StealthTM RNA成功的转染人肝癌细胞中,bel-2蛋白表达受抑制,并明显的诱导癌细胞发生凋亡.     

胰岛素类似物生长因子1受体基因沉默对人肾上腺皮质癌细胞株SW13增殖凋亡的影响

目的探讨胰岛素类似物生长因子1受体(IGF1R)基因沉默对人类肾上腺皮质癌细胞株SW13增殖及凋亡的影响。方法依据人类IGF1R的cDNA序列合成其特异性SiRNA,通过脂质体将其转入SW13细胞,24h后通过实时定量Real time PCR检测SiRNA对靶基因mRNA下调作用,同时使用Western blot检测其靶蛋白的表达。通过MTT法测定转染后细胞增殖活性,流式细胞仪测定细胞凋亡状态。结果3种不同的针对IGF1R的SiRNA能够有效下调SW13细胞IGF1R mRNA,而通过Western blot也发现在蛋白水平出现类似结果。IGF1R基因沉默能够有效抑制SW13细胞增殖以及诱导细胞凋亡。结论IGF1R基因沉默能够诱导肾上腺皮质癌细胞凋亡,抑制其增殖,有望为肿瘤靶向治疗在ACC中应用提供相应的理论依据。     

小干扰RNA沉默多药耐药相关蛋白基因2对人肝癌细胞HepG2多药耐药的逆转作用

目的 检测小干扰RNA(siRNA)对肝癌耐药细胞株HepG2/阿霉素(ADM)多药耐药相关蛋白基因2(MRP2)及其蛋白产物的抑制作用,观察对多药耐药性的影响.方法 使用浓度梯度法制作HepG2耐ADM细胞株(HepG2/ADM),ADM浓度从0.1～2.0 m/L:设计合成针对MRP2的siRNA小片段,转染HepG2/ADM耐药细胞,24 h后通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测siRNA对MRP2基因mRNA和蛋白的抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法观察抑制MRP2基因表达后,HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性变化,并计算各药物的半数抑制浓度(IC50).结果 HepG2/ADM对ADM、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱和奥沙利铂的IC50值分别为0.3204、3.8002、0.2014和0.1221;siRNA明显抑制了HepG2/ADM细胞MRP2基因mRNA和蛋白的表达(P＜0.05);转染MRP2-siRNA后,HepG2/ADM细胞对ADM、5-Fu、长春新碱和奥沙利铂的IC50值明显减小,分别为0.1023、1.4417、0.0452和0.0268.结论 用siRNA沉默MRP2基因能够逆转HepG2/ADM细胞对化疗药物的耐药性,MRP2基因与HepG2/ADM肝癌细胞的多药耐药性相关,可通过沉默MRP2基因提高耐药细胞对化疗药物的敏感性.     

沉默XIAP基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究siRNA（small interfering RNA）对MCF-7细胞株XIAP（X-chromosome-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）基因表达的抑制作用及对癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。方法 体外转录法合成特异性针对人XIAP基因的siRNA；荧光标记法标记XIAP siRNA；脂质体法将siRNA转人MCF-7细胞；流式细胞仪检测siRNA的转染效率；半定量RT-PCR及Western blot法检测siRNA对XIAP基因表达的抑制作用；MTT法检测siRNA对细胞生长增殖抑制作用；TUNEL法观察siRNA诱导细胞凋亡的作用。结果 siRNA的转染效率在一定剂量范围内随浓度的增加而增加，siRNA转染组XIAP mRNA表达水平可下调约77%，对照组mRNA表达水平无明显改变。细胞生长增殖抑制率在一定范围内具有剂量依赖性和时间依赖性。荧光显微镜下观察肿瘤细胞发现，siRNA50、100、200nmol/L转染组出现典型的凋亡形态学变化。结论 体外转录合成的siRNA能特异有效下调XIAP基因的表达，瞬时转染XIAP siRNA能有效抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡，低剂量XIAP siRNA对瘤细胞显示了显著的抗增殖作用。     

化疗诱导人肝癌细胞凋亡中p53和bcl-2基因的调控

目的 建立化疗药物丝裂霉素诱导肝癌细胞凋亡的模型,初步探讨在该凋亡过程 中重要凋亡相关基因ｐ５３和ｂｃｌ－２的调控作用。方法 用丝裂霉素诱导人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２凋亡,我显微镜和透射电镜观察肝癌细胞的形态学改变,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞ＤＮＡ片段的梯状条带,用流式细胞仪免疫荧光法检测凋亡不同时期Ｐ５３和Ｂｃｌ－２蛋白的表达量。结果 ８ｍｇ／ｍｌ丝裂霉素作用１２,２４,４８ｈ后,Ｐ５３蛋白表达量明显增高,尤以１２ｈ明显,而后逐渐下降。Ｂｃｌ－２蛋白在整个凋亡过程中无明显变化。结论 在化疗药物丝裂霉素诱导肝癌细胞凋亡过程中,ｐ５３基因参与了调控,并为凋亡信号传导途径中的早期事件。丝裂霉素诱导的肝癌细胞凋亡途径为ｐ５３依赖方式,而在该凋亡过程中,ｂｃｌ－２基因的调控并不重要。     

shRNA沉默GnT-Ⅴ基因表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnT-Ⅴ)的小片段发夹状RNA(shRNA)表达质粒,研究shRNA表达质粒沉默GnT-Ⅴ基因后对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对GnT-Ⅴ基因的小干扰RNA(siRNA)靶序列,构建shRNA表达载体并转染PC-3细胞,通过G418筛选,建立稳定表达GnT-Ⅴ基因的细胞株,采用RT-PCR和蛋白质印迹检测GnT-ⅤmRNA和蛋白的表达,并通过CCK-8增殖实验、流式细胞仪评价GnT-ⅤshRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建了GnT-ⅤshRNA表达质粒,且该质粒明显下调GnT-Ⅴ的表达;PC-3细胞GnT-Ⅴ/1079的mRNA和蛋白质水平的抑制率分别为76.5%和67.0%,对PC-3细胞呈明显抑制效应;CCK-8增殖实验显示,与对照组相比,PC-3GnT-Ⅴ/1079的增殖受到明显抑制(P<0.01),以48h为著;流式细胞仪检测结果表明,PC-3GnT-Ⅴ/1079的凋亡率明显增加(P<0.05)。结论 shRNA GnT-Ⅴ能显著降低GnT-Ⅴ基因的表达水平,从而有效抑制PC-3细胞增殖,并促进细胞凋亡,该GnT-Ⅴ的siRNA序列可能成为治疗前列腺癌的有效靶点。     

靶向survivin的siRNA联合凋亡相关配体对肝癌细胞的影响

目的探讨靶向survivin的siRNA联合肿瘤坏死因子诱导凋亡相关配体(tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法构建靶向survivin基因的siRNA真核表达载体,观察可溶性TRAIL对肝癌细胞增殖与凋亡的影响。结果采用RT-PCR检测显示,siRNA在mRNA水平抑制survivin基因表达为73％。MTT法检测到可溶性TRAIL对HepG2、HepG2／Silence(-)细胞增殖无明显的抑制作用(P>0．05),通过抑制survivin表达,可使HepG2／Silence(+)细胞的12 h存活率明显降低,48 h降至最低[HepG2／Silence(+)0．518±0．017,对照组0．741±0．005,P<0．01]。荧光显微镜检测HepG2／Silence(+)细胞12 h、24 h、48 h的细胞凋亡率分别为:11．85％±0．72％、28．97％±0．43％、41．80％±0．90％,与对照组相比差异有统计学意义(F=22．37,P<0．05)。结论靶向survivin的siRNA在抑制肝癌细胞中survivin表达的同时可增强TRAIL作用的敏感性。     

靶向沉默SPHK1基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨用小干扰核酸（SmallinterferingRNA,siRNA）靶向沉默神经鞘氨酸激酶1（sDhingosinekinasel,SPHKl）基因敲除后对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法人工化学合成SPHKlsiRNA和对照siRNA,分别转染胃癌SGC-7901细胞。Westernblot法检测SPHKl、Bcl-2和Bax蛋白的表达;流式细胞术（FlowCytometry,FCM）检测细胞凋亡的变化。结果SPHKlsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞后,SPHKl蛋白表达明显下调;与对照组相比,SPHKlsiRNA转染组Bcl一2蛋白表达下调了55％（P〈0．01）,Bax蛋白表达差异无统计学意义,Bcl-2／Bax比值下调54％（P〈0．05）;SPHKlsiRNA转染组早期凋亡细胞明显增多（P〈0．01）,晚期凋亡细胞无明显变化。结论SPHKl特异性siRNA可阻断SGC-7901细胞SPHKl蛋白的表达,并通过影响Bcl-2通路诱导细胞凋亡。     

siRNA沉默高迁移率蛋白A2基因对人膀胱移行细胞癌细胞T24增殖凋亡的影响

目的 观察siRNA靶向沉默HMGA2基因在人膀胱移行细胞癌T24细胞中表达的变化,探讨抑制HMGA2基因对T24细胞增殖、周期和凋亡的影响.方法 针对人HMGA2基因构建siRNA干扰片段,瞬时转染T24细胞后,采用Western-blot方法检测转染siRNA干扰片段48h后T24细胞蛋白表达量的变化,CCK-8法检测T24细胞增殖和流式细胞仪（FCM）检测T24细胞周期和凋亡情况.结果 转染后48h的T24细胞HMGA2蛋白表达水平较空白对照组（CON）和阴性对照组（NC）显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,转染HMGA2-siRNA的实验组抑制T24细胞增殖,T24细胞S期细胞比例（35.47±0.23）％高于CON组和NC组（P＜0.05）,实验组T24细胞凋亡率为（17.25±0.24）％,明显高于CON组和NC组（P＜0.05）.结论 HMGA2基因的特异性siRNA可以抑制T24细胞增殖,细胞周期阻滞在S期,并促进其凋亡.     

靶向PPARγ基因siRNA载体的构建及沉默效应

目的构建靶向过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisome proliferator—activated receptor-γ，PPARγ）基因的小干涉RNA（small interfering RNA，siRNA）载体，转染骨髓基质细胞（marrow stromal cells，MSCs）后观察其对PPARγmRNA的抑制作用。方法根据siRNA设计原则，在PPARγmRNA序列中选择2个特异性靶序列（677-695和497-515）及同时设计1条无关对照序列；体外合成对应发卡样DNA片段，经退火后，将其定向克隆入siRNA载体pRNAT—U6．2，将重组siRNA载体pRNAT—U6．2-PPARγ用脂质体包裹转染入MSCs后，采用RT—PCR检测PPARγ基因mRNA表达水平的变化。结果得到阳性重组克隆pRNAT—U6．2-SPPARγ，经过PCR鉴定与测序，结果正确；RT—PCR检测转染MSCs显示，PPARγ基因的表达水平明显降低。结论成功构建靶向PPARγ基因的siRNA载体pRNAT—U6．2-SPPARγ，转染MSCs可以有效抑制PPARγmRNA的表达，这为预防酒精性股骨头坏死发生的研究奠定了可靠基础。