某国产HIV-1病毒载量检测试剂的检测性能评估

目的对1型艾滋病病毒(HIV-1)的国产病毒载量检测试剂进行检测性能评估。方法应用系列稀释的定值质控品分析某国产病毒载量检测试剂的检测线性度和精密度,应用81份HIV-1感染阳性样本和30份阴性样本比较该国产病毒载量检测试剂与进口TaqMan病毒载量检测试剂检测结果的相关性和一致性。结果国产病毒载量检测试剂对系列浓度定值质控品检测结果的线性相关系数为R2=0.997 0。对不同浓度定值质控品检测结果的批间和批内检测变异系数均10%。与进口TaqMan病毒载量检测试剂相比较,两种检测试剂对临床样本检测结果之间的相关性系数为R2=0.792 3。比较两种试剂检测结果偏差的Bland-Altman分析显示偏差均值为-0.01 Log(拷贝/mL)。两种试剂判定阳性和阴性样本的检测符合率为100%。以1 000拷贝/mL为检测线时,两种试剂检测结果的符合率为93.83%;以5 000拷贝/mL为检测线时,两种试剂检测结果的符合率为91.36%。结论某国产病毒载量检测试剂具有较好的检测线性和精密度,与进口TaqMan病毒载量检测试剂相比具有较好的相关性和一致性,整体检测性能良好可适用于大部分临床检测需求。     

两种国产乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的检测效能评价

比较两种国产不同核酸提取方法定量检测乙型肝炎病毒（HBV）核酸试剂的检测效能。方法选择经抗病毒治疗且HBV DNA 载量在﹤1×10^4 IU/ml的乙型肝炎患者血清标本36份,采用两种国产HBV核酸定量检测试剂盒平行检测HBV DNA,对阳性血清进行梯度稀释后再检测,从定量线性范围、准确性、灵敏度、特异性等方面比较两种试剂的差异。结果在36例临床血清中,14份经科华试剂检测的结果为﹤500 IU/ml,而圣湘试剂检测的结果仍﹥1.00×10^3 IU/ml;对其中获得检测数据的31份标本进行两种试剂检测结果的相关性分析,发现一致性较好（r=0.817,P﹤0.05）;两种方法检测乙型肝炎患者血清HBV DNA的阳性率分别为55.6％和94.4％,差异具有统计学意义（x2=12.07,P=0.000）;对强阳性血清进行梯度稀释后定量检测显示,两种试剂检测水平的平均值与理论水平的线性相关性较好（湖南圣湘r=0.999,上海科华r=0.992）,但圣湘所有检测的相对偏差均在±0.3logIU/ml之内,而科华有两次检测的相对偏差超出了±0.3logIU/ml范围,提示圣湘试剂检测结果更稳定,使用纳米磁珠核酸提取法的检测结果较煮沸法更加准确。结论以纳米磁珠为提取核酸方法不仅具有更广的线性范围,同时可显著提高国产HBV DNA检测试剂的灵敏度和准确性。     

一种国产HIV-1病毒载量试剂与进口试剂的比较研究

正血浆病毒载量检测是艾滋病防治工作中一项重要的实验室检测指标,与疾病的发生、发展及预后有密切关系,主要用于评估艾滋病病毒(HIV)感染进程、抗病毒治疗效果监测及HIV感染的辅助诊断~([1])。目前国内主要使用3种进口试剂进行病毒载量(VL)检测,进口试剂的敏感性及特异性均较好,但价格昂贵~([2-4])。随着治疗就是预防艾滋病策略被广泛地接受~([5-6]),我国免费抗艾滋病病毒治疗的病人数大幅度     

LAg-avidity EIA HIV-1新发感染检测试剂性能评估

目的对国产限制性抗原亲和力法1型艾滋病病毒(HIV-1)新发感染酶联免疫检测试剂盒(LAg-avidity EIA HIV-1新发感染检测试剂)进行性能评估。方法抽取三批LAg-avidity EIA HIV-1新发感染检测试剂,分别由三个人检测同一批及一个人检测三批试剂,以评估该试剂批内与批间精密度;将其三批试剂2℃～8℃贮存组分于37℃放置7天,-20℃贮存组分于2℃～8℃放置7天后,评价试剂盒的热稳定性;利用81份HIV-1抗体阳性临床样本评估不同批次试剂与不同实验人员新近感染与既往感染样本检测结果的一致性。结果国产LAg-Avidity EIA HIV-1新发检测试剂批内弱阳质控(LPC)与强阳质控(HPC)光密度(OD)值批内变异系数(CV)分别为8.52%与9.06%,批间CV分别为9.25%与10.07%;加速热处理7天后,试剂批内LPC与HPC的CV分别为8.01%与5.66%,批间CV分别为6.24%与10.95%,同时三批新近感染与既往感染检测一致率分别为98.70%、100.00%与97.53%;三个不同实验人员新近感染与既往感染一致率分别为100.00%、97.53%与98.70%;三个不同批次试剂检测的新近感染与既往感染一致率分别为100.00%、98.70%与100.00%。结论国产LAg-Avidity EIA新发检测试剂批内与批间精密度、稳定性与一致性均较好,能够满足实验室HIV-1新发感染检测与应用。     

一种唾液快速检测HIV-1/2型抗体试剂的现场评价

目的对一种唾液快速检测艾滋病病毒Ⅰ/Ⅱ型(HIV-1/2)抗体试剂进行现场评价,考核其现场使用的敏感性和特异性,以及与血液HIV-1/2抗体检测试剂的一致性。方法采集247例已知HIV感染者、1 090例正常献血人员、60例患有其它疾病的患者(包括孕妇、肿瘤患者、一般疾病患者),以及109例HCV感染者和119例未知HIV感染状况的吸毒人员的唾液标本,现场使用Vanguard OMTTM唾液HIV-1/2抗体快速检测试剂盒(CalypteBiomedical生产)进行检测,同时平行采集上述人群的血液标本,使用Vironostika HIV Uni-FormⅡplus O(BioMerieux生产)进行对比测试。结果247例已知HIV感染者中,247例唾液标本HIV-1/2型抗体检测均为阳性。1 259例血液酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HIV抗体阴性人群中,1 257例唾液检测为阴性,2例为阳性。119例吸毒人员中,28例血液标本HIV阳性中,唾液标本检出27例。91例HIV阴性中检出阴性90例。该唾液HIV抗体快速检测试剂,敏感性为99.64%,特异性为99.78%。与ELISA检测的一致性为99.75%。结论唾液HIV-1/2型抗体检测试剂与现行的血液ELISA检测结果相近。唾液标本的采集方便而且危险性小,推荐在采血较困难的人群、基层医疗机构、VCT门诊等,可考虑使用唾液HIV-1/2型抗体快速检测试剂进行HIV抗体初筛检测。     

一种国产HIV-1病毒载量试剂与进口试剂的比较研究北大核心CSCD

血浆病毒载量检测是艾滋病防治工作中一项重要的实验室检测指标,与疾病的发生、发展及预后有密切关系,主要用于评估艾滋病病毒（HIV）感染进程、抗病毒治疗效果监测及HIV感染的辅助诊断^（[1]）。目前国内主要使用3种进口试剂进行病毒载量（VL）检测,进口试剂的敏感性及特异性均较好,但价格昂贵^（[2-4]）。随着治疗就是预防艾滋病策略被广泛地接受^（[5-6]）,     

滤纸片干血斑用于HIV-1 DNA检测的评价

目的 探索滤纸固定艾滋病病毒Ⅰ型核酸(HIV-1 DNA)的稳定性、均一性,评价滤纸片干血斑HIV-1 DNA检测方法的敏感性、特异性.方法 套式PCR扩增HIV-1的env、gag、pol三区.不同环境条件下保存的滤纸片干血斑,分别在不同的时间段检测;滤纸片干血斑的中心及圆斑的上下左右4个边缘,随机打取5个2.5mm圆片用于检测.采自新疆现场的94份阴性样本和90份阳性样本,分别制成滤纸片干血斑样本和全血样本,比较两者的HIV-1DNA检测结果.结果 滤纸片干血斑-20℃或4℃放置1年或室温放置3个月,或在37℃放置两天或冻融2次,实验的敏感性未见下降;37℃放置3天或冻融3次,已经有样本不能检出.滤纸干血斑不同位点随机打取圆片扩增,4个样本中,中点均阳性,但在上点、左点、右点分别出现一份阴性结果.滤纸干血斑法和全血法检测HIV-1前病毒DNA比较,敏感性是96.1%,特异性是98.9%.结论 滤纸干血斑在室温条件下运输是可行的,推荐尽量靠近滤纸干血斑的中间位点打取圆片扩增;该方法操作简便、经济、敏感、特异.     

两种尿液HIV-1抗体快速检测试剂在高危人群中应用效果评估

正云南省地处中国的西南边陲,靠近毒品的集散地"金三角",是我国最早暴发静脉吸毒人群中艾滋病流行的省份。据国家卫生健康委员会官网通报,截至2018年9月,全国报告现存活艾滋病病毒(HIV)感染者和病人85.0万人~([1]),云南省防治艾滋病局通报,至2018年10月,云南省现存活感染者和病人10.5万~([2]), 是全国艾滋病疫情最重的省份。根据《中国遏制与防治艾滋病"十三五"行动计划》~([3]),云南省通过扩大检测人群的措施,目前已发现了 80% 的     

1种检测下呼吸道标本中念珠菌核酸试剂的性能评价

目的:评估1种应用实时荧光PCR法检测念珠菌(包括白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌)核酸试剂的性能是否满足临床应用要求。方法:(1)应用含白色念珠菌10⁶和10⁸CFU/mL 2种浓度水平的临床混合下呼吸道样本,按照EP15-A3文件5×5精密度设计方案,5 d内每天每种浓度做5个复孔,共计25孔,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其重复性和实验室内精密度;(2)应用白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌3种念珠菌标准株及大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌标准株菌液,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其特异性;(3)将白色念珠菌标准株用生理盐水10倍梯度稀释为1×10⁵、1×10⁴、1×10³和1×10²CFU/mL,5 d内每天每种浓度4个复孔,共计20个复孔,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其检出限;(4)收集101例来自呼吸系统疾病患者的下呼吸道标本,提取核酸后应用该试剂扩增检测,并与真菌培养法的结果进行比较,以评价其符合率。结...     

某国产HIV-1病毒载量检测试剂盒的临床应用性能评估

目的对某国产艾滋病病毒1型(HIV-1)病毒载量检测试剂盒的应用性能进行评估。方法收集200份血液样品,分别用该国产待评估试剂(简称待测试剂)与进口参比试剂(简称参比试剂)进行盲试检测。然后采用阴阳性符合率和卡方检验等统计方法,来判定两种试剂定性检测结果的一致性;用相关性、回归分析和Bland-Altman模型等统计方法,来判定两种试剂定量检测结果的一致性。结果两种试剂总体符合率达100%,Kappa值为1.000(P0.001)。两种试剂盒检测结果的回归分析表现出较强的相关性(R~2=0.933)。运用Bland-Altman模型比对,显示两种试剂检测结果有97.06%(165/170)的样本在95%一致性界限内,说明两种试剂检测结果的一致性较好。文章还将经治疗样本和未经治疗样本的检测结果进行定量检测结果分析,结果显示,治疗样本两种试剂检测结果的相关性为0.968,回归分析表现出强相关性(R~2=0.937);Bland-Altman模型显示,有96.64%的样本在95%一致性界限内,说明两种试剂在治疗样本中的一致性较好。在未治疗样本中,两种试剂检测结果的相关性为0.952,回归分析表现出强相关性(R~2=0.906);Bland-Altman模型显示,有98.04%的样本在95%一致性界限内,说明两种试剂在未治疗样本中的一致性较好。从经过治疗样本和未经治疗样本的定量检测结果可以看出,无论是否接受治疗,国产试剂与进口试剂在检测在检样本的测试效果方面具有强相关性。结论该国产试剂和进口试剂检测结果具有较高的定性符合率、较强的相关性以及较强的定量一致性。     

总HIV-1 DNA定量检测技术的建立

目的建立一种基于实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法的1型艾滋病病毒(HIV-1)总脱氧核糖核酸(DNA)定量检测技术。方法构建了同时包含HIV靶基因和内参基因的质粒标准品,设计了涵盖我国主要HIV流行亚型的特异性引物和Taqman水解探针,对引物亚型覆盖面、灵敏度、特异性等相关指标进行了分析,进行了批内和批间重复试验。结果该检测方法所设计的HIV特异性引物和探针序列高度保守,成功检测12种常见及稀有HIV亚型;扩增灵敏度可达4个拷贝/PCR反应管,特异度100%;加入了细胞定量体系,做到了在同一个PCR反应管中既定量了HIV DNA,又定量了细胞数;批内和批间差异性的变异系数均在20%以内。结论该检测方法可用于HIV储藏库检测,评估联合抗病毒治疗的效果,可以用于"窗口期"HIV感染的辅助诊断以及HIV阳性母亲的新生儿HIV感染的诊断。     

血浆HIV-1 RNA与干血斑HIV-1 DNA基因型耐药检测比较

目的 通过对不同病毒载量的同一研究对象同时进行血浆HIV-1 RNA与干血斑HIV-1 DNA的基因型耐药检测并对结果进行比较,探讨HIV-1 DNA用于耐药检测的可行性和用途。方法 2021年12月采集云南省、广西壮族自治区及新疆维吾尔自治区接受ART后1年以上的HIV/AIDS患者静脉血5 mL,EDTA抗凝,分离血浆和制备成干血斑样本,分别提取病毒DNA和RNA进行pol区扩增,比较两种方法的扩增效率;并对同时扩增成功的序列利用MEGA7构建系统进化树并分析序列一致性。利用斯坦福大学HIV耐药数据库进行耐药位点分析,比较耐药性结果。结果 209例样本中,来自云南82份（39.2%）,来自广西壮族自治区69份（33.0%）,来自新疆维吾尔自治区58份（27.8%）。105例VL<20拷贝/mL,25例20拷贝/mL≤VL<200拷贝/mL,42例200拷贝/mL≤VL<1 000拷贝/mL,37例VL≥1 000拷贝/mL。不同病毒载量的样本分类中,使用血浆中HIV-RNA pol区扩增成功率分别为12.4%、28.0%、69.0%、89.2%;使用干血斑中HIV...     

一种国产磁珠核酸自动提取系统对人巨细胞病毒DNA检测的性能评价

目的:评价一种国产核酸磁珠自动提取系统对人巨细胞病毒(HCMV)DNA检测的性能。方法:采用科华磁珠核酸自动提取仪提取血浆HCMV DNA,经实时荧光定量PCR检测,分析其线性范围、灵敏度、精密度及抗干扰能力、8混养模式的检测效能。并利用30份含HCMV感染患者及20份健康人群血浆对该方法进行临床应用评价,其检测结果与沉淀离心提取法进行比较。结果:该方法检测HCMV DNA载量的线性范围为10~2～10~6 copy/mL。检测灵敏度为100 copy/mL(单检)。测定值与理论值的相关性良好,R~2=0.998,P0.01。批内和批间变异系数(CV)均小于5%。临床应用评价发现,国产磁珠核酸自动提取法与沉淀离心提取法对临床样品的检测一致性较好(Kappa=0.839≥0.75,P0.01),磁珠自动提取法的阳性率高于沉淀离心提取法(100%vs 86.7%),但差异无统计学意义(P=0.125)。在10~2～10~3 copy/mL范围内,国产磁珠核酸自动提取发现优于沉淀离心法。2法所获得的定量结果差异有统计学意义(P0.05)。8混养模式的检测灵敏度为10~(3 )copy/mL,拆分结果与实际相符,未产生交叉污染。结论:基于国产磁珠自动核酸提取系统实现了快速、自动化提取HCMV DNA,具有良好检测性能,适用于采供血机构HCMV的血液核酸检测及临床应用推广。     

两种HIV-1 RNA定量检测方法的临床对比研究

目的比较达安基因艾滋病病毒1型(HIV-1)核酸检测Ⅱ代(简称达安基因)和罗氏Cobas TaqMan HIV-1Test Version 2.0(简称罗氏Cobas TaqMan)两种试剂,检测HIV-1血浆病毒载量的相关性及一致性。方法采用达安基因试剂和罗氏Cobas TaqMan试剂,平行检测663份HIV-1感染者血浆病毒载量,采用配对t检验、相关分析和Bland-Altman等方法进行统计分析。结果罗氏Cobas TaqMan与达安基因试剂检测结果高于检测下限的比例一致(分别为65.31%和65.76%)。对于病毒载量低于1 000IU/mL的样本,二者的差异无统计学意义(P=0.856 8)。罗氏Cobas TaqMan与达安基因试剂检测结果具有很强的相关性(r=0.962 0,P0.000 1)。此外,Bland-Altman分析两种方法检测病毒载量的结果具有较高的一致性。结论达安基因和罗氏Cobas TaqMan试剂,检测HIV-1血浆病毒载量的结果具有较好的相关性和一致性。     

一种国产磁珠核酸自动提取系统对人巨细胞病毒DNA检测的性能评价

目的:评价一种国产核酸磁珠自动提取系统对人巨细胞病毒(HCMV)DNA检测的性能。方法:采用科华磁珠核酸自动提取仪提取血浆HCMV DNA,经实时荧光定量PCR检测,分析其线性范围、灵敏度、精密度及抗干扰能力、8混养模式的检测效能。并利用30份含HCMV感染患者及20份健康人群血浆对该方法进行临床应用评价,其检测结果与沉淀离心提取法进行比较。结果:该方法检测HCMV DNA载量的线性范围为10²～10⁶ copy/mL。检测灵敏度为100 copy/mL(单检)。测定值与理论值的相关性良好,R²=0.998,P<0.01。批内和批间变异系数(CV)均小于5%。临床应用评价发现,国产磁珠核酸自动提取法与沉淀离心提取法对临床样品的检测一致性较好(Kappa=0.839≥0.75,P<0.01),磁珠自动提取法的阳性率高于沉淀离心提取法(100%vs 86.7%),但差异无统计学意义(P=0.125)。在10²～10³ copy/mL范围内,国产磁珠核酸自动提取发现优于沉...     

两种早期诊断婴儿HIV-1感染方法的一致性评价

目的评价In-house方法与商品化雅培RealTime艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)定性检测试剂盒(简称雅培试剂盒),检测婴儿足底血干血斑(DBS)早期诊断的一致性。方法收集217份来自四川、重庆、江苏、新疆等地寄送的HIV阳性母亲所生婴儿的待检DBS样本,用In-house方法检测HIV-1前病毒脱氧核糖核酸(DNA),用雅培试剂盒进行定性检测,并用SPSS 19.0进行统计学分析,从而评价两种方法检测结果的一致性。结果 217份婴儿DBS样本,用In-house方法检测结果为10例阳性和207例阴性,用雅培试剂盒检测结果为9例阳性和208例阴性,两种方法检测不一致的有3例,分析得一致率为98.6%(214/217),Kappa值为0.835,95%可信区间(CI):0.652~1.000,P0.05。结论用DBS进行In-house与雅培试剂盒检测,对婴儿早期诊断具有较好的一致性,二者均可用于中国婴儿的早期诊断,为中国HIV婴儿早期诊断(EID)检测方法的选择提供了科学依据。     

五种不同沙眼衣原体实验室筛查试剂检测性能评价

目的通过对不同商品化沙眼衣原体(CT)检测试剂的检测结果,与Roche Cobas Amplicor检测结果的分析比较,评价5种沙眼衣原体检测试剂的性能。方法采用分层按比例的方法抽取32家医疗机构,收集各抽样单位2009年9月至11月期间,皮肤(性病)科、妇产科、泌尿科门诊就诊者的泌尿生殖道标本1 986人份。比较各个医疗机构采用的检测方法与Roche Cobas Amplicor检测方法所得检测结果,分析各不同检测试剂的特异度和灵敏度。结果共对1 986例样本进行了Roche Cobas Amplicor沙眼衣原体核酸检测,沙眼衣原体阳性为367例(18.48%)。3种免疫层析法(ICA)检测试剂中,ICA1(国产)、ICA2(国产)、ICA3(进口)灵敏度分别为34.48%、15.22%、52.53%;特异度分别为99.45%、98.04%、98.93%;阳性预测值(Positive predictive value,PPV)分别为93.75%、63.64%、92.86%;阴性预测值(Negative predictive value,NPV)分别为86.36%、83.68%、88.73%。2种聚合酶链反应(PCR)法检测试剂中,PCR1(国产)、PCR2(国产)灵敏度分别为70.09%、96.43%;特异度分别为99.44%、100.00%;阳性预测值分别为96.15%、100.00%;阴性预测值分别为94.34%、99.31%。用免疫层析试剂检测的四种样本间的敏感性和特异性有明显差异;PCR检测方法中,各类型标本的评价相近。结论不同公司生产的免疫层析检测试剂的性能存在显著差异,且总体水平均低于PCR法检测试剂。另外,不同类型标本对沙眼衣原体的检测也有影响,免疫层析法检测试剂较适用于女性阴道拭子和宫颈拭子标本的检测。     

2种ELISA试剂检测性能统计分析

目的:分析不同统计学方法对试剂评价的差异,为选择试剂提供可靠的依据。方法:采用ELISA方法对62 416份无偿献血者的血液标本进行双试剂初复检,并用不同的统计学方法对检测结果进行分析评价;并根据评价差异对HBsAg 2种试剂性能做进一步评价。结果:4项检测双试剂符合率均大于99.8%;2χ检验分析显示,HBsAg 2种试剂2χ=29.81,P0.01,差异有统计学意义,其余3项2种试剂差异无统计学意义;Kappa一致性检验表明,4项检测均具有双试剂一致性,一致性程度均较高。为了排除样本阴性、阳性率分布差异,本文对Kappa检验进行校正,校正后的结果显示4项双试剂一致性均为极强。试剂性能试验显示,2χ检验唯一具有统计学差异的HBsAg 2种试剂在精密度、准确度、灵敏度方面均相差不大。结论:2χ检验与Kappa检验结论矛盾,但反映了试剂性能的不同方面;Kappa检验对于试剂性能一致性的评价更加客观;对于不同试剂的评价应当结合性能试验和多方面因素综合分析。     

滤纸片干血斑HIV-1 DNA检测方法的建立

目的探索用滤纸片作血液样本的载体,建立一种简单、经济、敏感的滤纸片干血斑艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)DNA检测方法。解决HIV-1感染者全血样本采集、运输和储存过程中存在的实际困难。方法首先用滤纸片FTA卡收集血液制成滤纸片干血斑,处理提取DNA后,针对HIV的env、gag、pol区,设计三对高度保守引物,套式PCR扩增HIV-1 DNA。进一步用HIV-1质粒DNA检测该方法的最低检测限。结果摸索出扩增滤纸片干血斑HIV-1 DNA的最佳扩增条件;滤纸片干血斑样本pol区最低检测限是6拷贝/μl,env区8拷贝/μl,gag区10拷贝/μl。结论可以用滤纸片FTA卡收集HIV-1感染者的血液,制成滤纸片干血斑后检测HIV-1 DNA。该方法操作简便、经济、敏感,建议作为HIV-1抗体检测的辅助诊断方法。     

尿液HIV-1抗体检测的临床应用评价

目的通过对尿液艾滋病病毒1型(HIV-1)抗体检测在不同人群临床应用中性能的评价,探讨尿液HIV-1抗体检测作为艾滋病实验室检测指标的可行性。方法自2014年3月21日至2015年3月1日,采集不同地区、不同人群尿液样本1310例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测尿液HIV-1抗体,并将其结果与HIV抗体诊断(WB)结果进行比较,分析尿液HIV-1检测的灵敏度、特异性,以及与血液诊断的符合率。结果尿液HIV抗体检测灵敏度为97.28%(250/257),特异性为99.06%(947/956),与血液HIV抗体诊断符合率为98.68%。不同人群尿液HIV抗体检测的灵敏度为94.34%~100%,特异性为95.39%~100%,其中吸毒人群最低。对于HIV抗体阳性正在接受抗病毒治疗的人群,尿液检测的灵敏度为88.66%(86/97),显著低于其他人群。结论尿液HIV抗体检测可作为HIV抗体检测指标,但不能用于HIV抗体阳性接受治疗人群。