酶标葡萄球菌A蛋白组化法在流行性出血热诊断上的应用

使用辣根过氧化酶标记葡萄球菌A蛋白(HRP—SPA)间接免疫酶组化法检测100例流行性出血热病人、54例非出血热病人及31名正常人血清中出血热异特性抗体。结果表明(HRP—SPA)在灵敏度和特异度上与间接免疫荧光法IFA基本相同,由于HRP—SPA简便易行,可作为EHF诊断的一种新方法。     

肼化辣根过氧化物酶糖蛋白染色法

探索一种简便灵敏的糖蛋白半定量法。在 ｐＨ ５．０，碳二亚胺（ＥＤＣ）催化下，辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）与己二酰二肼反应生成肼化的ＨＲＰ（ＨＲＰ－ＨＺ），固相于硝酸纤维素膜上的糖蛋白（纤连蛋白或转铁蛋白）经过碘酸氧化其糖链中的糖基后生成的醛基可与ＨＲＰ—ＨＺ缩合，用ＨＲＰ的发包底物显色即可检出精蛋白的存在与否。结果：糖蛋白中，１０ ｎｇ的糖即可被检出。结论：与其他糖定量方法相比，该方法灵敏度高，方法简便，能够普遍应用。     

快速免疫酶染色法检测流行性出血热抗体

用快速免疫酶染色法(IESA)检测流行性出血热(EHF)患者血清抗体,并自行设计配制了联苯胺、亚硝基铁氰化钠及沙黄染料融为一体的新的底物染色剂,一次可将细胞核染成红色,抗原抗体复合物染成蓝色,普通显微镜下观察,鲜明易辨。本法可检出特异性抗体,有早期诊断价值,并具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便、无需特殊设备、底物染色剂可长期保存等优点。     

EHF早期快诊技术研究(Ⅰ.HRP—SpA染色法快速检测EHF病人IgG抗体)

本文报告用HRP—SpA染色法检测72例EHF病人和非EHF病人及健康人血清EHFIgG抗体滴度,结果表明本法特异性,敏感性与IFA法基本一致。本法操作简单,作者认为是一种实用的诊断流行性出血热的方法。     

抗辣根过氧化物酶单克隆抗体的研制和鉴定

用国产辣根过氧化物酶(HRP)免疫BALB/C鼠,取免疫脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得了7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株,其培养上清液的效价为256～4096,腹水效价为1024×10~3～4 096×10~3.上述7株细胞株中的6株所产生的单克隆抗体均能制备出质量良好的鼠单克隆PAP复合物,用于免疫组织化学及血清学研究均取得较理想效果。将7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株适应于含8-氮杂鸟嘌呤培养基中,诱导出了对HAT敏感的突变细胞株,为研制双特异性单克隆抗体奠定了基础。     

大白鼠嗅球传入纤维联系的实验性研究：辣根过氧化物酶逆行标记法

用辣根过氧化物酶(HRP)逆行标记技术,探索大白鼠嗅球传入纤维的起源.直视下将HRP注入大鼠一侧嗅球后,可在嗅前核、梨状皮质、屏状核、视前大细胞核、斜角带核、伏隔核、中缝背核和中央上核内观察到HRP逆行标记细胞.     

快速MacELISA法检测流行性出血热特异性IgM抗体

作者在IgM抗体捕获酶联免疫吸附试验(IgM antibody—capture ELISA,MacELISA)检测流行性出血热(EHF)IgM抗体方法的基础上,通过提高反应温度,应用新的、稳定、无致癌性的底物—四甲基联苯胺(TMB),建立了快速MacELISA法。用快速法测原法阳性血清61例,阳性符合率100％,测原法阴性的肝炎病人血清20例及正常人血清10例,无1例阳性。改进后的方法与原法相比,具有快速、使用安全、结果稳定等优点。     

HRP-SPA染色法检测流行性出血热病毒特异性抗体的流行病学评价

应用HRP-SPA染色法与免疫荧光抗体技术,对比检测了252份住院患者和一般人群的血清EHFV IgG抗体。结果表明,在住院患者中,两种方法的总符合率达98.6％,其灵敏度,特异度与可靠性基本一致。而在一般人群中,HRP-SPA染色法灵敏度较低。故此法可以作为临床实验诊断,但不适用于隐性感染的调查。     

三种特异性血清学方法诊断流行性出血热的评价

本文用IFAT、ELISA、HI平行检测了出血热患者血清161份的出血热病毒抗体，阳性57.9～95.1％；ELISA、HI和IFAT分别于2、4病日出现阳性；ELISA、IFAT分别于60、90病日阴转，HI94病日仍阳性；HI的阳性率（95.1％）高于IFAT（IgM57.9％、IgG88.4％）及ELISA（IgM75.6％、IgG65.9％），其发热期阳性率亦高于其他两法；ELISA-IgM、IgG的阳性率及ELISA-IgM、HI抗体的滴度随病情加重而增加。因此，ELISA（主要是ELISA-IgM）和HI具有高度特异性、敏感度，阳性出现早，HI在三法中灵敏度最高。     

流行性出血热出血机理的探讨

为阐明流行性出血热(简称出血热)的出血机理,我们将31例出血热患者各病期血小板和红细胞涂片,用羊抗人IgG和C3荧光素作荧光染色后,再用出血热单克隆荧光抗体作特异性染色。血小板、红细胞表面的免疫复合物在发热期即出现,检出率分别为33.3％和25.8％,至休克少尿期仍存在,到多尿和恢复期则基本消失。发热期患者的血小板计数及其聚集率均显著下降。各病期血标本纤维蛋白原半定量测定的结果均属正常。但纤维蛋白(原)裂解产物(FDP)在发热期已有增高,休克少尿期增高显著,多尿期仍高于正常。直至恢复期渐趋正常。本文资料提示免疫复合物在组织细胞表面沉积是引起出血的重要原因。     

间接法ELISA检测流行性出血热抗体

用间接法ELISA检测流行性出血热IgG抗体。54份EHF病人血清全部阳性,32份正常人、19份发热病人和18份误诊为EHF病人的血清全部阴性,与IFA检测结果相同。检测EHF病人系列血清,发病3d就可检出抗EHF IgG,抗体滴度随病程升高,表明间接法ELISA可用于EHF临床诊断。将间接法ELISA与IFA、RPHI和HI平行检测30份EHF病人血清,抗体几何平均滴度(GMT)分别为1:43 211、1:413、1:253和1:143,有高度相关性,且ELISA比RPHI和HI更能检测出早期抗体。检测疫区人群血清4134份,间接法ELISA检出490份阳性,而IFA仅检出470份。结果表明间接法ELISA有较好的敏感度和特异度,尤其适用于血清流行病学研究。     

流行性出血热的肝脏损害：附35例报告

报道35例流行性出血热,24例(68.6％)肝功检查单项谷丙转氨酶异常升高,11例(31.4％)谷丙转氮酶无异常。10例肝脏病理检查均能见到不同程度的肝细胞浊肿退变及气球样变;6例有灶性出血,5例有灶性出血性坏死并有炎细胞浸润,血管壁退变及内皮细胞退变坏死4例,出血灶分布部位与血管壁变性坏死相一致;部分可见胆色素沉积,枯否氏细胞增生及脂肪小滴性脂肪变性。肝脏的病理变化与病情轻重相一致。谷丙转氨酶正常者肝组织病理检查仍能见到病理变化,提示流行性出血热绝大部分伴有肝脏病理损害,但这种病理改变与乙型肝炎的肝脏病理变化有明显不同。     

305例流行性出血热肝脏损害的临床观察

对305例确诊的流行性出血热患者作了肝功能检查,异常者251例(82.29%),主要为血清 ALT 升高(82.29%)及血清白蛋白降低(71.8%)。发热期肝功能异常者为74.55%,休克期96.77%,少尿期91.95%。绝大岁数病例进入恢复期后肝功能逐渐恢复正常,未恢复者则与既往乙型病毒性肝炎有关。肝功能损害程度与病情轻重有关。对死亡8例肝穿及1例尸检肝组织光镜检查证实有肝细胞变性和坏死。上述结果表明出血热患者普遍存在出血热肝炎。     

流行性出血热危险因素的病例对照研究

用病例对照研究方法探索建德县罹患流行性出血热(EHF)的危险因素。经临床诊断和血清学证实的97例EHF病例,按年龄、性别和住同一医院与其他疾病病人作1:1配对调查。条件logistic回归模型分析,发现村中曾有EHF史、外出他县、野宿和直接接触鼠类四个因素是罹患EHF的危险因素,其相对危险度分别为35.67、11.94、18.18和7.36。病例家属隐性感染率(4.95％)与对照家属隐性感染率(5.12％)相似;病例与对照家中捕获的鼠类及其EHF抗体、抗原阳性率无显著性差异。     

肾综合征出血热实验室早期快速诊断的研究

本文通过对临床送检血清的抗体测定,评价IFAT在HFRS早期诊断中实用性。该法与临床诊断符合率为91.5％,发病1周内IgM抗体阳性率为82.8％,IgG抗体为81.1％,前者于病后10天左右达高峰,3～5个月后仍可测得。后者高峰期在病后4周左右,一年后维持在一定水平。IFAT与SPA-HRP酶染色法的比较,后者敏感性较高,但试验时间长。     

流行性出血热患者血清泌乳素水平的变化及意义

研究了54例流行性出血热男性患者血清泌乳素水平的变化,结果表明少尿期血清泌乳索水平明显升高,尤以重症组更显著。左旋多巴抑制试验仅两例重症组病人未被抑制,其余患者均被抑制;灭吐灵兴奋试验,轻、重两组受试者全部呈阳性反应。上述资料提示绝大多数患者下丘脑与垂体前叶泌乳素分泌细胞之间仍保持着良好的功能联系,血清泌乳素水平增高是应激反应的结果。     

61例流行性出血热患者临床各期血液流变学观察

通过血液流变学的检测,观察61例流行性出血热患者临床各期的改变。发现出血热患者临床各期,全血粘度的均数都高于正常对照的上限值。五期中少尿期升高不明显,发热期和多尿期明显升高。红细胞聚集指数各期均有显著性升高,提示出血热整个病程是DIC的形成过程。通过动态观察临床各期血液流变学的检测可及时正确地指导临床工作。     

流行性出血热患者T细胞亚群状态的研究

用T淋巴细胞单克隆抗体为第一抗体,马抗鼠IgG为第二抗体ABC免疫酶技术,对流行性出血热(EHF)患者30例48人次外周血中T淋巴细胞亚群的分布和变化进行检测。结果表明:EHF患者外周血中各种T细胞亚群的变化以少尿期最显著,恢复期各种比值变化趋于正常。提示EHF患者体内存在着明显T淋巴细胞亚群的比例失衡现象,与病情呈正相关,说明T细胞亚群的变化在EHF发病机理方面起一定作用,并为临床治疗提供理论依据。