长链非编码RNA SNHG7靶向微小RNA-186-5p及对肝癌细胞迁移侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7(SNHG7)靶向微小RNA-186-5p(miR-186-5p)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在机制.方法 基于UALCAN网站分析TCGA数据库中肝癌组织的SNHG7水平,应用Kaplan-Meier Plotter数据库分析SNHG7水平与肝癌预后的关系;采用...     

基因间长链非编码RNA 113靶向微小RNA-493-3p对肺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨基因间长链非编码RNA 113(LINC00113)调控微小RNA-493-3p(miR-493-3p)在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭迁移过程中的分子功能.方法 采用实时定量PCR(qPCR)检测LINC00113和miR-493-3p在50对NSCLC癌组织和癌旁组织及4株NSCLC细胞株(A549、...     

非编码长链RNA PVT1和miR-424拮抗调控宫颈癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的 探讨宫颈癌HeLa细胞增殖及侵袭过程中长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变体异位基因1(PVT1)对miR-424的调控作用,揭示LncRNA PVT1在宫颈癌进程中发挥作用的潜在机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测宫颈癌组织和癌旁组织miR-424表达,分别用miR-424 inhibitor、miR-424 mimics和PVT1 siRNA共转染宫颈癌HeLa细胞。实验组细胞采用miR-424 inhibitor和PVT1 siRNA共转染,对照组细胞采用miR-424 mimics和PVT1 siRNA共转染,转染非靶向序列质粒的细胞作为阴性对照。采用细胞计数盒8(CCK8)法、克隆形成实验检测各组细胞增殖及生长能力变化,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力变化。结果 宫颈癌组织和癌旁组织miR-424相对表达量分别为0.039±0.022和0.092±0.030,差异有统计学意义,t=4.82,P=0.032。Pearson相关性分析表明,宫颈癌组织中PVT1与miR-424成负相关,R²=0.587,P=0....     

长基因间非编码RNA 1980靶向微小RNA-335-5p及对胃癌细胞迁移侵袭的影响

目的 探讨长基因间非编码RNA 1980(LINC01980)对微小RNA-335-5p(miR-335-5p)的靶向调控作用及胃癌细胞迁移侵袭的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人胃黏膜上皮细胞GES-1及胃癌细胞(AGS、HGC-27、MKN-45和MGC80-3)的LINC01980和miR-33...     

长基因间非编码RNA 1475调控微小RNA-423-5p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨长基因间非编码RNA 1475(LINC01475)对微小RNA-423-5p(miR-423-5p)的靶向调控作用及在胃癌细胞增殖、侵袭和迁移中的作用。方法 采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测胃癌组织和细胞的LINC01475和miR-423-5p水平并进一步通过双荧光素酶报告基因实验鉴定两者的靶向关系。选择胃癌SGC-7901细胞并分为4组:对照组(未转染)、LINC01475过表达组(转染过表达载体pc DNA3.1-LINC01475+miR-NC)、miR-423-5p过表达组(转染miR-423-5p模拟物mimics+空载体pc DNA3.1)和共过表达组(转染pc DNA3.1-LINC01475+miR-423-5p mimics);采用q PCR、MTT法、划痕实验和Transwell小室实验评估转染效果、细胞活力及迁移侵袭能力的变化。结果 与癌旁组织相比,胃癌组织的LINC01475水平降低,而miR-423-5p水平升高,两者水平呈负相关(r=-0.686,P<0.05)。与人正常胃上皮GES-1细胞相比,胃癌细胞的LINC01475水平降...     

长链非编码RNA FOXD2-AS1对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

  目的  观察长链非编码RNA（lncRNA）FOXD2-AS1对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响。  方法  收集2017年2月至2017年9月华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院（武汉市妇幼保健院）手术切除的16例卵巢癌患者的组织标本,采用荧光实时定量聚合酶链式反应（quantitative PCR,qPCR）检测组织标本、人卵巢癌细胞系及人正常卵巢上皮细胞系中的FOXD2-AS1表达水平。将HO-8910细胞分为实验组和对照组,分别转染siRNA-FOXD2-AS1和阴性对照RNA。细胞计数CCK-8法、Transwell迁移实验分别检测沉默FOXD2-AS1表达对卵巢癌HO-8910细胞增殖活性和迁移能力的影响。生物信息学方法预测FOXD2-AS1的下游靶基因,qPCR检测下游靶基因表达,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白94（glucose regulated protein94,GRP94）和信号通路Wnt/β-catenin的蛋白表达。  结果  卵巢癌组织中的FOXD2-AS1相对表达量8.56±0.51明显高于正常癌旁组织的2.38±0.21（P < 0.01）,FOXD2-AS1在卵巢癌细胞系OC3、HO-8910、A2780、SKOV-3中表达明显增加（P < 0.05）。下调FOXD2-AS1表达明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖活性和迁移能力（均P < 0.01）。生物信息学方法显示,FOXD2-AS1靶向结合miR-150-5p后,可靶向结合GRP94基因。实验组和对照组miR-150-5p相对表达量分别为5.45±0.91和1.01±0.08（P < 0.01）,GRP94 mRNA相对表达量分别为0.32±0.05和1.02±0.11（P < 0.01）。GRP94和Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达减少。  结论  FOXD2-AS1在卵巢癌组织和细胞系呈高表达,下调FOXD2-AS1可调控miR-150-5p表达,抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖和迁移,可发挥抑癌基因的功能。      

基因间长链非编码RNA152靶向微小RNA?103a?3p对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的探讨基因间长链非编码RNA 152(LINC00152)靶向调控微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)表达及对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞(ANIP-973、NCI-H157、A549和NCI-H1975)的LINC00152水平。选取LINC00152水平最高的细胞分别转染LINC00152特异性小干扰RNA(si-LINC00152组)或无关序列(si-NC组),另设未转染细胞为对照组。QPCR检测LINC00152水平,活细胞计数CCK-8法、Transwell小室和划痕实验测定细胞增殖、侵袭和迁移能力,Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的水平;荧光素酶报告实验验证LINC00152靶向结合miR-103a-3p的能力。结果NSCLC细胞的LINC00152水平均高于BEAS-2B细胞(P<0.05),尤其是NCI-H1975细胞的最高。si-LINC00152组的LINC00152水平为0.352±0.087,低于对照组的1.058±0.219和si-NC组的1.126±0.139(P<0.05)。与si-NC组和对照组相比,si-LINC00152组NCI-H1975细胞转染48、72 h的增殖活力下降(P<0.05);si-LINC00152组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(27.386±2.428)%和(78.840±5.031)个,低于si-NC组的(77.675±4.803)%和(179.208±13.264)个及对照组的(76.371±5.385)%和(174.003±15.678)个(P<0.05);与si-NC组和对照组相比,si-LINC00152组的MMP-2和MMP-9水平均降低,而PTEN水平升高(P<0.05)。对照组和si-NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告分析证实,miR-103a-3p模拟物降低了野生型LINC00152的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型无影响(P>0.05)。结论LINC00152在NSCLC细胞中高表达并发挥促癌作用,与NSCLC的迁移侵袭密切相关,LINC00152与miR-103a-3p间的相互作用在NSCLC靶向治疗中有一定潜能。     

长链非编码RNA WDFY3-AS2靶向微小RNA-23b对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA WDFY3反义RNA 2(WDFY3-AS2)通过靶向微小RNA-23b(miR-23b)对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测正常乳腺上皮细胞(MCF10A)和乳腺癌细胞(MCF7、BT474、MDA-MB-468、BT549)的WDFY3-AS2和miR-23b水平,通过生物信息学预测并结合荧光素酶报告基因实验验证WDFY3-AS2和miR-23b的靶向关系。实验一将BT549细胞分为pc DNA3.1(转染空载体作对照)组和WDFY3-AS2过表达(转染pc DNA3.1-WDFY3-AS2作过表达处理)组,实验二中将BT549细胞分为pc DNA3.1+miR-NC组、WDFY3-AS2过表达+miR-NC组和共过表达(转染pc DNA3.1-WDFY3-AS2+miR-23b模拟物mimics)组。细胞计数法(CCK-8)检测细胞增殖情况,划痕实验和Transwell小室实验评估细胞迁移和侵袭情况。结果 与MCF10A细胞相比,乳腺癌细胞的WDFY3-AS2水平降低而miR-23b水平升高(P<0.05)...     

长链非编码RNA TUG1调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸调节基因1(TUG1)调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:在骨肉瘤细胞U-2OS中转染TUG1 siRNA和siRNA control,qRT-PCR测定干扰效果,MTT测定增殖,流式细胞术测定凋亡,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移。starBase预测TUG1与miR-138-5p有结合位点,双荧光素酶报告载体鉴定靶向调控关系。将miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染至骨肉瘤细胞中,测定干扰miR-138-5p对下调TUG1的骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:转染TUG1 siRNA后的骨肉瘤细胞中TUG1表达水平明显低于转染siRNA control后的细胞（P<0.05）。下调TUG1后的骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,细胞凋亡率升高（P<0.05）。野生型TUG1荧光素酶报告载体与miR-138-5p共转染后细胞荧光素酶活性降低（P<0.05）。与转染TUG1 siRNA的细胞比较,miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染后的细胞增殖、侵袭和迁移能力升高,细胞凋亡率降低（P<0.05）。结论:下调LncRNA TUG1表达通过调控miR-138-5p表达抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力并诱导细胞凋亡。     

长链非编码RNA SNHG1靶向miR-340-5p/CCND1轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1（LncRNA SNHG1）靶向miR-340-5p/细胞周期蛋白1（CCND1）轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:体外培养人食管上皮细胞、食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109,qRT-PCR法测定细胞中LncRNA SNHG1、miR-340-5p、CCND1 mRNA水平。将对数期NEC细胞分为对照组、sh NC1组、sh LncRNA SNHG1组、sh NC2组、sh CCND1组、sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组、sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组。CCK-8法测定细胞增殖能力,Transwell小室法测定细胞侵袭、迁移能力,Western blot法检测CCND1、Ki-67、MMP-2蛋白表达,双荧光素酶验证miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1的靶向关系,通过裸鼠瘤内注射转染试剂进行体内试验。结果:与人食管上皮细胞相比,食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109中LncRNA SNHG1、CCND1 mRNA表达升高,miR-340-5p表达降低（P＜0.05）,其中NEC细胞变化最显著,所以使用NEC作为下续研究菌株。与对照组、sh NC组相比,sh LncRNA SNHG1组NEC细胞LncRNA SNHG1、OD450、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2降低（P＜0.05）;与对照组、sh NC组相比,sh CCND1组CCND1 mRNA与蛋白表达、OD450、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2表达降低（P＜0.05）。miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1均靶向结合,与sh LncRNA SNHG1组相比,sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组OD450、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白表达升高（P＜0.05）;与sh CCND1组相比,sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组OD450、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白表达升高（P＜0.05）;裸鼠移植瘤实验进行了体内验证。结论:LncRNA SNHG1沉默可能通过调控miR-340-5p/CCND1表达抑制食管癌NEC细胞增殖、侵袭与迁移,裸鼠体内也验证了这一结果。     

长链非编码RNA FAM182B对肝癌细胞增殖、迁移侵袭和TGF-β/Smad通路的影响

目的 探讨长链非编码RNA序列相似性家族182成员B(FAM182B)在肝细胞癌(HCC)细胞增殖、迁移和侵袭中的生物学作用。方法 Starbase网络平台分析TCGA数据库中FAM182B在HCC组织中的水平及其与患者预后的关系。实时荧光定量PCR(qPCR)用于检测FAM182B在正常肝细胞LO2和HCC细胞(BEL-7404、MHCC97H、HCCLM3、SMMC7721)的相对表达量。向SMMC7721细胞转染靶向FAM182B的小干扰RNA序列si-FAM182B(FAM182B干扰组)或无义序列si-NC(阴性对照组),以未转染的SMMC7721细胞为空白对照组。MTT法、划痕实验和Transwell小室实验评估下调FAM182B表达对SMMC7721细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。Western blotting和qPCR检测转化生长因子(TGF)-β信号通路关键分子TGF-β1、SMAD家族成员3(Smad3)和骨形态发生蛋白2(BMP2)的表达情况。结果 HCC组织的FAM182B水平高于正常组织(P<0.05),且FAM182B高表达者的总生存期短于低表达者(...     

长链非编码RNA EMX2OS调控miR-150/TP53轴对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨EMX2反义RNA(EMX2OS)靶向微小RNA-150(miR-150)/肿瘤蛋白p53(TP53)轴在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用。方法 采用实时定量PCR(qPCR)检测EMX2OS和miR-150在宫颈癌细胞中的表达。利用EMX2OS过表达载体pcDNA3.1-EMX2OS或miR-150模拟物(mimics)转染C-33A细胞后分为4组：pcDNA3.1组、pcDNA3.1-EMX2OS组(过表达EMX2OS)、pcDNA3.1-EMX2OS+miR-NC组和pcDNA3.1-EMX2OS+miR-150 mimics组(过表达EMX2OS和miR-150)。通过MTT法、划痕实验和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭情况。双荧光素酶报告基因实验验证EMX2OS/miR-150和miR-150/TP53的靶向作用关系。结果 EMX2OS在宫颈癌细胞中表达下调,而miR-150表达上调(P<0.05)。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-EMX2OS组C-33A细胞的增殖活力、划痕愈合率、穿膜细胞数量和miR-150表达水平降低,而...     

基因间长链非编码RNA00963通过靶向miRNA-511-3p调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的 探讨基因间长链非编码RNA00963(LINC00963)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制.方法 常规培养正常胰腺上皮细胞hTERT-HPNE和胰腺癌细胞系Capan-1、SW1990、PaTu8988,将Capan-1细胞分为NC组、si-NC组、si-LINC00963组、pcDNA-NC组、pc...     

长链非编码RNA SNHG3在食管鳞状细胞癌中的表达及其对ECA-109细胞迁移和侵袭的影响

目的:探究长链非编码RNA SNHG3在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及其对ECA-109细胞迁移和侵袭的影响。方法:收集安阳市肿瘤医院2011年6月到2014年6月收治的60例ESCC患者癌及对应癌旁组织样本,采用qRT-PCR检测ESCC癌与癌旁组织、ESCC细胞ECA-109和人正常食管上皮细胞HEEC中lncRNA SNHG3的表达水平,分析ESCC患者组织中lncRNA SNHG3的表达与ESCC患者临床特征的关系。采用siRNA-SNHG3质粒转染ECA-109细胞,以敲降lncRNA SNHG3的表达水平。采用Kaplan-Meier法分析lncRNA SNHG3表达与患者预后的关系。采用Transwell实验检测ECA-109细胞的迁移和侵袭能力。采用qRT-PCR和Western blot实验检测ECA-109细胞中SNAIL和TWIST的mRNA及蛋白的表达水平。结果:ESCC肿瘤组织中lncRNA SNHG3的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),ECA-109细胞中lncRN...     

LncRNA TUG1靶向miR-138-5p调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1（TUG1）和微小RNA 138-5p（miR-138-5p）在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:应用RT-qPCR法检测胰腺癌组织及其细胞系中TUG1和miR-138-5p表达水平。通过小干扰RNA下调PANC-1细胞中TUG1水平或转染miR-138-5p mimics至PANC-1细胞，MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA TUG1和miR-138-5p的靶向关系。共转染TUG1-siRNA和miR-138-5p mimics至PANC-1细胞，MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。结果:在胰腺癌组织及其细胞系中，TUG1表达上调（P<0.05）而miR-138-5p表达下调（P<0.05）。在PANC-1细胞中敲减TUG1或过表达miR-138-5p，细胞活力、迁移和侵袭能力下降（P<0.05）。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验结果表明，TUG1可靶向调控miR-138-5p表达。MTT、Transwell实验结果显示，降低miR-138-5p的表达可逆转TUG1-siRNA对PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:敲减TUG1能够通过上调miR-138-5p水平抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

长链基因间非编码RNA 00681竞争性结合miR-16促进黑素瘤细胞侵袭和迁移

目的:检测长链基因间非编码RNA 00681（long intergenic noncoding RNA 00681,linc00681）在恶性黑素瘤组织和皮肤良性痣组织中的表达,探索沉默linc00681对黑素瘤A375细胞侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:采用一步法实时定量聚合酶链式反应（real time-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测恶性黑素瘤组织和A375细胞中linc00681的表达。利用小干扰RNA技术沉默黑素瘤A375细胞中linc00681的表达。应用划痕实验检测敲低linc00681对细胞迁移距离的影响,Transwell检测敲低linc00681对细胞迁移和侵袭能力的影响。生信分析网站分析linc00681和微小RNA-16（microRNA-16,miR-16）的潜在结合位点。荧光素酶报告实验检测linc00681与miR-16的结合能力。挽救实验检测miR-16对linc00681调控A375细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:黑素瘤组织和A375细胞中linc00681的表达高于皮肤良性痣和正常黑素HEMa-LP细胞。沉默linc00681表达后,A375细胞迁移距离、迁移和侵袭细胞数目均显著降低。研究显示:linc00681可吸附结合miR-16;linc00681和miR-16共同沉默组侵袭和迁移能力明显高于linc00681单独沉默组。结论:linc00681在黑素瘤组织和A375细胞中表达升高,并可通过竞争性结合miR-16促进黑素瘤细胞迁移和侵袭。