端粒酶催化亚基hTERT在肿瘤治疗中的研究进展

人端粒酶催化亚基hTERT基因转录的从头激活是端粒酶活化的限速步骤，受到多种癌基因和抑癌基因产物的精密调控。构建hTERT启动子调控抗肿瘤基因的逆转录病毒载体，使抗肿瘤基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞内定向表达，有望用于肿瘤基因治疗。本文首先简单介绍了hTERT蛋白的结构和表达调控机制，然后对其在肿瘤发生发展中的生物治疗的功能作一简要综述。     

SU11274对人子宫内膜癌细胞抑制作用的研究

目的:研究SU11274对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:使用不同浓度SU11274（0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.5 μmol/L、2.0 μmol/L）作用Ishikawa 和HEC-1B 两种细胞株1小时后，加入40 ng/ml的HGF，继续培养12、24、48小时，随后使用MTT法检测SU11274对子宫内膜癌细胞增殖的影响，并使用Annexin V-FITC法检测SU11274对细胞凋亡的影响。结果:SU11274均能抑制两种细胞的增殖，呈浓度依赖性，对HEC-1B细胞的增殖抑制作用明显高于Ishikawa细胞，差异具有统计学意义（P＜0.05）。SU11274可以使HEC-1B细胞株早期及中晚期凋亡细胞的百分比均增加，且具有剂量依赖效应关系，并不会增加Ishikawa细胞株的凋亡率（P＞0.05）。结论:SU11274是一种十分高效的抑制子宫内膜癌细胞生长的生物活性物质，主要通过诱导细胞的早期及中晚期凋亡来发挥抗肿瘤作用。并且对ER(-)的HEC-1B细胞株具有特异性的抑制作用。     

PTEN基因对子宫内膜癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨PTEN基因在子宫内膜癌基因治疗方面的可行性。方法 通过腺病毒载体(Ad-PTEN)将人野生型PrENcDNA导入Ishikawa细胞,观察外源性PTEN蛋白的表达情况,以及PTEN蛋白对Ishikawa细胞生长的影响,同时还观察了PTEN蛋白是否影响胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)对Ishikawa细胞的作用。结果 Ad-PTEN感染IsHikaWa细胞后1d,即可见PTEN蛋白表达;第3天时,表达明显增强,并能持续表达10d。感染后的IshikaWa细胞生长受到明显抑制,并且PTEN还能明显抑制IGF-Ⅱ诱导的Ishikawa细胞生长。结论 腺病毒介导的PTEN基因导入能诱导Ishikawa细胞生长受到明显抑制,提示野生型PTEN基因可能是治疗子宫内膜癌的一种新途径。     

反义端粒酶PNA对肺癌细胞株生长的体外抑制作用

目的　探讨反义端粒酶肽核酸 (PNA)片段对肺癌细胞株端粒酶活性及细胞株生长的抑制作用。方法　将人工合成的端粒酶反义PNA片段 ,应用脂质体转染法将反义端粒酶序列导入肺腺癌细胞株A5 49及小细胞癌细胞株NCI H44 6中 ,采用MTT法检测活细胞数 ,采用RT PCR ELLISA法检测端粒酶活性。结果　转染 72h后 ,A5 49、NCI H 44 6细胞株端粒酶活性 (A45 0值 )分别由 0 .5 82± 0 .0 3 9和 0 .5 71± 0 .0 43降低至 0 .2 94± 0 .0 48(P <0 .0 1)和 0 .2 76± 0 .0 5 1(P <0 .0 1) ;而两细胞株的活细胞数 (A5 80值 )分别由 0 .485± 0 .0 0 9和 0 .5 13± 0 .0 15降低至 0 .191± 0 .0 2 7(P <0 .0 1)和 0 .13 8± 0 .0 46(P <0 .0 1) ,细胞生长受到显著抑制。结论　反义端粒酶PNA片段具有抑制肺癌细胞株端粒酶活性的作用 ,并可抑制肺癌细胞的生长     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对人绒毛膜癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的探讨端粒酶RNA反义寡聚核苷酸(anti-hTR)对绒癌的治疗作用。方法采用绒癌JAR细胞移植裸鼠成瘤,行anti-hTR的低浓度和高浓度治疗,并设立生理盐水组、随机序列组及药物放线菌素D(Act-D)对照组,动态观察并测定肿瘤的生长。采用TRAP-ELISA方法测定端粒酶活性。采用Western blot法测定hTERT蛋白的表达。结果anti-hTR低浓度组、高浓度组和药物Act-D组的抑瘤率分别为76．6％、93．8％和85．4％,三组对肿瘤生长的抑制,与随机序列组和生理盐水组相比,差异均有统计学意义,而三组之间差异无统计学意义。三组的端粒酶活性及hTERT蛋白表达下降,较随机序列组和生理盐水组相比,差异均有统计学意义,而三组之间差异无统计学意义。结论anti-hTR能够抑制绒癌移植瘤的生长,可能成为肿瘤治疗的新方法。     

反义hTERT对人舌鳞癌细胞裸鼠移植成瘤的抑制作用

多种癌基因及抑癌基因的异常累积是口腔癌癌变过程的重要机制。已有研究表明，端粒酶逆转录酶（TERT）与癌的发生发展密切相关。本研究将经过hTERT反义寡核苷酸预处理后的Tca 8113细胞接种于裸鼠，观察处理后的Tca 8113细胞对裸鼠皮下移植瘤成瘤的抑制作用，初步探讨hTERT为靶点用于开展体内抗癌研究的可行性。     

端粒酶正义及反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的影响

背景与目的:近年研究表明,端粒及端粒酶与肿瘤发生密切相关。端粒酶反义寡核苷酸直接作用于端粒酶或诱导肿瘤细胞分化均可使端粒酶活性下降,抑制肿瘤生长。而用端粒酶反义寡核苷酸直接抑制端粒酶活性是否可引起肿瘤细胞再分化,尚不清楚。由于端粒DNA重复序列是以端粒酶RNA为模板合成的,因此端粒DNA可以和端粒酶正义寡核苷酸互补结合。这种结合是否也能影响肿瘤细胞的生长,值得研究。本研究正是要探讨端粒酶正义及反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的作用。方法:脂质体介导正、反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株,MTT法检测细胞增殖能力,免疫组化法检测细胞角蛋白表达,同时观察细胞形态学变化。结果:端粒酶正义寡核苷酸与反义寡核苷酸一样可抑制CNE1和CNE2Z细胞的生长,且呈剂量和时间依赖性。1.5、3.0、4.5、6.0μmol/L正义寡核苷酸处理CNE1细胞,6h抑制率分别为16.28%、19.38%、22.48%和23.26%,48h分别达26.26%、38.89%、39.90%和38.89%;CNE2Z细胞6h抑制率分别为7.69%、8.24%、18.13%和20.32%,48h分别为28.84%、28.88%、32.89%和31.54%。正、反义寡核苷酸组细胞角蛋白表达显著增加(P<0.01),细胞形态趋向分化成熟。结论:端粒酶正、反义寡核苷酸均可抑制鼻咽癌细胞的生长,并促进细胞分化。     

以端粒酶为靶的肿瘤反义核酸治疗

端粒酶是一种新的肿瘤标志物和肿瘤治疗靶点。以端粒酶为靶的反义核酸研究进展迅速并且抑癌效果明显，与2－5A（5-'phosphorylated-2'-5'-linked oligoadenylate)的连接更使其具有了特异性诱导凋亡的作用。作为一项刚起步的研究，它也面临挑战和困难。综述了近年来不同的反义核酸抑制端粒酶活性的研究进展。     

端粒酶RNA的反义寡核苷酸抑制裸鼠移植瘤生长的研究

背景与目的许多研究已证明:端粒酶的激活在肺癌的发生、发展中具有重要作用,因而成为肺癌基因治疗的重要靶点之一。本研究旨在探讨针对人端粒酶RNA成分的反义寡核苷酸对裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法应用人肺腺癌细胞株A549细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,18只荷瘤裸鼠随机分为反义寡核苷酸组(Antisense Oligodeoxynucleotide Group,Group ASODN)、正义寡核苷酸组(Sense Oligodeoxynucleotide Group,Group SODN)和生理盐水对照组(Normal Saline Group,Group NS),每组6只,瘤体内分别注射反义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物、正义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物和生理盐水,均为每日1次,共14次,观察移植瘤的生长情况。结果反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组的体积抑瘤率分别是43.94%、6.91%,统计学检验有非常显著性差异(t=6.17,P<0.001)。治疗过程中裸鼠对药物耐受良好,无恶心、呕吐等消化道症状,未见皮下出血,治疗结束时各组裸鼠的体重较治疗开始时略有增加。结论瘤体内注射脂质体包封的端粒酶RNA的反义寡核苷酸能够明显抑制裸鼠体内移植瘤的生长。     

Bcl-xl反义寡核苷酸对裸鼠人鼻咽癌移植瘤抑制作用的研究

目的　探讨bcl xl反义寡核苷酸 (ASODN)对裸鼠人鼻咽癌移植瘤生长和基因表达的抑制作用。方法　建立裸鼠人鼻咽癌模型 ,接种肿瘤细胞后 2 4h之内将bcl xlASODN、序列对照寡核苷酸 (ODN)皮下注射进行治疗 ,观察肿瘤大小变化和组织形态学改变 ,并检测药物治疗后肿瘤细胞中bcl xlmRNA和蛋白表达情况。结果　Bcl xlASODN治疗组裸鼠鼻咽癌的生长受到明显抑制 ,抑瘤率为 41.7% ,其对应的bcl xlmRNA和蛋白水平明显降低 ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而序列对照ODN治疗组抑瘤率仅为 19.0 % ,差异无显著性 ,对基因的表达亦无明显影响。结论　Bcl xlASODN对裸鼠鼻咽癌移植瘤的生长具有一定的抑制作用 ,为鼻咽癌的治疗提供新的方法。     

子宫内膜癌端粒酶活性研究

目的探索端粒酶活性与子宫内膜癌发生发展的关系。方法采用ＰＣＲ－ＴＲＡＰ方法检测３４例子宫内膜癌和６例正常子宫内膜组织的端粒酶活性。结果在３４例子宫内膜癌中,２８例端粒酶活性阳性;６例正常子宫内膜组织中,有１例端粒酶活性阳性。结论端粒酶激活与子宫内膜癌的发生发展有密切关系,并有可能成为子宫内膜癌的临床肿瘤标记物     

人类端粒酶反转录酶C27多肽过表达对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 研究人类端粒酶反转录酶C27多肽（hTERTC27）过表达对鼻咽癌C666-1细胞移植瘤生长的影响。方法 利用稳定转染质粒pcDNA3.1（对照组）与pcDNA3.1-hTERTC27（hTERTC27组）的C666-1细胞株建立裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤模型。观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,处死后剥离肿瘤,进行HE染色观察组织形态学变化。采用Western blot法观察肿瘤组织中剪切后的Caspase-3、Caspase-9、PARP以及bax和bcl-2的表达。结果 小鼠荷瘤第8天后,hTERTC27组移植瘤的体积明显小于对照组（P＜0.05）,肿瘤的重量明显低于对照组（P＜0.05）,局部肌肉浸润现象较少。hTERTC27组移植瘤Caspase-3、Caspase-9、PARP、bax的表达量增加（P＜0.01）,而bcl-2的表达量降低（P＜0.01）。结论 hTERTC27减缓裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤的生长速度并促进其凋亡,可能与其上调bax蛋白的表达和下调bcl-2蛋白的表达有关。     

以人端粒酶逆转录酶为靶点的肿瘤治疗

人端粒酶逆转录酶是近几年肿瘤治疗研究的一个热点,包括端粒酶活性抑制剂研究、以人端粒酶逆转录酶为靶点的RNA干扰研究、人端粒酶逆转录酶介导的免疫学研究以及以人端粒酶逆转录酶为靶点的基因治疗研究等,并取得了一定的成果.     

短发夹RNA抑制喉癌细胞hTERT基因表达及诱导细胞凋亡

目的:探讨DNA载体途径的RNA干扰技术抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达及诱导喉癌细胞Hep-2凋亡的作用。方法:构建靶向hTERTmRNA的质粒pshRNA1、pshRNA2及对照质粒pshRNA3、pEGFP,并将其分别转染喉鳞癌Hep-2细胞。共聚焦荧光显微镜观察质粒转染及表达情况;RT-PCR测定hTERTmRNA表达;Western印迹测定hTERT蛋白表达;末端重复片断扩增-酶联免疫吸附(TRAP-ELISA)方法测定细胞端粒酶活性;MTT法研究细胞增殖活性变化;原位细胞凋亡(TUNEL)及透射电子显微镜研究细胞凋亡。结果:①共聚焦荧光显微镜下见大量的细胞呈现绿色荧光,与其他组比较,pshRNA1、2组呈现荧光的死亡细胞显著增加。②pshRNA1、2转染细胞后hTERTmRNA及hTERT蛋白表达显著降低;其端粒酶活性明显受到抑制:转染后2 d pshRNA1组活性为:0.159±0.039、pshRNA2组活性为0.163±0.028,与空白对照组1.523±0.076比较,差异有非常显著性(P<0.005)。③pshRNA1、2转染细胞后可显著抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。这两组细胞透射电镜可见典型细胞凋亡特征。结论:DNA载体途径的RNA干扰技术能有效抑制hTERT基因的表达及端粒酶活性并诱导癌细胞凋亡,此法可能成为抑制肿瘤细胞的新途径。     

端粒酶反义RNA 对人喉癌细胞系Hep-2 生长的影晌

 目的　探讨抗端粒酶在喉癌细胞治疗中的意义。方法　用脂质体介导法将 pBBS2 12 hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体 )转染入人喉癌Hep 2细胞系中 ,采用TRAP法测定端粒酶活性 ,细胞动力学检测 ,电镜下观察等方法研究其对Hep 2细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响。 结果　端粒酶反义RNA能显著抑制细胞的端粒酶活性 ,抑制细胞增殖并促进其凋亡。结论　以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗喉癌的潜在途径。     

肝细胞癌端粒酶活性及hTERT mRNA表达与术后早期复发的关系

目的：研究肝细胞癌端粒酶活性及人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA表达与肝细胞癌术后早期复发的关系。方法：采用ELISA—TRAP法检测60例肝癌组织及其癌旁组织端粒酶活性，RT—PCR法检测hTERT mRNA表达，5例正常肝脏组织作为对照。分析端粒酶活性及hTERT mRNA表达与临床病理之间的关系。结果：肝癌组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达阳性率分别为86．7％（52／60）及90％（54／60），癌旁组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达阳性率分别为40％（24／60）及43．3％（26／60）。正常肝脏组织均未检测到端粒酶活性及hTERT mRNA表达。癌旁组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达与术后早期复发及包膜浸润、门静脉侵犯、肝内转移等恶性肿瘤的恶性生物学行为有关。结论：癌旁组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达可能是肝细胞癌术后早期复发的预后指标。