枸杞中微生物降解β-胡萝卜素特性研究

以枸杞鲜果为原料分离了可降解β-胡萝卜素的微生物,并对其进行分离鉴定,得出降解特性。实验经初步分离鉴定共得到7株可降解β-胡萝卜素的细菌,再经16S r DNA分子生物学鉴定发现实则共有3种细菌,其中L-1、L-3是Enterobacter sp.Ha NA17,L-2、L-4、L-7是Enterobacter ludwigii,L-5、L-6是Enterobacter cloacae。     

利用生物技术对烤烟发酵的研究

通过对发酵1-2年的烟叶进行高通量测序,分析烟叶中微生物,同时对其表面优势微生物正对性分离,筛选出22株优势株菌株,添加入烟叶发酵中,控制烟叶发酵醇化条件,对发酵醇化的烟叶进行感官评吸与分析检测。结果表明,添加了Enterobacter hormaechei strain C4、Enterobacter hormaechei subsp. steigerwaltii strain 34998、Peanibacillus polymyxa strain HY96-2、Bacillus licheniformis strain MER TA 88、 Bacillus licheniformis strain POTC的五株菌株的烟叶,在发酵前1个月控制为37℃,55%湿度,后阶段保持23℃,45%湿度的发酵条件下,发酵7个月,达到了现有发酵技术发酵3年的效果,起到了增香提质的作用。在烟叶的理化指标以及高通量检测方面也显示,微生物对烟叶的品质提升起到了主导作用。     

葡萄叶片上冰核细菌的分离鉴定

为了检测葡萄上冰核活性细菌的分布情况,并探究其对葡萄叶片霜冻害的影响,本试验对葡萄叶片上的冰核活性细菌进行了分离、鉴定和冰核活性的测定,并检验了活性较高的菌株对叶片冻害的效果。试验通过分离共获得10株冰核活性细菌,活性较高的1、2号菌株都是假单孢菌属(Pseudomonas)。用1、2号菌处理葡萄叶片,进行霜冻胁迫,叶片的霜冻指数分别达到83.67%和90.42%,而对照组为66.13%;活性最好的2号菌可以提高叶片过冷点2.3℃。     

刺葡萄皮色素色价测定及提取工艺研究

对湖南湘西刺葡萄及新疆的巨峰、红提两个葡萄品种的果皮进行了色价测定和对照，研究了刺葡萄皮色素的最佳提取工艺，结果表明：湘西刺葡萄皮的色价远高于对照品种，其色价是巨峰葡萄皮的21．75倍，红提葡萄皮的2．87倍；得出刺葡萄皮色素提取的最佳工艺条件为：以1．5mol／L的盐酸-95％乙醇（v/v=3：17）混合液为提取剂，提取时间为100min，提取温度为50℃，物料比为1：20（g／mL）。     

响应面法优化刺楸叶单宁的提取工艺及其抗氧化

对刺楸叶中单宁的提取工艺进行优化,利用定性试验鉴定单宁的类型,并对其抗氧化活性进行测定。结果表明,在单因素试验基础上,通过响应面分析法确定刺楸叶单宁提取的最佳工艺为:乙醇体积分数57%,提取时间0.9 h,提取温度61℃。此条件下单宁得率为4.05%,定性试验鉴定刺楸叶单宁为缩合类单宁,刺楸叶单宁提取物清除DPPH、ABTS自由基的IC50值分别为0.38 mg/mL和0.22 mg/mL。     

刺楸树皮中总皂苷的提取工艺优化及其抑菌活性

对刺楸树皮中总皂苷的提取工艺进行优化,并评价其抑菌活性。选用乙醇回流法,以刺楸树皮为原料,总皂苷得率为评价指标,考察提取时间、提取温度、乙醇体积分数、料液比对总皂苷得率的影响。在单因素试验基础上,利用响应面分析法优化刺楸树皮中总皂苷的提取工艺。结果表明：最佳提取条件为提取温度70 ℃、提取时间1.5 h、乙醇体积分数70%、料液比1∶15（g∶mL）。该条件下刺楸树皮总皂苷得率为3.33%。抑菌试验结果表明,刺楸树皮中总皂苷对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、酵母菌均有抑制作用,且在1.0 mg/mL的质量浓度下对细菌的抑制作用更强。     

一株叶黄素高效降解菌株的筛选、鉴定及其降解产生香料物质的条件优化

叶黄素生物降解产物中含有环柠檬醛、β-紫罗兰酮和二氢猕猴桃内酯等重要香味物质,目前能够应用于叶黄素生物降解的酶类和菌株较少。本研究从烟田土壤中分离得到一株高效降解叶黄素菌株,经典形态学和16S rDNA进化树分析,鉴定该菌株为Enterobacter tabaci strain β7。在单因素试验基础上采用响应面试验得出该菌株降解叶黄素最佳培养条件,即为蔗糖31.97 g/L,硝酸钠3.18 g/L,酵母粉6.88 g/L和初始pH值为6.91,叶黄素降解率从85.71%提高到93.17%。GC-MS结果表明该菌叶黄素降解产物主要为β-环柠檬醛（0.75%）、5,6-环氧-β-紫罗兰酮（2.59%）、3-羟基-β-紫罗兰酮（1.69%）、β-紫罗兰酮（1.21%）、4-羟基-β-紫罗兰酮（0.89%）和二氢弥猴桃内酯（1.03%）等香料物质。该研究结果为叶黄素降解提供新型菌株资源,也为叶黄素降解产生香料物质打下理论和应用基础。     

鲜切生菜贮藏过程中优势腐败细菌的多样性分析

以新鲜生菜作为研究对象,分析表面细菌种类,自制鲜切生菜置于4℃下贮藏10 d,结合感官评审、微生物计数和形态学观察,初步判断可能的优势腐败细菌,分离纯化并做回接实验,进一步比较准确地判断是否为优势腐败细菌,通过部分典型生理生化实验和分子生物学鉴定,确定优势腐败细菌。结果表明:生菜原料中M1-1、P1为微小杆菌(Exiguobacterium),V4、M1-4为肠杆菌(Enterobacter),M3为芽孢杆菌(Bacillus);贮藏在4℃下的鲜切生菜优势腐败细菌为M1-1微小杆菌(Exiguobacterium),M1-2、P2不动杆菌(Acinetobacter),M1-3单胞菌(Stenotrophomonas),N1、V3泛菌(Pantoea),V2肠杆菌(Enterobacter);其中,Exiguobacterium sp.M1-1为鲜切生菜贮藏过程中特有的优势腐败细菌。     

半制备型高效液相色谱法分离刺葡萄花色苷单体

经大孔吸附树脂HP-20纯化刺葡萄花色苷的粗提物后,以半制备型高效液相色谱法分离得到高纯度的刺葡萄花色苷单体。以XCharge C18柱（20 mm×250 mm,10 μm）制备柱,考察梯度洗脱条件、流动相流速、进样量对刺葡萄花色苷分离的影响,确定了最佳制备条件为甲醇-3%甲酸溶液流动相梯度洗脱、流速15 mL/min、进样量1.2 mL,实现了2 种主要花色苷单体的分离及制备。经超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱鉴定,2 种花色苷单体分别是锦葵素-3,5-O-双葡萄糖苷和锦葵素-3,5-O-双葡萄糖苷-香豆酰,产品纯度分别达到了99.54%和98.28%。方法具有简单易行、经济快速、易于放大等特点,适用于刺葡萄花色苷标准品的大规模制备。     

葡萄中有机酸的提取工艺参数优化及同时测定

根据单因素试验结果与响应面分析法中的Box-Behnken试验设计原理选取试验因素与水平,对葡萄有机酸提取率有影响的料液比、乙醇体积分数和pH值3个因素进行优化;结果表明:葡萄有机酸提取的最佳工艺参数为料液质量体积比1 g∶16 mL,乙醇体积分数76.37%,pH值11.87;在此条件下,葡萄有机酸质量分数为216.907μg/g。硫酸铜与柠檬酸、酒石酸和苹果酸反应生成的络合物吸收光谱重叠严重,用光度法难以进行单一组分的测定。采用偏最小二乘-光度法对柠檬酸、酒石酸和苹果酸模拟混合试样进行同时测定,并应用于葡萄有机酸的测定。对模拟混合试样,回收率99.6%~99.8%;RPEs为0.64%~0.67%。     

奶粉中一株阪崎肠杆菌的鉴定及其挥发性产物分析

目的鉴定奶粉中一株阪崎肠杆菌分离菌株F2-1,采用顶空气相色谱-质谱联用法(headspace gas chromatography-mass spectrometry,HS-GC-MS)分析分离菌株F2-1在液态培养中产生的挥发性代谢产物。方法应用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定系统分析分离菌株的生理生化特征;利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)特异性扩增检测分离菌株的16S rDNA,通过HS-GC-MS分析分离菌株F2-1代谢的挥发性产物。结果分离菌株F2-1为革兰氏阴性菌,生理生化特征与阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,ES)的相似性为99%,LAMP检测进一步确认为阪崎肠杆菌,分离菌株F2-1在营养肉汤中代谢的挥发性产物主要有异戊醛、乙醇、异戊醇、3-羟基-2-丁酮、乙酸、正十五烷、正十六烷、正十七烷、1-癸醇。结论奶粉中分离菌株F2-1鉴定为阪崎肠杆菌,该菌产生的挥发性产物为阪崎肠杆菌的快速鉴定提供参考。     

6种食源性致病菌质控考核结果分析

目的对承担食品安全风险监测任务的全国各级疾病预防控制中心开展微生物质量控制考核,以评价其对6种食源性致病菌的检验能力。方法 6种质控考核菌株包括单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽胞杆菌、阪崎肠杆菌、大肠埃希菌、沙门菌以及金黄色葡萄球菌。按照2011和2012年设计的组合,将新鲜培养的致病菌增菌液混合后滴加于灭菌奶粉载体中制成样品。2011年考核制备了6种样品(I~VI),2012年为10种样品(A~J)。运用点分数法对两年结果分别进行满意率评价,率的比较用Pearsonx~2检验或对数似然比x~2检验。结果 2011和2012年考核总体满意率分别为86.5%(268/310)和84.3%(375/445),2011年样品满意率最低的是空白样品VI(68.0%,17/25),2012年满意率最低的是G样品(0.0%,0/8)。2011和2012年考核结果主要漏检的是大肠埃希菌,其中2012年大肠埃希菌漏检率占漏检总数的85.7%(60/70)。2011年非考核菌中漏检最多的是金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌。2012年考核结果主要多检的是金黄色葡萄球菌,占多检总数的36.8%(7/19)。两年的结果均显示大肠埃希菌和阪崎肠杆菌组合样品中,大肠埃希菌的漏检率明显增高。沙门菌和大肠埃希菌的血清分型正确率较低,分别为41.5%(95/229)和45.1%(105/233)。单核细胞增生李斯特菌易错误鉴别成英诺克李斯特菌,蜡样芽胞杆菌易错误鉴别成蕈状芽胞杆菌,阪崎肠杆菌易错误鉴别成河生肠杆菌。结论 80%以上的疾病预防控制中心对6种致病菌的定性检验能力较好,可以满足食品安全风险监测的需求。其中对沙门菌的检验能力最高;金黄色葡萄球菌漏检率较低但易出现多检;大肠埃希菌的检验能力有待提高;阪崎肠杆菌的检验水平较2010年结果有明显提升。     

乌贼墨抑制海洋鱼体腐败菌活性成分的分离

对乌贼墨中抑制海洋鱼体腐败菌活性成分进行了分离,并初步探讨了抑菌成分的理化特性。结果表明:乌贼墨粗提物经DEAE-纤维素和Sepharose 4B分离后获得具有较高活性的抑菌活性物质,分子量约为83589u,对四种海洋鱼体腐败菌(气单胞菌、黄杆菌、芽孢杆菌、肠杆菌)的平均抑菌率为62.36%。经紫外扫描(UV)和红外光谱(IR)分析,抑菌物质的主要成分为多糖。     

Characteristics of Wheat-Flour Dough Using Enterobacter cloacae GAO With and Without Yeast

The Leavening bacterium Enterobacter cloacae GAO made dough rise, without shrinkage or flattening due to refrigeration. The GAO plus yeast mixture was allowed to ferment from 20 to 25% of the time for the GAO alone. The ratio of 0.5% yeast volume to wheat flour was acceptable. The yeast was used in the dough to make mantou (a type of bun). Both mantou volume and pH declined after 3 days refrigeration. The GAO and yeast mixture could withstand 5-7 days refrigeration before falling.     

应用环介导等温扩增检测阪崎肠杆菌

建立环介导等温扩增检测阪崎肠杆菌的方法,通过肉眼可见的白色沉淀,判断检测结果。将阪崎肠杆菌(ATCC29544)的16S-23SrRNA间区序列作为靶基因,设计2对特异引物,优化反应条件,进行LAMP扩增。对产物进行酶切分析,与理论上的预期结果相一致。通过测序比对,与GenBank上报道的同源性达到99%。用25株食源性致病菌证实该引物特异性强。LAMP扩增20min,其灵敏度为4.3×102 fg/tube,结果表明,LAMP方法检测阪崎肠杆菌,灵敏度高、特异性强、耗时短、方法简便。     

3种食品致病菌实时荧光核酸恒温扩增试剂盒

目的 以传统国标培养法作为参考比对方法,考察实时荧光核酸恒温扩增(simultaneous amplification and testing, SAT)食品检测试剂盒,在食品中检测致病菌志贺氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7/NM,以及阪崎肠杆菌的一致性。方法 以食品中志贺氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7/NM和阪崎肠杆菌国标培养法为参考方法,以基因测序法作为确认法。,考量SAT食品检测试剂盒方法的灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率、准确度,同时进行2种方法的显著差检验。结果 3种SAT食品检测试剂盒灵敏度均为100%,假阴性为0;特异性志贺氏菌100%,阪崎肠杆菌100%,大肠埃希氏菌O157：H7/NM 98.4%。大肠埃希氏菌O157：H7/NM假阳性率为1.2%。结论 SAT试剂盒检测方法具有高灵敏度、特异性强、准确度高,无一例漏检。     

芦荟提取物抑菌作用的研究

用芦荟提取物对几种常见的微生物进行抑菌活性测定,结果表明芦荟提取物能有效地抑制细菌的生长,对供试菌的最低抑菌浓度金黄色葡萄球菌为１０％,沙门氏菌为８％,大肠杆菌为９％,产气肠杆菌９％,枯草杆菌１１％,芦荟提取物能耐受高温短时的热处理。     

饮料中肠杆菌科细菌污染情况分析

国内不同地区几家企业生产的绿茶、还原乳、蜜橘饮料、奶茶中出现产品变质,胀瓶、产气等感官指标的变化,pH值均有所下降。主要污染菌经过16S rDNA序列比对鉴定为肠杆菌科Enterobacteriaceae细菌。蜜橘饮料和奶茶中分离到的3株典型污染菌,经过进一步的rpoB序列比对,鉴定为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)。肠杆菌科细菌不耐热,这些产品的污染属杀菌后的二次污染,该类微生物中有不少种类的菌对人体有害,或与致病菌有着亲密的亲缘关系。从生产线排查情况看,这类微生物的污染经由水(冲洗或冷凝水)或车间内湿润空气带入。     

奶粉中沙门氏菌和阪崎肠杆菌的测定能力验证结果分析

目的 提高实验室用传统生化方法检测沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的能力和水平。方法 用空白添加法和交叉试验检查培养基性能后,以奶粉样品为材料,用传统生化培养方法进行检测。结果 发现在传统生化检测技术中,对于排除非沙门氏菌来说,BS板作用突出,XLD和沙门氏菌显色平板容易受干扰菌影响。W样品检出沙门氏菌,Q样品未检出沙门氏菌;V样品检出阪崎肠杆菌,G样品未检出阪崎肠杆菌。结论 通过该研究,本实验室的沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的传统生化检测技术水平和能力得到了提高。     

基于高通量测序的湘派卤牛肉细菌多样性分析

目的:为湘派卤牛肉保鲜保味,延长货架期。方法:对不同贮藏时间(0,4,8,12,16 d)的湘派卤牛肉样品中细菌进行多样性测序。结果:高通量测序共获得有效基因序列1 116 813条,平均每个样品74 454条。Alpha多样性分析表明,LNR8d中细菌丰度最高,LNR4d中细菌丰度最低;细菌门水平结果表明,在贮藏期间,15个卤牛肉样品中的优势菌门主要有：厚壁菌门、变形菌门和蓝细菌门。细菌属水平结果表明,LNR0d的样品中优势菌属为芽孢杆菌属;LNR4d的样品中优势菌属为巨大球菌属;LNR8d的样品中优势菌属为肠杆菌属;在LNR12d的样品中优势菌属为芽孢杆菌属;在LNR16d的样品中优势菌属为unidentified＿Chloroplast。PCoA分析显示15个样品的组内样本之间距离较大,表明其菌群差异性较大。LEfSe分析表明,LNR4d～LNR16d样品中属水平下贡献最大的细菌菌群分别为巨大球菌属、微小杆菌属、乳杆菌属。结论:研究揭示了湘派卤牛肉贮藏过程中的细菌多样性,探索了湘派卤牛肉贮藏过程中的细菌变化情况及其优势菌属。