貉源致病性大肠杆菌HPI毒力岛相关基因检测及序列分析(英文)

[目的]探索大肠杆菌导致仔貉腹泻的发病机理。[方法]对分离鉴定的大肠杆菌进行了血清型鉴定,采用PCR方法检测HPI毒力岛基因irp2和fyuA,扩增产物进行序列测定。[结果]分离到2株貉源大肠杆菌,血清型分别为O23和O20,2株菌均检测到HPI毒力岛irp2基因(301bp)和fyuA基因(953bp);2株菌irp2基因与GenBank中的大肠杆菌irp2基因的同源性为98.5%～99.2%,2株菌间irp2基因同源性为99.3%;2株菌fyuA基因与GenBank中的fyuA基因序列的同源性为98.9%～100%,2株菌间fyuA基因同源性为98.9%。[结论]本试验结果为大肠杆菌导致仔貉腹泻的发病机理提供了科学的实验数据,为今后该疾病的预防、诊断和治疗提供了重要参考。     

犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测

采用多重PCR方法检测南京部分地区分离的110株犊牛腹泻大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI).对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因.同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定.在分离的110株犊牛腹泻大肠杆菌中,具有LEE和/或HPI毒力岛的菌株33株,占30%(33/110).LEE毒力岛基因检测结果为9.1%(10/110)的菌株ler和eaeA基因的扩增阳性.HPI毒力岛基因检测结果为25.5%(28/110)的菌株irp2和fyuA基因扩增阳性.0.9%(1/110)的菌株irp2阳性.5.5%(6/110)的菌株irp2、fyuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性.在33个LEE和/或HPI毒力岛阳性分离株中,O78和O36血清型菌株分别占定型菌株的34.6%(9/26)和27%(7/26).9.1%的犊牛腹泻大肠杆菌携带LEE,25.5%的菌株携带耶尔森菌HPI,O78和O36为牛源携带LEE和/或HPI毒力岛大肠杆菌常见血清型.     

猪、牛和兔粪中致病性大肠杆菌LEE毒力岛的检测分析

畜禽粪便中含有大量微生物,在发生传染性疾病时,粪便常常会成为重要的传染源.通过从种猪场、奶牛场和种兔场粪便中分离鉴定致病性大肠杆菌,并对分离到的大肠杆菌进行LEE毒力岛上eaeA基因的PCR检测,鉴定出含有LEE毒力岛大肠杆菌,调查携带LEE毒力岛的大肠杆菌在猪、牛和兔粪便中的存在情况.实验结果表明,猪、牛、兔粪便样品中携带LEE毒力岛的大肠杆菌检出率分别为12.9％、14.0％、22.5％.eaeA阳性的大肠杆菌应是导致仔猪、10日龄以内的初生犊牛和兔场断奶后幼兔发生腹泻症的主要细菌性病原.LEE毒力岛的检测能够作为大肠杆菌的诊断和流行分子病学调查的主要手段.     

新疆奶牛乳源大肠杆菌毒力相关基因eaeA的克隆及序列分析

从采自新疆乌鲁木齐市周边的5个奶牛场疑患隐性乳腺炎奶牛乳样,分离、纯化、鉴定出34株牛乳源大肠杆菌.根据GenBank发表的大肠杆菌16SrRNA序列和eaeA基因序列,用Oligo 6.0软件分别设计两对特异性引物,对分离菌株进行复检,并利用聚合酶链式反应(PCR)对eaeA基因进行扩增,结果10株为阳性,阳性率为2...     

粤北地区仔猪腹泻源大肠杆菌毒力基因检测及致病性初步研究

采用PCR方法对56株仔猪黄白痢源大肠杆菌肠毒素和耶尔森菌强毒力岛(HPI)相关毒力因子STa、STb、LT和irp2进行检测,进而根据毒力因子基因型对部分菌株进行致病性试验。结果显示,38株受试菌检测到毒力因子,其中STa基因阳性率为3.57%,STb基因阳性率为53.57%,LT基因阳性率为7.14%,irp2基因阳性率为21.43%,检测的毒力因子表现为5种基因型,主要的毒力因子基因型是STb和STb+irp2。致病性试验显示毒力基因阳性菌株均对小白鼠具有致病性。结果表明,粤北地区致仔猪黄白痢大肠杆菌流行的主要毒力因子为STb,其次为irp2、少数菌株携带STa和LT毒力因子,相关毒力基因检测可以作为快速确定大肠杆菌致病性的重要依据。     

猪源致病性大肠杆菌的血清型、毒力基因及抗菌药耐药性的调查

【目的】探讨猪大肠杆菌病分离的E.coli的优势血清型与毒力基因和耐药性的相关性。【方法】采用玻片凝集法测定了猪大肠杆菌病有关的血清型分布,PCR方法调查7种毒力相关基因,用微量稀释法测定了所有菌株对18种抗菌药的敏感性。【结果】超过一半的菌株含有astA,Stx2e和eaeA基因,且毒力基因组合Stx2e+astA和Stx2e+eaeA较为流行。定型菌株53株,分别属于15个不同的血清型,其中O8和O64为主要流行的血清型。O8型菌株中,所有均携带astA基因,多数耐四环素、环丙沙星、恩诺沙星、氯霉素和磺胺甲噁唑,但对安普霉素,阿米卡星和多黏菌素E敏感;而O64型菌株中,多数携带astA和Stx2e基因,所有对环丙沙星、恩诺沙星、氯霉素和磺胺甲噁唑耐药,但对多黏菌素E和卡那霉素敏感。【结论】O8和O64为主要流行的血清型,两种血清型菌株拥有相似的毒力基因谱和耐药表型,但有不同的敏感表型。     

猪大肠杆菌的血清型与毒力基因

为了解苏中地区规模化猪场大肠杆菌血清型及毒力基因的特点,无菌采集苏中地区45个规模化养猪场疑似大肠杆菌感染的病死猪有明显病变的肝、心、脾、肺等病料413份.通过细菌的分离培养,并进行生化试验和血清型鉴定,共分离到208株大肠杆菌,其中145株能定型,63株未能定型,定型菌株分别属于19种不同的血清型.同时对鉴定出的145株猪源大肠杆菌进行毒力基因检测,发现苏中地区猪大肠杆菌所含毒力基因estⅡ为50.3％,estⅠ为39.3％,LT为30.3％,Stx-2e为20.7％,Intimin为15.9％,其中具有毒力基因estⅠ和estⅡ的猪大肠杆菌较为流行.     

3株HPI+大肠杆菌fyuA与int基因的检测及序列分析

在耶尔森氏菌强毒力岛(HPI)的基因中,fyuA编码鼠疫菌素受体与细菌的摄铁能力调节有关,int编码的整合酶与HPI在大肠杆菌基因组αsn-tRNA位点的整合相关.根据GenBank中已发表的HPI基因序列设计2对引物,分别用于fyuA和int的PCR扩增.将从3株仔猪腹泻源HPI+大肠杆菌(S70903株、S70925株、S70931株)中扩增的片段克隆至pGEM-Teasy载体,分别获得含有fyuA和int的重组质粒.琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明:所克隆的fyuA基因大小均为948 bp,与已发表序列的同源性为98.6%～100%.所克隆的int基因片段大小均为1 391 bp,与已发表序列的同源件为96.0%～99.6%.研究结果提示,这3株细菌的fyuA基因并没有因为HPI的转移而缺失或被修饰,并且均整合在大肠杆菌基因组口αsn-tRNA位点.     

利用Red重组系统敲除APEC毒力岛irp2基因

应用质粒pKD46介导的Red同源重组系统,以质粒pKD3为模板,设计irp2基因序列敲除引物,引物5'端有51 bp的拟敲除基因的同源臂,3 '端为扩增引物,扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因,通过第1次同源重组将拟敲除的irp2基因替换为氯霉素抗性基因,再通过重组酶质粒pCP20在FRT位点发生第2次同源重组,消除抗性基因.结果表明,利用该重组系统成功敲除了禽致病性大肠杆菌HPI毒力岛irp2基因.为深入研究irp2基因在禽致病性大肠杆菌致病过程中所发挥的作用打下基础.     

奶牛乳腺炎大肠杆菌PCR的检测

通过对内蒙古呼和浩特地区分离3株奶牛乳腺炎大肠杆菌16S-23S rRNA间隔区的PCR检测、基因测序和序列比较分析,结果表明:分离菌株12C与参考菌株的同源率为99.9%,DG-25A和DG-23A与参考菌株的同源率为98.9%,3株分离菌株的同源性高。应用PCR检测奶牛乳腺炎大肠杆菌的方法简便、快速、特异,该方法也可广泛用于乳房炎其他病原菌的检测。     

Comparative Research on Serogroups Distribution and Antimicrobial Resistance of Escherichia coil Isolates from Poultry in Different Areas of China

A total of 241 Escherichia coli(E. coli)isolates from 349 avian samples(292 from cloacae,29 from feed and water,28 from dust and padding)were collected from Northeast,South,North,and Central China in recent years.The percentage of isolation was 69.1%.There are 67 serogroups each with 1-2 isolates distributed in different regions.and some of these regions had the preponderant serogroups.Antimicrobial-resistance(AR)of E. coli was so severe that the majority were multi-AR.Fifty percent strains were resistant to 10-19 antimicrobial drugs.Overall,the isolates represented resistance to nalidixic acid(88.1%),tetracycline(85.7%),sulfamethoxazole(81.0%),trimethoprim-sulfamethpxazole(77.1%),ampicillin (76.2%),amoxilline(74.3%),streplomycin(66.2%),fluoroquinolones(57.1-66.7%),chloramphenicol(52.9%),gentamicin (39.0%),and kanamycin(36.2%).The isolates were sensitive to cefalexin,amoxilline-clavulanic acid,amikacin,and florfenicol with all AR rate of 0-19.5%only.The results showed that the AR was more severe in chicken farms in which the antibiotics were used broadly and repeatedly.This study indicated the AR characterization of E. coli in different areas of China.It will be a foundation for studying AR mechanism and regulating the usage of antimicrobial in the poultry industry.     

兽医临床致病性大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测

[目的]指导临床合理用药,控制兽医临床的感染性疾病。[方法]用分子生物学方法对用双纸片协同法检测产生ESBLs的5株猪鸡致病性大肠杆菌进行了ESBLs的检测。[结果]产生ESBLs的猪鸡致病性大肠杆菌中都扩增出了TEM型引物。[结论]双纸片协同法检测ESBLs具有较高的可靠性,兽医临床大肠杆菌已经产生ESBLs。     

奶牛乳房炎大肠杆菌分离株主要免疫原性蛋白纯化

应用奶牛乳房炎大肠杆菌分离株灭活菌苗免疫健康家兔,制备兔抗大肠杆菌高免血清。对该大肠杆菌菌体裂解产物进行SDS-PAGE并进行Westernblot分析,结果该菌株与稀释一定倍数的兔高免血清反应,产生3条特异性带,其中约33ku蛋白为主要免疫原性蛋白。对其进行电洗脱纯化,得到单一条带的目的蛋白。     

临床分离鸡源性大肠杆菌外膜蛋白型的研究

[目的]了解禽致病性大肠杆菌分离株的遗传相关性。[方法]对分离自保定、秦皇岛和北京3个地区规模化养鸡场的病死鸡体内的38株大肠杆菌,采用超声波裂解和N-十二烷基肌胺酸钠进行外膜蛋白(Omp)提取,利用SDS-PAGE进行Omp分型。[结果]38株大肠杆菌共有3个Omp型,其中Omp-1型为O78、O88、O2、O18、O93、O766个血清型分离株所共有,Omp-Ⅱ型多为O76血清型分离株,Omp-Ⅲ型为O93、O78、O88、O2分离株所共有。这表明同一血清型的菌株可能属于完全不同的Omp型,而血清学上毫不相关的分离株之间却可具有相同的Omp型。[结论]该研究证实了同一血清型的分离株之间可发生遗传分化,而不同血清型的分离株之间也可具有不同程度的遗传相关性。     

Comparative Research on Serogroups Distribution and Antimicrobial Resistance of Escherichia coli Isolates from Poultry in Different Areas of China

A total of 241 Escherichia coli （E. coli） isolates from 349 avian samples （292 from cloacae, 29 from feed and water, 28 from dust and padding） were collected from Northeast, South, North, and Central China in recent years. The percentage of isolation was 69.1%. There are 67 serogroups each with 1-2 isolates distributed in different regions, and some of these regions had the preponderant serogroups. Antimicrobial-resistance （AR） of E. coli was so severe that the majority were multi-AR. Fifty percent strains were resistant to 10-19 antimicrobial drugs. Overall, the isolates represented resistance to nalidixic acid （88.1%）, tetracycline （85.7%）, sulfamethoxazole （81.0%）, trimethoprim-sulfamethpxazole （77.1%）, ampicillin （76.2%）, amoxilline （74.3%）, streplomycin （66.2%）, fluoroquinolones （57.1-66.7%）, chloramphenicol （52.9%）, gentamicin （39.0%）, and kanamycin （36.2%）. The isolates were sensitive to cefalexin, amoxilline-clavulanic acid, amikacin, and florfenicol with an AR rate of 0-19,5% only, The results showed that the AR was more severe in chicken farms in which the antibiotics were used broadly and repeatedly. This study indicated the AR characterization of E, coli in different areas of China. It will be a foundation for studying AR mechanism and regulating the usage of antimicrobial in the poultry industry.     

鸡源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的分子检测

对豫北地区临床分离的102株鸡源大肠杆菌进行生化鉴定、MICS值测定及氟苯尼考耐药基因floR的检测.最敏感的是头孢喹肟,敏感率为93.1%;其次为阿米卡星和氟苯尼考,敏感率分别为59.8%和54.9%;而对复方新诺明的耐药率达到100%;此外,对四环素,多西环素,氨苄西林,恩诺沙星和沙拉沙星的耐药率为78.4%~94.1%.氟苯尼考耐药基因的分子检测显示,有45.1%的菌株显示floR基因阳性.对其中4株大肠杆菌的氟苯尼考耐药基因floR进行了克隆和测序.结果表明,克隆的floR基因所推导的氨基酸序列与其它12-跨膜外输泵家族在共同的基序上是保守的,在克隆的floR序列与报道的floR序列间仅存在1~3个氨基酸替代.     

动物源大肠杆菌PMQR基因流行性检测

【目的】检测分离自广东省散养型养殖场的动物源大肠杆菌中oqxAB基因及其它质粒介导喹诺酮类耐药基因(PMQR)的流行情况。【方法】采用PCR方法检测oqxA、oqxB、qnr、qepA和aac（6′）-Ib-cr基因;琼脂平板稀释法对PMQR阳性菌株进行18种抗菌药物的最小抑菌浓度测定。【结果】qnrB 、qnrS、aac（6′）-Ib-cr、oqxA、oqxB的检出率依次为10.49%、18.88%、31.47%、44.8%和48.9%,但未检测到qnrA、qnrC、qnrD和qepA。oqxA与oqxB的检出率较高,且oqxA与oqxB常常同时存在。多数菌株同时携带两个或两个以上的PMQR基因。PMQR阳性菌对18种兽医临床常用抗生素耐药率较高。【结论】PMQR基因在广东省兽医临床传播广泛,广东省大肠杆菌对临床常用抗菌药物耐药较为严重,药敏谱呈多样化,多重耐药株比例较高。     

牦牛致病性大肠杆菌生物学特性研究

对牦牛致病性大肠杆菌的某些生物学特性进行了研究，包括分离菌株血清学特性，溶血性，血凝性，菌毛的表达，对小鼠，兔的致病性及抗生素敏感性等，结果表明，该菌株血清型属O148，为国内外首次报道，不产生溶血素，对绵羊，豚鼠，马，鸡的红细胞表现强凝集，而对猪，兔的红细胞不凝集，血凝能被D－甘露糖抑制，表现为MSHA，在营养肉汤中经37度，48h培养表达菌毛，肌肉接种兔，腹腔接种小白鼠均具有高致病性，分离菌株对恩诺沙星，环丙沙星，阿莫西林，羧苄青霉素等高度敏感，而对青霉素，四环素，土霉素，氯霉素等表现耐药性。     

鸡源大肠杆菌四环素耐药基因检测

用肉汤稀释法测定32株鸡源大肠杆菌对四环素等8种抗菌药物的敏感性,用PCR方法检测5种四环素耐药基因(tet基因),并用ERIC-PCR方法分析试验菌株间的克隆关系。结果显示:32株大肠杆菌对四环素、多西环素的耐药率分别为84%、75%,tetA和tetB阳性率分别为78%和25%。总tet基因阳性率为90.6%,与对四环素、多西环素的耐药率基本一致。携带1种或2种tet基因的临床分离菌,不仅对四环素类药物耐药,还对头孢噻肟、环丙沙星、新霉素和氟苯尼考耐药,呈现多重耐药的特点。试验菌共分为A~O 15个ERIC型,tetA和tetB几乎均匀分布于不同ERIC型菌株中,表明其在试验菌株间水平扩散。