芍药内酯苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药内酯苷对高糖损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用及机制.方法 采用33mmol·L-1的高糖培养基建立HUVECs损伤模型,并在造模前给予不同浓度的芍药内酯苷进行预保护,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,采用试剂盒检测细胞中内源性一氧化氮合酶（eNOS）和半胱天冬酶-3（Caspase-3）活性以及培养液中一氧化氮（NO）和乳酸脱氢酶（LDH）含量.结果 芍药内酯苷能够剂量依赖性增强细胞活力,降低Caspase-3活性和细胞凋亡率（P＜0.05）,并能增强eNOS的活性和NO的释放量（P＜0.05）.结论 芍药内酯苷对高糖诱导的HUVEs损伤具有保护作用,其机制可能与促进eNOS活性提高、NO释放量增加和抑制Caspase-3活性有关.     

依达拉奉对过氧化氢致血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨依达拉奉对过氧化氢(H2O2)致内皮细胞氧化损伤的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用H2O2作为外源性自由基生成系统,模拟血管内皮细胞氧化应激损伤模型,观察不同剂量依达拉奉对H2O2所致内皮细胞的影响。通过检测各组丙二醛(MDA)的含量反应细胞的损伤程度,检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性及总抗氧化能力(T-AOC)反应细胞的抗氧化能力。结果依达拉奉各浓度组均明显降低MDA的含量,提高SOD的活性及总T-AOC,上述作用随药物浓度增加呈增强趋势。结论依达拉奉能降低内皮细胞的氧化损伤程度,提高内皮细胞抗氧化能力。     

类叶升麻苷调控CREG表达对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

摘要：目的:探讨类叶升麻苷对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的影响及机制。方法:不同浓度(1,10,100μmol·L-1)的类叶升麻苷作用于oxLDL诱导的HUVEC细胞,酶联免疫吸附法检测细胞中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽还原酶（GSH-Px）活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹（Western blot）法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）和E1A激活基因阻遏子（CREG）蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测CREG mRNA表达水平。转染CREG过表达载体或CREG小干扰RNA至HUVEC细胞,构建CREG过表达或CREG表达抑制的HUVEC细胞。oxLDL诱导CREG过表达的HUVEC细胞,或类叶升麻苷作用于oxLDL诱导的CREG表达抑制的HUVEC细胞,上述相同方法检测MDA含量、SOD和GSH-Px活力、细胞凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:oxLDL诱导HUVEC细胞后,MDA含量、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高,SOD和GSH-Px活力、Bcl-2蛋白及CREG mRNA和蛋白水平降低（P<0.05）。类叶升麻苷或过表达CREG可降低oxLDL诱导的HUVEC细胞MDA含量、凋亡率和Bax蛋白表达,提高SOD和GSH-Px活力及Bcl-2蛋白表达（P<0.05）。类叶升麻苷可促进oxLDL诱导的HUVEC细胞CREG mRNA和蛋白表达（P<0.05）,抑制CREG表达降低了类叶升麻苷对oxLDL诱导的HUVEC细胞MDA含量、SOD和GSH-Px活力、细胞凋亡率及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响（P<0.05）。结论:类叶升麻苷通过上调CREG表达降低oxLDL诱导的HUVEC细胞氧化应激和凋亡,减轻细胞损伤。     

辛伐他汀对脂多糖损伤血管内皮细胞的保护作用

目的 探讨辛伐他汀对炎性刺激物脂多糖(LPS)刺激诱导血管内皮细胞生成肿瘤坏死因子α(TNF-α)、超氧化物歧化物(SOD)及丙二醛(MDA)的影响.方法 培养人脐静脉内皮细胞(ECV304),分别用不同浓度LPS刺激,在50mg/L LPS刺激的基础上用不同浓度的辛伐他汀(0.1、1.0、5.0、10.0μmol/L)及10μmol/L辛伐他汀 0.2mmol/L甲羟戊酸共育,用ELISA μmol/L法测定TNF-α的浓度,用化学比色法测定SOD活力和MDA的含量.结果 不同浓度LPS刺激内皮细胞24h后,培养上清TNF-α浓度和MDA含量明显高于空白对照组(分别为P<0.01和P<0.05),而SOD活力显著低于空白对照组(P<0.01).在50mg/L LPS刺激基础上,加入不同浓度辛伐他汀干预,培养上清TNF-α浓度和MDA含量显著低于LPS刺激组(分别为P<0.01和P<0.05),而SOD活力显著高于LPS刺激组(P<0.01).加入甲羟戊酸后,培养上清中TNF-α浓度、MDA含量和SOD活力与LPS刺激组无明显差异.结论 辛伐他汀可以抑制LPS诱导的内皮细胞TNF-α的生成,提高SOD的活性,降低MDA的水平,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用.其作用可被甲羟戊酸逆转.     

Omapatrilat对AngⅡ致人血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的观察Omapatrilat对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法体外培养HUVECs,随机分为4组:空白对照组,AngⅡ组,Omapatrilat组和AngⅡ+Omapatrilat组。分光光度计测定培养的HUVECs乳酸脱氢酶(LDH)的漏出,流式细胞仪技术检测细胞周期,硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs上清液中一氧化氮(NO)和内皮素(ET1)含量。结果10-7mol·L-1AngⅡ可增加HUVECsLDH漏出和ET1释放,Omapatrilat(10-6mol·L-1)对此具有明显抑制作用,同时它可促进HUVECs增殖和NO释放。结论Omapatrilat可减弱AngⅡ导致的体外培养HUVECs损伤,对内皮细胞具有保护作用。     

齐墩果酸对氧化损伤模型人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:研究齐墩果酸对氧化损伤模型人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:分别以含10%胎牛血清DMEM高糖培养液[含氧化低密度脂蛋白(ox-LDL,质量浓度分别为0、25、50、100、200、400μg/ml)]培养HUVECs,CCK-8法检测细胞活性以筛选复制模型最适质量浓度。以0、10、20、40、60、80、100μmol/L齐墩果酸培养HUVECs,CCK-8法检测细胞活性以考察齐墩果酸试验最适浓度。以5、10、20、40μmol/L齐墩果酸作用于氧化损伤模型HUVECs(100μg/ml ox-LDL诱导),CCK-8法检测细胞活性,测定一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平。结果:复制模型ox-LDL最适质量浓度为100μg/ml;齐墩果酸试验最适浓度范围为0⁴0μmol/L;5、10、20、40μmol/L齐墩果酸可增加氧化损伤模型HUVECs存活率,增强CAT、GSH-PX、NOS活性,增加NO含量。结论:齐墩果酸能够保护ox-LDL氧化损伤的HUVECs,其保护机制与增强CAT、GSH-PX、NOS抗氧化酶活性有关。     

绿原酸对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨绿原酸对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,分为(A)正常对照组、(B)绿原酸组(30μmol.L-1)、(C)H2O2损伤组、(D)绿原酸+H2O2组。检测细胞线粒体膜电位;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测不同组内皮细胞Caspase-3和Bcl-2基因的表达。结果与正常对照组比较,过氧化氢(400μmol.L-1)能明显的造成内皮细胞的凋亡(P<0.05),绿原酸(30μmol.L-1)可降低过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少(P<0.05),线粒体膜电位增加,Bcl-2的表达增强,Caspase-3的表达减弱。结论绿原酸可抑制过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,其作用机制可能与保护线粒体膜电位,促进凋亡抑制基因Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达有关。     

淫羊藿苷对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制

目的研究淫羊藿苷(Ica)对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用及其机制。方法 H_2O_2诱导氧化损伤模型。药效学研究分为六组:空白组,模型组(750μmol·L-1 H2O2),Ica-L、M、H组(750μmol·L~(-1) H_2O_2+1×10-8、1×10-7、1×10-6mol·L~(-1)Ica)和溶媒组(0.1%DMSO)。Ica给药12 h后加入H_2O_2,Ica作用时间为24、36和48 h。Ica作用机制研究分为五组:空白组、模型组、Ica-H组、LY组(750μmol·L~(-1) H_2O_2+25μmol·L~(-1)LY294002)、Ica-H+LY组。LY294002为PI3K抑制剂,给予LY294002后2 h加入Ica,12 h后加入H_2O_2,Ica作用时间为48 h。MTT法检测细胞活力,ELISA检测细胞培养液中活性氧(ROS)的含量,显微镜观察细胞形态及存活细胞密度,Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜观察细胞凋亡率,Real time RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA的表达,Western Blot检测p-Akt和Akt蛋白的表达。结果与空白组相比,模型组细胞活力降低(P<0.01),ROS分泌量和凋亡细胞增加(P<0.01);与模型组相比,Ica-L、M、H组均能提高细胞活力(P<0.01),降低细胞培养液中ROS的含量(P<0.05),其抑制率呈现时间和剂量依赖性。同时,Ica能明显降低细胞凋亡率(P<0.01),上调p-Akt蛋白和Bcl-2 m RNA的表达(P<0.05),下调Bax mRNA的表达(P<0.05);Ica的以上作用被LY294002拮抗。结论 Ica(1×10~(-8)-1×10-6 mol·L~(-1))对H_2O_2诱导的HUVEC氧化损伤有保护作用,能缓解氧化应激诱导的HUVEC凋亡,其机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

丹酚酸A对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究丹酚酸A对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(H2O2)诱导的HUVECs氧化损伤模型,观察丹酚酸A(10,20和40μg·mL-1)对血管内皮细胞损伤的保护作用,MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO),比色法测定Caspase-3的活性。结果丹酚酸A可抑制H2O2诱导的血管内皮细胞的凋亡,同时增加SOD的活性,降低MDA的水平,减少LDH的漏出量,增加NO的释放,降低Caspase-3的活性。且丹酚酸A的上述作用均呈质量浓度依赖性。结论丹酚酸A可以有效保护内皮细胞免受氧化损伤。     

栀子苷抗H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨栀子苷对氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及可能机制。方法体外培养的HUVEC细胞用不同浓度的栀子苷药物预处理24h后,加入终浓度为500μmol·L-1H2O2氧化损伤12h。荧光染色法观察细胞内DNA损伤情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,酶免法测定caspase-3蛋白酶的活性,Real-time PCR检测超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的mRNA表达。结果与模型组相比,不同浓度栀子苷(12.5、25、50mg·L-1)可以明显改善H2O2对细胞内的DNA氧化损伤,降低细胞凋亡率,下调Bax蛋白表达,逐步恢复Bcl-2/Bax表达比例和线粒体膜电位的改变,降低caspase-3蛋白酶活性,上调细胞内Mn-SOD和GPx的表达,但对Bcl-2的表达无影响。结论栀子苷可以抑制H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体应激途径和发挥抗氧化损伤功能有关。     

Protective effects of prostaglandin E1 on human umbilical vein endothelial cell injury induced by hydrogen peroxide

Aim:

To investigate the protective effects of prostaglandin E₁ (PGE₁) against H₂O₂-induced oxidative damage on human umbilical vein endothelial cells (HUVECs).

Methods:

HUVECs were pretreated with PGE₁ (0.25, 0.50, and 1.00 μmol/L) for 24 h and exposed to H₂O₂ (200 μmol/L) for 12 h, and cell viability was measured by the MTT assay. LDH, NO, SOD, GSH-Px, MDA, ROS, and apoptotic percentage were determined. eNOS expression was measured by Western blotting and real-time PCR.

Results:

PGE₁ (0.25−1.00 μmol/L) was able to markedly restore the viability of HUVECs under oxidative stress, and scavenged intracellular reactive oxygen species induced by H₂O₂. PGE₁ also suppressed the production of lipid peroxides, such as MDA, restored the activities of endogenous antioxidants including SOD and GSH-Px, and inhibited cell apoptosis. In addition, PGE₁ significantly increased NO content, eNOS protein, and mRNA expression.

Conclusion:

PGE₁ effectively protected endothelial cells against oxidative stress induced by H₂O₂, an activity that might depend on the up-regulation of NO expression.     

Protective effects of silybin on human umbilical vein endothelial cell injury induced by H2O2 in vitro

Oxidative injury induces cellular and nuclear damages that lead to cell injury. Agents or antioxidants that can inhibit production of reactive oxygen species can prevent injury. We tested the hypothesis that silybin can inhibit H2O2-induced injury in human umbilical vein endothelial cells. Eighteen hours of treatment with 750 micromol l(-1) H2O2 significantly stimulated expression of caspase-3 and cell apoptosis. In addition, it is observed that H2O2 increased the amounts of malondialdenhyde (MDA), the dehydrogenase (LDH) leakage, and decreased the activity of GSH-Px and NO contents in ECV-304 cells. In the H2O2 apoptosis model, the addition of 6.25-25 mg/L of silybin, which has in vitro radical scavenging activity, partially restored cell viability with a reduction in H2O2-induced apoptotic DNA damage, and decreased the expression of caspase-3. Moreover, it decreased other H2O2-induced damage in a concentration-dependent manner. The endothelial cell apoptosis was detected by AO/EB dual staining as well as flow cytometry, and the activity of pro-apoptotic factor caspase-3 was detected by immunocytochemical method. Our results suggest that the antioxidant, silybin, protects ECV-304 cells against H2O2-induced injury probably through its antioxidant activity, increasing the NO content, the activity GSH-Px and inhibiting signaling pathways mediated by caspase-3.     

Protective effects of icariin on human umbilical vein endothelial cell injury induced by H2O2 in vitro.

Icariin is a flavonoid isolated from Epimedium and is considered to be the major pharmacological active component of Epimedii Herba. In the present investigation, we studied and confirmed the protective activity of icariin on H2O2-induced injury in human umbilical vein endothelial cell line: ECV-304. Eighteen-hour treatment with 750 micromol l(-1) H2O2 significantly decreased the viability of ECV-304 cells, which was accompanied with apparent apoptotic features, including distinct cell morphological alteration and the increase of caspase-3 expression. In addition, it is observed that H2O2 increased the amounts of malondialdenhyde (MDA) and the dehydrogenase (LDH), and decreased the content of nitric oxide (NO) in ECV-304 cells. However, pretreatment with 0.1-50 micromol l(-1) icariin resulted in a significant recovery from H2O2-induced cell apoptosis. Also, it decreased other H2O2-induced damage in a concentration-dependent manner. Furthermore, pretreatment with icariin decreased the expression of caspase-3, which was known to be involved as a key role executor in H2O2-induced cell apoptosis. The endothelial cells apoptosis were detected by acridine orange/ethidium bromide (AO/EB) dual staining as well as flow cytometry, and the expression of pro-apoptotic factor caspase-3 were detected by immunocytochemical method. Taken together, these data suggest that protective effects of icariin against oxidative injuries of ECV-304 cells may be achieved via decreasing of caspase expression.     

长春西汀对体外培养的人脐静脉内皮细胞脂质过氧化的影响

目的 观察长春西汀(吲哚类生物碱,治疗和预防缺血性脑血管病)对活性氧造成的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)脂质过氧化损伤的影响.方法 用含100 g·L-1小牛血清的DMEM培养液体外培养HUVEC,用不同浓度(10、20、、50 100 μmol·L-1)的H2O2作为外源性活性氧,作用于HUVEC,用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入和细胞周期时相测定等方法,观察给予不同浓度(10、50、100 mmol·L-1)长春西汀预处理后,长春西汀对H2O2作用后的HUVEC增殖的影响.结果 H2O2对HUVEC的增殖活性具有剂量依赖性抑制作用;长春西汀可以抑制H2O2诱导的脂质过氧化损伤,且具有剂量依赖性.结论 长春西汀对动脉粥样硬化的防治可能具有应用前景.     

丙氨酰谷氨酰胺二肽对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用

目的观察丙氨酰谷氨酰胺二肽（丙谷二肽）对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法在以低氧低糖培养人脐静脉内皮细胞ECV304为细胞损伤模型的基础上,以噻唑蓝（MTT）比色法优化丙谷二肽的最佳作用浓度,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测线粒体膜电位。自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶（LDH）活性,比色法检测谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的浓度,RT-PCR方法检测细胞内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、热休克蛋白70（HSP70）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA的表达。结果丙谷二肽能够使细胞在缺氧缺糖应激下存活率增加,线粒体损伤减轻,LDH分泌降低,GSH产生增加,HSP70和HIF-1α mRNA的表达增加。结论丙谷二肽对细胞缺氧缺糖损伤有明显的保护作用,这种保护作用可能与保护线粒体、维持细胞膜结构完整、上调细胞中应激基因HSP70和HIF-1α的表达有关。     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素II致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的 :观察血管紧张素 (1 7) [Ang (1 7) ]对血管紧张素II(AngII)致人脐静脉内皮细胞 (HU VECs)损伤的保护作用。方法 :体外培养的HUVECs随机分为 4组 :对照组 ,AngII组 ,Ang (1 7)组 ,AngII Ang (1 7)组。采用分光光度计测定培养的HU VECs乳酸脱氢酶 (LDH)漏出 ;流式细胞仪检测细胞凋亡 ;硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs上清液中一氧化氮 (NO)和内皮素 1(ET 1)的含量。结果 :与对照组比较 ,AngII(0 .1μmol·L-1)显著增加HUVECsLDH漏出 (P <0 .0 1)、ET 1分泌(P <0 .0 1)和HUVECs凋亡率 (P <0 .0 1) ,显著减少NO的含量 (P <0 .0 5 ) ;Ang (1 7)呈剂量依赖性抑制了AngII的促LDH漏出、ET 1分泌、增加细胞凋亡等作用 ,同时明显促进HUVECs的NO释放 ;单用Ang (1 7)对HUVECs无明显影响。结论 :Ang (1 7)可抑制AngII所致的体外培养HUVECs损伤 ,对内皮细胞具有保护作用。     

非诺贝特对溶血卵磷脂诱导的血管内皮细胞增生及凋亡的影响

目的:观察非诺贝特对溶血卵磷脂(LPC)诱导的血管内皮细胞增生、凋亡的影响并探讨其机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常对照组、LPC组、非诺贝特低浓度组(10μmol·L-1)、非诺贝特中浓度组(50μmol·L-1)及非诺贝特高浓度组(100μmol·L-1)。分别观测LPC对血管内皮细胞增生、凋亡及凋亡调控蛋白抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的影响,及非诺贝特干预后的变化。结果:与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增生,促进内皮细胞凋亡,XIAP表达减弱。非诺贝特可干预LPC对内皮细胞的作用,使内皮细胞增生增强,凋亡减少,XIAP表达增强。结论:非诺贝特可通过促进XIAP表达干预LPC对HUVECs增生及凋亡的影响。     

淫羊藿苷对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

探讨淫羊藿苷对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导损伤人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）的影响。培养内皮细胞，淫羊藿苷作用24h后，采用AngII诱导制备内皮细胞损伤模型，测定细胞存活率（MTT法）、培养液中乳酸脱氢酶（LDH）释放量、NO值、清除超氧阴离子自由基（O2^-）和羟自由基（·OH）的能力，测定胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、T-NOS、iNOS以及eNOS的含量。与AngⅡ单独处理组相比，淫羊藿苷能明显提高细胞存活率，提高SOD、T-NOS和cNOS活力，提高NO含量，增强清除O2^-和·OH的能力，降低LDH和iNOS的量。结果表明淫羊藿苷对AngⅡ损伤的内皮细胞有一定的保护作用。     

PCSK9抑制剂在ox-LDL诱导HUVECs损伤中的保护作用研究

目的探讨人类枯草溶菌素转化酶9(PCSK9)抑制剂对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)导致的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护机制。方法对数生长期HUVECs细胞分为Control组(正常培养),ox-LDL组(50 mg/Lox-LDL诱导24 h),低、中、高剂量PCSK9抑制剂组(分别用5、10、20μmol/L PCSK9抑制剂预处理24 h,再加入50 mg/Lox-LDL诱导24 h)。采用CCK-8法检测各组细胞活性并计算细胞存活率,实时荧光定量PCR(q PCR)和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞或细胞培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-6和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1的转录和分泌水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase-3)和核因子(NF)-κB通路相关蛋白的表达水平。结果与Control组比较,ox-LDL组细胞存活率下降,TNF-α、IL-6和MCP-1转录及分泌水平升高,细胞凋亡率升高,促凋亡蛋白Bax、Cleaved-Caspas...