传统发酵酸凝硬质奶酪中乳酸菌的分离鉴定及其体外益生特性

【目的】 研究传统发酵酸凝硬质奶酪中乳酸菌的分离鉴定及其体外益生特性,得到产酸性能较高的菌株,测试体外益生特性,筛选出优良益生菌。【方法】 采用传统分离纯化方法,以新疆伊犁地区昭苏县农家自制自然发酵酸凝硬质奶酪为原材料,运用稀释涂布、平板划线以及复筛纯化的方法,从自然发酵奶酪中分离得36株菌株,观察其菌落与菌株形态特征并检测生理生化,选取符合条件的菌株运用16S rDNA同源序列分析方法鉴定其分子生物学。【结果】 鉴定6株为乳酸菌,5株是瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus),另外1株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。这些菌株的耐胆盐、耐酸、耐模拟胃液以及表面特性得知植物乳杆菌E₁₁在这些方面的性能最佳。【结论】 该菌株在浓度为0.5%的胆盐培养基中存活率达到46.42%,pH 2的条件下存活率仍然保持在20%以上,静置5 h后其自凝集率达到63.6%,对二甲苯的疏水率为44.26%。     

酸菜来源植物乳杆菌耐受性和吸收胆固醇能力

酸菜是东北地区一种传统的发酵食品,因其独特的口感深受人们的喜爱。酸菜中的乳酸菌对其品质具有重要影响。本研究从酸菜中分离筛选2株菌,经API50CH初步鉴定为植物乳杆菌,并对2株菌的耐人工胃胰液能力、耐胆盐特性、胆固醇吸收能力进行研究。结果表明,2株植物乳酸杆菌都能够耐受pH3.0的人工胃液（3h活菌数为4.16、4.49 logcfu/mL）、pH8.0的人工胰液和10g/L胆盐（4h活菌数为6.97、.1 log cfu/mL）。该菌具有良好的降胆固醇活性,3g/L胆盐浓度下胆固醇的去除量最高。本实验的研究结果为功能性益生菌的筛选和应用奠定了基础。     

植物蛋白发酵乳酸菌对模拟胃肠道环境的耐受性研究

通过模拟人体胃肠道环境,研究植物蛋白发酵乳酸菌植物乳杆菌FJAT-7926(Lactobacillus plantarum FJAT-7926)和干酪乳杆菌FJAT-7928(Lactobacillus casei FJAT-7928)在不同pH值人工胃液和不同胆盐浓度人工肠液下的存活情况。结果表明,pH3.0的人工胃液对2株菌的存活影响较小。经4h处理后,2株菌的存活数都在1×108cfu·mL-1以上,存活率分别为56.06%和55.65%。pH2.0的人工胃液对2株菌的影响较大,经2h处理后,2株菌的存活数降至1×105cfu·mL-1,4h后,2株菌存活数分别为3.67×102 cfu·mL-1和2.30×103cfu·mL-1。2株菌对不同胆盐浓度的人工肠液均有较好的耐受性。0.1%胆盐浓度的人工肠液对2株菌的存活基本没影响。随着胆盐浓度的升高,2株菌的存活率有所下降,但都与初始菌数维持在同一数量级上。在中高浓度胆盐(0.3%和0.5%)的人工肠液中处理4h后,植物乳杆菌FJAT-7926的存活率在70%以上,干酪乳杆菌FJAT-7928的存活率在40%以上。可见这2株菌均有较强的胃肠道环境耐受力,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品菌种耐受肠胃环境的要求,在植物乳酸菌发酵食品方面具有广阔的应用前景。     

短乳杆菌微胶囊的制备及特性研究

【目的】制备短乳杆菌微胶囊,并对其特性进行检测,以期在一定时间范围内延长短乳杆菌微生态制备的保存期,减少短乳杆菌通过胃肠道的损失。【方法】采用微包囊技术,以短乳杆菌为模型菌株,设计L9(34)正交试验,筛选制备短乳杆菌微胶囊的最佳配方,并检测短乳杆菌微胶囊的特性。【结果】制备短乳杆菌微胶囊的最佳配方为:海藻酸钠20 g/L,氯化钙30 g/L,m(菌液)∶m(海藻酸钠)=1∶3,壳聚糖20 g/L。制备的短乳杆菌微胶囊呈球形,粒径为227μm,包囊效率为89.7%,能够耐受85℃高温、人工胃液和肠液,恒温保存3个月活菌数量仍达1×108cfu/g以上。【结论】制备的短乳杆菌微胶囊保存期延长,在胃、肠道内的损失降低。     

猪源发酵乳杆菌的筛选及其潜在益生性能

【目的】对从健康仔猪粪便中筛选分离出一株发酵乳杆菌 的益生性能进行测试，为其在畜禽动物 养殖中的应用提供参考。【方法】采用 Rogosa SL 完全选择性培养基分离出 106 株乳酸菌，通过革兰氏染色、酸 和胆盐耐受初步筛选出 1 株潜在的饲用乳酸菌，经 16S rDNA 序列鉴定为发酵乳杆菌 LF1，并对其益生性能潜力 进行评估，包括抑菌活性 ( 针对大肠杆菌 K88、金黄色葡萄球菌、猪链球菌、沙门氏菌以及弧菌等 12 种病原菌 )、 对模拟胃液中酸性环境的耐受性、对胆盐的耐受性以及对小肠上皮细胞的粘附性。【结果】发酵乳杆菌 LF1 耐 酸和耐胆盐的能力较强，显示出较强的益生菌潜力，但 LF1 菌株对猪肠道上皮细胞的粘附能力不强。在生物拮 抗作用方面，发酵乳杆菌 LF1 的培养上清可以显著抑制多种常见动物病原菌生长。【结论】发酵乳杆菌 LF1 具 有较好的益生性能，通过进一步的动物实验评估后，可以作为应用于畜禽养殖业的益生菌候选菌株。     

多粘芽孢杆菌抗逆性与益生性的体外评价

为了探讨多粘芽孢杆菌的抗逆性与益生特性,通过5个试验评定多粘芽孢杆菌的抗热、抗酸、耐胆盐、抑菌性能和粘附性。85℃水浴对多粘芽孢杆菌分别处理2.5,5.0,7.5 min模拟制粒条件;利用pH分别为2、3、4的人工胃液模拟胃液环境;0.3%胆盐模拟肠液环境;抑菌试验测定多粘芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制能力;以蛋鸡肠道上皮细胞为模型测定多粘芽孢杆菌的粘附能力。结果表明:多粘芽孢杆菌高温处理7.5min活菌数较对照组减少1.17%(P0.05)。在耐酸性试验中,pH3的试验组较对照组活菌数降低0.37%(P0.05)。在耐胆盐试验中,试验组活菌数较对照组降低了0.74%(P0.05)。多粘芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌环直径分别为0,17.46 mm。粘附性试验结果显示,在每100个蛋鸡肠道黏膜上皮细胞上可以粘附30个多粘芽孢杆菌。因此,制粒温度、人工胃液、人工肠液不影响多粘芽孢杆菌活菌数;多粘芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌有显著的抑制能力,基本不能在蛋鸡消化道内定植。     

南阳酵子中乳酸菌的分离鉴定及性能研究

采用MRS培养基纯培养的方法从南阳酵子中分离出6株乳酸菌,通过生理生化反应、形态学观察和16S rDNA测序进行鉴定,对分离菌株的生长性能、产酸性能、人工胃液的耐受性和耐胆盐性能进行研究。结果表明：从5个样品中分离到6株乳酸菌分别为发酵乳酸杆菌(Limosilactobacillus fermentum)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)和食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)。其中,I-8发酵乳酸杆菌(Limosilactobacillus fermentum)产酸性能、人工胃液耐受性和耐胆盐性能最高,具有一定的应用开发潜力。     

2株乳酸菌的生长和潜在益生菌特性

通过研究和比较2株乳酸菌——植物乳杆菌D28(Lactobacillus plantarum D28)和粪肠球菌B21(Enterococcus faecium B21)的生长曲线,对Na Cl和胆盐的耐受性,对人工胃液和人工肠液的耐受性,以及它们的体外抗氧化能力和胆盐水解酶活性,判断其是否具有益生菌特性,以期为后期菌株功能研究提供理论基础。生长曲线试验表明,L.plantarum D28的最大生长速度出现在18 h左右,而E.faecium B21为16 h左右。起始pH对2株菌生长的影响很大,L.plantarum D28的最适生长pH为5.5~7.0,而E.faecium B21为pH 6.0~7.0。耐受性试验表明:E.faecium B21对Na Cl和胆盐的耐受性较好,高于L.plantarum D28;L.plantarum D28在人工胃液(pH 2.0,180 min)和人工肠液(pH8.0,240 min)中的菌群存活率均显著高于E.faecium B21。采用DPPH(二苯基苦基苯肼)自由基清除率来测定2株菌的体外抗氧化活性,结果表明,2株菌均具有一定的抗氧化活性,且L.plantarum D28的抗氧化活性(34.86%)显著高于B21(25.32%)。采用茚三酮法测定菌株的胆盐水解酶活性发现,E.faecium B21的胆盐水解酶活性(0.415 U/mg)显著高于L.plantarum D28(0.114 U/mg)。综上表明,L.plantarum D28和E.faecium B21均具有一定的益生特性,且这2个菌株均可应用于乳酸菌降低胆固醇活性的研究,且L.plantarum D28还可以用于应用乳酸菌提高体内抗氧化活性的进一步研究中。     

禽用乳酸菌的筛选与功能鉴定

【目的】从健康鸡肠道中分离筛选优质乳酸菌,为制备禽用微生态制剂提供技术支持。【方法】选用30日龄健康青年鸡,取其盲肠内容物,通过选择性培养基筛选出具有产酸能力的乳酸菌,对其进行耐pH 3.0胃酸和3g/L牛胆盐筛选试验及菌株生长曲线、产酸能力测定,并通过平板抑菌试验筛选出具有较强抑菌效果的菌株。最后对此菌株16SrRNA进行克隆测序,经Blast比对和系统进化树分析,对菌株进行鉴定。【结果】从所取鸡盲肠内容物中分离得到L1~L9 9株乳酸菌,其中L2、L4和L9株耐pH 3.0和3g/L牛胆盐的综合能力较强。经过比较3株菌的生长曲线和产酸曲线,发现L2菌株耐酸耐牛胆盐、生长迅速、产酸能力强,且具有较强的抑制致病性大肠埃希菌的活性。经16SrRNA序列比对和系统进化树鉴定,确定L2为唾液乳酸杆菌。【结论】成功筛选出了1株可用以研制禽用微生态制剂的乳酸菌菌株。     

云南武定鸡肠道芽孢杆菌分离鉴定及动物饲喂试验分析

【目的】筛选适合武定鸡的饲料添加益生菌株。【方法】本试验通过从武定鸡肠道中分离出10株芽孢杆菌,经生化鉴定、耐酸、耐胆盐、肠道粘附、抑菌试验,选择优良的芽孢杆菌进行16S r DNA同源性分析,并选用1日龄武定雏鸡进行饲喂试验。【结果】Bac C1为枯草芽孢杆菌,添加Bac C1组的武定鸡的体重、免疫器官指数、肠道中乳酸菌含量均显著高于对照组(P0.05)。而料肉比显著低于对照组(P0.05)。【结论】在饮水中加入武定鸡分离的芽孢杆菌Bac C1可以提高雏鸡的免疫能力和生产性能。研究结果为饲料添加菌株的筛选提供科学依据。     

产酸、耐酸乳酸菌的分离鉴定及益生特性

【目的】分离筛选高效产酸的乳酸菌Lactobacillus spp.,并进行功能评价,为乳酸菌在饲料行业的应用提供物质基础。【方法】以酸性风味食品为样品来源,以溶钙圈大小为指标进行初筛,以耐酸能力为指标进行复筛,并进一步研究了筛选得到的乳酸菌的产酸性能、生长特性、耐酸、耐胆盐以及抑制病原菌的能力。【结果】获得了10株可在pH 3.0生长的乳酸菌。其中,菌株SC3A和DJ3被鉴定为戊糖乳杆菌L.pentosus,菌株SC15、SC16、DJ9B、DJ10C、SC8、DJ8A、DJ8B和DJ9A为发酵乳杆菌L.fermentum。戊糖乳杆菌DJ3和SC3A的产酸能力、发酵生长速率和抑制病原菌的能力显著优于发酵乳杆菌。而发酵乳杆菌DJ8A和DJ9B的耐酸和耐胆盐能力较强。【结论】从酸性风味食品分离得到了10株具有较强的产酸、耐酸和抑菌能力的乳酸菌,在食品和饲料工业中具有应用潜力。     

基于永生化猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02对猪源益生性乳酸菌的筛选

【目的】从健康仔猪的粪便及各肠段内容物和黏液中分离乳酸菌,并以永生化猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02为体外细胞模型对猪源益生性乳酸菌进行筛选。【方法】采用分离培养和常规生化试验对乳酸菌进行分离与鉴定。用永生化猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02作为体外模型,通过黏附性试验、耐酸耐胆盐试验和对致病菌的黏附抑制试验对菌株进行筛选。【结果】分离筛选出了12株乳酸菌,其黏附能力存在差异。Y091231、Y091221、Y224031、X302032、Y223052和Y223072等6株菌的黏附性较好,黏附指数依次为:2 903.25±83.33,2 320.37±81.02,1 965.43±37.72,1 416.12±62.74,1 100.00±68.10,988.73±17.06。对其进行耐酸耐胆盐试验和抑菌试验,结果表明,菌株Y091231、Y091221和Y224031对致病菌均具有较强的黏附抑制能力,且对高胆盐、低pH具有较强的耐受性。其中Y091231对大肠杆菌C83921的黏附抑制率可达(99.40±3.17)%,Y091221对致病性沙门氏菌的黏附抑制率为(97.10±2.04)%,Y091231对金黄色葡萄球菌CVCC2258的黏附抑制率为(98.00±2.31)%。Y091231、Y091221和Y224031 3株菌分别被鉴定为发酵乳杆菌、乳酸乳杆菌和嗜酸乳杆菌。【结论】筛选得到的3株益生性乳酸菌,不仅具有耐酸耐胆盐能力,而且对小肠黏膜上皮细胞具有强黏附性,对大肠杆菌C83921、致病性沙门氏菌和金黄色葡萄球菌CVCC2258具有较强的黏附抑制能力,可作为肠道微生态制剂的候选菌株。     

牦犊牛源乳酸菌的筛选鉴定与体外益生特性评价

以3月龄健康牦犊牛胃肠道内容物作为菌源,筛选得到4株能够同时抑制大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的乳酸菌,分别编号为XC3、DC1、DC8和A5。经16S rRNA序列分析鉴定,XC3为乳酸片球菌,DC8为罗伊乳杆菌,DC1为戊糖片球菌,A5为植物乳杆菌。经体外试验评价其益生特性,pH=3时,4株乳酸菌的活菌数均较高;在3 g/L的牛胆盐培养液中,菌株XC3的存活率为93.85%,菌株DC8和A5的存活率分别为51.59%和51.18%,但菌株DC1的存活率仅为6.77%;在人工胃液中培育0.5 h和3 h后,4株菌存活率均高于80%,在人工肠液中培育0.5 h和3 h后,存活率均高于70%。结果表明,乳酸菌XC3、DC8和A5具有潜在的益生作用,可作为牦犊牛专用益生菌制剂的添加对象。     

一株植物乳杆菌对脂环酸芽孢杆菌的抑菌活性

【目的】筛选具有抑制脂环酸芽孢杆菌活性的乳酸菌,并对其抑菌活性进行研究,为延长果汁的保质期和提高产品的安全性提供理论基础。【方法】用琼脂扩散法,从50株分离自泡菜的乳酸菌中筛选具有抑制脂环酸芽孢杆菌活性的菌株,研究所获菌株发酵上清液(Cell-free supernatant,CFS)经不同pH(3,4,5,6,7)、温度(40,60,80,100,121℃)和酶(过氧化氢酶、链霉蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶)处理后抑菌活性的变化;通过气相色谱-质谱分析乳酸菌代谢物中的组成成分;利用扫描电镜观察CFS处理后脂环酸芽孢杆菌的形态变化;将乳酸菌应用于苹果汁的发酵,并测定发酵过程中乳酸菌和脂环酸芽孢杆菌生长及6种有机酸含量的变化情况。【结果】筛选得到1株具有较好抑菌活性的植物乳杆菌(L10),其代谢物抑菌活性呈pH依赖性,具有温度和过氧化氢酶稳定性,但蛋白酶水解会降低其抑菌活性。植物乳杆菌L10代谢物中的成分主要是有机酸,并且含有环(亮氨酸-脯氨酸)和环(甘氨酸-脯氨酸)两种环二肽。CFS通过对脂环酸芽孢杆菌的细胞壁和细胞膜造成严重损害,导致细胞破裂,达到杀菌的目的。植物乳杆菌L10能够抑制苹果汁中脂环酸芽孢杆菌的生长,并且发酵后主要有机酸的含量发生显著变化(P0.05)。【结论】植物乳杆菌L10可以产生有机酸、细菌素等抑菌物质来杀灭脂环酸芽孢杆菌,可以应用于果汁的发酵及生物保存。     

1株鸡肠源益生芽孢杆菌的分离·鉴定及其耐受特性研究

从人工饲养的健康仔鸡的盲肠和大肠中分离出1株对大肠杆菌有较强拮抗作用的芽孢杆菌菌株Y-1,对该菌株进行了菌落形态、培养特征观察和生理生化特性鉴定及16SrDNA序列的分析。以16SrDNA序列为基础构建了包括11株相关种属细菌在内的系统发育树,其中与11个芽孢杆菌属的菌株的16SrDNA序列的同源性为94．63％～99．35％,Y-1被鉴定为侧孢短芽孢杆菌。模拟体内高胆盐环境（胆盐含量0．3％）,监测菌株的耐受能力,然后测定在人工胃液、肠液环境中作用不同时间后的存活菌数。试验结果表明,Y-1在胆酸盐、人工胃液、人工肠液中表现出了很强的耐受能力。     

高效降胆固醇植物乳杆菌的筛选及其益生潜能初探

为筛选出高效降胆固醇乳杆菌,挖掘其潜在益生功能,从民间自制泡菜样品中分离乳杆菌,采用邻苯二甲醛法筛选高效降胆固醇菌株,利用16S rDNA进行分子生物学鉴定,并通过耐酸、耐胆盐及抑菌性实验,测定菌株的益生潜能。结果表明:1)从分离出的11株乳杆菌中筛选出PL2、PL5、PL16和PL194等4株高效降解胆固醇菌株,其体外胆固醇降解率分别为48.22%、51.67%、48.43%和48.56%;2)结合菌落特征、部分生理生化试验及16S rDNA基因序列比对鉴定4株乳酸菌均为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum);3)该4株乳酸菌均可在pH2.0的环境下生存3h,菌株PL2和PL5可以在0.3%的胆盐浓度下存活3h;4)菌株PL5对致病性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和福氏志贺氏菌均有显著的抑制作用。总之,植物乳杆菌PL5是具有开发前景的高效降胆固醇益生菌。     

1株鸡肠源益生芽孢杆菌的分离·鉴定及其耐受特性研究

从人工饲养的健康仔鸡的盲肠和大肠中分离出1株对大肠杆菌有较强拮抗作用的芽孢杆菌菌株Y-1,对该菌株进行了菌落形态、培养特征观察和生理生化特性鉴定及16S rDNA序列的分析。以16S rDNA序列为基础构建了包括11株相关种属细菌在内的系统发育树,其中与11个芽孢杆菌属的菌株的16S rDNA序列的同源性为94.63%~99.35%,Y-1被鉴定为侧孢短芽孢杆菌。模拟体内高胆盐环境(胆盐含量0.3%),监测菌株的耐受能力,然后测定在人工胃液、肠液环境中作用不同时间后的存活菌数。试验结果表明,Y-1在胆酸盐、人工胃液、人工肠液中表现出了很强的耐受能力。     

不同菌株对苹果渣青贮饲料发酵效果的影响

【目的】探讨接种3种不同菌株对苹果渣青贮饲料营养成分的影响。【方法】以3株乳酸菌(植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,R1)、马里乳杆菌(Lactobacillus acidipiscis,R11)、戊糖片球菌(Pediococcus pen-tosacous,R16))、1株酵母菌(产香酵母(Aroma-producing yeast,M5))及1株芽孢杆菌(蜡样芽孢杆菌(Bacillus cere-us,B2))作为供试菌种,以不添加菌种的苹果渣自然青贮为对照,设6个接菌处理(分别接种菌株R1、R11、R16、R1+M5+B2、R11+M5+B2和R16+M5+B2),研究不同处理对苹果渣青贮发酵过程中pH、供试菌株数量及各类营养成分含量的影响。【结果】混菌青贮模式下,微生物之间无明显的竞争或拮抗作用,均能良好生长,菌数可达到108~1010g-1;各处理的pH均可降至3.70以下,其中以处理1的pH降低最为明显,45d后其pH值达到3.50。青贮后苹果渣饲料营养水平高于鲜果渣,所有处理氨态氮含量均有一定增加,各混菌处理总氮含量均有不同程度的增加,其中以处理5最为明显,总氮含量增长了70%;各处理有机酸含量均有明显增长,尤其以处理1和处理2的增加量较为明显,增加量约为400%。【讨论】合理的乳酸菌和酵母菌配比,可以使乳酸菌在青贮过程中发挥主导作用,而且增加了饲料中的粗蛋白含量,提高了饲料品质,且混菌青贮优于单菌青贮。     

汉逊德巴利酵母菌在胃酸、肠胆盐环境的耐受性研究

为探究汉逊德巴利酵母菌在酸性、胆盐环境及人工胃肠液下的存活情况,采用活菌计数法,分别在p H值1.0、1.5、2.0、2.5,胆盐浓度0.2%、0.3%、0.4%的PDA液体培养基,人工胃液作用0、2、4 h,以及人工肠液作用0、2、4、6、8、10 h环境下,测定汉逊德巴利酵母菌的活菌数。结果表明:耐酸试验中,该菌株在p H值1.0没有存活,p H值1.5、2.0、2.5活菌数与对照组比较下降明显(P0.01);耐胆盐试验中,该菌株在0.4%的高胆盐浓度下仍然存活,活菌数随胆盐浓度增加而降低;人工胃液试验中,与0 h比较,2 h、4 h活菌数显著增加(P0.01);人工肠液试验中,随着处理时间的延长,该菌株活菌数先升后降,但都比0 h活菌数增加。可见,汉逊德巴利酵母菌能够耐受较高的酸性环境和较高的胆盐环境,并在人工胃肠液环境下具有较高的存活能力,符合研制新型微生态制剂的条件。     

健康犬肠道乳酸杆菌某些生物学特性的研究

从健康犬的肠道中分离并鉴定出5株乳酸杆菌,其中嗜酸乳杆菌3株、肠乳杆菌1株、发酵乳杆菌1株。根据其耐胆盐、生长表现等特性选择2株嗜酸乳杆菌（D1-3、D4-3）,作进一步的耐酸性、粘附性、抑菌作用等生物学特性试验。结果表明：D1-3和D4-3菌株能耐受高达6．0g／L的胆盐以及pH值低至2．0的酸性环境,对犬肠粘膜上皮细胞有良好的粘附性,其代谢产物对常见致病菌有较好的抑制作用,对小白鼠无毒性。