绒毛膜促性腺激素受体单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

以纯化嗜麦芽假单胞菌的绒毛膜促性腺激素(CG)受体为抗原,融合得到4株(ED490,DG390,AB890,GE590)对细菌CG受体特异的单克隆抗体杂交瘤细胞,其腹水和培养上清中的抗体滴度分别为10~(-2)～10~(-6)和1～10~(-2);亚类鉴定显示:单抗GE590为IgGl,单抗ED490、DG390和AB890为IgG2b。研究发现,ED490、AB890和DG390与细菌CG受体作用后,~(125)I-HCG仍能结合该受体,揭示其作用于受体不同位点。GE590与CG受体结合实验发现,随着单抗浓度不断增加,~(125)I-HCG与受体结合逐渐减少,推测该单抗与~(125)I-HCG结合受体同一位点。     

甲肝病毒单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的 :为甲肝研究和诊断提供大量高效价标准化抗体。方法 :用已培养的 NJ-3株甲肝病毒 (HAV)免疫 BALB/c小鼠 ,经细胞融合技术、IFA筛选和有限稀释克隆法。结果 :建立了 6株能稳定分泌抗 HAV-单克隆 (Mc Ab)的杂交瘤细胞。经鉴定 ,其上清和腹水的抗体效价分别为 0 .5× 10 3 ～ 1× 10 3 及 1× 10 3 ～ 2× 10 5。用免疫印迹法和间接 EL ISA分析 ,这 6株抗体分别能与 HAV的 3个抗原位点结合。结论 :成功的制备了抗 HVA的Mc Ab,在 HAAg检测中 ,简化了操作步骤     

人白细胞介素2单克隆抗体的制备

作者采用自行制备ＩＬ－２纯品及免疫ＢＡＬＢ／Ｌ小鼠，将脾细胞与ＮＳ－１细胞融合，获得具有分泌稳定性抗体的高效价杂交瘤细胞株，细胞连续舆传４２代仍稳定分泌单克隆抗体，该抗体与ＩＬ－２有特殊吸附，杂交瘤核型呈双亲染色体特点。连续传代未见变异。     

人降钙素原的原核表达及其单克隆抗体的制备

目的: 原核表达人降钙素原（procalcitonin,PCT）重组蛋白,制备高纯度的PCT单克隆抗体。方法: 将构建的PCT-pET22b表达载体转入大肠埃希菌BL21中诱导表达PCT蛋白,经Ni-NTA亲和层析法纯化,用蛋白质印迹法和胶体金法对其进行鉴定。获得的PCT重组蛋白采用长程免疫法皮下多点注射Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞（SP2/0）融合,筛选阳性杂交瘤细胞株并进行亚克隆4次。将细胞株注入小鼠腹腔收集腹腔积液获得单克隆抗体,经辛酸硫酸铵法和Protein G亲和层析法进行纯化。结果： SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量约14 kDa处有一明显条带,与目的蛋白大小相符。蛋白质印迹法和胶体金法证明该可溶性蛋白为PCT。采用细胞融合技术成功筛选出7株阳性杂交瘤细胞,将其命名为B3,C4,C7,E9,F8,F10,G2。选B3和C4细胞株通过体内诱生法制备单克隆抗体,经纯化后纯度可达95%以上。间接ELISA法检测B3、C4抗体效价均可达10⁷,亲和常数分别为5.06×10⁸,7.3×10⁸。结论： 获得高纯度的PCT重组蛋白及其单克隆抗体,为PCT检测试剂盒的进一步研究提供了支持。     

抗人hER单克隆抗体的制备及其应用

目的:制备抗人hER单克隆抗体。方法:用原核表达的人雌激素受体(hER)重组蛋白为抗原,免疫BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,进行细胞融合。结果:通过ELISA和免疫组织化学法筛选,有限稀释克隆化,得到一株分泌抗hER单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2B8/1C5/2C3),经鉴定2B8/1C5/2C3分泌的单克隆抗体为IgG2a,利用Western Blot分析,显示在23kU处针对hER重组蛋白位置有一特异性条带;利用乳腺癌组织进行的免疫组织化学染色结果显示该株细胞产生的单克隆抗体与细胞核呈强阳性反应。结论:该单克隆抗体适于乳腺癌组织hER的免疫组化检测。     

人白细胞介素2单克隆抗体的制备

作者采用自行制备ＩＬ─２纯品及免疫ＢＡＬＢ／Ｌ小鼠，将脾细胞与ＮＳ─１细胞融合，获得具有分泌稳定性抗体的高效价杂交瘤细胞株，细胞连续传４２代仍稳定分泌单克隆杭体，该抗体与ＩＬ─２有特异吸附，杂交瘤核型呈双亲染色体特点。连续传代未见变异。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及其特性研究

本文采用亲和层析法纯化的甲胎蛋白（ＡＦＰ）抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞系融合，获三株分泌抗人ＡＦＰ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系。用ＥＬＩＳＡ阻断试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验作特异性鉴定，杂交瘤细胞株染色体的众数为１０４条，三株细胞系ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１型。经体外连续传代３个月及冻存一年复苏后均能持续分泌抗ＡＦＰ抗体。     

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备及初步应用

将人绒毛膜促性腺激素(hCG)免疫的BALB/C小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,阳性孔经2～3次克隆化、液氮冻存后多次再克隆化和动物接种,获得了12株分泌抗hCG单克隆抗体(McAbs)的稳定杂交瘤株。12种McAbs除1种为IgM外,均为IgG_1;RIA滴度及亲和常数分别在0.2～7.0×10~4和0.4～5.1×10~8M~(-1)之间。有些McAbs已成功地用于血清和尿中hCG一步双位快速ELISA及滋养叶肿瘤组织切片的免疫细胞化学染色等。     

Characteristics of monoclonal antibodies against chorionic gonadotropin receptor]

We reported the production of monoclonal antibodies (McAb) against chorionic gonadotropin (CG) receptor by fusing spleen cells of BALB/c mice immunized with purified pseudomonas maltophilia CG receptor with mouse myeloma line (SP 2/0). Four hybridoma cell lines secreting CG receptor McAbs were obtained (ED 490, DG 390, AB 890, GE 590). GE 590 is IgG 1; ED 490, DG 390, AB 890 are IgG2b. I125-HCG and ED 490, DG 390. AB 890 recognized CG receptor different antigenic determinant. Increased concentrations of GE 590 were in inverse proportion to the amount of I125-HCG binding to human ovarian tissues showing that normal ovarian tissues and ovarian malignant tumors have different HCG receptor antigenic determinant. This study indicated that these McAbs may be useful in studying the structure of CG receptor and in providing a valuable evidence for early diagnosis and treatment of ovarian malignant tumors.     

抗人成骨肉瘤单克隆抗体的制备及其特性

目的：制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体并探讨其特性。方法：用人骨肉瘤细胞系OS-732免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞系NS-1融合,经酶联免疫吸附试验及补体依赖细胞毒实验筛选,获3株分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞。将手术切取经病理证实的骨肉瘤、软骨肉瘤、骨巨细胞瘤、滑膜肉瘤、平滑肌肉瘤、非骨化性纤维瘤、骨软骨瘤和正常肌、骨组织冰冻切片后,应用间接免疫荧光抗体实验检测。 结果：3株McAb均与骨肉瘤组织呈阳性反应,其中二株亦与软骨肉瘤呈阳性反应,与正常组织及其他肿瘤组织呈阴性反应。3株McAb分别与骨肉瘤相关抗原不同的抗原决定簇结合。 结论：抗人成骨肉瘤单克隆抗体具有较高的特异性。     

一种制备抗复合抗原单克隆抗体的方法

OBJECTIVE: To prepare monoclonal antibodies (mAbs) against multiple antigens by single cell fusion. METHODS: BALB/c mice were immunized with the multiple antigens, namely alpha fetoprotein (AFP), carcinoembryonic antigen (CEA), HBsAgiHBcAg and HBeAg, and hybridomas were employed using PEG as the fusing agent. The hybridoma cells were respectively screened with AFP, CEA, HBsAg, HBcAg and HBeAg by enzyme-linked immunosorbent assay and limited dilution. The mAbs were purified by protein G affinity chromatography, its subtype was identified, the affinity constants (K(a)) were determined and the specificity was analyzed by Western blotting. RESULTS: Twenty hybridoma cell lines were obtained by single cell fusion, including 5 cell lines against AFP, 6 against CEA, 3 against HBsAg, 4 against HBcAg, and 2 against HBeAg. The subtypes of some hybridoma cell lines positive for the mAbs were identified as the immunoglobulin G1 (IgG1), with K(a) ranging from 1x10(9) M(-1) to x10(11) M(-1). Western blot analysis showed that all the mAbs strongly and specifically bound to their respective antigens. CONCLUSION: The mAbs against multiple antigens have been obtained by single cell-fusion, which increases the production of mAbs and reduces the time of preparation.     

Preparation and identification of monoclonal antibodies against Penicillium marneffei]

OBJECTIVE: To prepare and identify monoclonal antibodies (mAbs) against Penicillium marneffei. METHODS: Recombinant mannoprotein1 (MP1) of Penicillium marneffei was used to immunize BALB/c mice, and anti-MP1 mAbs were obtained by means of hybridoma. Screening and identification of the mAbs were subsequently performed with indirect enzyme-linked immunosorbent assay and Western blotting, respectively. RESULTS: Four hybridomas producing antibodies against Penicillium marneffei were obtained, and the IgG isotypes of the 4 mAbs were identified as IgG1 with affinity constants (K) of 8.2x10(-9), 4.7x10(-9), 6.5x10(-9) and 2.7x10(-9), respectively. Western blotting demonstrated specific recognition of Aspergillus fumigatus MP1 by the obtained mAbs. CONCLUSION: The 4 hybridomas producing anti-MP1 mAbs with high specificity and affinity can be of significant value in the diagnosis of Penicilliosis marneffei infections.     

抗重组人乳腺珠蛋白单克隆抗体的制备及其特异性鉴定

目的通过杂交瘤技术获得特异性抗hMAM单克隆抗体,为进一步研制基于hMAM的乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础。方法以纯化的重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,运用杂交瘤技术制备、间接ELISA法及免疫组化法筛选出能稳定分泌特异性抗hMAM的单克隆抗体细胞株。结果通过杂交瘤技术获得了2株能分泌特异性抗hMAM单克隆抗体的杂交瘤细胞株hMAM-A2及hMAM-B7,其分泌的单克隆抗体亚类均属于IgG1,Western blotting结果显示2株细胞分泌的单克隆抗体特异性强能与34kDa处的hMAM抗原形成单一的蛋白质显色条带,免疫组化结果显示其仅与乳腺癌组织呈阳性反应,与其他肿瘤组织不发生交叉反应。结论利用鼠-鼠杂交瘤技术成功的制备了2株稳定分泌高效价、高特异性抗hMAM的杂交瘤细胞株。     

抗oh8dG单克隆抗体的制备及生物学特性研究

目的 :制备抗 8-羟基 - 2′-脱氧鸟苷 (oh8d G)的单克隆抗体 ,并通过免疫组化检测胃粘膜中的 oh8d G,评价幽门螺杆菌 (Hp)感染与 DNA氧化损伤的关系。方法 :以 BSA- oh8d G偶联物免疫 BALB/ C小鼠 ,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体 ,以竞争性 ELISA、Western blot和免疫组化进行生物学特性鉴定。结果 :建立了两个抗 oh8d G的单克隆抗体杂交瘤细胞株 (ZMC9,ZMD11) ,竞争性 ELISA和 Western blot显示该抗体对 oh8d G有高度特异性 ,免疫组化结果显示 oh8d G在 Hp阳性胃粘膜组织中表达率为 5 5 % ,Hp阴性胃粘膜组织中表达率为 5 % ,两者差异有显著性 (P<0 .0 1)。结论 :本研究制备的单克隆抗体能特异识别 oh8d G;Hp感染可导致胃粘膜组织 oh8d G水平增高。     

抗脱氧雪腐镰刀茵烯醇单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗脱氧雪腐镰刀茵烯醇(DoN)单克隆抗体(McAb)并对其进行初步鉴定.方法 采用小剂量长周期的免疫方案,以DON-牛血清白蛋白(BSA)偶联物免疫雌性BALB/c小鼠,采用细胞融合的方法制备杂交瘤细胞株,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中McAb,对抗体分泌阳性的细胞株进行克隆化,直至抗体阳性率100%,用竞争抑制ELISA法进一步检测McAb的特异性,腹水诱生法制备大量McAb,并用饱和硫酸铵对其进行纯化,用抗体亚类鉴定试剂盒对该McAb亚类进行鉴定,BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白含量,ELISA检测McAb的滴度、参考工作稀释度和亲和常数.结果 DON-BSA免疫的BALB/c小鼠血清效价为1∶256000,与BSA有强烈的交叉反应.细胞融合后,ELISA筛选抗体分泌阳性的杂交瘤细胞株,经3轮克隆化,建立了1株能稳定分泌抗DON-BSA McAb的杂交瘤细胞株3G5,腹水诱生法制备了大量的McAb.该McAb属IgG1,IgG含量为6.06 g/L,抗体滴度为1∶500000,参考工作稀释度为1∶64 000,抗体亲和常数为1.62×109.用间接竞争抑制ELISA测得校正曲线线性范围9.8～10 000 ng/mL,线性方程Y=-0.272 6X+0.225 9(r=0.930 9).结论 获得了分泌抗DON-McAb的杂交瘤细胞株,该单克隆抗体灵敏度高,特异性强,可用于制备高质量国产DON-ELISA检测试剂盒.     

抗人肺表面活性物质相关蛋白A单克隆抗体的制备及其特性的鉴定

目的 制备抗人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)单克隆抗体并对其特性进行鉴定。方法 以自行制备的SP-A蛋白作为抗原免疫Balb／c小鼠，建立分泌抗人SP-A单抗的杂交瘤细胞株，诱发小鼠产生单抗腹水，用(NH4)2SO4盐析纯化腹水，用间接ELISA法测定单抗效价，用Westemblotting测定抗体特异性。结果 建立了3株能持续分泌抗SP-A单抗的杂交瘤细胞株，其中286杂交瘤细胞株抗体效价最高，其染色体数目均大于100条。间接ELISA法测定腹水和细胞培养上清效价，分别为l：50000和l：10000。用Westem blotting在SP-A蛋白泳道上相对分子质量3l000左右位置出现明显的一条染色条带。结论 自行制备的抗人SP-A单抗，其具有特异性强、效价高的特点。     

一种制备抗复合抗原单克隆抗体的方法

目的 建立通过单次细胞融合制备抗复合抗原(多种抗原)单克隆抗体的方法。方法 用复合抗原(甲胎蛋白、癌胚抗原、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、乙型肝炎e抗原)免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备单克隆抗体。通过Protein-G亲和层析纯化阳性杂交瘤细胞株腹水,并通过亚类试剂盒法和非竞争ELISA法分别测定抗体亚类和亲和常数,同时应用免疫印迹分析其特异性。结果 通过单次细胞融合共获得20株抗上述复合抗原的单克隆抗体,其中针对甲胎蛋白的单克隆抗体5株、针对癌胚抗原的单克隆抗体6株、针对乙型肝炎表面抗原的单克隆抗体3株;针对乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体4株、针对乙型肝炎e抗原的单克隆抗体3株。已鉴定的部分阳性杂交瘤细胞株亚类均为IgG1,抗体亲和常数介于1×10⁹M^-1~2.8×10¹¹M^-1,免疫印迹分析显示,所获得的单抗都与其抗原发生特异性结合。结论 建立了通过单次细胞融合制备针对复合抗原的单克隆抗体制备技术,使单克隆抗体的产出率显著提高,制备周期明显缩短,为建立规模化单克隆抗体制备平台奠定基础。     

抗人MIF单克隆抗体的制备及其活性的初步鉴定

目的构建人巨噬细胞移动抑制因子(human macrophage migrationinhibitoryfactor,hMIF)原核表达系统并制备其单克隆抗体.方法采用RT-PCR从乳腺癌细胞株MDA-MB453细胞克隆hMIF cDNA,测序后构建pET11b/hMIF重组表达质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达hMIF;重组hMIF经纯化和鉴定后,作为抗原常规免疫和CpG ODN加强免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体并鉴定活性.结果构建pET11b/hMIF重组表达质粒,表达出预期hMIF蛋白,表达率30%,纯化后纯度达95%.Western blotting鉴定为hMIF,NO释放实验证实具有生物学活性.两种免疫方案共获得9株分泌抗hMIF抗体的杂交瘤细胞株,其中一株经Western blotting和活性鉴定证明具有特异性和生物学活性.结论获得hMIF重组蛋白和抗hMIF单克隆抗体,为其基础性研究和在脓毒症的治疗等临床应用研究奠定基础.