高氧致慢性肺疾病早产鼠肺组织细胞周期依赖蛋白激酶-4、p21表达及其对纤维化的影响

目的 研究慢性肺疾病（CLD）早产鼠的肺组织细胞周期依赖蛋白激酶-4（CDK4）及细胞周期依赖蛋白激酶抑制因子（p21）动态表达规律及其意义。方法 将80只早产鼠随机分为模型和对照组（每组40只），采用高体积分数氧诱导CLD模型，于实验后1、3、7、14、21d分别应用酶联免疫吸附法及免疫组织化学技术检测其肺组织I型胶原和CDK4、p21蛋白表达。结果 与对照组比较，实验组14和21dⅠ型胶原水平及CDK4表达增加，而p21表达水平降低。实验组14和21dCDK4表达水平与肺纤维化程度呈明显正相关；p21与肺纤维化程度呈明显负相关。结论 高氧诱导早产鼠肺组织CDK4及p21异常表达，可能是CLD肺纤维化发生的机制之一。     

HoxB5基因在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用

目的 探讨高氧致慢性肺疾病（CLD）早产鼠肺组织HoxB5基因表达规律及其对肺发育的影响。方法 将80只早产鼠随机分为实验组及对照组,采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）等技术,测定肺组织HoxB5 mRNA水平,并同时观察放射状肺泡计数（RAC）的变化。结果 生后1、3d,两组HoxB5 mRNA水平及RAC差异无统计学意义（P〉0.05）,7d时两者均开始降低（P〈0.05）,14d继续下降,21d降至最低（P〈0.01）,且肺组织HoxB5 mRNA水平及RAC呈明显正相关（P〈0.01）。结论 暴露高氧中早产鼠肺组织HoxB5基因呈低表达状态,其表达水平与肺泡发育障碍程度相一致。     

慢性肺疾病早产鼠的肺组织中HoxB5 mRNA表达及其对肺发育的影响

目的 探讨高氧致慢性肺疾病(CLD)早产鼠的肺组织HoxB5基因表达规律及其对肺发育抑制的影响机制.方法 将孕21 d剖宫取出的新生鼠(即早产鼠)80只随机分为实验组及对照组(每组均为40只),采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,分别于实验后1、3、7、14、21 d采集肺组织,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等技术,测定肺组织HoxB5、AQP-5、SP-B mRNA水平,并同期观察肺发育的评价指标放射状肺泡计数(RAC)的变化.结果 生后1 d和3 d,实验组和对照组的HoxB5、AQP-5及SP-B mRNA水平和RAC均差异无统计学意义(P＞0.05);生后7 d,与对照组比较,实验组RAC开始减少(6.35±0.83vs.7.67 ±0.52),HoxB5(0.98±0.14vs.1.20±0.16)及AQP-5(0.78±0.11vs1.04±0.19)mRNA也明显降低(P＜0.05)、SP-B(1.34±0.04vs1.04±0.11)反而明显升高(P＜0.05);生后14 d,实验组RAC逐渐减少,HoxB5及AQP-5 mRNA持续下降,21 d,HoxB5(0.64±0.11vs.1.18±0.13)及AQP-5(0.67±0.12vs.0.97±0.01)mRNA降至最低(P＜0.01),而SP-B(1.43±0.07vs.1.12±0.09)mRNA升至最高(P＜0.01);实验组肺组织HoxB5 mRNA水平及RAC呈明显正相关(γ=0.685,P＜0.01).结论 暴露高氧中早产鼠的肺组织HoxB5基因呈低水平表达,其表达降低可能导致的Ⅱ型肺泡上皮细胞向Ⅰ型肺泡上皮细胞的分化障碍与CLD肺发育停滞密切相关.     

高氧诱导早产鼠肺纤维化中结缔组织生长因子的表达及其意义

目的：结缔组织生长因子（CTGF）是新近发现与纤维化发生密切相关的一种因子，但其与早产儿慢性肺疾病（CLD）的肺纤维化有何关系，迄今未见报道。该文旨在阐明CTGF在高氧致早产鼠CLD发生、发展的表达规律，并探讨其在纤维化中表达及意义。方法：采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型，应用酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫组织化学及反转录聚合酶链反应（RT-PCR）等技术，动态观察CTGF mRNA表达，并同时测定肺成纤维细胞的增殖性细胞核抗原（PCNA）指数及肺组织 Ⅰ 型胶原的含量和TGF-β1蛋白表达水平。结果：生后1 d，3 d，两组 Ⅰ 型胶原、PCNA指数、TGF-β1蛋白及CTGF mRNA表达水平无差异（P>0.05）；实验组肺组织TGF-β1蛋白表达7 d升高（P<0.05），Ⅰ 型胶原、PCNA指数及CTGF mRNA表达14 d升高（P<0.05），21 d均达高峰（P<0.01）；肺组织CTGF mRNA表达与 Ⅰ 型胶原呈明显正相关（γ=0.89, P<0.01）。结论： 高氧致CLD早产鼠肺组织CTGF mRNA表达水平与肺组织纤维化的程度相一致，CTGF与CLD的肺纤维化密切相关。［中国当代儿科杂志，2007，9（5）：449-452］     

慢性肺疾病早产鼠肺组织转化生长因子β_1基因及蛋白表达的动态变化(英文)

目的：近年来研究发现慢性肺疾病(CLD)早产儿支气管肺泡灌洗液中转化生长因子-β1(TGF-β1)水平明显升高,但其表达在CLD发生、发展中动态变化规律及与CLD的肺泡发育障碍的关系尚不明确。该研究探索高氧致CLD肺组织TGFβ1基因及蛋白表达特点及对其肺发育的影响。方法：采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,应用反转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组织化学及图像分析等技术,动态观察肺系数、放射状肺泡计数(RAC)的变化,并同时测定肺组织TGF-β1mRNA及蛋白表达水平。结果：生后1d,3d,两组肺系数、RAC无差异(P>0.05),7d和14d时实验组肺系数、RAC低于对照组(P<0.05),21d时RAC明显降低(P<0.001),但两组肺系数无差异;实验组肺组织TGFβ1mRNA水平3d高于对照组(P=0.005),14d达高峰(P<0.001),21d稍有下降,但仍高于对照组(P=0.005);实验组肺组织TGFβ1蛋白表达7d增高(P=0.036),21d达高峰(P<0.001);肺组织TGF-β1蛋白表达与RAC呈显著负相关(P=0.003)。结论：暴露高氧环境中早产鼠肺组织TGF-β1蛋白表达的动态变化与其肺发育障碍的程度相一致,TGF-β1是抑制肺泡发育的重要因子。     

HoxB5基因在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用

目的探讨高氧致慢性肺疾病(CLD)早产鼠肺组织HoxB5基因表达规律及其对肺发育的影响。方法将80只早产鼠随机分为实验组及对照组,采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等技术,测定肺组织HoxB5 mRNA水平,并同时观察放射状肺泡计数(RAC)的变化。结果生后1、3d,两组HoxB5 mRNA水平及RAC差异无统计学意义(P>0.05),7d时两者均开始降低(P<0.05),14d继续下降,21d降至最低(P<0.01),且肺组织HoxB5 mRNA水平及RAC呈明显正相关(P<0.01)。结论暴露高氧中早产鼠肺组织HoxB5基因呈低表达状态,其表达水平与肺泡发育障碍程度相一致。     

高体积分数氧暴露对早产大鼠肺p53和细胞周期调节基因表达的影响

目的 观察体积分数为600 mL/L氧暴露对早产大鼠肺肿瘤抑制蛋白p53和肺细胞周期调节基因(p21waf/cipl)表达的影响,探讨其与新型支气管肺发育不良(BPD)发病机制的关系.方法 孕21 d早产大鼠出生6 h内随机分为高体积分数氧(高氧)组和对照组.对照组置于常压空气中,高氧组置于氧体积分数为600 mL/L的氧舱中,二组均于胚胎19 d(E19)及出生第1、3、5、7天(P1、P3、P5、P7)各随机取8只早产大鼠,采用RT-PCR技术检测其肺组织肺p53和p21waf/cipl基因表达水平.采用SPSS 12.0软件进行统计学分析.结果 1.对照组胎鼠及早产大鼠肺组织p53 mRNA的表达自出生后随鼠龄增加逐渐下降,至P5最低;高氧组胎鼠及早产大鼠p53 mRNA的表达在E19～P7均较高于对照组,P5和P7时与对照组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05).2.对照组胎鼠及早产大鼠肺组织p21waf/cipl mRNA的表达水平在E19～P7随鼠龄增加而升高,高氧组胎鼠及早产大鼠肺组织p21waf/cipl mRNA的表达在E19～P7均高于对照组,P5时二组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 600 mL/L氧暴露可通过调控p53及p21waf/cipl途径抑制肺组织细胞增殖,进而导致BPD的发生.     

高氧致新生鼠慢性肺疾病HoxB5 SPC AQP5表达及其意义

目的：肺泡上皮损伤是慢性肺疾病（CLD）主要病理改变之一,HoxB5基因是在肺发育过程中表达强烈的基因之一。该文探讨高浓度氧致新生鼠肺损伤时肺泡上皮损伤及修复能力,研究HoxB5在这一损伤中的动态表达规律及其与前者的关系。方法：建立高氧诱导新生鼠CLD模型, 80只早产鼠被随机分为实验组及对照组,分别应用免疫组化及RT-PCR技术测定肺组织HoxB5,SPC,AQP5蛋白及mRNA表达。结果：实验组肺组织HoxB5表达7 d后逐渐减少;高氧肺损伤SPC 3 d表达明显减少,7 d后开始增多,14 d、21 d明显高于对照组;而AQP5随着肺损伤加重表达量进行性下降。结论：高氧肺损伤新生鼠肺泡上皮细胞损伤明显,根据SPC,AQP5表达结果提示I型肺泡上皮细胞（AECI）损伤更甚且未得到正常修复,II型肺泡上皮细胞（AECII）虽然数量有所增加但其分化转化能力明显下降,而 HoxB5表达量减少可能致使大量的AECII失去了分化为AECI的功能。［中国当代儿科杂志,2009,11（1）：51-55］     

高体积分数氧致慢性肺疾病早产鼠肺上皮细胞凋亡及其调控机制

目的 探讨高体积分数氧致慢性肺疾病(CLD)早产鼠肺泡上皮细胞(AEC)凋亡的动态变化规律及Caspase-3 mRNA、Bax和Bcl-2基因的调控作用.方法 将60只早产SD鼠生后1 d内随机分为高体积分数氧暴露组(高氧组)和空气组(对照组)各30只,制备高体积分数氧致CLD早产鼠模型,应用脱氧核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术及链霉亲和素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组织化学方法,检测生后1、3、7、14及21 d AEC的凋亡指数(AI)和肺组织Caspase-3 mRNA、Bax及Bcl-2基因蛋白的表达.相关分析采用Spearman分析.结果 与对照组比较,高氧组3 d AEC的AI、肺组织Caspase-3 mRNA水平及Bax基因蛋白表达开始升高,7～21 d明显增加,Caspase-3 mRNA水平在此期间持续于高水平;Bcl-2基因表达7 d开始降低,14～21 d明显降低.高氧组AEC的AI与肺组织Caspase-3 mRNA及Bax表达均呈正相关,与Bcl-2表达呈负相关.结论 高体积分数氧可致CLD早产鼠肺组织Caspase-3 mRNA基因表达增强,使Bax和Bcl-2介导Bax/Bcl-2基因表达比例失衡,是CLD早产鼠肺上皮细胞凋亡的重要机制之一.     

高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织中ERK1/2变化的研究

目的：探讨细胞外信号调节激酶（ERK）1/2在高氧致慢性肺疾病（CLD）新生大鼠肺组织中的表达及作用。方法：将48 只新生Wistar大鼠随机分为高氧组和对照组,每组 24 只。高氧组生后即置于氧箱中,维持氧浓度为 0.90,诱导CLD;对照组生后置于空气中。于生后3 d、7 d和14 d采集肺组织标本,应用免疫组化、Western blot及Real-time PCR方法检测ERK1/2蛋白及mRNA表达,同时测定肺组织纤维化评分。结果：免疫组化及Western blot结果显示7 d、14 d时高氧组肺组织p-ERK1/2蛋白的表达均明显高于同时间点对照组（P<0.01）。Western blot结果同时显示各组间ERK1/2总蛋白的表达差异无统计学意义。Real-time PCR结果表明各组间ERK1、ERK2 mRNA水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：新生大鼠持续吸入高氧后,ERK1/2蛋白磷酸化活化,参与了高氧致CLD肺纤维化的形成过程。     

高氧对早产大鼠角化细胞生长因子mRNA及增殖细胞核抗原表达的影响

目的　探讨 85 %高浓度氧暴露对早产新生大鼠肺组织角化细胞生长因子 (KGF)mRNA及增殖细胞核抗原 (PCNA)动态表达的影响。方法　早产SD大鼠生后 1d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露 85 %氧气中 ,空气组置于同一室内常压空气中。两组分别于 1、4、7、10、14和 2 1d时 ,提取肺组织RNA ,采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定KGFmRNA ;同时应用免疫组化检测肺组织切片中PCNA。结果　 (1)与空气组相比 ,高氧 1d时 ,KGFmRNA表达无明显差异 (P >0 0 5 ) ;4d时明显增强 ,较空气组增加 3 8倍 (P <0 0 0 1) ;其后开始下降 ,7d时较空气组增加 1 8倍 (P<0 0 5 ) ;10d时两组间无明显差异 (P >0 0 5 ) ;14d时较空气组降低 1 5倍 (P <0 0 1) ,2 1d时复又增高 ,较空气组增加 1 15倍 (P <0 0 1)。 (2 )空气组早产新生大鼠生后 14d内肺组织中均有PCNA表达 ,并且PCNA阳性细胞 90 %以上定位于气道和肺泡上皮细胞 ,2 1d时几乎检测不出其表达 ;与空气组比较 ,高氧组 1～ 4d时肺组织中PCNA表达明显减弱 ,7～ 10d时增强且部分间质细胞也有表达 ,2 1d时PCNA阳性细胞以间质细胞为主。结论　 85 %高氧暴露可促进早产新生大鼠肺组织KGFmRNA及PCNA表达     

卡托普利对高氧致新生大鼠慢性肺疾病的保护作用及机制探讨

目的：观察高氧致慢性肺疾病（CLD）新生大鼠肺组织ACE,AngⅡ和ColⅠ蛋白及mRNA含量的动态变化,以探讨卡托普利的保护作用及机制。方法：足月新生Wistar大鼠240只,随机分为高氧组、空气对照组、卡托普利治疗组和盐水对照组,每组各60只。将高氧组、盐水对照组和卡托普利治疗组的足月新生Wistar 大鼠（连同母鼠）生后即置于氧舱内持续吸入高浓度氧（FiO2=0.9）21 d造成高氧肺损伤模型,空气对照组吸入空气。卡托普利治疗组于生后7 d每天经胃管灌服卡托普利每日30 mg/kg, 盐水对照组每天经胃管灌服等量生理盐水。每组分别于实验开始后第1,3,7,14,21天随机选取6只麻醉后处死。肺组织采用ELISA法测定ColⅠ蛋白含量,用日产7170全自动生化分析仪测定ACE活性,用放免法测定AngⅡ的含量。用RT-PCR法检测肺组织ACE,AngⅡ,ColⅠmRNA表达的动态变化并同时观察肺组织形态学变化。结果：与空气对照组比较,高氧组、盐水对照组肺组织ACE,AngⅡ,ColⅠ蛋白含量及mRNA表达在实验后第14天明显升高,第21天达高峰(P<0.05或P<0.01),卡托普利治疗组上述指标与高氧组、盐水对照组比较明显降低(P<0.05或P<0.01),但仍高于空气对照组（P<0.05）。 肺组织形态学改变：高氧组、盐水对照组第14天肺组织间质细胞增多,出现纤维化改变。第21天正常肺泡结构消失,肺组织出现严重的纤维化。卡托普利治疗组肺组织纤维化病变明显减轻。结论：卡托普利干预抑制了高氧致CLD新生大鼠肺组织ACE,AngⅡ,ColⅠ蛋白含量及mRNA表达,减轻了肺纤维化病变,这可能是卡托普利对高氧肺损伤具有保护作用的机制之一。［中国当代儿科杂志,2007,9（2）：169-173］     

新生大鼠高氧肺损伤血管内皮生长因子蛋白及其mRNA表达变化研究

目的：血管内皮生长因子（VEGF）参与肺的发育和损伤修复,VEGF具有促进肺泡和肺血管增殖以及预防新生儿支气管肺发育不良（BPD）的作用。该研究的目的是探讨新生大鼠高氧肺损伤后肺组织VEGF蛋白及VEGF mRNA表达的变化。方法：新生Sprague-Dawley大鼠48只随机分为高氧实验组和空气对照组,高氧实验组吸入95%以上高氧建立高氧肺损伤模型。分别采用免疫组化法和逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）检测新生大鼠3 d,7 d,14 d肺组织VEGF蛋白及VEGF mRNA表达变化。结果：空气对照组新生大鼠生后随着肺发育,肺组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达逐渐增加。高氧实验组新生鼠吸入高氧3 d,肺VEGF蛋白表达出现降低,在7 d,14 d明显降低与对照组比较差异有显著性（VEGF 蛋白:12.67±3.82 vs 7.79±5.23; 15.10±8.91 vs 5.85±3.37, 均P<0.01）;高氧实验组VEGF mRNA表达在3 d,7 d,14 d均明显低于对照组（VEGF mRNA: 1.19±0.63 vs 0.78±0.22, 1.52±0.47 vs 0.53±0.18, 1.89±0.81 vs 0.48±0.12, 均P<0.01）。结论：VEGF能促进新生大鼠肺发育,VEGF蛋白及VEGF mRNA表达与新生大鼠肺发育有密切关系。高氧可抑制VEGF蛋白及VEGF mRNA在新生大鼠肺内的表达,VEGF在新生鼠肺发育和高氧肺损伤发病机制中起重要作用。     

高氧诱导肺损伤新生小鼠肺组织中长链非编码RNANANCI的表达及对NKX2.1的调控作用

目的探讨长链非编码RNA NANCI在高氧诱导肺损伤新生小鼠肺组织中的表达变化及对NKX2.1的调控作用。方法采用随机分组法将48只C57BL/6J新生小鼠随机分为空气组和高氧组,每组24只,各组再随机分为生后7 d组、14 d组、21 d组,每组8只。空气组置于室内环境(Fi O2=21%)中饲养,高氧组置于高氧箱(保持氧浓度95%)中饲养,在各时间点分别处死两组动物后收集肺组织标本。采用苏木精-伊红染色法观察小鼠肺组织病理变化;采用RT-q PCR及Western blot技术分别检测NANCI、NKX2.1的m RNA和蛋白表达水平。结果空气组新生小鼠肺组织NANCI和NKX2.1的m RNA表达水平7 d最高(P0.05),14 d与21 d呈同水平表达。与空气组比较,高氧组肺组织肺泡化程度降低,辐射状肺泡计数(RAC)减少(P0.05),且高氧组RAC值随高氧处理时间延长逐渐降低(P0.05)。各时间点高氧组NANCI m RNA、NKX2.1 m RNA及其蛋白表达水平均低于空气组(P0.05),且随高氧处理时间延长逐渐降低(P0.05)。NKX2.1与NANCI表达呈正相关(r=0.585,P=0.003);两者与高氧组RAC水平均呈正相关(分别r=0.655、0.541,P0.05)。结论 NANCI可能主要参与未成熟肺组织发育;肺组织损伤程度随高氧暴露时间的延长逐渐加重,且NANCI及NKX2.1水平与肺损伤程度相关,提示NANCI/NKX2.1靶基因信号通路可能参与新生小鼠高氧肺损伤过程。