MCHR1基因沉默对3T3-L1细胞诱导分化的影响

摘要:目的　运用RNA干扰技术沉默黑色素浓集激素受体1（Melanin-Concentrating Hormone Receptor 1,MCHR1）基因的表达,观察其对3T3-L1细胞诱导分化的影响,为肥胖症的基因治疗提供新思路。方法　用含绿色荧光蛋白的重组载体sh-MCHR1,通过脂质体法转染3T3-L1细胞。细胞诱导分化的同时用黑色素浓集激素（Melanin-Concentrating Hormone,MCH）干预,并在不同时点对脂滴进行油红O染色。采用RT-PCR以及Western blot分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ,PPAR γ）、CCAAT/增强子结合蛋白-α（CCAAT/ Enhancer-Binding Protein α,C/EBPα）和脂肪酸结合蛋白2（adipocyte protein 2,ap2）mRNA和蛋白的表达。结果　重组载体sh-MCHR1成功转染;与阴性转染组相比,sh-MCHR1转染组d 10后,油红O 染液相对OD510值显著下降（P＜0.05）;PPARγ、C/EBPα和ap2 mRNA的表达量分别在d 6、d 8和d 8后显著下降（P＜0.05）;3者蛋白的表达量均在d 8后显著下降（P＜0.05）。结论　shRNA沉默MCHR1基因可减缓3T3-L1细胞诱导分化,其可能通过抑制PPARγ、C/EBPα和ap2的表达而实现。     

CD74小干扰RNA通过NF - κB途径诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察CD74小干扰RNA（siRNA）对胃癌细胞BGC - 823细胞生长增殖、DNA合成、细胞凋亡的影响,通过检测NF - κB信号通路家族成员P65及细胞凋亡关键调控因子Bcl - 2和Bax的表达变化,探讨CD74在胃癌发生发展中的可能机制。方法 选取胃癌细胞BGC - 823进行体外培养,选取对数生长期的细胞进行后续实验。实验分成3组:空白对照组（mock组）,转染对照组（control siRNA组）和CD74 siRNA转染组。western blotting检测细胞中CD74 siRNA对胃癌细胞BGC - 823中CD74的干涉效能;MTT法测定不同分组胃癌细胞BGC - 823的增殖率;BrdU掺入法测定BGC - 823细胞的DNA合成;流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡情况;western blotting检测细胞中P65蛋白、Bcl - 2和Bax的蛋白表达。结果 与2组对照组比较,CD74 siRNA组CD74蛋白表达降低,BGC823细胞的增殖和DNA合成明显受抑制,细胞凋亡比例增加,P65蛋白和Bcl - 2蛋白表达减少,Bax的表达增加。结论 下调CD74的表达抑制胃癌细胞BGC - 823增殖和DNA合成,诱导胃癌BGC823细胞发生凋亡,其作用机制可能与抑制NF - κB家族成员P56的表达,进而改变细胞凋亡关键调控因子Bcl - 2和Bax的表达相关。     

醋酸铅对PC12细胞凋亡和caspase-3活性的影响

目的　探讨醋酸铅对PC12细胞凋亡和caspase 3活性的影响。方法　采用四唑盐 (MTT)法检测IC50 值 ,用流式细胞仪、Hoechst3 3 2 5 8/PI荧光染色分析细胞凋亡 ,比色法测定caspase 3活性。结果　用不同浓度的醋酸铅处理细胞 48h ,其IC50 值为 (0 44 5± 0 0 80 )mmol/L ;用 0 2 5、 0 5mmol/L醋酸铅处理细胞 48h ,可见凋亡峰和典型的凋亡形态学改变 ,两铅处理组经流式细胞仪和荧光染色检测出的细胞凋亡率均明显高于对照组 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,cas pase 3活性也明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论　醋酸铅可诱导PC12细胞凋亡 ,其机制可能与caspase 3的活化有关。     

丙烯醛对PC12细胞毒性作用的初探

摘要:目的　实验以PC12细胞系为实验对象进行研究,探讨丙烯醛对其毒性作用及其特征,为丙烯醛对AD的发病机制研究提供依据。方法　通过细胞急性毒性实验测得其LC50;测定不同浓度丙烯醛处理后的细胞内总GSH含量和caspase 3酶活性,并通过western blot检测caspase3蛋白质在不同浓度丙烯醛处理后的表达情况。结果　经CCK-8毒性实验和集落形成实验测定丙烯醛LC50分别为29.91 μM、21.94 μM;不同浓度丙烯醛处理24 h后可引起细胞内总GSH的下降;不同浓度丙烯醛处理24 h后细胞内caspase3酶活性未见明显上调,但短时间处理（2 h、4 h和8 h）可见明显上调倾向;western blot实验可见不同浓度丙烯醛处理8 h后有caspase3蛋白表达上调,而处理24 h后caspase3蛋白表达下降。结论　丙烯醛对PC12细胞有较强的急性毒作用,其作用机制可能与丙烯醛诱导的细胞内GSH的耗竭和细胞凋亡以及细胞坏死有关。     

活性氧在氯化锰致PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨活性氧（ROS）在氯化锰（MnCl2）诱导PC12细胞凋亡中的作用机制.方法 构建MnCl2诱导的PC12细胞模型,MTT法检测细胞存活率,流式细胞分析PC12细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化程度;分光光度法检测培养基中活性氧（ROS）生成量变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷（ATP）生成量和Caspase-3表达量的变化;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-xl和bax的表达.结果 PC12细胞存活率与MnCl2诱导浓度和诱导时间呈负相关（P＜0.01）;2 mmol/L MnCl2诱导PC12细胞36 h,细胞凋亡率明显上升（P＜0.01）;核DNA发生明显片段化;细胞ROS生成量明显增加（P＜0.001）,细胞ATP生成量受到明显抑制（P＜0.01）;基因bcl-xl表达被抑制,bax表达上升（P＜0.01）;Caspase-3在细胞凋亡中被激活（P＜0.01）.结论 MnCl2诱导的PC12细胞凋亡与ROS升高、线粒体功能破坏和激活Caspase-3有关.     

沉默信息调节因子3蛋白对线粒体代谢和凋亡调节的研究进展

沉默信息调节因子3(sirt3)是线粒体烟碱腺嘌呤二核苷酸(NAD)依赖的去乙酰化蛋白,是调节线粒体代谢关键酶,可维持细胞内稳态平衡,在线粒体氧化代谢、能量代谢、信号调节和细胞凋亡等活动中发挥重要作用。sirt3是重要的凋亡调节因子,调节线粒体生物学效应和氧化应激水平,抵抗神经元细胞凋亡,其缺失可引起线粒体代谢异常和细胞损伤,甚至引起细胞凋亡。笔者综述了sirt3在线粒体三羧酸循环(TCA)、脂肪酸氧化等代谢活动和细胞凋亡中的重要作用,阐明sirt3可以维持线粒体的正常代谢活动,抵抗细胞凋亡,为肿瘤等疾病的研究提供重要靶点。     

硼替佐米对人前列腺癌PC3细胞WWP1、Smurf1、Smurf2表达的影响及其与增殖的关系

目的探讨硼替佐米对人前列腺癌PC3细胞WWP1、Smurf1、Smurf2表达的影响及其与增殖关系,为泛素连接酶E3作为前列腺癌治疗的靶点提供依据。方法给予人前列腺癌PC3细胞不同浓度的硼替佐米处理(0.1、1、10、50μmol/L),采用BrduELISA法测定不同处理时间人前列腺癌PC3细胞的增殖活性,并采用Westernblot和RT-PCR的方法检测WWP1、Smurf1、Smurf2的蛋白水平和转录水平。结果 (1)与对照组相比,在处理24h、48h以及72h后,硼替佐米均可呈剂量依赖的方式降低PC3细胞的增殖活性,且在50μmol/L的浓度下抑制作用最明显,但除了0.1μmol/L的的硼替佐米外,其余浓度均可呈时间依赖的方式降低PC3细胞的增殖活性;(2)处理72h后,硼替佐米可呈剂量依赖的方式降低WWP1、Smurf1、Smurf2的蛋白表达和mRNA水平,且50μmol/L的浓度下效果最明显。结论硼替佐米可抑制人前列腺癌PC3细胞WWP1、Smurf1、Smurf2的蛋白和mRNA水平,同时降低PC3细胞的增殖活性。     

异黄酮对PC-3细胞凋亡的诱导作用

目的 :　通过观察染料木素 (genistein,GS)、大豆甙元 (daidzein,DA)和黄豆黄素(glycitein,GL)对前列腺癌细胞 (PC- 3 )凋亡的影响 ,探讨通过膳食途径预防前列腺癌发生危险性的可行性。方法 :　将 PC- 3细胞在 RPMI1 6 4 0培养液 (含 1 0 %小牛血清 )中采用开放式单层贴壁培养。实验设溶剂对照及三种受试物各三个剂量组 ,采用流式细胞术 ,DNA凋亡片段凝胶电泳和细胞 HE染色法分析三种常见异黄酮类物质对 PC- 3细胞凋亡的影响。结果 :　与对照组相比 ,流式细胞仪分析结果表明 ,5 0μ mol/L GS、75μ mol/L DA和 75μ mol/L GL对 PC- 3细胞处理 72 h,二倍体细胞 (G1期细胞 )相对减少 ,亚二倍体细胞峰 (即细胞凋亡率 )逐渐增多 ,即凋亡细胞比例逐渐增多 ;DNA凋亡片段凝胶电泳和细胞苏木素染色结果也显示 ,三种受试物能够诱导 PC- 3细胞凋亡 ,且这种作用存在剂量 -效应关系。结论 :　异黄酮类化合物染料木素、大豆甙元和黄豆黄素均具有诱导 PC- 3细胞凋亡的作用 ,这一结果提示 ,该类物质是可通过诱导细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用的。     

Nkx3.1和p27协同诱导激素抵抗性前列腺癌PC3细胞株凋亡的研究

目的 探讨人类同源框基因Nkx3.1和细胞周期素依赖激酶抑制剂p27诱导激素抵抗前列腺癌PC3细胞凋亡的协同作用.方法 构建Nkx3.1和p27的真核表达质粒载体,恢复表达PC3细胞Nkx3.1或/和p27表达.Nkx3.1或p27单独和二者结合转染PC3细胞后,检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡,同时分析了凋亡相关蛋白...     

腺病毒siRNA沉默 Raf-1基因抑制异丙肾上腺素 诱导大鼠心肌肥厚

摘要:目的　研究Raf-1 siRNA重组腺病毒载体对大鼠心肌肥厚的作用并探讨其机制。方法　构建Raf-1腺病毒siRNA 载体,大鼠随机分为正常对照组、心肌肥厚组、无关siRNA 组、Raf-1 siRNA 干预组,皮下注射异丙肾上腺素（ISO）制备大鼠心肌肥厚模型,无关siRNA 组及Raf-1 siRNA 干预组注射ISO后,分别经心包腔注射重组腺病毒pAd-siCon及pAd-siRaf-1,4周后染色测定全心重指数（HWI）、心肌细胞横截面积（CSA）、心肌间质胶原容积分数（CVF）及血管周围胶原面积（PVCA）,western blot检测心肌Raf-1、NF-κB及ERK1/2蛋白表达,RT- PCR检测TNF-α、MCP-1、TGF-β1 mRNA表达。结果　与心肌肥厚组相比,Raf-1 siRNA 干预组可降低大鼠HWI、CSA、CVF及PVCA,下调Raf-1、NF-κB、ERK1/2蛋白及TNF-α、MCP-1、TGF-β1 mRNA表达;无关siRNA 组与心肌肥厚组相比无明显差异。结论　Raf-1 siRNA重组腺病毒载体能减轻大鼠心肌肥厚,其作用可能与抑制Raf-1/ NF-κB、Raf-1/ ERK1/2信号转导及下调肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、转化生长因子-β（TGF-β）表达相关。     

曲古抑菌素A阻断Stat3信号通路诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的本实验研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对前列腺癌细胞DU145的抑制作用及其对信号传导与转录激活因子3(Stat3)信号通路的影响。方法采用不同浓度的TSA处理DU145不同时间后,四氮甲基唑蓝比色法测定TSA对细胞活力的抑制效应;流式细胞仪分析细胞周期的改变;蛋白印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase)家族的Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、二磷酸腺苷核糖多聚酶(PARP)及Stat3信号蛋白活性(phospho-Stat3)的变化。结果 TSA时间和剂量依赖性地抑制DU145细胞的增殖,TSA处理细胞24 h和48 h后,细胞生存率分别是85.7%和68.7%;细胞经TSA处理后,细胞形态和细胞周期均发生明显的变化,细胞周期被阻断在G0/G1期,其细胞百分比从55.6%增加到68.5%;Western blot检测结果显示,TSA作用DU145细胞后,Stat3信号蛋白的磷酸化水平下降,同时IL-6对Stat3的刺激诱导作用也被TSA所阻断;Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、PARP等凋亡蛋白被TSA诱导活化,并发生显著剪切。结论 TSA能够通过抑制Stat3信号通路的活性来诱导DU145细胞凋亡。     

AKT基因被RNA干扰抑制后对卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响

目的通过RNA干扰技术阻断卵巢癌SKOV3细胞中AKT基因的表达,研究其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,分为对照组、空白载体组与RNA干扰组三组,采用MTT法与流式细胞仪AnnexinV／PI法检测并评价AKT基因干扰后对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。结果MTF结果显示RNA干扰组细胞增殖能力较对照组与空白载体组明显降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）,空白载体组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;流式细胞仪AnnexinV／PI法检测结果显示,RNA干扰组细胞凋亡率高达到（79．52±2．31）％,较对照组与空白载体组明显升高,约是空白载体组与对照组的3倍,差别具有统计学意义（P〈0．05）。结论靶向AKT基因的小干扰RNA（siRNA）可有效地抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是卵巢癌的治疗新方法。     

单唾液酸神经节苷脂对2,5-己二酮诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的研究单唾液酸神经节苷脂(GM1)对2,5-己二酮(2,5-HD)诱导PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,2,5-HD、GM1及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)抑制剂LY294002单独或联合处理细胞,MTT法检测细胞存活率,Giemsa染色法观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,免疫印迹检测蛋白激酶B(Akt)和磷酸化-Akt(P-Akt)蛋白的表达。结果GM1可以有效地改善凋亡引起的细胞形态学改变,提高细胞存活率(P<0.05),最高可提高36.35%;降低DNA断裂程度,减少凋亡率(P<0.001),最明显可降低69.36%。GM1能够促进Akt磷酸化,LY294002可以阻断这种作用。结论GM1对2,5-HD诱导的PC12细胞凋亡有保护作用。该保护作用可能是通过启动PI3-K信号通路,激活Akt及其下游信号而产生的。     

siRNA抑制NFBD1基因表达对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:研究siRNA抑制NFBD1基因表达对人肝癌HepG2细胞凋亡的作用原理及caspase途径在此过程中的作用。方法:应用流式细胞法及RT-PCR检测沉默NFBD1对人肝癌HepG2细胞凋亡及凋亡基因组表达水平的影响。MTT法检测NFBD1 siRNA对HepG2细胞的抑制作用。结果:转染48 h后,转染组与阴性对照组和空白组相比,NFBD1mRNA表达明显减弱,转染组NFBD1 mRNA较空白组相对下降74.75%;HepG2细胞组中促凋亡基因Bc1-xl表达减少,Bid及caspase-3表达量增加(P<0.05)。MTT结果显示NFBD1 siRNA能明显抑制HepG2细胞增殖,抑制率达到92.131±0.893%。流式法检测结果显示转染组细胞凋亡明显高于阴性对照组和空白组。结论:NFBD1可通过改变Bc1-xl/Bid的表达比,激活caspase-3来诱导HepG2细胞凋亡。     

Resveratrol protects intestinal epithelial cells against radiation-induced damage by promoting autophagy and inhibiting apoptosis through SIRT1 activation

Intrinsic autophagy is important for the maintenance of intestinal homeostasis and intestinal regeneration. Ionizing radiation suppresses intrinsic autophagy and reduces damage-induced regeneration in the intestine, resulting in intestinal injury. Resveratrol, a sirtuin 1 (SIRT1) agonist, promotes autophagy and exerts radioprotective effect. In this study, the protective effect of resveratrol against radiation-induced intestinal injury and its potential mechanism were investigated. Intestinal epithelial cells (IEC-6) were exposed to 10 Gy ionizing radiation and resveratrol (0.1–40.0 μM). Cell viability was investigated using Cell Counting Kit 8 (CCK8), apoptosis was observed by Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide (PI) staining and flow cytometry, and the expression of apoptotic and autophagic proteins was determined by western blotting. Resveratrol exerted a high toxicity against IEC-6 cells, but at low concentrations, it inhibited ionizing radiation-induced apoptosis. Resveratrol increased SIRT1 expression after irradiation and inhibited ionizing radiation-induced p53 acetylation and pro-apoptotic protein, Bax, expression. Furthermore, resveratrol promoted autophagy via the phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/AKT/mammalian target of rapamycin (mTOR) pathway, thereby protecting IEC-6 cells against radiation-induced damage. These results suggest that resveratrol reduces radiation-induced IEC-6 cell damage by inhibiting apoptosis and promoting autophagy via the activation of SIRT1, and that the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway is involved in the induction of autophagy.     

鱼藤酮对PC12细胞凋亡及ERK1／2蛋白表达的影响

目的 观察鱼藤酮对PC12细胞凋亡以及细胞外信号调节酶1和2(ERK1/2)蛋白表达的影响,以深入探讨ERK1/2蛋白表达与鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡之间的关系.方法 通过建立PC12细胞鱼藤酮染毒模型,光镜下观察鱼藤酮对PC12细胞形态的影响;流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率的改变;Western蛋白印迹法和免疫组化法检测PC12细胞ERK1/2蛋白表达及定位情况.结果 鱼藤酮处理24 h后PC12细胞形态明显改变且凋亡率增加,20 μmol/LMEK抑制剂PD98059预处理1 h与单纯鱼藤酮染毒比较凋亡率没有显著性改变;磷酸化ERK1/2蛋白表达量随着鱼藤酮剂量的加大而增高,且活化的ERK1/2蛋白主要集中在胞浆内表达.结论 鱼藤酮体外作用可以诱导PC12细胞凋亡以及ERK1/2蛋白磷酸化表达增强.